顺铂联合热疗抑制人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖作用的研究

目的在国内外现有的研究基础上,探讨顺铂联合热疗体外抑制人肝癌细胞增殖的效果,以确定联合方案是否具有协同效应。方法使用MTT法测定单独或联合应用化疗药物顺铂与热疗对人肝癌SMMC-7721细胞的体外增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测不同方案对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果联合应用热疗可以显著提高化疗药物顺铂引起的细胞增殖抑制及细胞凋亡。以亚毒性剂量浓度的顺铂为例,对照组、化疗组、热疗组、热化疗组的细胞增殖抑制率分别为0%、20.77%、32.46%、62.76%;细胞倍增时间分别为40.54、50.30、106.85、166.07 h;细胞凋亡率分别为2.19%、5.56%、10.16%、24.32%。结论联合应用热疗与顺铂,对SMMC-7721细胞体外增殖的抑制及诱导细胞凋亡具有显著的协同作用。     

羟基喜树碱联合热疗抑制人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖作用的研究

目的探讨羟基喜树碱联合热疗体外抑制人肝癌细胞增殖的效果,以确定联合方案是否具有协同效应。方法使用MTT法测定单独或联合应用羟基喜树碱与热疗对人肝癌SMMC7721细胞的体外增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测不同方案对SMMC7721细胞凋亡率的影响。结果联合应用热疗可以显著提高羟基喜树碱引起的细胞增殖抑制及细胞凋亡。以亚毒性剂量浓度的羟基喜树碱为例,对照组、化疗组、热疗组、热化疗组的细胞增殖抑制率分别为0%、13.65%、32.46%、71.89%;细胞倍增时间分别为40.54、86.35、106.85、187.90h;细胞凋亡率分别为2.19%、3.96%、10.16%、20.42%。结论联合应用热疗与羟基喜树碱,对SMMC-7721细胞体外增殖的抑制及诱导细胞凋亡具有显著的协同作用。     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的 研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法 使用MTT法测定细胞增殖，确定顺铂的工作浓度。并以该浓度进行化疗或与热疗联合，计算24h和48h时的细胞生存率，根据Veleriote法判断热化疗联合24h或48h的作用效果；24h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的调亡情况。结果以24h时ICA0-IC50的药物浓度作为试验的工作浓度，确定CDDP对SGC-7901和BCK3-823细胞的工作浓度分别为5μg／mL和1μg／mL。单纯的43℃热疗60min在24h时对2个细胞系均有抑制作用（P〈0．05），在48h时没有显著抑制作用。CDDP5μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时对SGC-7901细胞均有显著的抑制作用（P〈0．01），C73DP5μg／mL与热疗联合作用24h时呈叫显的协同作用，在48h时呈次加作用。CDDP1μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用（P〈0．01），CDDPμg／mL与热疗联合作用24h和48h均呈明显的协同作用；24h时流式细胞仪检测BGC＋823细胞的凋亡情况发现，CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论 CDDP5μg／InL与43℃热疗60min联合在24h时对SCiC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，在48h时里次加作用；CDDPμg／mL与43℃热疗60min联合BGC-823细胞的增殖抑制在24h和48h时均呈明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7 901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定顺铂的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况。结果以24 h时IC40~IC50的药物浓度作为试验的工作浓度,确定CDDP对SGC-7 901和BGC-823细胞的工作浓度分别为5μg/mL和1μg/mL。单纯的43℃热疗60 min在24 h时对2个细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48 h时没有显著抑制作用。CDDP 5μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时对SGC-7 901细胞均有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 5μg/mL与热疗联合作用24 h时呈明显的协同作用,在48 h时呈次加作用。CDDP 1μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 1μg/mL与热疗联合作用24 h和48 h均呈明显的协同作用;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现,CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01)。结论CDDP 5μg/mL与43℃热疗60 min联合在24 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,在48 h时呈次加作用;CDDP 1μg/mL与43℃热疗60 min联合对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h和48 h时均呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

苦参素注射液与顺铂联合对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响

目的:探讨苦参素注射液与顺铂(DDP)联合对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERTmRNA表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,半定量RT-PCR法检测wtp53和hTERTmRNA表达。结果:苦参素注射液、DDP单独应用均能抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合具有单纯相加或协同作用,与DDP单药组相比,联合用药组的细胞抑制率明显增加(P<0.01),端粒酶活性显著下降(P<0.01),wtp53mRNA表达明显升高(P<0.01),hTERTmRNA表达明显减少(P<0.01)。结论:苦参素注射液和DDP联合应用具有单纯相加或协同抗肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,其机制可能通过上调wtp53和下调hTERT基因表达,从而有效抑制端粒酶活性。     

STAT3在人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内的表达

目的研究信号传导及转录活化因子STAT3在人肝癌细胞内的表达及其表达产物STAT3酪氨酸磷酸化活化情况。方法分别采用western blotting、流式细胞术检测人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内STAT3蛋白和磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白的表达。结果人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内有STAT3的表达和酪氨酸(Y705)磷酸化。结论STAT3的异常表达和活化可能在肝癌的发生发展中起重要作用。     

伊立替康联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究

目的：探讨伊立替康联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果，以确定联合方案是否具有协同效应。方法：使用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法测定单独或联合应用伊立替康与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用，使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响。根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果；透射电镜观察细胞形态。结果：与伊立替康化疗或单纯热疗作用相比．伊立替康与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0．01），24h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现，热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：伊立替康与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

pEGFP-E1A真核表达载体的构建及其体外抑制SMMC-7721肝癌细胞作用研究

目的构建含有EGFP及Ad5.EIA基因的重组真核表达载体pEGFP-E1A,研究其在体外对肝癌细胞的裂解作用。方法对pUC119-E1A质粒双酶切获得E1A基因,定向克隆带EGFP和neo筛选标记的真核表达载体到pEGFP-C1载体中,构建pEGFP-E1A质粒,通过脂质体导入人肝癌细胞SMMC-7721中,经RT-PCR及间接免疫荧光方法确认EIA基因的导入,DNAladder法检测EIA基因对SMMC-7721细胞的凋亡诱导作用。结果酶切和序列测定结果显示重组质粒构建正确,RT-PCR及间接免疫荧光结果显示,外源性E1A基因已整合于SMMC-7721细胞并获稳定表达,在6小时就导致SMMC-7721出现细胞凋亡。结论初步证实E1A基因在体外对人肝癌SMMC-7721细胞具有诱导细胞凋亡的作用,为进一步探索Ad5.EIA基因的抗瘤作用提供实验基础。     

腹腔灌注顺铂射频热疗联合希罗达治疗晚期胃癌36例临床研究

目的:观察腹腔灌注顺铂射频热疗联合希罗达治疗晚期胃癌的疗效及安全性。方法:共入组晚期胃癌36例,其中管状腺癌2例,低分化腺癌17例,粘液腺癌12例,印戒细胞癌5例,治疗方案为顺铂40mg/m2,加入44℃生理盐水1500～2000ml中,行腹腔灌注,然后将射频热疗机探头对准病变部位持续热疗1.5h,温度42℃～43℃,第1、8天,希罗达2000mg/m2·d,分成2次口服,第1～14天,21天为1个周期,至少应用4个周期。结果:可评价疗效33例中,CR1例(3%),PR19例(57.6%),SD9例(27.3%),PD4例(12.1%),总有效率(CR+PR)60.6%,中位肿瘤进展5.7个月,中位生存期13.6个月,主要不良反应为骨髓抑制、恶心、呕吐及手足综合征。结论:腹腔灌注顺铂射频热疗联合希罗达治疗晚期胃癌疗效较好,毒性可耐受。     

金雀异黄素对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用的研究

目的研究金雀异黄素对人肝癌细胞SMMC-7721生长的影响。方法应用MTT法、流式细胞术和透射电镜超微结构观察分析金雀异黄素对SMMC-7721细胞生长的作用，细胞周期及形态学的影响。结果金雀异黄素明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长，G2／M期细胞增加。透射电镜超微结构观察发现金雀异黄素使肿瘤细胞超微结构改变。结论金雀异黄素可通过改变细胞的周期和超微结构而抑制人肝癌细胞生长。     

羟基喜树碱与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究羟基喜树碱与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC7901和BGC823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定羟基喜树碱的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24h和48h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24h或48h的作用效果;24h时流式细胞仪检测BGC823细胞的凋亡情况。结果以24h时IC20～IC30的药物浓度作为试验的工作浓度,确定HCPT对2株细胞系的工作浓度均为3μg/mL。单纯43℃热疗60min在24h对2株细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48h时没有显著的抑制作用。HCPT在24h时对SGC7901细胞有显著的抑制作用(P<0.01),与43℃热疗60min联合后在24h和48h时均有显著的抑制作用(P<0.01),HCPT3μg/mL与热疗联合作用24h或48h对SGC7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用。HCPT化疗或与热疗联合在24h和48h时均对BGC823细胞有显著的抑制作用(P<0.01),HCPT3μg/mL与热疗联合作用24h时对BGC823细胞的增殖抑制具有次加作用,在48h时呈明显的协同作用;24h时流式细胞仪检测BGC823细胞的凋亡情况发现,热疗组、HCPT化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论HCPT3μg/mL与43℃热疗60min联合在24h和48h时对SGC7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用;对BGC823细胞的增殖抑制在24h时呈次加作用,在48h时呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤作用

目的研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤的生长抑制作用及可能机制。方法建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤鼠模型,观察沙利度胺组与对照组瘤体变化,应用免疫组化方法测定瘤体组织中微血管密度,ELISA法测定荷瘤鼠外周血血管内皮生长因子（VEGF）表达,并采用流式细胞仪测定瘤体组织细胞凋亡指数及瘤体细胞中Caspase-3的表达。结果成功建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤鼠模型,随着皮下移植瘤的生长,在第7天以后,对照组瘤体体积渐大于沙利度胺组,且随时间延长差值增大。实验结束时沙利度胺组抑瘤率为24.6%。沙利度胺组荷瘤鼠外周血VEGF含量及瘤体组织微血管密度均显著低于对照组（t=6.563、3.586,P〈0.01）,瘤体组织细胞凋亡指数及Caspase-3阳性表达均显著高于对照组（t=7.356、5.147,P〈0.01）。结论沙利度胺能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721荷瘤鼠移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管形成可能为其机制,Caspase-3参与细胞的凋亡过程。     

高温、利多卡因、足叶乙甙联合体外净化淋巴瘤细胞

应用高温、利多卡因(lidocaine,LID)、足叶乙甙(etoposide,VP-16)联合法研究其在体外对淋巴瘤细胞的杀伤作用。结果:联合法(41℃60分钟 LID0.75mmol/L VP-16 8.5μmol/L)可杀伤3.2个对数级的淋巴瘤细胞,而正常骨髓CFU-GM仍有近50％存活,其处理模拟缓解期骨髓,显示残留恶性肿瘤细胞达到清除净化目的,又保持了正常造血细胞的活力。对于淋巴瘤患者的自身骨髓的体外净化有一定意义。     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因3个不同靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测survivin基因mRNA表达水平。选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后,免疫细胞化学法（ICC）检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖情况。结果与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性（F=18.64,q=4.293～4.925,P〈0.05）,而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性（q=0.631～0.126,P〉0.05）。转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调（F=68.39,q=13.71、14.37,P〈0.01）,其增殖能力较对照组显著下降（F=20.06～47.65,q=11.186、12.601,P〈0.01）。结论构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-sur-vivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究非甾体类抗炎药塞来昔布对肺癌细胞的体外抑制作用。方法选用肺癌A549细胞系体外培养,在不同塞来昔布浓度作用下,MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪测定肺癌细胞周期分布以及RTPCR法观察肺癌细胞血管内皮生长因子mRNA(VEGFmRNA)的表达水平。结果塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC50为50μmol/L;塞来昔布可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,有剂量依赖性;RTPCR法中,对照组肺癌细胞VEGFmRNA的表达水平高于药物组(P<0.05),药物组中肺癌细胞VEGFmRNA表达水平与塞来昔布浓度相关。结论塞来昔布对肺癌细胞有明显的体外增殖抑制作用,与VEGFmRNA的表达下调和阻滞细胞周期在G/G期有关。     

RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗影响

目的探讨RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗敏感性的影响。方法构建针对HepG2细胞survivin基因的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387。将HepG2细胞接种于6孔板中,分为空白对照组（不加药物）、阴性对照组（每孔加pshRNA-survivin-NC为3.2μg）、低浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为0.8μg）、中浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为1.6μg）、高浓度转染组（每孔加pshRNA-survivin-387为3.2μg）,作用48 h后收集细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数;将HepG2细胞接种于96孔板中,分为3组：空白对照组（不加药物）、阴性对照组（每孔加pshRNA-survivin-NC为0.2μg）、实验组（每孔加pshR-NA-survivin-387为0.2μg）,四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞分别与顺铂（2.0 mg/L）作用24、36、48、60 h后的增殖水平。结果各浓度转染组细胞的凋亡指数明显高于空白对照组和阴性对照组（F=228.87,q=10.45～38.21,P〈0.01）,高浓度转染组细胞凋亡指数高于低浓度转染组（q=23.99,P〈0.01）。顺铂对实验组细胞的细胞抑制率在24、36、48、60 h时明显高于空白对照组和阴性对照组（F=235.88～910.86,q=28.04～52.28,P〈0.01）。结论 pshRNA-survivin-387转染能诱导肝癌细胞的凋亡,增强肝癌细胞对顺铂化疗的敏感性。