肿瘤坏死因子对正常和甲亢甲状腺细胞功能调控的对比观察

采用细胞单层培养方法，以ｃＡＭＰ为观察指标，研究肿瘤坏死因子对正常和甲亢甲状腺细胞功能调控的特征。结果显示：（１）１０＾－３和１０＾－１Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦ－α对其状态下正常甲状腺细胞生成ｃＡＭＰ的值无显著影响，当其浓度为１０和１０＾３Ｕ／ｍｌ时，ｃＡＭＰ释放明显增加。ＴＮＦ－α在１０＾－３－１０Ｕ／ｍｌ的剂量范围内，对甲亢甲状腺细胞基础ｃＡＭＰ的生成无明显影响，但１０＾３Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦ－α则显著促     

干扰素和肿瘤坏死因子和调节甲状腺细胞分泌甲状腺球蛋白

采用甲状腺细胞培养方法,研究α－干扰素（ＩＦＮ－α）、γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）对甲状腺细胞生成甲状腺球蛋白的调节作用。结果显示：在１０＾－３－１０＾３ｕ／ｍｌ的浓度范围内,ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ－α均可显著抑制甲状腺细胞基础状态下Ｔｇ的分泌;ＩＦＮ－α不影响ＴＳＨ的刺激效应,但ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α对ＴＳＨ诱导的Ｔｇ释放具有双重调节作用,氏深度时（１０＾－３－１     

干扰素和肿瘤坏死因子调节甲状腺细胞分泌甲状腺球蛋白

采用甲状腺细胞培养方法，研究α－干扰素（ＩＦＮ－α）、γ－干扰素（ＩＮＦ－γ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）对甲状腺细胞生成甲状腺球蛋白（Ｔｇ）的调节作用。结果显示：在１０＾－３～１０＾３ｕ／ｍｌ的浓度范围内，ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ－α均可显著抑制甲状腺细胞基础状态下Ｔｇ的分泌；ＩＦＮ－α不影响ＴＳＨ的刺激效应，但ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α对ＴＳＨ诱导的Ｔｇ释放具有双重调节作用，低浓度时（１０＾     

干扰素对人胃癌细胞IAP—2表达的调节

应用基因重组干扰素－α和－γ体外诱导三侏人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５，ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－α或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－α和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＡＰ－２     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

白介素—6对甲状腺细胞功能调控的研究

目的：研究白介素－６（ＩＬ－６）对甲状腺细胞生长和分化功能的调节作用。方法：采用Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺培养细胞,分别以非同位素标记的细胞增殖分析法和放免法,检测ＩＬ－６对甲状腺细胞的生长、ｃＡＭＰ和甲状腺球蛋白（Ｔｇ）分泌功能的影响。结果：在１０＾－３～１０＾３Ｕ／ｍｌ的浓度范围内,ＩＬ－６不影响甲状腺细胞的生长功能,但此因子能够剂量依赖性地抑制甲状腺细胞基础和ＴＳＨ诱导的ｃＡＭＰ和Ｔｇ的生成。结论：ＩＬ－６在甲状腺分化功能的调节中发挥重要作用。     

干扰素对人胃癌细胞IAP－2表达的调节

应用基因重组干扰素－ａ和－γ（ＩＦＮ－ａ和－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ＿（７９０１）、ＭＧＣ＿（８０３）和ＭＫＮ＿（４５），ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照组细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ能增加这三株细胞ＩＡＰ－２表达量；而高浓度（＞１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－ａ和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＭＰ－２表达水平检测作为临床应用ＩＦＮｓ治疗癌症患者的疗效判别指标可能具有一定价值。     

HIV—1gp120基因及其与IFN—α基因共表达产物的构建和 …

目的 研究细胞因子ＩＦＮ－α在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应。方法 以表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因与ＩＦＮ－α基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＦＮ－α免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用流式细胞仪测定１００００个免疫鼠脾淋巴细胞中ＣＤ４＾＋，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞数及ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值。结果 ｐＧ－ＰＩＦＮ－α与ｐＧＰ比较，ｐＧＰＩＦＮ－α免     

人绒毛膜促性腺激素对甲状腺细胞cAMP生成的影响

采用细胞培养方法，研究人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）对甲状腺细胞ｃＡＭＰ生成的调节作用。结果显示：在１０￣１０＾４Ｕ／Ｌ的剂量区间，ｈＣＧ可明显刺激甲状腺细胞释放ｃＡＭＰ，ｈＣＧ浓度与ｃＡＭＰ产值之间存在明显的量效依赖关系。１０＾５Ｕ／Ｌ的ｈＣＧ亦显著促进ｃＡＭＰ的分泌，但其刺激强度低于１０＾４Ｕ／Ｌ的ｈＣＧ。提示ｈＣＧ具有类似ＴＳＨ的作用，是孕期母体甲状腺功能的重要调节因子。     

抗氧化剂PDTC抑制氧化的低密度脂蛋白诱导的人肾小球系膜细胞NF_(-k)B活化

目的 研究氧化的低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化的影响，以及抗氧化剂毗咯二硫氨基甲酸酯（Ｐ ＤＴＣ）对ＮＦ－ＫＢ活化的抑制作用，探讨ＯＸ－ＬＤＬ介导肾损害的基因调控机制及抗氧化剂ＰＤＴＣ防治脂质肾损害的可能性。方法 将Ｏｘ－ＬＤＬ或ＰＤＴＣ与ＨＭＣ共培养后，提取细胞核蛋白进行凝胶迁移率变动分析（ＥＭＳＡ）检测ＮＦ－ＫＢ的活化，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内ＩＫＢα蛋白含量的变化，反映ＩＫＢα的降解及免疫组化染色检测细胞内的Ｐ６５向核转位。结果 正常对照组未见ＮＦ－ＫＢ活化，当用不同浓度（１０、２５、５０及１００ｍｇ／Ｌ）的Ｏｘ－ＬＤＬ，刺激肾小球系膜细胞 ｌｈ后，均可引起细胞 ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解。与对只组相卜较差异显著（ｐ＜０．０５），以５０ｍｇ／Ｌ 的ＯＸ－ＬＤＬ刺激ＨＭＣ１ｈ，ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解最明显。ＮＦ－ＫＢ活化的同时，伴有Ｐ６５由胞浆向胞核的转位。１００μｍｏｌ／Ｌ ＰＤＴＣ，能明显抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化、ＩＫＢα降解（ｐ＜０．０１）及 Ｐ６５的核转位。结论Ｏｘ－ＬＤＬ。能诱导ＨＭＣ的ＩＫＢαａ降解、Ｐ６５的核转位，最终使Ｎ     

甲状腺上皮HLA—DR抗原异常表达及临床意义

应用一组识别淋巴细胞活化标志，细胞因子，组织相容性抗原（ＨＬＡ－ＤＲ）的单克隆抗体及ＡＢＣ免疫组化技术对５００例甲状腺粗针穿刺标本进行原位研究。结果发现甲状腺上皮ＤＲ抗原异常表达与局部浸润细胞总数，Ｔａｃ＾＋细胞，ＴＬｉＳＡ１＾＋细胞，ＩＦＮ－γ＾＋ＸＬＥＱ，－２＾＋细胞，尤其是Ｉ２＾＋细胞与ＴＮＦ－α，细胞百分比外周血甲状腺球蛋白抗体，甲状腺微粒体抗体，促甲状腺素水平呈正相关，甲状腺上皮ＤＲ抗原     

大鼠骶髓后连合核神经元兴奋性氨基酸诱导的反应

应用制霉菌素穿孔全细胞电压钳技术，研究急性分离的大鼠骶髓后连合核（ＳＤＣＮ）神经元对谷氨酸受体激动剂的反应。钳制电压为－４０ｍＶ的条件下，Ｌ－谷氨酸（Ｇｌｕ），Ｎ－甲基－Ｄ－门冬氨酸（ＮＭＤＡ），使君子酸（ＱＡ），α－氨基－３－羟基－５－甲基异倾阶－４－丙酸（ＡＭＰＡ）和红藻氨酸（ＫＡ）均诱导产生内向电流。随着激动剂浓度的增高，这些电流的量效关系曲线呈典型的Ｓ型。ＥＣ５０值分别是Ｇｌｕ３．３×１０－５Ｍ，ＮＭＤＡ９．０×１０－ＳＭ，ＱＡ６．４×１０７Ｍ，ＡＭＰＡ１．３×１０－４及ＫＡｇ．６×ｕ１０－５Ｍ。Ｎｉｌｌ系数分别是Ｇｌｕ０．７４，ＮＭＤＡ０．８３，ＱＡ１．３，ＡＭＰＡ１．１和ＫＡ１．３。代谢型谷氨酸受体激动剂ｔＡＣＰＤ（１０－３Ｍ）未能诱导出电流．Ｃｙｃｌｏｔｈｉａｚｉｄｅ显著增强ＫＡ和ＡＭＰＡ诱导的反应。相反，伴刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）对ＫＡ和ＡＭＰＡ反应作用甚微，提示ＳＤＣＮ神经元主要表达ＡＭＰＡ型非ＮＭＤＡ受体。     

IFN—γ抑制血管成形术后兔血管平滑肌细胞增殖和PDGF—A的表达

目的和方法：采用体外细胞培养，进行氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交。结果：发现γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）能抑制体外培养新西兰兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ合成和血小板衍化生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）的基因表达；整体实验中，用４ＦＦｏｇａｒｔｙ导管气囊拉伤新西兰兔的腹主动脉内皮后，随即连续肌注ＩＦＮ－γ（１６５万Ｕ·ｋｇ１·ｄ１）３天，结果发现肌注ＩＦＮ－γ能明显抑制受损部位ＶＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ的标记率及ＰＤＧＦ－Ａ的表达。结论：ＩＦＮ－γ对血管成形术引起的血管挛缩有一定的舒张作用。     

羧甲基茯苓多糖对HPBL分泌IL—2,TNF,IL—6,IFN—γ的调节作用

用ＣＭＰ培养外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ）２４、３６、４８、７２ｈ采样检测的ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ效价分别可达１３．６±４．３，４１．９±２．０，１８３７．４±４６４．３，１０３７．９±２１１．０Ｕ／ｍｌ，分别比无ＣＭＰ的细胞培养对照组的效价高０．８，７．４，０．５，１０．９倍（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ具有ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ的诱生剂功能。由ＣＭＰ预处理ＨＰＢＬ后经ＰＨＡ和／或ＣｏｎＡ促诱生组的ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ效价分别比无ＣＭＰ的ＰＨＡ和／或ＣｏｎＡ刺激的相应常规诱生组高１．２～２．８，０．５～１．１、０．５～０．８、０．４～０．６倍（Ｐ＜０．０１），尤以ＣＭＰ＋ＰＨＡ＋ＣｏｎＡ促诱生细胞因子效果最佳（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ又具有ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ促诱生效应。     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

CMP促诱生IL—2,TNF—α,IL—6,IFNγ／α效应和产品中试

用羧甲基茯苓多糖（ＣＭＰ）预处理人外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ），在以ＰＨＡ和ＣｏｎＡ为主的复合诱生剂诱导培养２４、３６、４８、７２ｈ采样检测的促诱生组ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮγ效价（ｘ±ｓ）分别为４５６．１±２４．２，４７５．６±１８５．７，７４３３±１１８９．９，５５８３．０±５３５．５ＩＵ／ｍｌ，分别比无ＣＭＰ的常规诱生组效价高１．５，３．８，１．８，１．４倍；在以ＮＤＶ－Ｆ病毒为诱生剂诱导培养２２ｈ采样，并经酸化和中性化后检测的ＩＦＮ－α效价可达２１２７４．２±５５２３．０ＩＵ／ｍｌ，比无ＣＭＰ的常规诱生组高１．２倍，均有显著差异（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ对上述五种细胞因子均有明显的促诱生效应。此外，还采用ＣＭＰ促诱生技术，对ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮγ和ＩＦＮ－α细胞因子进行了中试，提出了低成本、高效益的中试工艺路线，有待于在制备天然细胞因子的细胞工程中推广应用     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立

本文应用兔抗ｈＡＦＰ ＩｇＧ包被板条，以异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ－Ｅｕ＾３＋标记抗ｈＡＦＰ ＭｃＡｂ，建立了固相“夹心”二步法分析ｈＡＦＰ技术，结果显示，分析范围是６．２５ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９），变异系数在１．６７％－１７．７４％之间，ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样品，同所购ＤＥＬＦＩＡ ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５ｎｇ／ｍｌ。测定７６例孕妇血清样     

IL—10对外周血单个核细胞体外产生IL—2及IFN—γ的调节作用

为探讨Ｔｈ１与Ｔｈ２两类细胞因子间相互调节，研究了ｒｈＩＬ－１０对ＰＨＡ体外诱导人ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ的影响。结果表明，１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－１０明显抑制ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ（Ｐ＜０．０２及Ｐ＜０．０１）。在加入兔抗人ＩＬ－１０抗体的ＰＢＭＣ体外培养体系中，在５μｇ／ｍｌ浓度时，ＩＬ－２产生可明显增加（Ｐ＜０．０５），随着抗体浓度增加，ＩＬ－２呈剂量依赖性增加（ｒ＝０．９６２，Ｐ＜０．０１），ＩＦＮ－γ产生亦增加，但差异不明显。本研究表明ＩＬ－１０抑制活化人ＰＢＭＣ体外产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ，而抗人ＩＬ－１０抗体则表现出增强作用。ＩＬ－１０介导Ｔｈ１与Ｔｈ２两类辅助性Ｔ细胞间的相互调节，选择机体对抗原的免疫应答类型，从而对临床疾患的防治有一定指导意义。     

反义Gαq/11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的影响

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ｖＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代修饰的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ），以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＴ－１刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ｖＳＭＣ。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ｖＳＭＣＤＮＡ合成、免疫细胞化学技术检测ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ｖＳＭＣＤＮＡ的合成，在１２ｈ，２４ｈ时抑制率分别为８４２％和８５３％；Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ亦明显降低ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白的表达。而相同浓度的正义Ｇαｑ／１１ＯＤＮｓ只呈现少量抑制作用。结论：本实验提示Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的ｖＳＭＣ增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治的研究