酶标记免疫吸附试验考核肺吸虫病药物疗效的研究

1979年以来,我们曾用辣根过氧化物酶标记抗人IgG,进行酶标记免疫吸附试验(ELISA)检测肺吸虫患者的特异抗体,证明该法比间接血凝及对流免疫电泳灵敏性高。随后又观察了ELISA对其它疾病患者血清的交叉反应情况,并对影响该法敏感性的有     

应用McAb ELISA双抗体法检测肺吸虫病循环抗原

酶联免疫吸附试验(ELISA)应用于肺吸虫病的诊断,国内已有报道,刘纪伯又报道了应用单克隆抗体(McAb)斑点试验检测斯氏肺吸虫循环抗原的研究;但尚未有应用McAb ELISA双抗体法检测卫氏肺吸虫病循环抗原。为此,我们应用McAb ELISA双抗体法检测了38例肺吸虫病人循环抗原,现将结果报道如下。材料和方法一、试验血清分二组第一组:卫氏肺吸虫病患者血清38份,     

脑肺吸虫病临床免疫诊断的研究

目的:为脑肺吸虫病的临床诊断提供简便、有效的方法。方法:采用斑点ELISA法与ELISA法对脑肺吸虫病人血清抗体的检测。结果:斑点ELISA法和ELISA法敏感性和特异性分别为96.7％、93.3％,无显著差异。对其他人群的检测交叉反应较低。结论:两种方法均可作为脑肺吸虫病的临床诊断,但比较显示,斑点ELISA法简便、快速,敏感性、特异性较高,更具临床实际应用价值。     

抗双链DNA抗体不同检测方法的比对分析

目的评价间接免疫荧光法(IIFA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的特点及应用价值。方法采用IIFA、ELISA和IBT法对实验组(系统性红斑狼疮患者,n=70)及健康对照组(健康人,n=650)血清标本进行抗dsDNA抗体的检测。结果经IIFA、ELISA法及IBT法检测,实验组抗dsDNA抗体的阳性率分别为34.29%,54.29%和44.29%;健康对照组抗dsDNA抗体的阳性率分别为0.15%,4.46%和1.54%,ELISA和IBT检出阳性率与IIFA方法比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在血清抗dsDNA抗体的检测上,IIFA法特异性高,敏感性较低;而ELISA和IBT法检测敏感性高,特异性较差。     

基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

目的 以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断.方法 制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了特异性IgY和lgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%.结论 建立了基于lgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

固相胶体金法检测乙型肝炎表面抗原

本文报道了用固相胶体金法检测血清中表面抗原(HBsAg)。氯金酸经枸椽酸钠还原制成17nm左右的胶体金颗粒,与抗-HRs结合后,经双抗体夹心法检测HBsAg,最后用硝酸银溶液显影观察结果。检测78份病人血清并与酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行了比较,其特异性、敏感性、重复性相当于ELISA,但胶体金与抗体结合要比酶与抗体结合简单得多,而且结果可长期保存。     

免疫酶斑点试验(Dot-ELISA)诊断斯氏肺吸虫病的研究

用Dot-ELISA检测了30份斯氏肺吸虫抗原皮试阳性的患者血清,其中,斯氏肺吸虫循环抗体(CAb)呈阳性反应的血清有12份,阳性率为40％(12/30),同时检测的80份正常人血清,全部呈阴性反应。检测结果与间接ELISA法的相同。在实验动物血清的检测方面,斯氏肺吸虫免疫的兔血清,效价达1 :6400,而人工感染血吸虫、华枝睾吸虫、弓形虫溶组织内阿米巴的兔血清及正常兔血清均为阴性。实验表明,Dot-ELISA法具有较高的特异性、敏感性,其检测结果可作为临床诊断的可靠依据。     

PPA-ELISA和PSAHIgG-ELISA检测日本血吸虫病人抗体比较研究

本文报告酶联A蛋白(PPA)和酶联羊抗人IgG-IgG(PSAHIgG)的ELISA间接法,用血吸虫虫卵粗抗原检测血吸虫病人血清抗体的比较研究,探讨PPA-ELISA的特性.两种酶结合物的ELISA结果是相当一致的.检测也吸虫病人的消光值均数约为健康人消光值均数的8倍;血吸虫病人的消光值均高于健康人的消光值正常范围上限值(阈值),与粪检(阳性)结果是符合的.同样条件对肺吸虫病人试验,PPA-ELISA尚未见交叉反应,PSAHIgG-ELISA出现少数交叉反应.目测法和光电比色法的判读结果基本上是符合的.初步认为PPA可以代替PSAHIgG用于ELISA检测人体抗血吸虫抗体的研究.     

酶标记抗原对流免疫电泳检测肺吸虫抗体及肺吸虫抗原的初步分析

本文报道酶标记抗原对流免疫电泳检测斯氏肺吸虫抗体及肺吸虫抗原初步分析实验结果。肺吸虫病患者和感染者血清53份,酶标对流免疫电泳法阳性31份,常规对流免疫电泳法阳性22份,前者检出效能较后者有提高的趋势,其抗原终点滴度几何均数增加17.04倍,敏感性增强,仍保持特异性。斯氏肺吸虫成虫粗制抗原与对流免疫电泳相关的抗原部分为耐热的、含糖和蛋白质成分,推测属糖蛋白类。抗原活性部分集中于层析分离后第一蛋白峰,不能被50～60％饱和度硫酸铵盐析完全沉淀。     

卫氏肺吸虫重组抗原的制备及初步应用研究

目的：纯化重组细菌Pw-1／pRSET B／BL21的表达产物肺吸虫重组抗原，复性后以ELISA法检测肺吸虫病患者、其他寄生虫病患者和正常人血清，评价其敏感性、特异性和应用前景。方法：通过分步洗涤及透析对细菌重组蛋白进行初步纯化．进一步做快速液相层析纯化，比较前后两法的纯化效果。初步纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原(以下简称重组抗原)。用该重组抗原，以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、肝吸虫、囊虫和包虫病患者以及正常人血清中相应抗体，并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果：经分步洗涤及透析纯化后的重组抗原纯度已较高，快速液相层析进一步纯化效果不明显。以初步纯化后经复性的重组抗原进行ELISA法检测肺吸虫病患者血清，敏感性为91．07％，与其他寄生虫病患者和正常人血清均无交叉反应；粗抗原检测肺吸虫病患者血清敏感性虽为100％，但与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为：血吸虫病11．43％，肝吸虫病4．84％，囊虫病3．22％，包虫病5．88％，正常人为2．5％。结论：研究制备的重组抗原应用于肺吸虫病的免疫诊断特异性较高。     

实验性感染斯氏狸殖吸虫大鼠血清抗体三种检测方法的比较

目的 比较三种血清学方法 对斯氏狸殖吸虫实验感染大鼠抗体检测的效果. 方法 采用斑点ELISA法(Dot-ELISA)、免疫酶染色试验(IEST)和后尾蚴膜试验检测斯氏肺吸虫病大鼠血清IgG抗体. 结果 三种方法 的阳性率分别为97.7%, 、97.5%和95.2%,差异无统计学意义(P＞0.05).用此三种血清学方法 检测正常大鼠、旋毛虫病大鼠、血吸虫病兔和蛔虫病人血清IgG抗体,除1例蛔虫病人血清IEST出现阳性反应外均为阴性反应. 结论 三种方法 对斯氏狸殖吸虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性.     

Preparation of specific yolk immunoglobulin (IgY) of Anti-Sj14-3-3 in serological diagnosis of Schistosomiasis japonica

目的 制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值.方法 利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6 %和48.4 %,正常人血清的阴性率为94.7 %;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%.结论 建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

类风湿因子与抗环瓜氨酸肽抗体联合检测的临床应用价值

目的探讨类风湿因子（RF）与抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）联合检测的临床应用价值。方法使用酶联免疫吸附法（ELISA 法）检测我院150例类风湿关节炎（RA）患者（A组）、28例非RA患者（B组）以及34例健康人群（C组）的血清,比较三组人群血清中RF、抗CCP抗体单独或联合使用对诊断RA的敏感性、特异性等。结果 A组人群抗CCP抗体和RF阳性率比B组、C组高（P〈0.01）;A组中单独使用RF的敏感性高于抗CCP抗体,抗CCP抗体的特异性高于RF,联合使用抗CCP抗体和RF,其检测敏感性、阴性预测值及约登指数等高于抗CCP抗体或RF单独使用。结论抗CCP抗体和RF联合使用用于诊断RA具有良好的临床应用价值。     

人血清中青霉素抗体的酶联免疫吸附测定

目的: 建立检测青霉素抗体的ELISA法,并探讨其临床意义。方法: 以氨苄西林用SPDP法与兔血清白蛋白交联,用此交联物为包被抗原,HRP-抗人IgG为酶标抗体,建立检测青霉素抗体的ELISA法,并对部分临床标本进行青霉素抗体检测。结果: 建立的方法其批内、批间变异系数分别为6.8%、8.4%。氨苄西林-兔白蛋白交联物免疫家兔获得兔抗氨苄西林的抗体,以此抗体作阻断试验,抑制HRP-抗人IgG的显色。临床标本检测结果表明,不同疾病患者青霉素抗体的阳性率不同。结论: ELISA可用于临床对青霉素抗体的检测,具有较好的特异性、敏感性和重复性。     

血清幽门螺旋菌抗体定量ELISA检测的实验研究

幽门螺旋菌(Hp)的检测目前主要采用培养法、组织切片染色法、快速尿素酶试验法等.本文建立酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测Hp抗体,以Hp抗体滴度来反映血清Hp抗体水平,该方法敏感性93.9%、特异性100%,可为临床诊断Hp感染、判断Hp感染严重程度以及指导临床抗Hp治疗提供实验依据.该方法也可用于Hp感染的流行病学调查.     

DOT—ELISA对斯氏肺吸虫病的免疫诊断研究

用DOT－ELISA（斑点－酶联免疫吸附试验）对20例斯氏肺吸虫病进行检测，19例阳性反应，阳性检出率为950％，26例对照血清中，12例日本血吸虫病，2例阳性，交叉反应率16．9％．同时，对DOT－ELISA的特异性，敏感性进行研究，32例其他血吸虫病和肺部疾病血清经该法检验，出现交叉反应率为12．5％．24例可疑斯氏肺吸虫血清分别用DOT－ELISA和平板－ELISA检测，阳性总符合率为85．7％．本文认为DOT－ELISA具有较高的特异性、敏感性，成本低,操作简便，观测结果直接，为期氏肺吸虫病免疫诊断的较好方法．     

抗-SSA/Ro抗体三种检测方法的比较

目的 比较酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫双扩散（ID）和免疫印迹（IB）3种方法检测抗-SSA/Ro抗体,评价3种方法的符合度,同时提高IB检测相对分子质量52 000条带的认识.方法 采用ELISA法、IB法及ID法检测以下3组对象的抗-SSA/Ro抗体水平：正常献血员血清122份;实验室常规检测血清7736份;诊断明确结缔组织病血清166份.结果 （1）正常献血员122份血清ELISA、ID和IB检测抗-SSA/Ro抗体全部阴性;（2）实验室常规检测的7736份血清,IB检测相对分子质量52 000阳性1085例,其中抗核抗体和其他抗-ENA抗体均阴性的有92份,该组病人经过ID和ELISA两种方法检测全部阴性;（3）结缔组织病组166例,ELISA、ID和IB检测抗-SSA/Ro抗体的阳性率分别是76.5%（127/166）,65.1%（108/166）,49.4%（82/166）;（4）结缔组织病166份血清中,ELISA和ID两种方法检测的符合率88.6%（147/166）,两种方法的比较,χ2=17.1,P＜0.001;ID和IB两种方法检测的符合率为75.9%（126/166）,两种方法的比较,χ2=15.6,P＜0.001;（5）ELISA和ID进行Spearman等级相关分析,相关系数为0.828,P＜0.001.结论 （1）ELISA和ID特异性优于IB.（2）IB特异性较差,但如果同时ANA和或抗-ENA其他条带阳性,特异性会显著提高.（3）ELISA敏感性优于ID,ID敏感性优于IB.（4）ELISA和ID结果在数值上存在显著的正相关关系.     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

系统性红斑狼疮自身抗体与肾脏损害的相关性研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清自身抗体与肾脏损害的关系.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法检测141例SLE患者(其中82例LN患者)血清中的抗Clq抗体、AnuA、抗ds-DNA抗体.分析三种自身抗体与肾脏损害的关系.结果 LN组的抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体、AnuA的阳性率分别为65.9%、62.2%、62.4%,明显高于非LN组,差异有统计学意义(P＜0.05).联合检测抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体与AnuA对LN的敏感性、特异性分别为50.0%、86.4%.结论 三种抗体均与肾脏损伤有关,三种抗体联合检测有助于肾脏损害的诊断.     

抗环瓜氨酸抗体检测的临床意义

目的：研究抗环瓜氨酸肽抗体检测的临床意义。方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测了几种自身免疫病及正常健康人血清中抗环瓜氨酸抗体的浓度。结果：抗环瓜氨酸抗体的特异性比类风湿因子高,但敏感性比类风湿因子低。结论：抗环瓜氨酸抗体是检测类风湿关节炎的一项特异性很高的血清学指标,可以作为类风湿关节炎的早期诊断指标。