莱菔硫烷抑制LPS诱导的小鼠星形胶质细胞增殖

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(astrocyte,AST)增殖的影响及其机制.方法 体外培养小鼠原代星形胶质细胞,给予0.1 μg/mL LPS刺激星形胶质细胞活化增殖;同时分别给予不同浓度的莱菔硫烷(10、15、20 μmol/L)处理星形胶质细胞24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况;选取20 μmoL/L作为干预剂量行GFAP、Ki67双标免疫荧光染色及流式细胞仪细胞周期检测,进一步验证莱菔硫烷对LPS诱导星形胶质增殖的作用;Western blot检测细胞周期相关蛋白P27kip1、CyclinD1、PCNA的表达情况.结果 CCK8法检测显示0.1μg/mL LPS能显著促进星形胶质细胞增殖(P＜0.01),而加入20μmol/L莱菔硫烷能显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞增殖(P＜0.01),并能减少LPS刺激下的Ki67阳性细胞(P＜0.05);细胞周期分析提示20 μmol/L莱菔硫烷可减少LPS诱导下的星形胶质细胞S期比例,增加G1期细胞比例(P＜0.05);Western blot提示20 μmol/L莱菔硫烷能下调LPS刺激下PCNA、CyclinD1的表达,上调P27kip1表达(P＜0.05).结论 莱菔硫烷可以通过调控星形胶质细胞细胞周期,抑制体外LPS诱导的星形胶质细胞增殖.     

卵巢颗粒细胞瘤中Ki67的表达与临床病理参数的关系

目的：探讨卵巢颗粒细胞瘤（GCT）中增殖细胞相关核抗原（Ki67）的表达及意义。方法：采用免疫组化法检测Ki67在37例GCT中的表达,并分析其与临床病理参数的关系。结果：病例组GCT组织中Ki67表达高于对照组（P〈0．05）;随临床分期升高Ki67表达水平升高（P〈0．05）;核分裂相高者Ki67增殖指数高于核分裂相低者（P〈0．05）;复发病例Ki67表达高于原发病例（P〈0．05）;在成年型GCT中弥漫型Ki67增殖指数高于滤泡型（P〈0．05）。结论：GCT中Ki67表达与临床分期、组织学类型有关,检测Ki67表达对GCT的诊断及判断预后可提供理论依据。     

循环外泌体介导的lncRNA HOXA11-AS通过上调SOX4促进血管内皮细胞增殖

目的：探索循环外泌体对内皮细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法：收集支架内再狭窄患者（n =199）及对照组患者（n =32）血浆并提取外泌体,用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型,MTT法测各组细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PCNA、Ki67的表达情况。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,qRT-PCR检测lncRNA HOXA11-AS表达情况。结果：与对照组比,雷帕霉素组细胞增殖能力减弱;PCNA、Ki67 表达减少（P ＜0.05）;相比于雷帕霉素组,对照组外泌体干预后内皮细胞增殖能力增强;PCNA、Ki67表达增加（P ＜0.05）。芯片结果显示lncRNA HOXA11-AS在ISR外泌体中表达减少（P ＜0.05）。pHOXA11-AS可以促进内皮细胞的增殖能力,增加细胞中PCNA、Ki67、SOX4的表达（P ＜0.05）。结论：血浆外泌体中的lncRNA HOXA11-AS可能是通过上调内皮细胞中SOX4的表达,增加内皮细胞的增殖能力。     

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖相关基因蛋白PCNA、Ki-67的影响

目的　探讨去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC SD细胞系增殖相关基因蛋白PCNA、Ki 67的影响。方法　应用体外细胞培养技术进行人胆囊癌GBC SD细胞的培养和传代 ;将去甲斑蝥素作用于经体外培养的人胆囊癌GBC SD细胞 ,应用SABC法检测其对GBC SD细胞增殖相关基因蛋白PCNA和Ki 67表达影响。结果　对照组GBC SD细胞可见核仁或胞核呈不同程度的PCNA或Ki 67棕褐染色 ,PCNA和Ki 67阳性指数分别达 0 .93 2和 0 .964;去甲斑蝥素 (60 μg/ml)作用 48h后 ,PCNA表达和Ki 67表达阳性的细胞数明显减少 ,PCNA和Ki 67阳性指数仅为 0 .3 18和 0 .2 97,差异有显著性 (P <0 .0 5)。结论　去甲斑蝥素可影响GBC SD细胞增殖相关基因蛋白PCNA和Ki 67的表达 ,这可能是其抑制人原发性胆囊癌GBC SD细胞增殖的机制之一     

紫草素调控PTEN/AKT通路抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭研究

目的探究紫草素(SK)对宫颈癌细胞系Caski增殖和侵袭的影响,并初步探讨相关分子机制。方法 0、5、10、20、40、80μmol/L SK分别处理生长良好的宫颈癌Caski细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况;免疫印记(WB)法检测第10号染色体上缺失磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、蛋白激酶B(PKB,又称AKT)、p-AKT及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核相关抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达情况。结果 12、24、36 h,5、10、20、40、80μmol/L SK组Caski细胞增殖抑制率逐渐升高。SK处理24 h后,5、10、20、40、80μmol/L SK组Caski细胞侵袭数量逐渐降低。与对照组相比,5μmol/L SK组细胞中PTEN表达量升高,PCNA、Ki67表达量降低;10、20、40、80μmol/L SK组细胞中pmTOR、PCNA、Ki67、MMP-9表达量降低,PTEN表达量升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与5μmol/L SK组相比,10μmol/L SK组细胞中p-mTOR、MMP-9表达量降低,PTEN表达量升高;20、40、80μmol/L SK组细胞中p-AKT、pmTOR、MMP-9表达量降低,PTEN表达量升高;40、80μmol/L SK组细胞中PCNA、Ki67、MMP-2表达量降低,差异均有统计学意义(P0.05)。随着SK剂量增加,细胞中p-AKT、p-mTOR、PCNA、Ki67、MMP-2、MMP-9表达量降低,PTEN表达量升高,呈剂量依赖效应(P0.05)。结论 SK可能调控PTEN/AKT通路抑制宫颈癌细胞Caski的增殖、侵袭,且随着剂量增加抑制作用加强。     

腮腺肿瘤中PCNA、Ki67的表达及意义

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、增殖细胞核相关抗原(Ki67)在人体腮腺及其肿瘤中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法检测37例正常腮腺组织、32例腮腺多形性腺瘤及29例腮腺腺样囊性癌中PCNA及Ki67表达情况.结果:PCNA、Ki67在正常腮腺组织、腮腺多形性腺瘤及腮腺腺样囊性癌中呈阳性表达,但PCNA、Ki67表达阳性率及强度与腮腺细胞分化程度相关;腮腺腺样囊性癌组的PCNA、Ki67的阳性及强阳性表达构成比明显高于腮腺多形性腺瘤组.结论:PCNA、Ki67反映腮腺肿瘤的增殖活动,可作为腮腺肿瘤发生的可能性及恶性程度的参考性标志物之一.     

间歇性循环张力对人间充质干细胞成软骨分化的影响

目的:研究间歇性循环张力(ICMT)对人间充质干细胞(h MSCs)成软骨分化的影响。方法:取人间充质干细胞建立体外软骨分化的模型,将人间充质干细胞以8×10~4/cm~2的密度接种于被Ⅰ型胶原覆盖处理过的Bio Flex TM六孔加力板中,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养,待细胞贴壁后加入成软骨诱导液培养。根据间歇性循环张力的影响分为加力组和对照组,加力组:细胞通过Flexcell FX-5000TM应变加载系统在培养箱中(37℃、5%CO_2)给予力学刺激(10%伸长率、0. 5 Hz、8 h/d)处理;对照组:不加以力学刺激放在相同环境下一起培养。两组细胞分别在加成软骨诱导液后1、3、6、8、10 d用CCK-8法检测细胞增殖。第14天用番红O染色观察细胞成软骨变化,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用Real-time PCR的方法检测细胞成软骨基因ACAN、COLⅡ、SOX9的表达变化。结果:间歇性循环张力可以抑制间充质干细胞的增殖。第14天的加力组细胞明显凋亡,番红O染色比对照组浅,软骨基因的表达被抑制。结论:间歇性循环张力抑制人间充质干细胞成软骨分化。     

小檗碱对H_2O_2损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的探讨小檗碱(berberine,BBR)对H_2O_2诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖作用的影响。方法采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑NSCs。实验分为正常对照组、H_2O_2组、小檗碱组、DAPT(Notch信号通路阻断剂)组。采用Nestin免疫化学染色鉴定NSCs,通过CCK8检测NSCs细胞活力,测量NSCs平均直径反映NSCs增殖能力,Ki67/Nestin双标法检测NSCs增殖情况,Western blot检测Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 Nestin鉴定为阳性,与正常对照组相比,H_2O_2组细胞存活率降低、细胞平均直径降低,Ki67阳性率降低(P0.05);与H_2O_2组相比,小檗碱组(5μmol/L)明显增强细胞活力,提高NSCs的平均直径,上调Ki67、Notch1、Hes1蛋白表达水平(P0.05),小檗碱促进损伤NSCs增殖作用可以被DAPT拮抗。结论小檗碱处理提高H_2O_2损伤NSCs的存活率,可能通过Notch信号通路发挥促增殖作用。     

卵巢性索间质肿瘤中Ki67的表达及临床意义

目的：探讨卵巢性索间质肿瘤中增殖细胞相关核抗原（Ki67）的表达及意义。方法：采用免疫组化En—Vision二步法检测Ki67在48例卵巢性索间质肿瘤中的表达,并分析与临床病理参数的关系。结果：卵巢颗粒细胞瘤组织中Ki67表达高于卵泡膜细胞瘤和正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）;在卵巢颗粒细胞瘤随临床分期升高Ki67表达水平增强（P〈0．05）;核分裂相≥3／HPF明显高于核分裂相〈3／HPF（P〈0．05）;复发者Ki67表达高于原发者（P〈0．05）。结论：卵巢性索间质肿瘤中Ki67表达与临床分期、组织学类型有关,检测Ki67表达对卵巢性索问质肿瘤的生物学行为判断及预后估计具有重要意义。     

温下肠腑方对大鼠大肠癌细胞周期素D1、增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨温下肠腑方对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌细胞周期素D1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法予以大鼠1,2-二甲基肼腹腔注射,建立大鼠大肠癌模型,温下肠腑方灌胃给药干预,在第15、20、23周时间点,分别用免疫荧光组织化学法结合激光共聚焦显微镜扫描和免疫组织化学法观察中药对大鼠肠组织CyclinD1和PCNA表达的影响。结果在第15、20、23周时间点,与对照组比较,模型组大鼠肠组织CyclinD1蛋白和PCNA蛋白表达均显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;与模型组比较,温下方组Cyclin D1蛋白和PCNA蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论温下肠腑方能够显著降低肠癌动物模型肠组织Cy-clinD1、PCNA表达,提示温下肠腑方可能通过抑制CyclinD1、PCNA的表达而抑制肠癌细胞的增殖。     

pin1基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及与Cyclin D1、Ki67的关系

目的 探讨卵巢恶性肿瘤组织中pin1、Cyclin D1、Ki67的表达水平以及三者相互关系.方法 应用免疫组织化学法检测53例卵巢肿瘤组织病理切片中pin1、Cyclin D1、Ki67的表达水平,其中卵巢恶性肿瘤组31例,对照组22例为卵巢良性肿瘤.收集研究对象的临床资料,应用logistic回归模型分析指标间的相关性.结果 卵巢恶性肿瘤组pin1高表达21例(67.74%),Ki67阳性表达27例(87.10%),Cyclin D1高表达19例(61.29%),对照组中pin1高表达1例(4.54%),Ki67阳性表达3例(13.64%),Cyclin D1高表达2例(9.10%),两组差异有统计学意义(均P<0.05).经统计学分析,卵巢恶性肿瘤不同临床分期及有无淋巴结转移之间pin1、Ki67、Cyclin D1的阳性表达差异无统计学意义(P>0.05). pin1高表达分别与Ki67阳性表达及Cyclin D1高表达有相关性(均P<0.05).结论 pin1基因在卵巢恶性肿瘤组织中表达上调;pin1基因的表达与卵巢恶性肿瘤的临床分期和淋巴结转移无明显相关性;卵巢恶性肿瘤组织中pin1基因表达水平与Ki 67、Cyclin D1表达水平相关,提示pin1基因可能参与细胞周期、细胞增殖的调控.     

PCNA和Ki-67在染锰大鼠生精细胞中的表达及研究

目的研究氯化锰对生精细胞PCNA和Ki-67表达的影响,比较二者作为细胞增殖指标的差异。方法雄性sD大鼠（体重120±10g）48只,随机分为6组：空白对照组,低剂量（15mg／kgMnCl2）和高剂量（30mg／kgMnCl2）组,8只／组。MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5d／周,1次／d,分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化（SABC法）法检测睾丸PCNA和Ki-67表达。结果与空白对照组比较,染锰4周PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高（P〈0．01）。各染锰组Ki-67总阳性细胞率显著降低,细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰剂量相同,6周与4周组比较,PCNA阳性细胞率显著升高,Ki-67总阳性细胞率显著降低,Ki-67细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,PCNA阳性细胞率和Ki-67总阳性细胞率均显著降低（P〈0．01）,Ki-67细胞核阳性细胞率在4周组和6周组分别显著升高和显著降低（P〈0．01）。结论15mg／kg氯化锰即可抑制大鼠生精细胞的增殖能力,PCNA和Ki-67互相结合可以更加准确地反映细胞周期。     

Cyclin D1和Ki67与涎腺多形性腺瘤发生及预后的相关性研究

目的检测Cyclin D1和Ki67在涎腺多形性腺瘤（pleomorphic adenomas,PA）中的表达状况,探讨其与PA发生及预后的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法,分别检测Cyclin D1和Ki67在15例正常涎腺组织（normal salivary gland,NSG）及40例PA组织中的表达。实验数据采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。结果 Cyclin D1和Ki67在NSG中基本无表达,而在PA中阳性表达率明显增高,并且与PA的复发相关,但与患者性别、年龄及发生部位无相关性。结论 Cyclin D1和Ki67在PA中高表达,提示其表达异常是PA发生的重要机制之一;故检测Cyclin D1将有助于预测肿瘤患者的预后。     

靶向COX-2基因的RNA干扰治疗裸鼠胃癌的实验研究

目的：利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制COX-2基因表达，探讨RNA干扰对胃癌治疗的特异性和相关机制。方法：设计靶向COX-2基因的siRNA，构建重组表达质粒pTZU6＋1-siRNA-COX-2并导入裸鼠皮下移植瘤，在体外诱导RNA干扰。采用RT-PCR法、免疫组化法同时检测处理组和对照组COX-2基因表达，Western blotting检测了与细胞增殖相关信号分子p53、PCNA及Ki67蛋白表达。结果：pTZU6＋1-siRNA-COX-2导入裸鼠皮下移植瘤后14天，肿瘤体积明显变小。COX-2的mRNA表达由98．36％下调到43．44％，COX-2蛋白表达由86．24％下调至47．59％。PCNA及Ki67蛋白表达均明显下调。对照组各指标均无明显变化。结论：siRNA明显抑制了COX-2表达，并抑制肿瘤生长，这可能与上调p53蛋白和下调PCNA及Ki67蛋白表达有关。     

血根碱抑制肺腺癌A549细胞生长及机制初探

目的 研究血根碱(sanguinarine,SAN)对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将肺腺癌A549细胞随机分为空白组、SAN不同浓度(1.25、2.5、5、10 μmol/L)组、阳性组.采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thia-zolyl)-2,5-di...     

周期蛋白A、D1和增殖细胞核抗原在肺癌中的表达及临床意义

目的观察细胞周期蛋白A、D1（Cyclin A、D1）和增殖细胞核抗原（PCNA）在肺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化和RT-PCR方法观察94例肺癌组织和10例假瘤炎性肺组织（对照组）中Cyclin A、D1和PCNA的表达。结果在94例肺癌中，Cyclin A蛋白表达阳性率为84.0%；Cyclin D1蛋白表达阳性率为63．8％;PCNA蛋白表达阳性率为68．1％；肺癌的分期与Cyclin A和PCNA蛋白的表达相关（P〈0．05）。在小细胞癌、鳞癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组均存非常显著的提高（P〈0.01）;在腺癌中Cyclin A、D1的mRNA表达较对照组也有明照增强（P〈0．05）。结论肺癌中Cyclin A和PCNA蛋白表达有显著升高，Cyclin A和PCNA蛋白的过表达与肺癌的分期相关。     

大肠癌、大肠腺瘤Cyclin D1、P16和PCNA蛋白表达及其意义

探讨细胞周期调控因子蛋白表达在大肠癌发生发展中的作用及其对预后影响。方法采用免疫组化染色对１１３例大肠癌、１４例大肠腺瘤、１１例腺瘤癌变化组织中ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｐ１６和ＰＣＮＡ进行了检测。结果大肠癌、腺癌和癌变ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｐ１６以ＰＣＮＡ阳性表达率与大肠粘膜相比均相差异显著（Ｐ〈０．０５）腺瘤癌变ＣｈＣｌｉｎＤ１表达明显增高,大肠癌Ｐ１６表达明显降低,大肠癌、腺癌癌变的ＰＣＮ较腺癌组显著增     

脑胶质瘤增殖细胞核抗原和Cyclin Dl蛋白的表达及生物学意义

目的探讨增殖细胞核抗原（PCNA）和Cyclin D1蛋白在脑胶质瘤中的表达及其在胶质瘤发生、发展过程中的生物学意义。方法对已明确诊断的82例脑胶质瘤及10例瘤旁正常脑组织利用S—P免疫组化法检测PCNA和Cyclin D1蛋白。结果82例胶质瘤中PCNA标记指数（PCNALI）较正常脑组织明显升高,并随胶质瘤恶性程度的升高而呈上升趋势（P〈0．05）。Cyclin D1蛋白阳性率在正常脑组织及肿瘤组织间以及不同分级的胶质瘤间无明显差异（P〉0．1）。结论PCNA是胶质瘤发生和恶性转化的重要促进因子,而Cyclin D1可能不参与该类肿瘤的发生和发展。