骨形成蛋白和氯己定双缓释的壳聚糖温敏凝胶用于牙周组织再生的实验研究

目的 观察双重缓释骨形成蛋白和氯己定的壳聚糖温敏载药凝胶修复牙周组织缺损的效果.方法 制备犬前磨牙Ⅱ度根分叉牙周组织缺损模型,分5组于牙周组织缺损处分别注入:①自制的双重缓释骨形态发生蛋白和氯己定的载药凝胶(T1组);②仅加载缓释骨形态发生蛋白的壳聚糖温敏凝胶(T2组);③仅加载缓释氯己定的壳聚糖温敏凝胶(T3组);④未加载任何药物的壳聚糖温敏凝胶(C1组);⑤不注射任何载体及药物(C0组).术后不使用抗生素,常规护理,8周后取材进行大体及组织学观察牙龈炎性反应及牙周组织再生情况.结果 应用壳聚糖温敏凝胶,可以方便地通过注射方式局部安放载体.T1组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的99.2%,T2组新生牙槽骨高度平均达到缺损高度的87.8%,T3组为63.6%,C1组为37.0%,CO组为34.3%;牙龈炎性反应细胞浸润情况显示T1及T3组炎细胞数量明显少于其他组.结论 自制双缓释壳聚糖温敏凝胶有效发挥了骨形态发生蛋白和氯己定各自的作用,并且在牙周组织再生治疗中具有简便性和有效性.     

黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备及释药性能检测

目的:将黄芩苷和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)载入壳聚糖温敏凝胶,构建双缓释体系,检测凝胶对药物的体外释放情况。方法:采用乳化缩聚法制备黄芩苷-明胶微球(gelatin microspheres,GMS);用不同配比的壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液制备壳聚糖温敏凝胶,观察在37℃的成胶情况,选择最佳配比;在此基础上,将不同浓度的黄芩苷-GMS与BSA共混于壳聚糖凝胶溶液,测定载药后的成胶情况及黄芩苷和BSA的体外释放情况。结果:成功制备了黄芩苷-GMS,载药率5.62%,包封率72.05%;1.8%壳聚糖溶液与9%的β-GP混合10min后可获得状态良好的凝胶;加载两种药物后的凝胶溶液相转变时间未发生改变;30d时低浓度组累积释放了63.79%,两个较高浓度组分别释放了74.86%、77.63%。结论:壳聚糖温敏凝胶可以同时负载黄芩苷-GMS和BSA两种药物,在室温下呈溶液状态,37℃下经过10min可转变成半固体凝胶,在体外释药可达30d。黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备和释药性能检测为牙周组织修复再生药物的研制提供了基础。     

缓释骨形态发生蛋白-2的壳聚糖温敏凝胶促进牙周组织再生的实验研究

目的观察自制的加载重组人骨形态发生蛋白- 2（rhBMP- 2）的壳聚糖温敏凝胶修复牙周组织缺损的效果。方法选取3只健康雄性杂种犬制备前磨牙区人工Ⅱ度根分叉区组织缺损模型,随机分为空白对照组、空白凝胶组及载药凝胶组,术中先严密缝合组织瓣,然后对空白凝胶组及载药凝胶组区域分别注射先期配制并消毒好的空白凝胶和载药凝胶,术后8周取材行大体及组织学观察。结果载药凝胶组出现明显的牙周组织再生,而空白对照组和空白凝胶组仅有少量的牙周组织再生。载药凝胶组与空白对照组及空白凝胶组均有统计学差异（P<0.05）,空白对照组和空白凝胶组相比,没有统计学差异。结论载rhBMP- 2的壳聚糖温敏凝胶可有效促进牙周组织再生,同时简化手术操作,是一项有潜力的牙周组织再生手段。     

碱性成纤维细胞生长因子/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶促大鼠牙周组织再生的研究

目的 探讨不同种壳聚糖衍生物温敏型复合水凝胶作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法制备磺化壳聚糖（SCS）、磷酸化壳聚糖（PCS）及磷酸化磺化壳聚糖（PSCS） 3种具有不同生物学特性的壳聚糖衍生物,构建3种碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶。选取20只雄性wistar大鼠,大鼠双侧上颌第一磨牙近中建立三壁骨袋,随机分为空白对照组、空白凝胶组、bFGF/SCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PSCS/胶原温敏型复合水凝胶组,术后6周处死大鼠,采集标本,进行大体、苏木精-伊红染色、Masson染色观察。结果 术后6周,3种bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶组与空白对照组在相对牙槽骨高度比值、相对上皮根向下移比及牙周组织再生分级计数等方面的差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶在牙周组织工程邻域具有良好的应用前景。     

盐酸米诺环素缓释剂对慢性牙周炎龈沟液碱性磷酸酶水平的影响

目的:观察成人慢性牙周炎应用盐酸米诺环素缓释软膏治疗前后龈沟液中碱性磷酸酶(alkalinephos phatase ,ALP)水平的变化。方法:2 8例慢性成人牙周炎患者,每例口腔左右两个象限随机分为实验组和对照组。基础治疗后实验组使用盐酸米诺环素缓释软膏,一周一次,共4周。对照组不使用盐酸米诺环素软膏。测定两组治疗前后龈沟液中ALP水平。结果:实验组、对照组在治疗后龈沟液中ALP均明显降低(P <0 .0 1)。治疗前后实验组与对照组龈沟液中ALP变化有显著性差异,实验组优于对照组(P <0 .0 1)。结论:基础治疗和盐酸米诺环素缓释软膏联合应用对成人慢性牙周炎的治疗在降低龈沟液中ALP方面优于单纯的基础治疗。     

两种消毒方法对壳聚糖温敏凝胶物理性能及生物学特性影响的研究

目的:比较不同消毒方法对壳聚糖温敏凝胶物理性能及生物学特性的影响。方法:采用常规消毒法(壳聚糖-盐酸液高温高压消毒)和改进消毒法(壳聚糖粉单独高温高压消毒)制备壳聚糖温敏凝胶,分别检测其凝胶化时间、粘度;通过扫描电镜观察2组壳聚糖温敏凝胶的超微结构;在2组壳聚糖温敏凝胶表面培养第三代人牙周膜细胞,倒置荧光显微镜观察凝胶表面细胞活性;用2组壳聚糖温敏凝胶浸提液培养第三代人牙周膜细胞,MTT法检测细胞增殖情况。结果:改进组壳聚糖温敏凝胶凝胶化时间5～6 min稳定,常规组壳聚糖温敏凝胶凝胶时间为10～30 min不等;改进组的壳聚糖温敏凝胶初始粘度为(9.94±0.38)Pa.s,在37℃环境下其粘度随时间延长而增加,10 min后达(50.25±0.96)Pa.s,此后趋于平稳。常规组初始粘度为(0.90±0.45)Pa.s,其粘度随时间延长增加不明显,15 min时仅为(4.05±0.72)Pa.s,2组各时间点间均有显著差异(P<0.05);扫描电镜观察2组壳聚糖温敏凝胶均呈三维立体网状多孔结构,常规组孔径为10～48.33μm,改进组孔径为0.385～2μm。人牙周膜细胞不仅在2组壳聚糖温敏凝胶表面生长良好,而且在其浸提液中也均增殖正常。结论:改进消毒方法制备的壳聚糖温敏凝胶凝胶化时间更短,粘度更大,与常规消毒方法一样具有良好的生物相容性。     

多西环素纳米脂质体缓释凝胶改善大鼠牙周损伤的作用评价

目的:在动物体内检验多西环素纳米脂质体缓释凝胶的生物相容性及其对牙周损伤动物模型的修复效果.方法:毒性实验-用20%样品(多西环素纳米脂质体缓释凝胶)水溶液给予SD大鼠灌胃,观察长期应用多两环素纳米脂质体凝胶剂有无全身毒性反应及其程度.造模动物实验-将牙周损伤动物模型造模成功的SD大鼠分为5组(空白组、派丽奥组、纳米组、基质组、造模组),按分组进行相应治疗,通过实时定量PCR检验各组大鼠龈沟液中MMP-8及其抑制剂TIMP-1的表达,采用SAS13.3软件包对数据进行t检验.结果:自制的多西环索纳米脂质体缓释凝胶具有良好的生物相容性:经多西环素纳米脂质体缓释凝胶治疗1个月后的牙周病变大鼠龈沟液中MMP-8含量明显降低,与其他对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:牙周袋内应用多西环素纳米脂质体缓释凝胶可降低龈沟液中MMP-8的含量,减轻牙周炎症,提示该药物制剂对改善大鼠牙周炎症有一定疗效.     

CS/β-TCP/rhBMP-2复合因子加血管束修复兔下颌骨缺损的实验研究

目的:通过研究在壳聚糖(CS)/β-磷酸三钙(β-TCP)复合体修复兔下颌骨缺损的过程中,探讨重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)及兔面动脉血管束对成骨作用的影响,探讨CS/β-TCP/rhBMP-2+复合因子血管束修复骨缺损的可行性。方法:健康新西兰大白兔36只共36侧骨缺损(全部为左侧),随机分为3组。实验组在缺损区植入CS/β-TCP复合体,加入rhBMP-2,同时包埋兔面动脉及下颌下腺包膜组成的血管束;对照1组缺损区植入CS/β-TCP复合体,只加入rhBMP-2;对照2组缺损区植入CS/β-TCP复合体,并包埋兔面动脉及下颌下腺包膜组成的血管束,不加入rhBMP-2。于术后4周、8周、12周分批处死动物,取材后行大体观察、X线、组织切片染色观察及骨密度测定,观察各组的成骨情况。采用SPSS13.0软件包进行组间比较。结果:实验组在术后8、12周的骨密度值均显著高于对照组(P<0.05)。术后12周,实验组取材后大体观察,植入材料区皮质骨形成完好,与自体骨组织分界肉眼难辨别,X线表现较正常骨质已无明显差异,HE染色可见丰富成熟的骨小梁及板层骨,各项指标均显著优于对照组。结论:CS/β-TCP复合体修复兔下颌骨缺损过程中,加入rhBMP-2并包埋进兔面动脉血管束可明显促进成骨作用。     

壳聚糖温敏凝胶负载釉基质蛋白对骨髓基质细胞的作用

目的:探讨在壳聚糖温敏凝胶支架材料中釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响.方法:合成壳聚糖温敏凝胶并加入适当浓度的EMPs,通过考马斯亮蓝试剂盒检测其对EMPs的缓释作用.用全骨髓培养法获得大鼠BMSCs.含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代培养.含EMPs浓度分别为0、50、100、150μg/mL DMEM培养液培养第3代大鼠BMSCs,MTT法测定各组细胞的增殖活性.MTT法及ALP试剂盒检测大鼠BMSCs在负载100μg/mL EMPs及不负载EMPs的壳聚糖温敏凝胶支架材料中的增殖情况及ALP的活性.采用SPSS11.0软件包对实验数据进行单因素方差分析及两样本t检验.结果:EMPs可在壳聚糖温敏凝胶中持续释放3周以上.DMEM培养液中,50μg/mL EMPs组从实验的第3天开始,显著促进大鼠BMSCs的增殖(P＜0.01).壳聚糖温敏凝胶负载100μg/mL EMPs后.于实验的第3天和第5天明显促进大鼠BMSCs的增殖(P＜0.05)并且在实验的第7天(P＜0.05)和第9天(P＜0.01)显著促进大鼠BMSCsALP水平的提高.结论:壳聚糖温敏凝胶对EMPs具有缓释性,负载EMPs后,可以促进大鼠BMSCs增殖,提高ALP的活性.     

人脐带间充质干细胞在壳聚糖温敏凝胶中增殖和成骨分化的实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)在壳聚糖温敏凝胶中的增殖和成骨分化。方法:体外分离培养hUCMSCs。制备壳聚糖温敏凝胶并使用扫描电镜观察其超微结构。用壳聚糖温敏凝胶浸提液培养细胞,MTT法检测细胞增殖情况。使用成骨诱导培养液诱导壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs向成骨方向分化,在诱导过程中进行茜素红法染色钙结节(21 d)。结果:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶浸提液中的增殖情况与常规培养液中相近,无显著性差异。壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs成骨诱导21d时可见到橘红色的钙结节。结论:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶中可以正常增殖,经过诱导后可以向成骨方向分化。[关键词] 脐带间充质干细胞 壳聚糖温敏凝胶 增殖 成骨分化