青蒿琥酯对K562细胞凋亡诱导作用及其与亚砷酸的协同作用

目的研究青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其与亚砷酸的协同作用。方法采用MTT法、透射电镜技术、流式细胞术检测青蒿琥酯或(和)亚砷酸作用后K562细胞的凋亡发生情况。结果青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41μg/mL,其有时间、剂量-效应关系;12.50～50.00μg/mL的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,并具有一定的时间剂量-效应关系;12.50μg/mL青蒿琥酯与1.00μmol/L亚砷酸联合作用于K562细胞48h后,凋亡率为21.07%,与阴性对照(1.87%)、单独应用青蒿琥酯(7.45%)、亚砷酸(2.57%)相比,差异有统计学意义,χ2依次为1128.39、335.47和1058.40,P值均为0.000。结论青蒿琥酯对K562细胞具有凋亡诱导作用,并且与亚砷酸具有协同作用。     

青蒿琥酯的抗肿瘤作用研究

目的:研究青蒿琥酯的抗肿瘤作用.方法:用青蒿琥酯或全铁转铁蛋白联合青蒿琥酯进行体外抗肿瘤实验,用MTT法检测青蒿琥酯对体外培养人结肠癌HCT-8细胞、人红白血病K562细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的杀伤作用.结果:体外实验表明青蒿琥酯对上述3种人肿瘤细胞均有杀伤作用,对HCT-8、K562、MCF-7的IC50值为1.99μg/ml、1.62μg/ml、10.54μg/ml;加用1mg/ml全铁转铁蛋白处理3小时后再给予青蒿琥酯,其IC50值分别为3.54μg/ml、4.14μg/ml、11.95μg/ml.结论:青蒿琥酯钠在体外对HCT-8、K562、MCF-7等细胞有明显的杀伤作用,加用全铁转铁蛋白未明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用.     

磁性纳米四氧化三铁增强青蒿琥酯诱导的K562细胞凋亡及作用机制研究

本研究旨在观察青蒿琥酯共聚磁性纳米四氧化三铁（MNPs-Fe3O4）后,对K562细胞的细胞毒性效应以及是否增加K562细胞的凋亡,了解MNPs-Fe3O4是否可以增强青蒿琥酯的活性,并进一步探讨其可能的机制。方法:采用Western印迹检测K562细胞Bcl-2、Bax、Bcl-rambo,激活的Caspase-3和Survivin蛋白的表达,应用MTT法检测青蒿琥酯共聚MNPs-Fe3O4后对K562的细胞毒性,用流式细胞仪检测K562细胞的凋亡率。结果:青蒿琥酯可以抑制K562细胞的增殖,当青蒿琥酯共聚MNPs-Fe3O4后,对K562细胞的增殖抑制率显著高于单用青蒿琥酯组（P<0.05）,同时检测细胞凋亡率也发现,与单用青蒿琥酯组相比,青蒿琥酯共聚MNPs-Fe3O4组的细胞凋亡率显著增加,结果提示MNPs-Fe3O4可以增强青蒿琥酯的活性。而当加入泛Caspase抑制剂Z-VAD-FMK以后,MNPs-Fe3O4增强青蒿琥酯诱导细胞死亡的效应则被减弱了。Western印迹显示,青蒿琥酯共聚MNPs-Fe3O4组与单用青蒿琥酯组相比,Bcl-2,Bax,Bcl-rambo和Caspase-3蛋白的表达上调,而Survivin蛋白的表达则是下调的。结论:磁性纳米四氧化三铁可以增强青蒿琥酯诱导的K562细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-rambo和下调Survivin蛋白有关。      

青蒿琥酯的抗肿瘤作用研究

目的：研究青蒿琥酯的抗肿瘤作用。方法：用青蒿琥酯或全铁转铁蛋白联合青蒿琥酯进行体外抗肿瘤实验，用MTT法检测青蒿琥酯对体外培养人结肠癌HCT-8细胞、人红白血病K562细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的杀伤作用。结果：体外实验表明青蒿琥酯对上述3种人肿瘤细胞均有杀伤作用，对HCT-8、K562、MCF-7的IC50值为1．99μg／ml、1．62μg／ml、10．54μg／ml；加用1mg／ml全铁转铁蛋白处理3小时后再给予青蒿琥酯，其IC50值分别为3．54μg／ml、4．14μg／ml、11．95μg／ml。结论：青蒿琥酯钠在体外对HCT-8、K562、MCF-7等细胞有明显的杀伤作用，加用全铁转铁蛋白未明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。     

氯丙嗪对耐药细胞系K_(562)/AO_2多药耐药逆转作用的研究

目的 :研究氯丙嗪对耐药细胞系K562 /AO2 多药耐药逆转作用。方法 :应用免疫组化观察K562 /AO2 细胞系的耐药蛋白表达情况 ,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562 /AO2 细胞系耐药逆转作用 ,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562 /AO2 细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况 ,用半定量RT PCR法测定氯丙嗪对K562 /AO2 细胞多药耐药基因 (mdr 1)mRNA表达的影响。结果 :K562 /AO2 细胞不但P gp表达阳性 ,而且肺耐药相关蛋白 (lungresistanceelatedprotein ,LRP)表达也阳性 ;氯丙嗪能增强多柔比星对K562 /AO2 细胞的杀伤作用 (单用ADM组、氯丙嗪 0 75 μg/mL ADM组、氯丙嗪 1 5μg/mL ADM组和氯丙嗪 3 μg/mL ADM组对K562 /AO2 的抑制率分别为 5 2 %、 2 5 9%、3 9 1%和 74 8% ) ;增加K562 /AO2 细胞内罗丹明的蓄积 (对照组、氯丙嗪 0 75 μg/mL组、氯丙嗪1 5 μg/mL组和氯丙嗪 3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为 1 87、 10 2 8、 48 75和65 63 ) ;对K562 /AO2 细胞mdr 1mRNA表达无明显影响 (对照组mdr 1和 β actin的面积比为0 41,氯丙嗪组为 0 42 )。结论 :氯丙嗪对K562 /AO2 细胞的耐药有较强的逆转作用 ,并呈剂量依赖关系     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中IκB-α,NF-κB蛋白表达的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导慢性粒细胞性白血病K562细胞凋亡过程中IκB-α以及NF-κB的表达变化.方法应用不同剂量As2O3诱导K562细胞凋亡,以Western-Blot免疫印迹电泳检测NF-κB,IκB-α的表达,流式细胞术检测K562细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果 As2O3可诱导K562细胞凋亡,随着As2O3浓度从1 μmol/L到4 μmol/L的增高细胞凋亡率由16.0%增加到60.6%,胞浆中IκB-α阳性表达率则由88.1%减少到49.2%,胞核中p65量逐渐增加.结论 As2O3可诱导K562细胞凋亡,在此过程中伴有NF-κB的激活,在一定剂量范围内激活的程度随着砷剂浓度的增加而增强.砷剂激活NF-κB通过其抑制蛋白IκB-α的降解.     

氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的研究氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用.方法应用免疫组化观察K562/AO2细胞系的耐药蛋白表达情况,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562/AO2细胞系耐药逆转作用,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562/AO2细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况,用半定量RT-PCR法测定氯丙嗪对K562/AO2细胞多药耐药基因(mdr-1)mRNA表达的影响.结果K562/AO2细胞不但P-gp表达阳性,而且肺耐药相关蛋白(lung resistanceelatedprotein,LRP)表达也阳性;氯丙嗪能增强多柔比星对K562/AO2细胞的杀伤作用(单用ADM组、氯丙嗪0.75 μg/mL+ADM组、氯丙嗪1.5μg/m L+ADM组和氯丙嗪3μg/mL+ADM组对K562/AO2的抑制率分别为5.2%、25.9%、39.1%和74.8%)增加K562/AO2细胞内罗丹明的蓄积(对照组、氯丙嗪0.75 μg/mL组、氯丙嗪1.5 μg/mL组和氯丙嗪3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为1.87、10.28、48.75和65.63)对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA表达无明显影响(对照组mdr-1和β-actin的面积比为0.41,氯丙嗪组为0.42).结论氯丙嗪对K562/AO2细胞的耐药有较强的逆转作用,并呈剂量依赖关系.     

六亚甲基二乙酰胺对K562细胞作用的实验研究

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）体外对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化的作用。方法：MTT法检测不同浓度HMBA对于K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪（FCM）检测HMBA对于K562细胞周期分布的影响;Annexin V／PI染色方法检测HM—BA诱导K562细胞凋亡的作用;通过瑞氏染色、联苯胺染色和FCM检测分化抗原研究K562细胞分化情况。结果：HMBA可以抑制K562细胞增殖,1、2、3和4mmol／L对K562细胞增殖抑制率分别为21．97％、36．05％、41．56％和47．59％;HMBA可以阻滞K562细胞周期,主要表现为G0／G1期的阻滞;HMBA诱导K562细胞凋亡的作用不明显,4mmol／L的HMBA对K562细胞诱导凋亡率〈5％;HMBA处理后,瑞氏染色显示K562细胞有一定程度的成熟表现,联苯胺染色基本为阴性;K562细胞膜表面CD11b、CD14、CD68和胞质内溶茵酶抗原的表达在HMBA处理前后均为阴性。结论：HM—BA可以抑制K562细胞的增殖,提示具有一定的治疗作用;HMBA对K562的作用机制和阻滞细胞周期有关,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA有促进K562细胞分化的迹象,但分化方向和机制有待进一步研究。     

青蒿琥酯对骨髓瘤细胞SP2/0的作用观察及其机制的初步探讨

目的 观察青蒿琥酯对骨髓瘤细胞SP2/0的增殖抑制及促凋亡作用,并对其机制进行初步探讨.方法 利用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度青蒿琥酯对SP2/O细胞作用24、48和72 h后的增殖抑制作用,并观察其对SP2/0小鼠移植瘤的抑瘤效应.常规Giemsa染色、DAPI荧光染色以及透射电镜下观察细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA梯带,利用Annexin V/PI双染和流式细胞术检测青蒿琥酯作用后24、48 h SP2/0细胞的凋亡率和细胞周期.Western blot检测核因子kB(NF-kB)p65及其抑制蛋白(IKB)α的水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测NF-KB p65的转录活性.结果 2μg/ml青蒿琥酯作用24 h,对SP2/0细胞增殖抑制率即达33.0%;40μg/ml青蒿琥酯作用72 h,细胞增殖抑制率达91.9%,呈现出明显的时间、剂量依赖性.50、100和200 mg·kg-1·d-1的青蒿琥酯对SP2/0小鼠移植瘤的抑瘤率分别为17.8%、36.5%和48.O%.2 wg/ml青蒿琥酯作用24 h,G0/1期细胞数目增多(50.6%±0.8%),凋亡率为7.7%;40μg/ml青蒿琥酯作用48 h,G0/G1期细胞达75.3%±7.0%,凋亡率为78.7%,呈时间、剂量依赖性.胞核中NF-kB p65蛋白减少,胞浆中IKBα蛋白的表达增加,NF-kB p65的转录活性降低.结论 青蒿琥酯对骨髓瘤细胞SP2/0有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,是一种潜在的抗骨髓瘤药物,其作用机制与抑制NF-kB p65的转录活性有关.     

桑黄胞内多糖对白血病细胞K562的增殖抑制效应研究

背景与目的:观察桑黄胞内多糖(PLIP)对体外培养的人白血病细胞K562的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.材料和方法:采用MTT法及台盼蓝拒染法测定细胞增殖抑制率和生长曲线,Hoechst-PI双荧光染色,流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:PLIP在25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml、400 μg/ml、800 μg/ml剂量时均能显著抑制K562细胞增殖(P＜0.05),其中400 μg/ml剂量时抑制率最高,达52.55%,半数抑制浓度(IC50)为262.36 μg/ml,流式细胞仪检测PLIP在100 μg/ml、200 μg/ml、400 μg/ml剂量时K562细胞凋亡率分别为5.72%、13.57%、19.39%,并能诱导K562细胞出现凋亡所具有的形态学及生化特征.结论:PLIP对体外培养的人白血病细胞K562生长增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与诱导K562细胞凋亡和影响细胞周期有关.     

肝素对胃癌细胞端粒酶活性及生长的影响

目的:研究肝素对胃癌细胞生长及端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的肝素作用于胃癌SGC7901细胞,倒置相差显微镜进行细胞计数,绘制生长曲线,TRAPELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:肝素浓度为10mg/mL时细胞端粒酶活性明显受抑制,P<005;各浓度肝素下胃癌细胞的生长速度减慢,以中等剂量(10mg/mL)时明显,但均无细胞死亡。结论:肝素对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,对肿瘤细胞自身的增殖有一定抑制作用,但肝素不引起细胞死亡。     

三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究

目的: 探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5 FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制。方法:经不同浓度的As2O3 和(或)5- FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化。结果:与As2O3 或5 -FU单药作用相比,As2O3 与5- FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1 期细胞比例上升,癌细胞bcl- 2基因表达明显下降, bax和Fas基因表达显著增强。结论:As2O3与5 -FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

丁酸钠对体外培养的卵巢癌细胞生长影响及其机制探讨

目的 :观察丁酸钠 (sodiumbutyrate ,NaB)对体外培养的卵巢癌细胞 3AO生长的影响 ,初步探讨其作用机制。方法 :以人卵巢上皮癌细胞株3AO为肿瘤模型 ,采用不同浓度的NaB对其进行干预 ,MTT比色法测定NaB对 3AO细胞增殖活性的影响 ,进一步通过光镜、电镜观察 3AO细胞的形态学改变 ,进行DNA降解分析 ,并采用流式细胞技术分析细胞周期动力学变化。结果 :NaB作用下 3AO细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制 ,一定浓度的NaB作用一定时间 ,可诱导 3AO细胞发生凋亡 ,光镜和电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变 ,DNA降解分析中出现典型的梯形条带 ,流式细胞技术分析发现NaB作用首先引起细胞周期分布的改变 ,随剂量的加大和用药时间的延长 ,凋亡率逐渐升高。结论 :NaB通过诱导凋亡而抑制体外培养的 3AO细胞生长 ,其机制可能与细胞G1期阻滞有关。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人恶性胶质瘤U251细胞增殖及细胞周期的影响.方法 采用MTT法、流式细胞术等方法检测DADS对U251细胞的增殖抑制及细胞周期的影响.免疫细胞化学、qRT-PCR与Western blot检测cyclin B1与c-Myc表达.结果 MTT法显示,15、30、45、60 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,生长抑制率分别为22.0％、38.8％、49.2％、55.3％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术结果显示,15、30、45、60 mg/L DADS作用U251细胞48小时后,G2/M期细胞分别为(14.1±1.2)％、(25.0±0.6)％、(41.2±1.4)％、(53.5±3.3)％,较对照组(9.6±0.9)％差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫细胞化学显示,45 mg/L DADS处理U251细胞48小时后,cyclin B1与c-Myc蛋白平均光密度值分别从0.52±0.09、0.56±0.08显著下降至0.23 ±0.02、0.39+0.04 (P ＜0.05).qRT-PCR结果显示,cyclin B1与c-Myc mRNA表达分别下调42.0％与63.0％ (P ＜0.05).Western blot结果显示,cyclin B1、c-Myc蛋白与β-actin的平均灰度值比分别为1.12±0.14与1.20 ±0.15,明显低于对照组1.74 ±0.15与2.23 ±0.19(P ＜0.05).结论 DADS可明显抑制恶性胶质瘤U251细胞增殖与阻滞G2/M期,机制与下调cyclin B1、c-Myc有关.     

人参皂苷Rh2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡

目的:探讨人参皂苷Rh2能否增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡。方法:应用SRB法检测药物抑肿瘤效应;荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;应用金氏公式分析药物间的相互作用。结果:人参皂苷Rh2可浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖,并可协同性地增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇诱导的Hela细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论:人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇对Hela细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用。     

地塞米松诱导CEM细胞凋亡过程中Survivin和Caspase-3基因表达的研究

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导CEM细胞凋亡过程中生存素(Sur-vivin)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)基因表达。方法台盼蓝拒染法测定细胞活力,绘制增殖曲线;流式细胞仪解析DEX诱导CEM细胞凋亡;Westernblot检测Survivin和Caspase-3蛋白表达;RT-PCR检测Survivin基因表达。结果1)DEX以时间、剂量依赖方式抑制CEM细胞增殖。0.1~10μmol/LDEX于48h开始明显抑制CEM细胞的生长。24、48、72h抑制细胞增殖50%的药物浓度分别为9.8、0.9和0.4μmol/L。2)随DEX剂量增大亚二倍体细胞百分数逐渐增加。5μmol/LDEX处理12~48h,亚二倍体细胞从14.9%升至46.2%;3)5μmol/LDEX处理12~72h,Survivin蛋白从54.6%下调至9.7%;SurvivinmRNA从76.4%(6h)降至18.3%(72h);4)DEX作用12h之内只能检测到非激活状态的procaspase-3,处理24h后出现17×103活性亚基,直至72h。结论DEX诱导CEM细胞凋亡时下调Survivin基因表达,活化Caspase-3。     

新型细胞保护剂--氨磷汀

氨磷汀是第 1个被认可的广谱细胞保护药 ,就氨磷汀的药动学、作用机制 ,及在肿瘤放、化疗中的临床应用予以概述     

丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制

目的 研究丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及其机制.方法 细胞计数法检测不同浓度丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.Westernblot检测细胞周期蛋白cyclin D1和p21、凋亡抑制基因survivin的变化.结果 丙戊酸钠能明显抑制Raji细胞的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.01).流式细胞仪检测发现以3 mmol/L的丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞阻滞于G0/G1期,其凋亡率呈时间依赖性上升(P＜0.01).Western blot检测发现3 mmol/L丙戊酸钠处理后Raji细胞cyclin D1表达明显下调而p21表达明显上调(均P＜0.05).survivin表达显著下降(P＜0.01).结论 丙戊酸钠对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与细胞周期和诱导凋亡有关.