在小鼠骨髓移植中CCRS与急性移植物抗宿主病的相关性研究

本研究评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用，为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。经过致死剂量照射的BALB／c小鼠接受异基因C57BL／6小鼠的骨髓移植。根据回输的细胞不同实验分为4组：B6CCR5KO组，受者接受C57BL／6CCR5^-/-小鼠骨髓和脾脏细胞；B6WT组，受者接受野生型C57BL／6小鼠骨髓和脾脏细胞；B6CCR5KOBMC组，受者只接受C57BL／6CCR5^-/-小鼠骨髓细胞；B6、WT BMC组，受者只接受野生型C57BL／6小鼠骨髓细胞。结果表明：较之B6、WT组，B6CCR5KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD；其受者体内的CD8^＋T细胞更大量的增殖；其T细胞恢复后产生更多的INF-γ和TNF-α并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平，从而进一步促进T细胞的增殖，提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8^＋T细胞的增殖。组织学评价提示，移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在有更为严重的病理变化。结论：剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率的增加，供者CD8^＋T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重，这提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

NKT细胞与移植物抗宿主病

NKT细胞（自然杀伤T细胞）是一种免疫T细胞,同时表达传统T细胞和自然杀伤细胞的表面标志,经特异抗原刺激后能够分泌大量细胞因子,调节Th1/Th2平衡,在预防和治疗移植物抗宿主病方面发挥重要作用.与此同时,NKT细胞能够发挥抗肿瘤和抗感染效应,进而加大了NKT细胞在异基因造血干细胞移植方面的应用,帮助患者重建移植后免疫.因此,进一步了解NKT细胞生物学和免疫学特征及其具体免疫调节机制,对运用NKT细胞防治移植中出现移植物抗宿主病有重要的指导意义.本文就NKT细胞的生物学特征、分类、分化发育,免疫活化及NKT细胞与GVHD（包括机制）、NKT细胞与肿瘤、NKT细胞与感染和NKT细胞与临床GVHD研究进行综述.     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立

背景：小鼠移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症,表现为多系统损害（皮肤、食管、胃肠、肝脏等）的全身性疾病,是造成异基因造血干细胞移植后死亡的重要原因之一。目的：探讨建立小鼠移植物抗宿主病模型的方法,为实验性研究药物防治移植物抗宿主病提供有效的动物模型。方法：选择C57BL/6（H-2b）→BALB/C（H-2d）作为完全异基因移植供、受体。通过注射移植供鼠脾脏淋巴细胞及骨髓细胞数以建立移植物抗宿主病模型。根据临床表现、病理检查等判断移植物抗宿主病模型是否建立。结果与结论：给予5×106个以上的供鼠脾细胞的小鼠都发生了急性移植物抗宿主病,但小鼠移植物抗宿主病出现的时间、存活期不同。提示,输入5×106个供鼠脾细胞可有效建立移植物抗宿主病模型,小鼠异基因骨髓移植动物模型是可靠的,可用于移植物抗宿主病防治的实验性研究。     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立

背景:小鼠移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症,表现为多系统损害(皮肤、食管、胃肠、肝脏等)的全身性疾病,是造成异基因造血干细胞移植后死亡的重要原因之一。目的:探讨建立小鼠移植物抗宿主病模型的方法,为实验性研究药物防治移植物抗宿主病提供有效的动物模型。方法:选择C57BL/6(H-2b)→BALB/C(H-2d)作为完全异基因移植供、受体。通过注射移植供鼠脾脏淋巴细胞及骨髓细胞数以建立移植物抗宿主病模型。根据临床表现、病理检查等判断移植物抗宿主病模型是否建立。结果与结论:给予5×106个以上的供鼠脾细胞的小鼠都发生了急性移植物抗宿主病,但小鼠移植物抗宿主病出现的时间、存活期不同。提示,输入5×106个供鼠脾细胞可有效建立移植物抗宿主病模型,小鼠异基因骨髓移植动物模型是可靠的,可用于移植物抗宿主病防治的实验性研究。     

防治移植物抗宿主病的新策略

异基因造血干细胞移植是治疗诸多造血系统恶性疾病、重症联合免疫缺陷、某些自身免疫疾病以及实体瘤等疾病的有效方法之一 ,然而与之伴发的移植物抗宿主病 (graft ver sus hostdisease,GVHD)是引起移植失败和患者死亡的主要原因 ,严重影响了异基因造血干细胞移植效果。如何防治GVHD的发生是当前移植免疫学研究领域中亟待解决的难题。近年来对GVHD的病因、病理、预测、预防和治疗等方面的研究都取得了显著成果。笔者就GVHD防治研究领域中的某些进展进行综述。1　特异性抑制MHC Ⅱ类分子反式激活因子 CⅡTAMHC Ⅱ类分子反式激活因…     

移植物抗白血病效应与移植物抗宿主病调控研究进展

异基因造血干细胞移植作为治疗白血病有效手段之一.然而异基因造血干细胞移植的主要并发症之一移植物抗宿主病与移植物抗白血病效应密不可分.因此如何将两者分开成为移植领域研究热点,本文就目前进展进行综述.     

急性移植物抗宿主病预警指标的研究进展

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是引起异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后,患者非复发性死亡的主要原因之一.目前多数研究聚焦于aGVHD预警指标的研究,以期能够及时控制aGVHD的发生和发展,并获得关于aGVHD病理、生理学的新见解.笔者拟就近年来关于aGVHD预警指标的研究进展进行综述.     

移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应的分离策略

异基因造血干细胞移植（allo-SCT)是治愈血液系统恶性肿瘤最有效的方法，而且这种治愈效果与移植物抗白血病效应（GVL）有关，当今用于预防移植物抗宿主病（GVHD）的免疫抑制治疗是没有选择性的，会削弱GVL效应，如何在预防GVHD的同时最大限度保留GVL效应是当今移植领域的研究热点，本文主要介绍该领域的新进展。     

慢性移植物抗宿主病的研究进展

慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是异基因造血干细胞移植后晚期并发症中最为常见的一种。该病严重影响移植的成功。本综述cGVHD发病机制、诊断、预防和治疗的研究进展。     

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBV CDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT—PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明：单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBV CDR3分子存在一些C’末端保守的CDR3氨基酸基序（motif）。结论：单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBV CDR3基序,识别类似的抗原。     

高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究

本研究探讨高压氧（HBO）在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL／6受鼠注入供鼠BALB／c骨髓与脾淋巴细胞的混合液，分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD11a^＋、CD4^＋CD18^＋、CD8^＋CD11a^＋、CD8^＋CD18^＋的表达，用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明：HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA＋MTX组；HBO和CsA＋MTX可明显降低脾组织中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD11a^＋、CD4^＋CD18^＋、CD8^＋CD11a^＋、CD8^＋CD18^＋的表达（P〈0.05）；HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组（P〈0.05），但高于CsA＋MTX组；HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA＋MTX组（P〈0、05）。结论：高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤，其抗aGVHD的作用机制与调节促炎／抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。     

异体骨髓移植术后急性GVHD患者的护理

作者重点阐述了８例异体骨髓移植患者发生急性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的护理要点及注意事项，总结了皮肤、胃肠道及肝脏损害的护理体会，并提出了预防急性ＧＶＨＤ的具体措施。     

96例异基因造血干细胞移植后5年总生存率的危险因素分析

本研究探索96例异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后5年总生存的主要危险因素,以便早期采取积极有效的防治措施,更好地提高移植疗效。对96例allo—HSCT患者的资料进行回顾性分析。选择年龄、性别、移植时疾病状态、HLA配型、供者类型、供受者血型、预处理方案、急性移植物抗宿主病（aGVHD）、出血性膀胱炎（HC）、肝静脉闭塞（VOD）、间质性肺炎（IP）等11个临床参数,进行Cox单因素分析。将在单因素分析中P〈0．1作为有统计学意义的因素进行Cox多因素回归分析。aGVHD的累积发生率和患者的生存率采用Kaplan—Meier曲线计算。结果表明：除1例患者造血干细胞未植活外,其余95例患者均达到稳定植活,ANC≥0．5×10^9／L的中位时间为移植后13天。96例中有42例发生Ⅰ-Ⅳ度aGVHD（43．75％）,其中Ⅰ度11例（11．46％）,Ⅱ度19例（19．79％）;Ⅲ-Ⅳ度12例（12．50％）。96例接受移植的患者中复发10例,死亡38例,5年的总生存（OS）率为60．42％。Cox模型分析表明,aGVHD和移植前的疾病状态是影响患者长期生存率的主要因素,其相对危险度分别是2．996和2．619。结论：影响患者长期生存的主要危险因素是aGVHD和移植前的疾病状态,提高allo—HSCT疗效的关键是控制aGVHD,同时要把握好移植时机的选择,对于有高危复发因素的患者应争取在CRⅠ期进行allo—HSCT。     

雷公藤多甙对急性移植物抗宿主病小鼠的作用

本研究应用雷公藤多甙防治小鼠急性移植物抗宿主病。对受致死量照射的C57BL／6受鼠，注入供鼠BABC／c骨髓与脾淋巴细胞的混合液，并给予雷公藤多甙、环孢素A、甲氨蝶呤处理。用免疫组织化学法、流式细胞术和ELISA法检测各组小鼠T淋巴细胞、黏附分子、细胞因子。结果表明：所有异基因对照组小鼠，在30天内死于aGVHD，而雷公藤多甙组（19／21）、环孢素A＋甲氨蝶呤组（13／21）和雷公藤多甙＋环孢素A组（17／21）的大部分小鼠存活时间超过了30天，并没有明显的aGVHD症状表现。雷公藤多甙、环孢素A、甲氨蝶呤可明显降低皮肤、肺组织CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD11a^＋、CD18^＋细胞（P〈0．05）和脾组织CD3^＋,CD4^＋，CD8^＋，CD4^＋CD11a^＋，CD4^＋CD18^＋。CD8^＋CD11a^＋，CD8^＋CD18^＋细胞（P〈0．05）。而小肠组织CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞变化不明显（P〉0．05）。同时，雷公藤多甙可降低受鼠血清中IL-2、TNFα浓度和脾组织IL-2、TNFα的mRNA的表达（P〈0．05）；上调血清中IL-10的水平（P〈0．05）。但对IL-4的作用不显著（P〉0．05）。结论：雷公藤多甙具有明显抗aGVHD作用并同时保留抗白血病效应，其作用机制与调节促炎／抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达，以及抑制T淋巴细胞作用有关。     

人骨髓间充质干细胞体外对异基因T淋巴细胞表型的影响

为了研究间充质干细胞 (mesenchymalstemcell,MSC)的免疫调节作用 ,探讨防治异基因骨髓移植中移植物抗宿主病 (GVHD)和移植排斥反应 (HVGR)的可能途径 ,从人骨髓中分离培养间充质干细胞 ,并通过其形态的均一性及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度 ,将MSC分别以 8× 10 4 (A组 )、4× 10 4 (B组 )和 2× 10 4 (C组 )个细胞 孔分别接种于 6孔板 ,并与经分离的外周血T淋巴细胞共培养 7天 ,以单独培养的外周血T淋巴细胞为对照组 ,用流式细胞仪分别在培养 0、2 4、72小时和 7天测定各组T细胞上CD3、CD4、CD8、CD2 5表达的变化。结果表明 :T细胞和MSC共培养组与T细胞单独培养组相比 ,A组和B组CD4 CD2 5 免疫调节性T细胞和CD8 T细胞明显增多 ,A组和B组之间无明显差别。实验组和对照组相比CD3、CD4、CD2 5表达无明显差别。结论 :骨髓MSCs在体外可使外周血T细胞表型发生改变 ,CD4 CD2 5 免疫调节性T细胞和CD8 T细胞明显增多 ,本研究结果为临床异基因造血干细胞移植预防GVHD时MSCs的输注数量提供了参考。     

TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β(TGF-β)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/c小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL/c受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β实验组。TGF-β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β1(1μg/kg)。结果显示:TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组(p<0.01),TGF-β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF-β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高,但远低于移植对照组;TGF-β实验组血清IL-10浓度明显高于移植对照组。结论:TGF-β能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的aGVHD发生,提高移植后存活率。TGF-β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌,同时促进了Th2类细胞因子IL-10的表达,降低aGVHD的发生。     

抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析

本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术（hiBMT）后耐激素的急性移植物抗宿主病（aGVHD）治疗中的作用。对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20mg，第1、4天静脉点滴，未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果显示：完全有效8例（53．33％），其中4例无病生存，2例生存伴局限性cGVHD，2例死于肺部感染；3例部分有效（20％），其中1例无病生存，1例死于aGVHD及感染，1例死于肺部感染；4例无效（26．67％）死亡，死亡原因有GVHD、肺部感染、心力衰竭。总有效率73．33％，总生存率46．67％。该药应用安全，未发现输注相关的毒副作用。结论：抗CD25单克隆抗体对单倍体相合BMT后耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD具有较好的疗效，但总的生存率仍然较低，感染仍然是导致该类患者死亡的主要原因，因此加强环境保护，预防感染极为重要。     

供体TReg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和造血重建的影响

本研究探讨供体CD4^＋CD25^＋调控T细胞（regulatoryTcell,TReg）输注对异基因骨髓移植（allo-BMT）后小鼠移植物抗宿主病（GVHD）和造血重建的影响。建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,体外磁珠分离纯化供鼠外周血CD4＋CD25＋TReg细胞,接受移植的小鼠随机分为3组,在移植骨髓后6-8小时分别予尾静脉输注CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25^-T细胞和RPMI1640培养液（空白对照）。以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期及白细胞（WBC）、血小板（Plt）的重建为观察指标并进行组间比较。结果显示：TReg阳性细胞移植组,TReg阴性细胞移植组和空白对照组小鼠WBC〉1.0×10^9/L的时间分别为（8.14±3.26）天、（17.62±5.71）天、（19.81±6.77）天;Plt〉20.0×10^9/L的时间分别为（5.29±1.34）天、（8.97±3.44）天、（9.52±3.92）天,TReg阳性细胞移植组WBC和Plt恢复时间比TReg阴性组与空白对照组快（P〈0.05）。3组小鼠在移植后15天GVHD评分为（1.33±0.58）、（1.80±0.27）、（1.93±0.45）,TReg阳性细胞移植组小鼠与TReg阴性细胞移植组、空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。移植后（25-30天）的TReg阳性细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期TReg阴性细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻。3组小鼠移植后平均存活时间分别为（41.45±17.88）天、（18.75±14.39）天和（25.67±16.84）天,TReg阳性细胞移植组小鼠平均存活时间较TReg阴性细胞、空白对照组小鼠延长（P〈0.05）。结论：小鼠allo-BMT后输注供体TReg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存期,促进造血重建。