大鼠釉原蛋白基因表达的载体构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 观察釉原蛋白（ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ,Ａｍ）基因聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）产物在大肠杆菌中的表达。方法 利用谷胱苷肽巯基转移酶表达载体４Ｔ－２型（ｐｔａｃ ｇｌｕｔａｈｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ,ＰＧＥＸ－４Ｔ－２）载化大肠杆菌ＤＨ５α,通过异丙基硫代半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ,ＩＰＴＧ）诱导,收菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 电泳分析表明,釉原蛋白基因ＰＣＲ产物在大肠杆菌中成功地获得了表达。结论 构建了ＰＧＥＸ－４Ｔ－２／Ａｍ融合表达载体,获得了融合表达的目的蛋白。     

釉成熟蛋白amelotin在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:观察釉成熟蛋白(amelotin)基因聚合酶链反应产物在大肠杆菌中的表达,并获得纯化的釉成熟蛋白.方法:利用His融合蛋白表达载体pET32a(+)转化大肠杆菌BL21,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并改变诱导时间、温度、IPTG浓度来优化表达条件,然后在优化的条件下进行大量表达并收菌;His镍柱纯化表达的蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白表达、纯化情况.结果:电泳结果分析表明:amelotinPCR扩增产物在大肠杆菌中获得高效表达,大小约4×104,纯化得到的amelotin纯度较高.结论:成功得到纯化的amelotin,为进一步制备抗体奠定基础.     

小鼠釉原蛋白成熟肽编码区cDNA的克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠釉原蛋白（ＡＭＧ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠釉原蛋白成熟区的基因片段（约６７０ｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＡＭＧ的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠釉原蛋白成熟肽编码区基因。     

人成骨蛋白—1成熟肽基因5‘端的修饰及其在大肠杆菌中的表达

目的：对人成骨蛋白－１（ＯＰ－１）成熟肽基因进行修饰、克隆并在大肠杆菌中表达、检测，为ＯＰ－１的进一步纯化、复性、诱骨活性的研究以及未来的临床应用奠定基础。方法：在不改变氨基酸的前提下，用ＰＣＲ的方法对ＯＰ－１的成熟肽Ｎ端序列加以修饰，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３’端０．４２ｋｂ基因片段克隆于温控型大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０，受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。用鼠抗牛天然ＢＭＰｓ单抗对表达产物进行ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ确证。结果：工程菌经４２℃、５ｈ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带，分子量在１．６×１０４ｕ左右，约占菌体总蛋白的１９．８％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后，可获得纯度较高的重组人成骨蛋白－１成熟肽（ｒｈＯＰ－１）。表达产物的ＥＬＩＳＡ检测和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｎｇ确证确均呈阳性反应。结论：表达产物即为目的蛋白，使ｈＯＰ－１成熟肽基因５’端的修饰及其在大肠杆菌中的表达在国内第一次获得成功。     

人釉原蛋白成熟肽基因的原核表达和纯化

目的 建立人釉原蛋白(amelogenin,AMG)成熟肽基因原核表达和纯化的技术路线,获得纯化的人AMG成熟肽蛋白,以期为牙周炎的基础治疗提供依据.方法 通过已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1-AMG,转化BL21大肠杆菌,原核表达后利用谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白纯化系统(glutathione S-transferase fusion protein purification system,GSTrapFF)亲和层析柱进行重组人AMG的纯化.结果 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳图和蛋白质印迹法分析结果显示,获得纯化的相对分子质量为45 000大小GST-AMG融合蛋白和19 000大小的目的 蛋白AMG.结论 利用pGEX-4T-1-AMG-BL21体系成功获得了人AMG成熟肽基因在大肠杆菌中的原核表达和纯化.     

人重组成釉蛋白C端肽在大肠杆菌中的表达及初步纯化

目的 :在大肠杆菌中表达人重组成釉蛋白C端肽 ,并对重组蛋白进行纯化 ,为进一步制备抗人成釉蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法 :将编码人成釉蛋白C端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET -A上 ,构建表达质粒 pRSET -A -AMBN ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni -NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌在IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白带 ,相对分子量 (Mr)为 5 2× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度大于 95 %的人重组成釉蛋白C端肽。结论 :获得Mr为 5 2× 10 3 的人重组成釉蛋白C端肽。     

大鼠牙胚组织发育过程中釉原蛋白mRNA的表达

目的：观察釉原蛋白（Ａｍ）基因在大鼠牙胚组织发育过程中的表达。方法：采用原位杂交的方法,检测大鼠孕期１７、１８、１９ｄ和出生后１、３、５、７、９ｄ牙胚中成釉细胞ＡｍｍＲＮＡ的表达。结果：从出生后１ｄ至出生后９ｄ大鼠第一磨牙牙胚中均检测到ＡｍｍＲＮＡ的表达,其中出生后第５ｄ表达最高,成釉细胞分泌完成后Ａｍ的表达下降。成牙本质细胞在发育的任何时期均未见到Ａｍ的表达。结论：釉原蛋白基因的转录只发生在牙胚发育的早期,前成釉细胞极化阶段和成釉细胞分泌阶段;发育成熟的釉基质中没有釉原蛋白。成牙本质细胞不表达釉原蛋白基因。     

小鼠成釉蛋白成熟肽编码区cDNA序列的克隆

目的：克隆小鼠成釉蛋白（ＡＭＢＮ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠成釉蛋白成熟区的基因片段（约１．１ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＴＺ１８质粒载体,转化到大肠杆菌ＤＨ５α后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＴＺ－ＡＭＢＮ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠成釉蛋白成熟肽编码区基因     

变形链球菌表面蛋白pcDNA3/pacA与pcDNA3/pacP真核表达质粒的构建

目的：构建变形链球菌表面蛋白真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ,即表面蛋白氨基端与中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个基因疫苗。方法：通过ＰＣＲ扩增,获得分别编码变形链球菌表面蛋白ＰＡｃ氨基端和中央区Ｔ、Ｂ细胞表位的两个目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ。将它们与真核穿梭表达载体ｐｃＤＮＡ３进行体外重组,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,采用菌落原位杂交筛选出阳性克隆子后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析和ＤＮＡ序列测定。结果：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ构建正确,目的基因ｐａｃ－Ａ和ｐａｃ－Ｐ定向插入至真核表达载体中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架。结论：真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＡ与ｐｃＤＮＡ３／ｐａｃＰ分别包含了变形链球菌表面蛋白ＰＡ     

小鼠重组釉蛋白32000多肽的原核表达和纯化

目的 在大肠杆菌中表达小鼠重组釉蛋白32 000多肽,为进一步制备抗鼠釉蛋白抗体和釉蛋白功能研究奠定基础.方法 利用聚合酶链反应(PCR)法扩增出编码小鼠釉蛋白32 000多肽的cDNA序列,将所得基因片段插入pGEM-T Easy质粒载体,转化大肠杆菌JM109后挑取阳性克隆,提取重组质粒DNA,并经酶切鉴定后将所克隆的序列312 bp片段连入原核表达载体pGEX-4T1,并于大肠杆菌BL21中诱导表达,行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.结果 成功构建了重组表达载体pGEX-4T1-EN312,并经异丙基硫代半乳糖苷诱导后,可见相对分子质量(Mr)为47×103的融合蛋白.结论 利用pGEX-4T1-EN312-BL21体系成功获得了小鼠重组釉蛋白32 000多肽在大肠杆菌中的原核表达和初步纯化.     

柠檬精油对牙周致病菌抑制作用及其安全性初步研究

目的:探讨柠檬精油对牙周致病菌的体外抗菌活性及对细胞增殖的影响。方法:采用微量液体稀释法测定柠檬精油对Pg、Fn、Aa、Pi的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)及最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以较低浓度的MIC为标准稀释LEO作为实验组,采用MTT法测定柠檬精油对HUVECs的毒性作用,明确抑菌浓度下LEO的安全性。结果:柠檬精油对牙周主要致病菌均有抑菌作用,Pg、Fn、Aa、Pi的MIC分别是9.0 g/L、4.5 g/L、4.5 g/L、9.0 g/L,Aa、Fn的 MBC是9.0 g/L,Pg、Pi的MBC未测得。1/2MIC、1/20MIC浓度的LEO能够抑制人脐静脉内皮细胞的生长,而低于1/200MIC浓度的LEO则对人脐静脉内皮细胞的生长没有影响,其中1/200MIC浓度的LEO作用明显优于0.02%的CHX。结论:体外环境中,柠檬精油对牙周致病菌Pg、Fn、Aa、Pi具有抗菌活性,低浓度应用对机体相对安全。     

Oral cancer: molecular technologies for risk assessment and diagnosis

Purpose: The effective biomarkers related to diagnosis, metastasis, drug resistance and irradiation sensitivity of oral cancers will help the pathologist and oncologist to determine the molecular taxonomy diagnosis and design the individualization treatment for the patients with oral cancers.     

Computer-assisted planning for maxillofacial prosthodontic rehabilitation

Computerized tomography (CT) planning and the use of CT derived surgical templates for implant placement have shown promise for restoring function within months after surgical reconstruction of acquired post-oncologic defects.     

Stimulated whole saliva components in children with Down syndrome

The authors report on the components of stimulated whole saliva from children with Down syndrome—including pH, flow rate, sialic acid and protein concentrations, and amylase and peroxidase activity. Saliva samples were collected from 35 children aged 6–10 years. Of the participants, 17 had Down syndrome and 18 did not. To stimulate saliva production, the children chewed a piece of parafilm for 10 minutes before the sample was collected. Soon after collecting the saliva sample, the authors measured pH using a portable pH-meter. Sialic acid levels were determined with a thiobarbituric acid assay. Protein content was determined with Folin's phenol reagent. Amylase was assayed and the authors measured the maltose produced by the breakdown of starch and peroxidase using ortho-dianisidine.
No statistically significant difference was observed in levels of sialic acid (free and total) between the two groups. Protein concentration was about 36% higher in the group with Down syndrome. However, the salivary flow rate, pH, and amylase and peroxidase activities were lower among the children with Down syndrome.     

Effect of Pingyangmycin on human venous malformation endothelial cells

Purpose: Venous malformations are common vascular anomalies with a propensity of the head and neck. Intralesional injection of Pingyangmycin (PYM, bleomycin A5 hydrochloride) is a widely used sclerotherapy method for the treatment of venous malformation.     

牙髓再生的研究现状

目前,根管治疗术在临床上已得到了广泛的应用并成功的保存了患牙,但其仍有许多术后并发症。随着组织工程技术在口腔领域的应用,构建一种组织工程化牙髓进行牙髓-牙本质复合体的再生治疗成为可能。近年来国内外已有很多关于牙髓再生的研究,并且已经取得了一定成果。本文将对目前国内外牙髓再生的研究进展现状作一综述。     

Oropharyngeal dysphagia in amyotrophic lateral sclerosis alters quality of life

Dysphagia is one of the most important complications encountered in amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Our aim was to determine whether oropharyngeal dysphagia impacted the quality of life (QoL) of patients with ALS. Thirty consecutive patients were recruited (31–82 years, 18 men). Swallowing function was evaluated using a standardised videofluoroscopic barium swallow. All the patients completed a specific questionnaire on quality of life in dysphagia (SWAL‐QoL) immediately after the videofluoroscopy. The results of dysphagia outcome severity scale separated 14 patients with oropharyngeal dysphagia and 16 with normal swallowing function. There was no difference in the average age, weight and body mass index of the two groups (dysphagic patients: 68 ± 11 kg versus non‐dysphagic patients: 69 ± 14 kg). Most of the dysphagic patients had a bulbar affection based on their Norris scores which determine the importance of cranial nerves illness (20 ± 8), significantly lower than those of the non‐dysphagic patients (35 ± 5) (P < 0·0001). There was no difference in the neurological peripheral symptoms evaluated by Amyotrophic Lateral Sclerosis Functional Rating Scale scores (dysphagic patients: 26 ± 7 versus non‐dysphagic patients: 27 ± 8) (ns). The swallowing quality of life questionnaire revealed that the dysphagic patients had significant burden (P < 0·001). They were affected by the necessity to applied a food selection (P < 0·01), by the increase in eating duration (P < 0·05) and described a decrease in eating desire (P < 0·05). They complained of fear regarding the risk of dysphagia (P < 0·05). They also described difficulties with oral communication (P < 0·001). All of those complained about dysphagia which impacted directly mental health (P < 0·05) and social life (P < 0·05). In conclusion, oropharyngeal dysphagia is a common symptom accompanying ALS, which alters the patient's QoL, especially social health.     

拔牙位点保存用复合温敏凝胶的构建及体外表征

目的:制备多壁碳纳米管/羟基磷灰石/壳聚糖复合温敏凝胶,探讨其作为拔牙位点保存材料的理化性能。方法:采用原位沉积方法制备多壁碳纳米管/羟基磷灰石(MWNT/ HA简称HAC)复合无机材料,将其分散至壳聚糖温敏凝胶中,制备壳聚糖/多壁碳纳米管/羟基磷灰石(CS /MWNT/HA简称CS/HAC)复合温敏凝胶,以成胶时间、孔径、孔隙率、机械强度及降解性能为指标优化配方设计,并表征复合温敏凝胶的微观形貌及理化性能。结果:以10 g/L的HAC作为补强成分加入到壳聚糖溶液中,能够在不影响成胶并保证一定孔隙率(84%)的前提下,提高材料的机械性能(抗压强度0.441 MPa),所获复合温敏凝胶具有适宜的临床操作时间(12 min),并具有可控的降解速率。结论:负载HAC的复合温敏凝胶具有良好的成型性,并具有较好的机械性能,在拔牙位点保存领域具有良好的应用前景。     

替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节特征的锥形束CT研究

目的:采用锥形束CT(CBCT)研究替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节的影像学特征,探讨Ⅲ类功能状态下,颞下颌关节的生长、改建机制。方法:从就诊于昆明医科大学附属口腔医院正畸科的患者中选取符合纳入标准的替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者及骨性Ⅰ类错牙合患者各20名,使用NNT viewer 5.3图像处理软件进行三维重建及线距和角度的测量,并进行统计学分析。结果:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者组和替牙期骨性Ⅰ类错牙合患者组对比结果为:矢状面双侧关节前间隙偏小、双侧关节上间隙偏小、双侧关节结节斜度偏小;冠状面双侧关节内间隙偏小,双侧关节上间隙偏小,双侧关节外间隙偏小,右侧髁状突角度偏小;横截面右侧髁状突前后径偏小。结论:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节发育不充分,呈现髁状突,关节窝深度,关节结节斜度;冠状面关节内、外间隙均较小的特征。骨性Ⅲ类错牙合患者髁状突在关节窝中处于前置近关节窝顶位置。骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节影像学特征与其功能状态相适应。