OX40-OX40L轴对动脉粥样硬化小鼠淋巴细胞活性氧和亲环素A表达的调控作用

目的　探讨OX40-OX40L相互作用对C57BL/6J小鼠活性氧（ROS）水平及亲环素A（CyPA）表达的影响。　方法　采用C57BL/6J小鼠颈动脉硅胶圈置入法快速建立动脉粥样硬化斑块模型,免疫组织化学法检测颈动脉粥样硬化（As）斑块内CyPA的表达;小鼠淋巴细胞表达CyPA采用Western　Blot检测;采用流式细胞术检测CD4、OX40及细胞内ROS水平。　结果　C57BL/6J小鼠形成As斑块后,淋巴细胞表达OX40较非As小鼠明显增加,同时发现As小鼠淋巴细胞内ROS水平和CyPA表达水平显著增加;体外应用anti-OX40特异性刺激OX40-OX40L轴后,淋巴细胞表达OX40及ROS水平显著上调,anti-OX40L特异性阻断OX40-OX40L后,淋巴细胞OX40表达减少,细胞分泌ROS水平较刺激组降低（P<0.05）;体外培养淋巴细胞6　h,刺激组分泌的CyPA水平明显高于抑制组（P<0.001）。　结论　OX40-OX40L相互作用能调控动脉粥样硬化小鼠活性氧水平及亲环素A表达。     

OX40-OX40L相互作用对NFATc1表达及斑块形成的影响

目的探讨OX40-OX40L相互作用对活化T细胞核因子c1(NFATc1)及动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法选取33只载脂蛋白(Apo)E-/-小鼠,分为对照组、OX40刺激组、OX40刺激+沉默NFATc1组,采用颈动脉硅胶圈置入法建立斑块模型;Masson染色检测斑块组成;采用免疫组化检测斑块内NFATc1和CD68分布。细胞实验以小鼠脑微静脉内皮细胞为对象,分为对照组、OX40刺激组和OX40抑制组。斑块及细胞表达NFATc1采用qRT-PCR和Western blot方法检测。结果细胞实验显示,OX40刺激组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达明显高于对照组(P0.05),而OX40抑制组小鼠内皮细胞NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P0.05)。动物实验显示,OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达高于对照组(P0.05),而OX40刺激+沉默NFATc1组Apo E-/-小鼠斑块中NFATc1蛋白及mRNA表达低于OX40刺激组(P0.05)。OX40刺激组斑块面积与对照组相比显著增加,斑块内纤维增生明显,而OX40刺激+沉默NFATc1组较刺激组斑块面积明显减少,纤维增生程度减弱。OX40刺激组Apo E-/-小鼠斑块内NFATc1及CD68表达高于对照组,而OX40刺激+NFATc1沉默组小鼠斑块内NFATc1及CD68表达低于OX40刺激组。结论 OX40-OX40L信号调控NFATc1表达并影响动脉粥样硬化斑块的形成。     

共刺激分子OX40-OX40L相互作用对ApoE-/-小鼠淋巴细胞活化T细胞核因子C1表达的影响

目的 探讨共刺激分子OX40-OX40L相互作用对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠淋巴细胞中活化T细胞核因子C1(NFATc1)表达的影响.方法 采用未经治疗的ApoE-/-小鼠颈动脉粥样斑块模型,取其脾脏淋巴细胞,以不同浓度刺激型OX40抗体或抑制型OX40L抗体体外特异性刺激或阻断OX40-OX40L相互作用,不同时间点收获细胞,分别应用实时荧光定量PCR和流式细胞技术检测小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达.结果 (1)抗OX40抗体特异性刺激OX40-OX40L轴后,小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA及蛋白表达明显上调,anti-OX40浓度为20 μg/ml时刺激作用最强,刺激时间24 h最佳(P<0.01).(2)抗OX40L抗体特异性阻断OX40-OX40L轴能明显抑制NFATc1 mRNA及蛋白表达,anti-OX40L为20 μg/ml时抑制作用最强,抑制时间24 h最佳(P<0.001).结论 OX40-OX40L相互作用能调控ApoE-/-小鼠淋巴细胞NFATc1的表达.

Abstract：

Objective To investigate the effect of OX40/OX40L interaction on the nuclear factor of activated T cells c1(NFATc1) in ApoE-/- mice.Methods Lymphocytes were prepared from mouse spleens after Collar-treated Surgery, then incubated with a range of agonistic anti-OX40 mAbs and inhibitory anti-OX40L mAb to stimulate or inhibit OX40-OX40L interaction in vitro. The expression of NFATc1 mRNA and protein in lymphocytes of ApoE-/- mice was measured by Real Time PCR and flow cytometry, respectively.Results (1)After stimulating OX40-OX40L signal pathway, the expression of NFATc1 mRNA and protein in leukocytes of ApoE-/- mice was significantly increased, with maximal effect occurring at 20 μg/ml anti-OX40 mAb- stimulated, and peaked at 24 h at any concentration(P<0.01). (2)Anti-OX40L mAb significantly suppressed the expression of NFATc1 in leukocytes of ApoE-/- mice, with maximal effect occurring at 20 μg/ml anti-OX40L mAb, and peaked at 24 h(P<0.001).ConclusionsOX40-OX40L interaction can regulate the mRNA and protein expressions of NFATc1 in lymphocytes of ApoE-/- mice.     

OX40-OX40L相互作用对小鼠平滑肌细胞亲环素A表达的影响

目的　观察OX40-OX40配体（OX40L）相互作用对小鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）亲环素A（CyPA）表达的影响。方法　小鼠VSMC采用组织块贴壁法原代培养；应用实时荧光定量PCR和流式细胞术检测OX40L　mRNA和蛋白表达水平；细胞内、外CyPA水平分别采用实时荧光定量PCR及Western　blot方法检测。结果肿瘤坏死因子α＋脂多糖联合处理小鼠VSMC，细胞OX40L　mRNA和蛋白表达呈时间依赖性，mRNA表达在24　h（5.967±0.252比1.000±0.000，P<0.05）达到高峰，蛋白表达在36　h（61.900±2.551比20.967±0.451，P<0.05）增加最显著；可溶性OX40处理VSMC后，CyPA　mRNA表达呈时间依赖性并在90　min达到高峰（1.799±0.098比1.000±0.000，P<0.05），2　h后细胞培养上清中可检测到高水平的CyPA（1.119±0.059比0.281±0.038，P<0.05），而细胞内CyPA表达较对照组无明显差异；抗OX40L预处理细胞可显著抑制可溶性OX40诱导的CyPA　mRNA（1.105±0.091比1.799±0.098，P<0.05）及蛋白（0.635±0.040比1.119±0.059，P<0.05）表达。结论　OX40-OX40L相互作用可影响VSMC　CyPA的分泌。     

糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的建立

目的　探讨糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型建立的方法。方法　8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠46只,随机分为对照组、高脂饮食组、链脲佐菌素低剂量组和高剂量组,链脲佐菌素低剂量组和高剂量组分别腹腔注射链脲佐菌素55　mg/kg（连续注射5天）、200　mg/kg（单次注射）。2月后测定空腹血糖、血脂、主动脉根部斑块面积。结果　链脲佐菌素高剂量组出现高死亡率,链脲佐菌素低剂量组血糖、血脂、粥样斑块面积均高于对照组和高脂组（P＜0.01）,高脂组空腹血糖呈轻度升高（7.78±0.67　mmol/L）。结论　以ApoE^-/-小鼠为基础小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素是制备糖尿病合并动脉粥样硬化小鼠模型的理想方法,单纯高脂喂养ApoE^-/-小鼠可以导致空腹血糖升高,大剂量单次腹腔内注射链脲佐菌素不宜用于该模型的建立。     

成纤维细胞生长因子21对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变中内质网应激诱导的凋亡的影响

目的　探讨成纤维细胞生长因子21（FGF-21）对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠主动脉中内质网应激诱导的凋亡的影响。方法　将24只ApoE^-/-小鼠随机分为动脉粥样硬化模型组（简称模型组）和FGF-21组（n12）,另选12只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,三组小鼠都给予高胆固醇饮食4周,同时FGF-21组皮下给予FGF-21［0.1　mg　/（kg·d）］4周,而模型组和正常对照组给予等量生理盐水。4周后处死小鼠进行主动脉病理学检测,观察斑块面积,采用放射免疫法检测血浆中FGF-21的水平,采用免疫组织化学染色和Western　Blot检测主动脉成纤维细胞生长因子受体1（FGFR-1）的表达水平,采用Tunel染色检测主动脉斑块中的细胞凋亡水平,采用Western　Blot检测主动脉中剪切后Caspase-12和C/EBP　同源蛋白（CHOP）的表达水平。结果　与正常对照组比较,模型组血浆中的FGF-21水平及主动脉中FGFR1蛋白表达显著升高　（P<0.05）,模型组主动脉根部斑块面积、细胞凋亡数量、剪切后Caspase-12及CHOP蛋白的表达水平增加（P<0.05）;与模型组比较,FGF-21组主动脉根部斑块面积、细胞凋亡数量、剪切后Caspase-12及CHOP蛋白的表达水平减少（P<0.05）。结论　FGF-21可能通过抑制剪切后Caspase-12及CHOP相关促凋亡蛋白表达,抑制ApoE^-/-小鼠主动脉斑块病变中细胞的凋亡及斑块进展。     

冠心舒通胶囊对ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化斑块内MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 观察中成药冠心舒通胶囊对高脂饮食喂养ApoE^－/－小鼠主动脉粥样硬化斑块病理变化、人组织型基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,探讨冠心舒通胶囊对粥样斑块稳定性的影响以及对相关机制进行初步研究。方法 将8周龄雄性ApoE^－/－小鼠30只给予高脂喂养,12周时随机分为：模型组、冠心舒通胶囊高剂量［1.8 g/（kg·天）］组和冠心舒通胶囊低剂量［0.6 g/（kg·天）］组,喂养12周后处死,取主动脉中段,大体标本油红O染色观察斑块面积,冰冻切片后HE染色观察斑块厚度,冰冻切片免疫荧光法检测斑块内TIMP-1、MMP-9表达情况。结果 与模型组相比,冠心舒通胶囊组平均斑块浸润面积减小（P<0.05）,弥漫程度减轻,斑块厚度降低,MMP-9表达减少,而且冠心舒通胶囊高剂量组与低剂量组相比,各项统计指标亦有统计学意义（P<0.05） ,TIMP-1表达未见明显变化。结论 冠心舒通胶囊可以对抗ApoE^－/－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成和进展,以及通过降低斑块内MMP-9表达,从而抑制胶原纤维分解,稳定易损粥样斑块。     

内质网应激介导的凋亡在糖尿病ApoE－/－小鼠内膜钙化中的作用

目的　观察内质网应激（ERS）介导的凋亡在糖尿病动脉粥样硬化（As）性载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠内膜钙化启动中的作用。方法　6周龄雄性ApoE^－/－小鼠,给予腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40　mg/（kg·d）,连续5天。2周后血糖水平＞3000　mg/L的小鼠纳入本研究,并由普通饮食转为半合成型高脂饮食（HFD）,同时给予尾静脉注射羧甲基赖氨酸（CML）10　mg/（kg·d）,连续4个月。在转换高脂饮食和给予CML注射后的0个月（0月组,n＝10）、2个月（2月组,n＝10）和4个月（4月组,n＝10）时对小鼠实施安乐死,进行相关检测与分析。结果　病理形态学研究证实STZ-CML-HFD联合处理2个月后,糖尿病ApoE^－/－小鼠可形成早期的As斑块,4个月后形成典型的晚期As内膜钙化。主动脉壁平滑肌细胞固有表型SM22α逐渐丢失,而成骨表型骨形成蛋白2、核心结合因子α1、碱性磷酸酶的表达与活性则增加。主动脉壁CML沉积信号和糖基化终产物受体（RAGE）表达主要局限于粥样斑块内。Western　blot检测显示,随着糖尿病ApoE^－/－小鼠病程的延长,主动脉壁CML、RAGE、CD36表达显著上调,而胆固醇外流调控子三磷酸腺苷结合盒转运体A1先出现代偿性增加继而又减少至基线附近。TUNEL染色与Cleaved　Caspase-3免疫组织化学染色发现,随着糖尿病As的演进,斑块内细胞凋亡率明显增加。定位分析显示ERS伴侣分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EPB同源蛋白（CHOP）主要分布在As病变区的脂质池内,而且相对于CHOP,4月组GRP78的分布位置似乎更倾向于脂质池的基底部。Western　blot半定量分析发现,ERS相关指标GRP78、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶、磷酸化eIF2α、活化转录因子4和CHOP的表达随着动物实验时间的延长均呈上调趋势。结论　STZ-CML-HFD联合干预4个月可成功诱导ApoE^－/－小鼠形成糖尿病As钙化。CML/RAGE可能首先启动了斑块ERS介导的凋亡,继而诱发了钙化级联信号。     

SREBP-1/小凹蛋白1介导烟酸姜黄素酯对ApoE－/－小鼠的抗动脉粥样硬化作用

目的探寻烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化病变的作用及机制。方法50只7周龄ApoE^－/－小鼠,随机分为五组,即对照组、高脂组、辛伐他汀组［5mg/（kg·d）］、烟酸姜黄素酯低剂量组［33mg/（kg·d）］和烟酸姜黄素酯高剂量组（99mg/（kg·d）］,其中对照组给予普通饲料,其他组给予高脂饲料喂养。连续干预6周之后处死动物,检测血清中血脂水平;油红O染色法和HE染色法观察小鼠主动脉斑块及肝脏脂质蓄积;ELISA法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;Westernblot法检测小鼠肝脏中小凹蛋白1和SREBP-1的表达。结果与对照组相比,高脂组血清中总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）升高,高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）降低,主动脉粥样硬化斑块增多。与高脂组相比,烟酸姜黄素酯组小鼠血清中的TC和LDLC明显降低,TNF-α和IL-6水平下降,而主动脉粥样硬化斑块减轻,肝脏脂质减少;烟酸姜黄素酯组肝脏小凹蛋白1蛋白表达高于高脂组,而SPEBP-1蛋白表达低于高脂组。结论烟酸姜黄素酯预防性给药能抑制高脂喂养所致的ApoE^－/－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成;机制可能与减少SREBP-1、增加小凹蛋白1蛋白水平,调节肝脏脂质代谢及炎症反应有关。     

化瘀祛痰方通过调节ApoE-/-小鼠胆固醇代谢相关基因表达抗动脉粥样硬化

目的 观察化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠粥样斑块以及胆固醇代谢相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化（As）作用及可能的机制。方法 10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照组,30只ApoE^－/－小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组［20 g/（kg·d）］和辛伐他汀组［0.005 g/（kg·d）］。全自动生化分析仪检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）,HE染色观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度,油红O染色观察主动脉脂质沉积,RT-PCR和Western blot检测肝脏低密度脂蛋白受体（LDLR）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）及主动脉CD36 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞CD36蛋白表达。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高;HDLC水平显著降低,主动脉管腔中形成较大粥样斑块,管壁形成大量脂质沉积,肝脏LDLR、LCAT 基因表达显著下调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著上调。通过药物干预,与模型组相比,化瘀祛痰组和辛伐他汀组小鼠TC、TG、LDLC水平显著下降,HDLC显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDLR、LCAT 基因表达显著上调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著下调。结论 化瘀祛痰方可抑制ApoE^－/－小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血脂及胆固醇代谢相关基因LDLR、LCAT及CD36的表达有关。     

红景天甙对间歇性低压低氧诱导的ApoE－/－小鼠动脉粥样硬化的影响

目的　观察红景天甙对间歇性低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠动脉粥样硬化的影响及其可能机制。方法　30只8周龄健康雄性ApoE^－/－小鼠随机分为常压常氧组、间歇性低压低氧组、低压低氧＋红景天甙组,其中间歇性低压低氧组和低压低氧＋红景天甙组被放置在模拟海拔5000　m低压低氧舱内每天8　h,每组给予相同的普通饮食喂养,低压低氧＋红景天甙组灌服红景天甙30　mg/（kg·d）,而常压常氧组和间歇性低压低氧组灌服等量蒸馏水,连续灌胃12周后取小鼠血样测空腹血糖和血脂,取小鼠主动脉根部,HE染色观察动脉粥样硬化斑块的大小,Masson染色观察斑块内胶原含量,Western　blot检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）蛋白的表达。结果　三组空腹血糖和血脂水平无统计学差异（P>0.05）;与常压常氧组比较,间歇性低压低氧组动脉粥样硬化斑块面积明显增加（P<0.01）,胶原含量明显减少（P<0.01）;与间歇性低压低氧组比较,低压低氧＋红景天甙组斑块面积、MMP-2和MMP-9蛋白水平明显降低（P<0.01）,而斑块内胶原含量、TIMP-2蛋白水平明显增加（P<0.01）。结论　红景天甙能抑制间歇性低压低氧诱导的动脉粥样硬化斑块形成,并提高斑块的稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量有关。     

其刺激分子OX40在内毒素耐受大鼠肝组织中的表达及意义

目的 观察内毒素耐受(ETT)及正常大鼠接受D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)注射后肝组织其刺激分子OX40表达的变化,探讨ETT发生的可能机制.方法 雄性SD大鼠54只,按随机数字表法分为正常对照组6只、急性肝功能衰竭(ALF)组和ETT组各24只.ETT组及ALF组先分别以0.1 mg/kg LPS和0.9％NaCl溶液腹腔注射,每日1次,连续5次,于第6天同时腹腔注射D-GalN 800 mg/kg和LPS 8 t上g/只,分别在注射后6、12、24和48h4个时间点留取大鼠血液及肝脏标本.RT-PCR检测大鼠肝组织OX40 mRNA表达,Western印迹法测定肝组织OX40蛋白表达,ELISA检测血清TNF-α、IL-6水平.数据分析采用单因素方差分析、LSD法、Dunnett T3检验.结果 ETT组大鼠血清TNF-α、IL-6水平虽高于正常对照组,但明显低于ALF组.ALF组大鼠肝组织OX40 mRNA表达上升,于造模后12 h升高最明显,之后逐渐下降.ETT组大鼠肝组织OX40 mRNA表达水平虽高于正常对照组,但明显低于ALF组,与ALF组相比,差异有统计学意义(6、24、48 h时间点比较,F值分别为5.027、5.539、5.011,均P＜0.05;12 h F值为36.688,P＜0.01).ALF组OX40蛋白的表达12 h达峰值,24 h开始下降.ETT组OX40蛋白的表达较ALF组明显下降(6hF值为8.658,P＜0.05; 12、24、48hF值分别为34.611、28.176、16.747,均P＜0.01).结论 ALF组大鼠肝组织OX40表达水平升高,ETT组大鼠出现OX40的抑制,TNF-α、IL-6释放减少,提示OX40在ETT过程中可能发挥重要作用.     

miR-31-5p通过靶向抑制胰岛素降解酶发挥促进动脉粥样硬化作用

目的　探讨miR-31-5p是否通过靶向抑制胰岛素降解酶（IDE）发挥促进动脉粥样硬化作用。方法　应用生物信息学和双荧光素酶技术筛选并验证miR-31-5p与IDE　3’UTR靶向结合情况。miR-31-5p　mimic和inhibitor转染THP-1巨噬细胞及THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞;采用miR-31-5p　agomir处理高脂饮食的ApoE^－/－小鼠;Western　blot检测IDE蛋白表达;ELISA检测ApoE^－/－小鼠血浆脂质水平;油红O染色检测小鼠肝脏脂质蓄积及主动脉粥样硬化斑块病变。结果　miR-31-5p靶向结合IDE　3’UTR　并引起转录抑制;miR-31-5p可下调THP-1细胞、小鼠肝脏和主动脉组织中IDE蛋白表达（P<　0.05）,同时引起泡沫细胞和小鼠血清中脂质含量增加（P<　0.05）,小鼠主动脉窦和主动脉树病变面积明显增加（P<0.05）。结论　miR-31-5p可通过靶向抑制IDE发挥促进动脉粥样硬化作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血中OX40、OX40L mRNA的表达及意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中OX40、OX40L mRNA的表达及意义。方法采用RT-PCR法检测30例SLE患者(活动期15例、非活动期15例)及15例健康体检者外周血单个核细胞中OX40、OX40LmRNA表达。结果活动期SLE患者外周血单个核细胞OX40、OX40L mRNA的表达水平高于非活动期SLE患者和健康体检者(P均<0.05)。相关分析显示,OX40 mRNA的表达水平与SLE疾病活动指数呈正相关(r=0.35,P<0.05)。结论 SLE患者外周血中OX40、OX40L mRNA的表达水平上调,可能在SLE发生、发展中起一定作用。     

载脂蛋白E基因缺失促进不成熟髓系细胞的增殖和向单核细胞的极化

目的 研究载脂蛋白E（ApoE）对小鼠骨髓来源的CD11b⁺Gr-1⁺髓系细胞增殖和分化的影响,阐述ApoE基因敲除小鼠（ApoE^－/－）致动脉粥样硬化敏感的炎症相关新机制。方法 6～8周龄的ApoE^－/－小鼠和C57/B6野生型小鼠,采用流式细胞术分析骨髓、脾脏和外周血中CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞、CD11b⁺Gr-1^-单核细胞和CD11b^-Gr-1⁺粒细胞的百分比的变化。应用定量RT-PCR和免疫荧光染色,鉴定ApoE基因和蛋白在CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞的表达。从骨髓分选CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞,体外培养24 h,流式细胞术分析ApoE基因缺失对髓系细胞周期改变的作用。结果 （1）ApoE基因缺失显著增加ApoE^－/－小鼠外周血CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞和CD11b⁺Gr-1^-单核细胞;（2）ApoE基因缺失促进ApoE^－/－小鼠脾脏和骨髓中CD11b⁺Gr-1⁺ 不成熟髓系细胞的增殖;（3）定量RT-PCR和免疫荧光染色证实ApoE在CD11b⁺Gr-1⁺髓系细胞有较高水平的表达;（4）ApoE基因缺失可以促进CD11b⁺Gr-1⁺细胞周期自G₁期进入S期。结论 ApoE基因缺失显著增加ApoE^－/－小鼠脾脏和骨髓中CD11b⁺Gr-1⁺ 不成熟髓系细胞的增殖、巨噬细胞分化和动员。ApoE基因缺失促进CD11b⁺Gr-1⁺ 髓系细胞增殖与其促进细胞周期进入S期有关。     

间歇性低压低氧促进载脂蛋白E基因敲除小鼠血管重构

目的　探讨高海拔间歇性低压低氧（IHH）环境对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^－/－）小鼠血管重构的影响。方法　将14只8周龄雌性ApoE^－/－小鼠随机分为对照组和IHH组,IHH组每天在低压舱模拟的4000　m海拔低压低氧环境中放置8　h,持续60天。干预完成后采用Masson染色测定胸主动脉管壁胶原含量,采用免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶（MMP）及其组织型基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）的表达情况。结果　与对照组比较,间歇性低压低氧组小鼠主动脉管壁胶原含量显著降低,MMP-9的表达显著增高,而TIMP-2的表达显著降低（P＜0.01）,而MMP-2、MMP-14在两组间没有显著差异（P＞0.05）。结论　IHH可能通过加重ApoE^－/－小鼠血管壁MMP-9和TIMP-2的表达失衡减少血管壁胶原含量,从而促进血管重构。     

血清可溶性CD40配体及基质金属蛋白酶9水平在老年缺血性脑卒中患者颈动脉斑块不稳定中的诊断价值

目的 探讨血清可溶性CD40配体(sCD40L)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在老年缺血性脑卒中(CIS)患者颈动脉斑块不稳定性中的诊断价值。方法 回顾性分析2021年8月至2022年12月烟台市蓬莱中医医院收治的266例老年(年龄≥60岁)CIS患者的临床资料(CIS组),另选取同期在本院体检的234例健康志愿者为对照组,比较两组血清sCD40L及MMP-9水平,分析二者在CIS早期诊断中的价值。依据老年CIS患者颈动脉斑块情况将CIS组患者分为斑块稳定组(n=106)与斑块不稳定组(n=160),分析老年CIS患者斑块不稳定的影响因素,并探讨血清sCD40L、MMP-9水平在老年CIS患者颈动脉斑块不稳定性中的诊断价值。采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验或χ²检验进行组间比较。采用多因素logistic回归分析老年CIS患者颈动脉斑块不稳定的影响因素。采用ROC曲线分析血清学指标在老年CIS患者颈动脉斑块不稳定性中的诊断效能。结果 CIS组患者血清sCD40L和MMP-9水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组患者经检测均为无斑块,CIS组检测出斑块稳定者106例,斑块不稳定者160例。斑块不稳定组与斑块稳定组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、sCD40L、MMP-9、纤维蛋白原(FIB)、白细胞计数(WBC)水平比较,差异有统计学意义(t=13.008、9.511、14.514、20.972、13.252、16.344、10.232,P＜0.05)。多因素logistic回归分析显示,TC(OR=1.758,95%CI 1.083~2.852)、LDL-C(OR=2.275,95%CI 1.045~4.954)、sCD40L(OR=1.956,95%CI 1.112~3.440)及MMP-9(OR=1.846,95%CI 1.151~2.961)是CIS患者颈动脉斑块不稳定的独立危险因素(P＜0.05)。血清sCD40L、MMP-9水平对老年CIA患者颈动脉不稳定斑块诊断曲线下面积(AUC)分别为0.967和0.939。结论 TC、LDL-C、sCD40L及MMP-9是CIS患者颈动脉斑块不稳定的独立危险因素,临床需加强对以上指标的监测。另血清sCD40L和MMP-9水平的监测,可为CIA早期诊断及CIA患者颈动脉斑块不稳定性评估提供客观依据。     

1,5-(OH)2D3通过Ca2+/CaM 信号调控内皮细胞自噬抑制动脉粥样硬化钙化

目的 探讨1,5二羟基维生素D₃(1,5-(OH)₂D₃)是否通过信号调控人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块内钙化。方法 (1)将体外培养的HUVEC高脂刺激自噬后予1,5-(OH)₂D₃干预后,通过荧光显微镜、透射电镜、蛋白免疫印记(Western blot)检测细胞自噬水平;利用慢病毒过表达或者沉默钙调蛋白(CaM),运用Western blot、茜素红染色法、钙检测试剂盒检测细胞钙化指标骨形态发生蛋白2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)。(2)取6～8周龄ApoE－/－雄性小鼠高脂饲养形成动脉粥样硬化模型,1,5-(OH)₂D₃灌胃后尾静脉注射CaM过表达或者沉默慢病毒,Western blot检测组织自噬及钙化水平指标;扫描电镜观察主动脉斑块自噬小体及钙沉积;HE及Von Kossa染色法分别检测小鼠主动脉粥样硬化及钙化程度。结果 体外实验显示,1,5-(OH)₂D₃处理后细胞自噬增强,Ca²⁺与CaM上调;与对照组相比,CaM过表达组自噬增强,细胞钙化减轻,ApoE－/－小鼠斑块内钙化明显被抑制;CaM沉默组细胞自噬流不通畅,细胞钙沉积增加;ApoE－/－小鼠斑块内钙化明显增加(P＜0.01) 。结论 1,5-(OH)₂D₃通过Ca²⁺/CaM信号调控HUVEC自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块钙化。     

Ghrelin对脓毒症小鼠肺脏炎症及JAK/STAT通路的影响

目的 通过观察生长素释放肽(ghrelin)对脓毒症小鼠肺组织炎症反应、肺组织janus激酶/信号转导通路和转录激活因子mRNA、STAT3蛋白及肺组织炎细胞因子肿瘤细胞α(TNF-α)、IL-6的表达水平的影响,探讨ghrelin在脓毒症炎症反应中的调节作用及可能的分子机制.方法 选用腹腔注射脂多糖的方法制作小鼠脓毒性模型:选取雌性小鼠54只,随机分为对照组、模型组及ghrelin干预组,对照组经腹腔注射等量生理盐水;模型组经腹腔内注射脂多糖(6 mg/kg);干预组先经腹腔注射ghrelin(200 μg/kg),30 min后再经腹腔注射脂多糖(6 mg/kg);各组分别于3、9、18h随机处死小鼠各6只,光镜下观察肺组织炎症改变;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检查肺组织STAT3mRNA的基因转录水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织STAT3、TNF-α、IL-6的表达量.结果 Ghrelin可抑制肺组织STAT3mRNA基因转录活性,从而降低STAT3蛋白表达、减少炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P值均＜0.05);改善脓毒症小鼠肺组织病理结构损伤(充血、水肿、炎症细胞浸润).结论 ghrelin可减轻脓毒症小鼠肺脏炎症反应,其作用机制可能与抑制了janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT通路)、下调TNF-α和IL-6的表达有关.     

脑梗死患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与颈动脉粥样硬化的相关性

目的　探讨脑梗死患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（Treg）水平与颈动脉粥样硬化的相关性。方法　56例存在颈动脉斑块的脑梗死患者均行颈动脉斑块高分辨率MRI检查,根据斑块影像学特征分组。同期住院健康体检者（即对照组）30　例。应用流式细胞仪测定外周血CD4⁺CD25⁺　Treg的水平。结果　脑梗死组外周血CD4⁺CD25⁺　Treg水平低于对照组（P<0.05）;不稳定性斑块组、不稳定性斑块未破裂组及不稳定性斑块破裂组外周血CD4⁺CD25⁺　Treg水平低于稳定性斑块组（P<0.05和P<0.01）。不稳定性斑块破裂组外周血CD4⁺CD25⁺　Treg水平低于不稳定性斑块未破裂组（P<0.05）。外周血CD4⁺CD25⁺　Treg水平与斑块易损程度呈负相关关系（P<0.05）。结论　外周血CD4⁺CD25⁺　Treg水平可以反映颈动脉粥样硬化斑块的稳定性及破裂性。