中医药干预基质金属蛋白酶表达治疗膝骨性关节炎研究进展

膝骨性关节炎是临床上常见的慢性进行性关节病,症状通常以疼痛及关节功能丧失为主。其病因复杂,发病机制尚未完全阐明,对该病的有效防治一直是临床研究的热点。近年来,随着对基质金属蛋白酶与骨性关节炎关系研究的不断深入,发现基质金属蛋白酶通过影响关节软骨破坏这一重要病理过程,在其发生和发展过程中扮演重要角色。大量研究资料表明,中医药可干预膝骨性关节炎患者基质金属蛋白酶表达,抑制软骨细胞外基质降解,从而减轻膝骨性关节炎的临床症状及延缓病理进程。笔者就中医药干预基质金属蛋白酶表达治疗膝骨性关节炎的研究进展进行综述,以期为中医药应用于膝骨性关节炎的防治提供参考和依据。     

基质金属蛋白酶-13在骨性关节炎发病中的活性调控研究

目的 研究一氧化氮(NO)是否通过膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)间接激活基质金属蛋白酶-13酶原(pro-MMP-13).方法 购买并传代人软骨肉瘤细胞(SW1353),用NO供体S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺(SNAP),SNAP+NO清除荆氧合血红蛋白(OxyHb)和SNAP+组织金属蛋白酶抑制物-2(TI...     

右归丸对膝骨性关节炎模型鼠基质金属蛋白酶及炎性因子表达的影响

目的观察右归丸对膝骨性关节炎大鼠血清基质金属蛋白酶和炎症因子含量的影响,探讨右归丸对膝骨性关节炎是否具有治疗作用。方法 SPF级SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、右归丸低、中、高剂量组和硫酸氨基葡萄糖组,每组10只。采用改良Hulth法复制膝骨关节炎大鼠模型。造模6周后,假手术组和模型组灌服蒸馏水,其他4组灌服相应的药物,干预8周后,HE染色法观察大鼠膝关节软骨的形态变化及Mankin评分,ELISA法检测大鼠血清中MMP-1、MMP-3、MMP-13、TIMP-1、IL-1β、IL-6和TNF-α的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠关节软骨Mankin评分显著升高,血清MMP-1、MMP-3、MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α含量升高(均P0.05);而其血清TIMP-1含量降低,差异有统计学意义(均P0.05)。与模型组比较,右归丸高剂量组和硫酸氨基葡萄糖组Mankin评分降低,同时,右归丸高剂量组和硫酸氨基葡萄糖组大鼠血清MMP-1、MMP-3、MMP-13、L-1β、IL-6、TNF-α含量均下降(均P0.05);而其TIMP-1升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论右归丸可能是通过抑制基质金属蛋白酶活性和炎症因子含量表达来延缓KOA软骨的退变。     

基质金属蛋白酶3在类风湿关节炎中的表达及调控

类风湿关节炎是一个病因未明的、以慢性关节滑膜炎症和进展性关节破坏为主要表现的自身免疫性疾病。其早期关节改变是滑膜细胞增生和新生血管形成,最终导致局灶性、关节旁和系统性骨丢失。基质金属蛋白酶是一种能降解细胞外所有基质的锌蛋白酶,研究发现,类风湿关节炎患者血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)对细胞外间质的降解和关节骨及软骨的破坏均发挥着重要作用,是系统性的炎症标志物,可作为类风湿关节炎特别是早期患者滑膜损害和预后的指标,同时也是评价抗风湿药物治疗疗效的重要指标。因此,本文主要从MMP-3的结构、功能及表达调控方面作一综述,以期对类风湿关节炎的发病机理作进一步的探讨。     

外源性透明质酸钠对骨性关节炎患者的血清及关节滑液中基质金属蛋白酶-9的影响

骨性关节炎（osteoarthritis,OA）是一组以关节软骨退变为主要病理特征的临床综合征,其发病原因至今尚不清楚。软骨细胞赖以生存的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的合成与降解失衡是导致软骨退变的重要原因之,许多研究表明基质金属蛋白酶家族（matrix metalloproteinases,MMPs）在这一过程中起重要作用.对于甲、中期的OA患者,     

基质金属蛋白酶13抑制剂在骨关节炎治疗中的现状与展望

骨关节炎(OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病.基质金属蛋白酶13(MMP13)是在骨关节炎发生发展过程中的一种关键介质,而MMP13抑制剂则能够通过对MMP13的抑制作用起到保护软骨细胞的作用.本文简要回顾了目前在临床工作和基础研究中被人们所关注的各种MMP13抑制剂,横向对比其优劣性,对未...     

基质金属蛋白酶-13在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌预后的影响

目的 探讨基质金属蛋白酶-13(MMP-13)与乳腺癌临床病理特征的关系及其对乳腺癌总体生存率的影响.方法 选取包含生存资料的159点乳腺癌组织芯片MMP-13(126例病例),免疫组织化学方法测定组织芯片中MMP-13的表达.统计分析MMP-13在乳腺癌组织、癌组织与癌旁组织中的表达差异;MMP-13表达与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、ER表达、PR表达、HER2表达的相关性;高MMP-13表达组与低MMP-13表达组的乳腺癌总体生存率的差异.结果 MMP-13在乳腺癌组织(54.4％)中的表达明显高于癌旁组织(27.5％)(P=0.003);MMP-13表达与淋巴结转移(r=0.257,P=0.006)、临床TNM分期(r=0.310,P =0.001)、HER2表达(r=0.192,P=0.041)呈正相关,而与肿瘤大小(r=0.143,P=0.128)、肿瘤组织学分级(r=0.010,P=0.915)、ER/PR表达的相关性差异均无统计学意义.MMP-13高表达组乳腺癌病例总体生存率较低表达组明显降低.结论 MMP-13高表达是乳腺癌淋巴结转移的高危因素和独立的小良预后因素.     

基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂在大肠癌中的表达

目的　研究基质金属蛋白酶 (MMPs)及组织金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)在大肠癌中的表达特点 ,与肿瘤发生发展的关系 ,以及在肿瘤治疗中的应用前景。　方法　采用RT PCR方法测定 2 8例大肠癌患者肿瘤组织和周围正常粘膜的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )、膜型 1 基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)、基质溶素 (MMP 7)、组织金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP 2 )、组织金属蛋白酶抑制剂 3(TIMP 3)的mRNA表达状况 ,并将其结果与临床及病理学资料进行统计学分析。　结果　 (1) 2 7例患者肿瘤组织中MMP 7mRNA表达阳性 ,MMP 2、MT1 MMP、TIMP 2和TIMP 3在肿瘤组织和正常粘膜中均有高表达 ;(2 )肿瘤组织中MMP 7mRNA的表达水平与大肠癌患者的Dukes′分期相关 (P <0 0 1) ;(3)淋巴结阳性患者的肿瘤组织TIMP 2表达水平为 (1 2 5± 0 46 )明显高于淋巴结阴性患者的 (0 75± 0 41) ,差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;(4)大肠癌患者癌周正常粘膜TIMP 3mRNA表达随患者Duke′s分期的进展和肿瘤浸润深度的增加而降低 (P <0 0 1) ;(5 )TIMPs与MMPs之间无明显相关关系 (P >0 1)。　结论　MMP 7可望成为诊断大肠癌的敏感指标 ;人工诱导TIMP 2、TIMP 3或阻断MMP 7、MMP 2、MT1 MMP的表达可能抑制肿瘤的浸润和转移 ,成为肿瘤治疗的新途径。     

基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-13在风湿性心脏病二尖瓣组织中表达的意义

目的探讨基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-13在风湿性心脏病（RHD）二尖瓣组织中的表达和作用。方法实验组为成人RHD患者16例,对照组为无心脏病变的成人意外死亡者7例。经HE染色及电镜观察两组组织学及超微结构变化,采用免疫组织化学染色（SABC法）测定两组二尖瓣组织中MMP-2、MMP-13的表达情况。结果实验组为风湿性病理改变,对照组结构基本正常。两组比较MMP-2、MMP-13的积分光密度（IOD）Z值分别为-2.633,-2.936,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论MMP-2、MMP-13的表达上调可能参与二尖瓣细胞外基质的重构,是其风湿性改变的重要分子机制之一。     

MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及意义

目的探讨MMP-3、MMP-13在骨性关节炎患者滑膜中的表达及相关性。方法应用免疫组化和Western blotting法检测MMP-3、MMP-13蛋白在30例骨性关节炎(OA,实验组)与30例非OA(对照组)患者滑膜组织中的表达情况。结果免疫组化结果表明MMP-3、MMP-13蛋白在实验组与对照组患者滑膜中的表达有显著性差异(P0.01),且阳性表达多定位于滑膜细胞的胞浆;Western blotting分析结果显示MMP-3、MMP-13蛋白在实验组患者滑膜中表达明显高于对照组患者,且二者在OA组中表达呈正相关性。结论 MMP-3、MMP-13蛋白与骨性关节炎发生发展密切相关,可能作为诊断及判断骨性关节炎的一项重要指标。     

RNA干扰技术对大肠癌细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制作用

目的 观察RNA干扰对大肠癌细胞中人端粒酶逆转录酶基因(hTERT gene)的抑制效应.方法 大肠癌细胞株HT-29分为Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组;将靶向于hTERT基因的小干扰RNA,转染大肠癌细胞;分别检测大肠癌细胞转染前后的端粒酶活性,hTERTmRNA和蛋白水平,细胞生长增殖和凋亡情况.结果 sihTERT转染大肠癌细胞效率为60%;sihTERT组的端粒酶活性值、hTERT mRNA表达、hTERT蛋白表达、细胞凋亡率分别为0.73±0.14、0.47±0.08、0.37±0.07、49.5%,sihTERT组与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 靶向于hTERT的siRNA能特异性沉默大肠癌细胞hTERT基因,下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平,降低端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖从而促进大肠癌细胞凋亡.     

RNA干扰对骨桥蛋白不同片段表达的影响

目的 观察RNA干扰技术对肝癌细胞株内骨桥蛋白(osteopontin,OPN)不同片段的抑制效果,以期为针对OPN的靶向治疗提供更准确、有效的位点.方法 应用合成OPN序列特异性双链RNA(OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C),转染人HEP G2肝癌细胞株,用荧光定量PCR和免疫组化检测比较OPN的mRNA和蛋白表达情况.结果 OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C转染HEP-G2后,A片段的荧光强度大于B片段和C片段.RNA干扰HEP-G2细胞株48 h后,A、B、C、三个片段的OPNmRNA的△CT值分别从干扰前的8.31±1.58、8.78±1.49、8.25±1.51上升至12.14±1.43、10.22±1.97、10.48±1.88 (P＜0.05)；三个片段的OPN蛋白水平免疫组化评分也从干扰前的6.44±1.67、5.43±2.05、5.45±2.52下降到2.84±1.52、4.43±1.65、3.95±1.43.结论 RNA干扰对肝癌细胞株内骨桥蛋白不同片段有不同的抑制作用.合成更具针对性的siRNA可能对抑制肝癌侵袭转移具有重要的科学和卫生经济学意义.     

慢病毒介导的RNA干扰对大鼠神经元PKCγ mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大鼠神经元PKCymRNA及蛋白表达的影响.方法 孕16 d的SD大鼠,原代培养大鼠胚胎皮层神经元,随机分为3组,每组6孔,对照组(C组):不行任何处理;阴性对照组(NC组):每孔加入阴性对照慢病毒3×105个;RNAi组:每孔中加入编码PKCγ shRNA的慢病毒载体(LV-PKCγ shRNA)颗粒3×105个.5 d后采用RT-PCR和Western blot法检测PKCγ mRNA和蛋白的表达水平,并计算干扰效率.结果 与C组比较,RNAi组大鼠神经元PKCγ mRNA及其蛋白表达水平均降低(P<0.05),NC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).基因干扰效率99.3%,蛋白干扰效率85.2%.结论 慢病毒介导的RNAi可有效地下调大鼠原代神经元PKCγ基因及其蛋白的表达.     

miRNA 146a对软骨细胞MMP 13表达的影响

目的研究在正常软骨细胞及中期和晚期骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中上调或下调miRNA 146a后基质金属蛋白酶13(matrix metallopeptidase 13,MMP 13)的表达变化规律。探索miRNA 146a在骨关节炎发生、发展中的作用。方法收集正常人膝关节软骨4例,骨关节炎患者膝关节软骨12例。骨关节炎组又依据Kellgren-Lawrence的放射学诊断标准分为中期和晚期骨关节炎。通过化学转染的方法转染miRNA 146a mimic或miRNA 146a inhibitor于各组软骨细胞,测定上调或下调miRNA 146a后,MMP 13蛋白水平表达的变化。结果正常人软骨细胞中上调miRNA146a后,MMP13的蛋白水平较对照组及抑制组均出现明显的上升,结果具有统计学意义;下调miRNA146a后,MMP 13蛋白水平下降,结果没有统计学意义。中期OA软骨细胞表达MMP 13水平高于晚期OA软骨细胞,差异具有统计学意义。中期OA软骨细胞上调miRNA 146a后,MMP 13的蛋白水平上升,结果具有统计学意义;抑制miRNA 146a后,MMP 13的蛋白水平下降,结果具有统计学意义。晚期OA软骨细胞上调miRNA 146a后,MMP 13的蛋白水平上升,结果具有统计学意义;晚期OA软骨细胞抑制miRNA 146a后,MMP 13的蛋白水平下降,结果具有统计学意义。结论 miRNA 146a可调控软骨细胞MMP 13表达,从而参与骨关节炎的发生、发展。     

RNA干扰沉默胃癌细胞FasL表达的抗肿瘤免疫作用

目的 探讨胃癌细胞FasL表达诱导肿瘤特异性CD8⁺CTL凋亡介导胃癌细胞的免疫逃逸,RNA干扰沉默胃癌细胞FasL表达能通过增加肿瘤特异淋巴细胞的数量以提高机体抗肿瘤免疫作用。方法 设计并筛选针对性的人胃癌细胞FasL-siRNA,应用脂质体法把siRNA双链分子（dsRNA）转入胃癌细胞,以沉默胃癌细胞中FasL的表达,设置实验组（转染目标质粒）、阴性对照组（转染空载质粒）及空白对照组（未转染）。沉默胃癌细胞FasL基因表达后,在与肿瘤特异性CTL共培养系统中观察其对CTL的凋亡诱导作用和抗肿瘤免疫功能的影响。采用流式细胞仪检测胃癌细胞Fas/FasL表达水平,采用MTT（二苯基四氮唑溴盐）法观察胃癌细胞与肿瘤特异性CTL共培养结果。结果 转染FasL-siRNA的胃癌细胞经检测细胞膜的FasL表达减少,与转染前对比差异存在统计学意义（P < 0.05）,并且转染后实验组较阴性对照及空白对照组表达FasL量存在统计学差异（P < 0.05）,胃癌细胞与肿瘤特异性CTL共培养显示,实验组淋巴细胞数量（吸光度值）较阴性组和空白对照组多,差异存在统计学意义（P < 0.05）。结论 应用RNA干扰技术可使胃癌细胞FasL表达量下降,减少胃癌细胞通过Fas/FasL途径诱导抗肿瘤淋巴细胞凋亡的发生,增强淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默Wip1基因对人脑胶质母细胞瘤细胞生长的影响

目的 构建人Wip1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默人胶质瘤U251细胞的Wip1基因并观察其对细胞生长的影响.方法 设计并合成3条Wip1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒pFU-GW-iRNA载体中.慢病毒包装转染HEK293T细胞,获得病毒上清并测定其滴度;感染U251细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot鉴定RNA干扰效率;筛选出基因沉默效率最高的慢病毒感染U251细胞,CCK-8法检测细胞的增殖,Western blot检测RNA干扰后的bcl-2蛋白表达.结果 PCR扩增和测序表明成功构建Wip1慢病毒干扰载体,病毒载体包装获得的病毒上清滴度在3×10~8～8×10~8 TU/ml.可以有效地沉默U251细胞中Wip1基因的表达,构建的RNAi慢病毒载体感染U251细胞后Wip1基因的mRNA表达量同对照组比较分别为36.3%、32.9%、23.8%.稳定Wip1 RNA干扰后的U251细胞4 d后细胞增殖能力下降35.1%.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以高效稳定地沉默基因表达,Wip1基因促进了U251细胞的增殖.     

靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

RNAi对GBC-SD细胞survivin基因表达及阿霉素敏感性的影响

目的 利用RNA干扰(KNAi)技术沉默人胆囊癌GBC-SD细胞中抗凋亡基因survivin,观察survivin基因表达的变化以及其对阿霉素的敏感性.方法 将靶向survivin的基因片段插入到栽体后构建重组质粒,将其导入GBC-SD细胞,RT-PCR及Westem-blotting法检测转染前后GBC-SD细胞survivin mRNA及蛋白水平的表达情况,MTT法检测转染前后GBC-SD细胞对阿霉素的敏感性变化.结果 成功构建重组质粒.转染重组质粒后,GBC-SD细胞survivin mRNA和蛋白的表达明显降低;转染前后阿霉素对GBC-SD细胞生存率具显著影响.结论 靶向survivin的RNAi表达载体能下调survivin基因表达,进而增强阿霉素对GBC-SD细胞化疗敏感性.