褪黑素在烫伤大鼠的抗氧化和抗炎作用

目的:研究早期应用褪黑素对于深Ⅱ度烫伤大鼠的抗氧化和抗炎的作用.方法:雄性sD大鼠30只,分为假烫组,烫伤组和烫伤 褪黑素治疗组(治疗组)每组10只动物.烫伤组和治疗组大鼠在背部造成30%体表总面积(TBSA)的深Ⅱ度烫伤,烫伤组和治疗组伤后平衡盐补液治疗.治疗组分别于伤后1 min,6 h,以10 mg/kg的剂量给予腹腔注射褪黑素溶液.各组于12 h采集血清标本检测丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)等反映自由基水平的指标;用ELISA方法检测TNF-α,IL-1β等炎症因子指标.于伤后12 h采集烫伤皮肤组织,用TUNEL和cagpase-3免疫组织化学检测残留毛囊细胞的凋亡情况.结果:与假烫组比较,烫伤组伤后12 h血清MDA显著升高,GSH明显下降;TNF-α,IL-1β含量显著增加(P<0.01).与烫伤组比较,治疗组12 h血清MDA含量降低了34%;GSH增加了37%;TNF-α下降了29%;IL-1β降低了35%(P<0.05).TUNEL显示烫伤组伤后12 h残留毛囊凋亡细胞率为(30.9±2.5)%,高于假烫组的(3.8±1.9)%,(P<0.01).而治疗组的毛囊凋亡细胞率降低为(20.2±2.4)%,低于烫伤组(P<0.05).caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势.结论:深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素,可以改善机体氧化应激水平、降低炎症反应进而具有保护毛囊细胞的作用.     

热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞线粒体结构和功能的影响

目的 探讨热休克预处理(HS)对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞线粒体的保护作用及机制.方法 观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞超微结构及线粒体超氧化物歧化酶(mSOD)和线粒体细胞色素氧化酶(mCCO)活力的影响.将Wistar大鼠随机分为烫伤组(40只):烫伤后即制作急性胃黏膜损伤模型,另取8只大鼠不致伤作为空白对照(伤前);HS组(40只):于烧伤前20 h行热休克预处理,另取8只行热休克预处理不烫伤,作为实验对照(伤前).各组于伤后3、6、12、24、48 h处死大鼠(每组每时相点8只大鼠)后留取标本检测大鼠胃黏膜损伤指数(UI)、胃黏膜细胞超微结构改变,热休克蛋白(HSP)60、HSP70、mSOD、mCCO变化,并进行相关分析.结果 大鼠严重烫伤后胃黏膜损害明显(伤后24 h UI值12.7±1.9),胃黏膜细胞超微结构改变显著,mSOD和mCCO活力随烧伤时间延长而降低,伤后24 h分别降至0.64±0.05、0.28±0.04.热休克预处理能诱导烫伤大鼠胃黏膜HSP60和HSP70表达显著增加.伤后24 h分别为0.53±0.08和0.64±0.09,明显高于烫伤组0.31±0.04(P＜0.05)和0.27±0.04(P＜0.01),并明显减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害(伤后24 h UI值6.3±0.7 vs 12.7±1.9,P＜0.01);热休克预处理能显著降低胃黏膜mSOD的消耗(伤后24 h值293±32 vs 108±11,P＜0.01),提高mCCO活性(伤后24 h值0.64±0.05vs 0.28±0.04,P＜0.01);电镜观察显示热休克预处理大鼠胃黏膜细胞超微结构受损程度减轻,线粒体改变不明显.相关分析结果显示,mSOD与HSP70呈显著正相关(r=0.436,P＜0.05);mCCO与HSP60呈显著正相关(r=0.679,P＜0.05).结论 热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜细胞线粒体具有保护作用,可显著减轻大鼠烫伤后急性胃黏膜损害,保护线粒体机制与HSP60、HSP70保护抗氧化酶mSOD及呼吸酶mCCO活性密切相关.     

烧伤后胰岛素抵抗的实验研究

目的:探讨大鼠烧伤后葡萄糖耐量,胰岛素敏感性指数和正常血糖高胰岛素钳夹的变化情况,证实烧伤后存在胰岛素抵抗.方法:6周龄SD大鼠(体质量160～170 g)随机分为假烫伤组和烫伤组,每组8只.烫伤组大鼠制成烧伤面积为30%的Ⅲ度烫伤模型,伤后第3天禁食12 h后采血,用自动血糖仪测定血糖;用大鼠胰岛素ELISA试剂盒测血浆胰岛素水平和胰岛素敏感性指数(ISI);测0、30、60、90、120 min血糖值,观察葡萄糖耐量的变化;伤后第4天观察正常血糖高胰岛素葡萄糖钳夹技术10%葡萄糖总输注率的变化情况.结果:与假烫伤组相比,大鼠烫伤后第3天血糖和血浆胰岛素水平显著升高[血糖(8.94±2.22)vs(6.10±0.62)mmol/L,血浆胰岛素浓度(3.14±1.08)vs(1.06±0.45)ng/ml,P＜0.01],而ISI显著下降[(0.58±0.23)vs(1.23±0.16),P＜0.01].烫伤后第3天葡萄糖耐量实验显示烫伤大鼠对于外源性葡萄糖耐受性在各时间点均明显降低.烫伤后第4天正常血糖高胰岛素钳夹技术检测显示10%葡萄糖输注率较假烫伤组显著下降[(7.23±1.35)vs(12.31±0.54)mg/(kg·min),P＜0.01].结论:大鼠烧伤后可引起糖代谢异常并导致胰岛素抵抗发生.     

丙酮酸乙酯对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达和肺损伤的影响

目的 观察丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达水平及急性肺损伤的影响.方法 采用大鼠30%总体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏模型,78只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假烫伤组(n=18)、烫伤组(n=30)、EP治疗组(n=30),每组分别在假伤或伤后第8、24、72小时活杀留取肺组织.HMGB1基因/蛋白表达分别采用逆转录聚合酶链反应及蛋白免疫印记法、免疫组化方法检测;髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性采用酶学分光光度法测定;并采用HE染色、光镜下观察肺组织病理改变.结果 与假烫伤组比较,烫伤组肺组织HMGB1基因/蛋白表达于伤后8～72 h显著增强(P＜0.05,P＜0.01),同时肺组织MPO活性在8 h及24 h明显升高(P＜0.01),病理学观察见肺组织炎细胞浸润,正常结构破坏,其中以24 h改变最重.与烫伤组比较,EP治疗组大鼠肺组织8～72 h时间点HMGB1表达显著下调(P＜0.05),肺组织MPO活性在8、24 h时间点显著下降(P＜0.01),EP治疗组8～72 h肺组织病理形态损害明显减轻.结论 HMGB1作为晚期炎症因子参与了烫伤后肺组织炎症反应的病理过程,EP治疗可明显下调肺组织HMGB1表达,并有助于降低肺组织MPO活性,从而减轻烫伤延迟复苏所致急性肺损伤.     

腺苷预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过观察腺苷对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白-78（GRP-78）和半胱氨酸天冬氨酸特异性
蛋白酶12（caspase 12）表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法通过阻断大鼠肾动脉水平的腹主动脉90 min建立大
鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。27只成年健康雄性SD大鼠随机分成3组：假手术组（A组）;缺血再灌注损伤组（B组）;腺苷预处
理组（C组）。于再灌注6、12、24 h观察大鼠并对其后肢运动功能进行评分,取再灌注24 h大鼠的L2-L5节段脊髓组织作HE染
色及TUNEL 染色,Western blot检测GRP-78和caspase 12蛋白的表达。结果HE染色结果显示：C组细胞水肿等组织形态学变
化较B组轻;TUNEL染色结果显示：与A组比较,B组的凋亡细胞数量显著增加;与B组相比,C组凋亡细胞数量较少。WB检
测结果显示：相较于B组,C组GRP-78蛋白表达增多（P<0.01）,caspase 12蛋白表达减少（P<0.01）。结论腺苷通过上调GRP-78
的表达,下调caspase 12的表达,抑制细胞凋亡而发挥其保护作用。     

川芎嗪对严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对烧伤后大鼠心肌细胞凋亡的影响及初步机制探讨.方法 选健康Wistar大鼠50只,随机分为5组,对照组、烧伤组(即B组,造成30%TBSAⅢ度烧伤)、烧伤 TMP组(B TMP组,烫伤后即刻腹腔注射TMP,20mg/kg)、烧伤 SB202190组(B SB组,烫伤后立即注射SB202190,10mg/kg)及烧伤 TMP SB202190组(B TMP SB组).放射免疫法测定TNFα含量,末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞、RT-PCR,免疫组化分析心肌Fas、caspase-8、Bcl-2和Bax基因表达,荧光分析法测定Caspase-3活性.结果 与对照组比较,B组大鼠心肌细胞凋亡指数(17.46±2.45),心肌中TNFα含量,Fas、caspase-8和Bax蛋白水平及caspase-3活性均显著性升高,但Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01).B TMP组大鼠心肌TNFα含量、心肌细胞凋亡指数(4.15±0.41),心肌Fas、caspase-8和Bax表达水平及caspase-3活性均显著性低于B组,而Bcl-2蛋白表达水平则显著高于B组(P<0.01).结论 TMP对烧伤后心肌细胞凋亡有较好的抑制作用,其机制可能是TMP通过降低TNFα的生成及调节凋亡相关基因的表达.     

大黄素对糖尿病大鼠肠平滑肌内质网应激及调控机制的研究

目的 探讨大黄素对糖尿病大鼠肠平滑肌细胞凋亡机制及调控机制.方法 SD大鼠分为对照组、糖尿病组与大黄素组,成模10周时,检测小肠推进率;TUNEL法测肠平滑肌细胞凋亡;免疫组织化学测细胞葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)及Caspase-12蛋白表达.结果 糖尿病组与大黄素组大鼠于成模后出现多尿、多饮、多食、体质量减轻症状;血糖水平显著增高(P＜0.05).成模10周时,与对照组比较,糖尿病组大鼠小肠推进率显著下降(P＜0.05),肠平滑肌细胞凋亡率、GRP78、Caspase-12蛋白表达显著增加(P＜0.05).与糖尿病组比较,大黄素组小肠推进率显著增高(P＜0.05),肠平滑肌细胞凋亡率、GRP78、Caspase-12蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 内质网应激途径介导了糖尿病大鼠肠平滑肌细胞凋亡;大黄素可能降低糖尿病大鼠肠平滑肌内质网应激介导的细胞凋亡,从而改善肠动力.     

低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡的内质网应激机制研究

目的:本文对低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡相关机制进行研究,为新药开发和临床治疗提供参考.方法:人卵巢癌细胞A2780经低剂量奥沙利铂联合紫杉醇处理后,MTT法检测细胞增殖情况;采用real-time PCR及Western Blotting方法检测内质网应激相关蛋白PERK,CHOP以及细胞凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的表达情况.结果:低剂量奥沙利铂(1μM)联合紫杉醇(10 mM)处理72 h后,A2780细胞抑制率为39.5％,明显高于其他组,差异具有统计学意义(P＜0.01);且PERK、CHOP及细胞凋亡蛋白在mRNA和蛋白质水平上均明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:低剂量奥沙利铂联合紫杉醇可能通过激活人卵巢癌细胞A2780的内质网应激及细胞凋亡通路起抑制细胞增殖的作用.     

生脉注射液对大鼠烧伤后心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨生脉注射液对大鼠烧伤后心肌细胞凋亡的影响.方法 SD(Sprague-Dawley)大鼠72只,随机分成单纯烫伤组(B组,n=36)和烫伤并应用生脉注射液治疗组(S组,n=36),制成30%TBSA Ⅲ度烫伤模型,伤后B组按Parkland公式补液,S组在B组的基础上伤后即刻按4 ml/kg给予生脉注射液,并相应减少补液量,两组均于不同时相点,取左室心肌组织切片,做病理形态学观察,并采用DNA切口末端标记法(TUNEL)和心肌组织caspase-3活性双指标联合检测细胞凋亡.结果 病理切片显示S组较B组心肌组织损伤有所减轻;两组心肌细胞TUNEL显示烫伤后6 h呈阳性,伤后12 h达高峰;caspase-3活性变化早于凋亡形态学变化,于伤后3、6 h达峰值;S组较B组在伤后6、12、24 h心肌细胞凋亡指数显著降低(P＜0.01),左心室心肌组织caspase-3活性在伤后3、6、12 h也显著降低(P＜0.05).结论 烧伤后早期心肌细胞凋亡参与了烧伤病理损伤过程.早期应用生脉注射液治疗可以有效地减少心肌细胞的凋亡,进而减轻心肌的损伤,起到保护心肌的作用.     

丙泊酚对大鼠移植肾脏细胞凋亡通路的影响

目的 研究丙泊酚对肾移植大鼠肾脏局部血流动力学的改变和内源性线粒体凋亡信号通路中关键蛋白表达的变化.方法选择成年近交系Lewis雄性大鼠40只行异体肾移植,实验鼠分为三组:对照组(C组),肾移植组(RT组),肾移植 丙泊酚组(RT P组).术中分别记录实验鼠的左肾肾静脉血流速度,不同时间进行比较;用蛋白免疫印迹方法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白Bd-2,Bax,caspase 3和细胞色素C的表达. 结果 ①肾静脉血流速度:RT组和RT P组组内比较供肾在受体均比在供体显著下降(P<0.05),组间比较RT P组供肾血流速度显著下降(P<0.05).②凋亡相关蛋白:RT组移植肾与对照组相比Bcl.2表达减弱,Bax,caspase 3,细胞色素C表达增强;RT P组移植肾与RT组相比Bcl-2表达增强,而Bax,细胞色素C,caspase 3表达降低. 结论 丙泊酚可降低肾移植大鼠移植肾的肾静脉血流速度;丙泊酚抑制大鼠移植肾脏的缺血/再灌注损伤引发的内源性线粒体细胞凋亡信号通路中相关蛋白的表达,起到肾保护的作用.