与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50对血管内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响

目的探讨与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50(EBP50)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内Akt1磷酸化水平、细胞分泌明胶酶的活性以及细胞骨架表达和分布的影响,阐明其影响人血管内皮细胞增殖、迁移及成管的分子机制。方法构建EBP50的真核重组表达载体,将重组质粒分别稳定转染HUVEC细胞系,经Western blot法验证后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;应用划痕法检测细胞的迁移能力;应用Matrigel法检测细胞的成管能力;应用Western blot检测EBP50对Akt1磷酸化水平的影响;应用明胶酶谱法检测HUVEC细胞分泌的明胶酶活性;应用免疫荧光观察细胞骨架的分布。结果转染的外源性EBP50 cDNA片段已整合到基因组中;与对照组细胞比较,EBP50能显著抑制细胞的增殖、迁移及成管能力,并且EBP50明显下调Akt1的磷酸化水平(t=2.98,P<0.01);同时使HUVEC分泌的MMP2活性下降,并影响血管内皮细胞内细胞骨架的分布。结论EBP50可以抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及成管,其机制可能与调整Akt1的磷酸化水平、调节细胞分泌明胶酶的活性及影响微丝细胞骨架分布有关。     

小檗碱抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及其分子机制

目的探讨小檗碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的抑制作用及其相关信号通路改变。方法体外培养HUVEC,以ox-LDL刺激增殖并以不同浓度小檗碱干预,采用细胞计数试剂盒8与Ed U掺入实验检测小檗碱对HUVEC增殖的抑制作用,通过实时荧光定量PCR及Western blot分析相关基因和蛋白表达及信号通路变化。结果小檗碱(1~50 mg/L)呈浓度依赖性显著抑制ox-LDL诱导的HUVEC增殖,并降低增殖细胞核抗原(PCNA)、核因子кB(NF-κB)、凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)的表达;该作用与PI3K/Akt、ERK1/2及p38MAPK信号通路蛋白的磷酸化水平降低相关。结论小檗碱通过下调PCNA、NF-κB与LOX-1表达从而抑制ox-LDL诱导的HUVEC增殖,PI3K/Akt、ERK1/2及p38MAPK信号通路参与其中。     

干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型。Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响。结果不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达。结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡。     

miR-20a-5p通过靶向MRTFA缓解ox-LDL诱导的内皮细胞损伤

目的探讨miR-20a-5p是否可通过靶向心肌素相关转录因子A(MRTFA)缓解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法 RT-qPCR检测miR-20a-5p在不同剂量不同时间oxLDL诱导的HUVEC中的表达; MTT法、流式细胞术和Western blot检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL诱导HUVEC增殖和凋亡的影响;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定过表达miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC中LDH释放的影响; ELISA法检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL处理的HUVEC中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和丙二醛(MDA)的影响;荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-20a-5p与MRTFA的靶向关系。结果 miR-20a-5p的表达随着ox-LDL诱导时间和剂量的增加而逐渐下降;过表达miR-20a-5p可部分逆转ox-LDL诱导对HUVEC增殖和凋亡的影响;上调miR-20a-5p可部分修复ox-LDL诱导对HUVEC氧化应激损伤; MRTFA是miR-20a-5p的靶基因;在ox-LDL诱导HUVEC中,MRTFA过表达可逆转miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC细胞增殖和凋亡、氧化应激损伤指标的影响。结论 miR-20a-5p靶向MRTFA修复ox-LDL诱导的HUVEC损伤。     

磷酸化p38介导低切应力诱导的血管内皮细胞Bmi-1表达

目的探讨低切应力(LSS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Bmi-1表达的影响及其可能的机制。方法原代培养HUVEC,免疫荧光检测Bmi-1在细胞中的定位;运用平行平板流动腔系统,给HUVEC加载0.5 Pa低切应力0.5 h、1 h、2 h和4 h,以无切应力加载为对照组,用实时定量RT-PCR检测Bmi-1 mRNA表达,用Western blot检测Bmi-1蛋白表达,利用p38特异性抑制剂SB2219探讨信号转导途径。结果免疫荧光观察发现Bmi-1主要分布在HUVEC胞核中;HUVEC在LSS作用0.5 h后Bmi-1表达即明显增强,随着作用时间延长(1 h、2 h、4 h),Bmi-1mRNA及蛋白表达逐渐降低;切应力能显著激活磷酸化p38表达;SB2219可以明显抑制Bmi-1表达。结论 LSS可诱导HUVEC中Bmi-1表达,其表达量与刺激时间长短密切相关,这种作用可能通过p38信号调节。     

肿瘤甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷抑制人皮静脉内皮细胞及生长因子受体2

目的分析肿瘤甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、管室结构及血管内皮生长因子受体(VEGFR)2的影响来探讨5-Aza-CdR对肿瘤血管形成HUVEC的抑制作用。方法将HUVEC以胰酶消化传代至第3代,5-Aza-CdR含药血清进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测5-Aza-CdR对HUVEC增殖的影响,Transwell小室观察5-Aza-CdR对HUVEC迁移的速度,管样结构检测5-Aza-CdR对HUVEC管腔结构形成的影响,Western印迹检测5-Aza-CdR对HUVEC受体VEGFR2表达的影响。结果在72 h时5-Aza-CdR 10μmol/L药物组对HUVEC的增殖分化和迁移抑制最为明显,10μmol/L药物组对HUVEC管样结构形成的抑制最为明显,5-Aza-CdR明显抑制VEGFR2蛋白表达,并与剂量浓度大小有正相关关系,浓度越大其抑制蛋白表达的作用也越明显。结论5-Aza-CdR可能通过抑制HUVEC的增殖、迁移、分化、管样结构形成及其主要的促生长因子VEGFR2来阻滞肿瘤血管生长、扩散。     

血管结构异常的先天性心脏病患儿中Vav2基因突变的筛查和功能分析

目的 通过全外显子组测序筛查血管结构异常类先天性心脏病(CHD)致病候选基因Vav2的新发突变c.701C>T:p.P234L,探究Vav2及其新发罕见突变对内皮细胞功能的影响，探索CHD发生的可能分子机制。方法 分析117例血管结构异常类CHD患儿及200例正常儿童的外周血全外显子组测序数据筛查Vav2突变。构建Vav2野生型及突变型表达质粒，转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),通过qRT-PCR和Western blot检测Vav2、下游Rac1 mRNA和蛋白的表达水平；通过CCK-8、划痕试验和成管实验检测Vav2及突变对HUVEC增殖、迁移和成管能力的影响。结果 在血管结构异常类CHD患儿中发现的Vav2罕见突变c.701C>T:p.P234L,在对照组中未出现且从未被报道。与野生型对比，P234L突变能降低Vav2蛋白表达，CCK-8、划痕试验和成管实验发现该突变影响Vav2促进HUVEC增殖、迁移和成管等血管生成相关的功能，但该突变不影响下游Rac1本底mRNA和蛋白表达。结论 Vav2的错义突变影响Vav2蛋白表达，进而损害Vav2在HUVEC中促进增殖、迁...     

miR-205对黑色素瘤A375细胞增殖、黏附和迁移的影响及机制探讨

目的探讨miR-205对人皮肤恶性黑色素瘤细胞系A375增殖、黏附和迁移的影响及其可能机制。方法将miR-205 mimics用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染A375细胞,CCK-8法测细胞增殖变化;细胞黏附实验和划痕实验检测细胞黏附和迁移能力变化。Western blot检测PTEN、总AKT和磷酸化AKT蛋白表达变化。结果上调miR-205表达后实验组的细胞增殖、黏附和迁移能力均比空白对照组和阴性对照组减低(P均<0.05);Western blot结果显示上调miR-205表达能增加PTEN蛋白表达,减低磷酸化AKT蛋白水平,但对非AKT蛋白表达无影响。结论 miR-205可能通过调控PTEN/AKT通路抑制黑色素瘤细胞的增殖、黏附和迁移能力。     

RNA干扰人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达对内皮细胞骨架损伤的影响

目的构建针对人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体,并转染人脐静脉内皮细胞后,采取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导观察对内皮细胞骨架损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL处理)、阴性转染组(ox-LDL处理+阴性慢病毒转染)和慢病毒转染组(ox-LDL处理+最佳干扰序列慢病毒转染)。荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、Rho激酶(ROCK)、LOX-1蛋白的表达;免疫荧光法观察细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的变化。结果与对照组比较,ox-LDL组和阴性转染组p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达增高;细胞F-actin发生损伤并伴含量减少(P<0.05)。与阴性转染组比较,慢病毒转染组抑制p-MLC、ROCK、LOX-1蛋白表达,减轻F-actin损伤及伴含量增加(P<0.05)。结论干扰LOX-1表达对ox-LDL诱导引起的内皮细胞ROCK、p-MLC表达增加及细胞骨架损伤均有抑制作用。     

硫氧还蛋白对血管内皮细胞Nox2通路调控的研究

目的探讨动脉粥样硬化发生发展中硫氧还蛋白(Trx)对NADPH氧化酶Nox2亚型的调控作用及机制。方法应用腺病毒感染的方法,在原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立高表达硫氧还蛋白(Ad-Trx)及其对照(Ad-GFP)的细胞模型,将致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作为刺激剂,应用免疫印迹法检测Nox2、Rac1的表达及Akt的磷酸化;用免疫印记及免疫荧光的方法检验Trx在内皮细胞中的蛋白表达水平;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;提取细胞膜组织,用酶学方法测定内皮细胞NADPH氧化酶的活性。结果免疫印记结果显示腺病毒感染在内皮细胞中成功上调了Trx的表达,与对照组相比上调了3.3倍(P0.01)。与对照组相比,过表达Trx明显下调了ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Rac1及p-Akt的表达(分别下调了31.5%、23.8%和20.8%,均为P0.05),抑制了ox-LDL诱导的ROS增加(25.3%,P=0.0247)及NADPH氧化酶活性增加(32.6%,P=0.004)。结论过表达Trx通过减少ox-LDL刺激下内皮细胞Nox2、Nox2结合蛋白Rac1的表达及Nox2下游信号分子Akt的磷酸化,抑制了内皮细胞Nox2通路的过度活化及氧化应激,减轻炎症损伤,保护内皮细胞功能。     

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法

目的 对神经母细胞瘤(NB)进行体外培养，探讨神经母细胞瘤(NB)体外建系的方法。方法 NB患儿新鲜手术标本，采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系；用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化；从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定，证实所培养细胞是否为NB细胞。结果 两种细胞培养法均可培养出NB细胞，纯化后可得形态均一的细胞系。结论 可采用适当的细胞培养方法建立神经母细胞瘤的体外细胞系。     

Bone marrow-derived stem cells and hepatocarcinogenesis in hepatitis B virus transgenic mice

BackgroundSeveral studies have demonstrated that cancer can develop with the contribution of bone marrow-derived cancer stem cells. We evaluated the possible involvement of bone marrow-derived stem cells in hepatocarcinogenesis in a hepatitis B virus (HBV) transgenic mouse model.MethodsBone marrow cells from wild type male mice were transplanted into sublethally irradiated, female, HBV transgenic mice with hepatocarcinoma nodules. Four months later, liver tissue was examined to localize neoplastic nodules/foci and characterize cells by evaluating the Y-chromosome and the hepatocyte lineage marker hepatocyte nuclear factor-1 (HNF1), as well as the HBsAg encoding gene (HBs-Eg) and HBsAg protein (HBs-Pr) (present only in cells of female origin).ResultsHepatocytes were HBs-Eg/HBs-Pr-positive in “normal” tissue, while resulted only HBs-Eg-positive in regenerative areas. Neoplastic foci/nodules were both HBs-Eg/HBs-Pr-negative. In the liver, 19 ± 5% of cells were Y-chromosome-positive and about one fifth were HNF1-positive. Y-chromosome and HBs-Eg colocalized in HNF1-positive cells. Y-chromosome-positive cells never localized in neoplastic foci/nodules (HBs-Pr/HBs-Eg-negative).ConclusionsBone marrow-derived stem cells participate in the hepatic regenerative process but not in neoplastic growth. Simultaneous detection of both Y-chromosome and HBs-Eg in the nucleus of an HNF1-positive cell (hepatocyte) demonstrates a phenomenon of cell fusion.     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

普罗布考抑制大鼠血管平滑肌细胞周期素D1蛋白表达和G1→S转换

目的研究普罗布考是否通过阻滞细胞周期抑制平滑肌细胞增殖。方法首先用普罗布考和氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞共同孵育。然后用MTT法和细胞计教法测定细胞增殖，用流式细胞术观察细胞周期，最后用蛋白印迹测蛋白表达。结果MTT法和细胞计数法显示25～100mg／L氧化型低密度脂蛋白都能刺激平滑肌细胞增殖，效应呈浓度依赖性，普罗布考能显著抑制氧化型低密度脂蛋白所诱导的细胞增殖，效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞术分析表明普罗布考增加了G0/G1细胞比例达28.6％（P〈0．01，n=3），减少S期细胞比例达83．5％（P〈0.01，n=3）。蛋白印迹结果显示氧化型低密度脂蛋白诱导细胞周期素D1蛋白表达，高峰在6～12h，普罗布考显著减少周期素D1蛋白表达，在6h和12h分别减少达26％和23％（P均〈0.01，n=3）。结论普罗布考显著抑制氧化型低密度脂蛋白所诱导的细胞增殖，其抗增殖活性与普罗布考下调周期素D1蛋白表达，从而阻滞细胞由C0/G1期向S期转换有关。     

膀胱癌细胞凋亡和细胞增殖的表达及意义

目的 观察膀胱癌细胞凋亡与细胞增殖的表达,探讨细胞凋亡指数和细胞增殖指数的比值(AI/PI)与膀胱癌病理分级、分期及预后的关系。方法 利用原位末端标记技术(TUNEL),增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,观察48例膀胱癌患者细胞凋亡与细胞增殖的表达。结果AI/PI随肿瘤病理分级和分期升高而增高,各分级和分期的AI/PI比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AI/PI>0.01者的生存时间比AI/PI<0.01者明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论AI/PI可作为判断肿瘤恶性程度及预后的重要指标。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的探讨趋化因子配体16（CXCL16）对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响。方法取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加入50、1013、200ng／ml的重组人CXCL16（rhCXCL16）和抗CXCL16抗体处理4h,以不加rhCLCL16作为对照。采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果100ng／ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0．264±0．021、（91．4±8．6）％、1．246±0．216、1．361±0．276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的（20．6±3．2）％、0．259±0．013、0．199±0．008（P〈0．01）,对细胞的增殖不影响;2130ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到（92．1±6．3）％、1．511±0．174、1．600±0．208（P〈0．05）。结论CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的 探讨趋化因子配体16(CXCL16)对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响.方法 取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加人50、100、200 ng/ml的重组人CXCL16(rhCXCL16)和抗CXCL16 抗体处理4 h,以不加rhCLCL16作为对照.采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力.结果 100 ng/ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0.264±0.021、(91.4±8.6)%、1.246±0.216、1.361±0.276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的(20.6±3.2)%、0.259±0.013、0.199±0.1308(P<0.01),对细胞的增殖不影响;200ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到(92.1±6.3)%、1.511±0.174、1.600±0.20s(P<0.05).结论 CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性.     

普罗布考对糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞功能的影响

目的探讨普罗布考对糖尿病鼠脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）功能的影响。方法体外分离培养ADSC,应用流式细胞术对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。将ADSC分为：①正常ADSC对照组;②正常ADSC+普罗布考组;③糖尿病ADSC对照组;④糖尿病ADSC+普罗布考组;⑤正常ADSC+高糖（30mmol/L）组;⑥正常ADSC+高糖+普罗布考组。应用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况。应用ELISA和实时定量PCR检测各组细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）蛋白和mRNA表达水平。应用二氯醋酸荧光素探针检测各组细胞活性氧（ROS）含量。结果ADSC表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;与正常ADSC对照组相比,糖尿病ADSC增殖能力和迁移能力下降,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平降低。与糖尿病ADSC对照组相比,糖尿病ADSC+普罗布考组增殖能力和迁移能力增加,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平上升。结论糖尿病能损伤ADSC的生物学特性。普罗布考对糖尿病鼠ADSC增殖、迁移和分泌能力具有保护作用。     

A comprehensive meta‐analysis of stem cell therapy for chronic angina

Background

A substantial proportion of patients with coronary artery disease do not achieve complete revascularization and continue to experience refractory angina despite optimal medical therapy. Recently, stem cell therapy has emerged as a potential therapeutic option for these patients. However, findings of individual trials have been scrutinized because of their small sample sizes and lack of statistical power. Therefore, we conducted an updated comprehensive meta‐analysis of available randomized controlled trials (RCTs) with the largest sample size ever reported on this subject.

Hypothesis

In patients with chronic angina stem cell therapy improves clinical outcomes.

Methods

Scientific databases and websites were searched for RCTs. Data were independently collected by 2 investigators, and disagreements were resolved by consensus. Data from 10 trials including 658 patients were analyzed.

Results

Stem cell therapy improved Canadian Cardiovascular Society angina class (risk ratio: 1.53, 95% CI: 1.09 to 2.15, P = 0.013), exercise capacity (standardized mean difference [SMD]: 0.56, 95% CI: 0.23 to 0.88, P = 0.001), and left ventricular ejection fraction (SMD: 0.63, 95% CI: 0.27 to 1.00, P = 0.001) compared with placebo. It also decreased anginal episodes (SMD: –1.21, 95% CI: –2.40 to ?0.02, P = 0.045) and myocardial perfusion defects (SMD: –0.70, 95% CI: –1.11 to ?0.29, P = 0.001). However, no improvements in all‐cause mortality were observed after a relatively short follow‐up.

Conclusions

In patients with chronic angina on optimal medical therapy, stem cell therapy improves symptoms, exercise capacity, and left ventricular ejection fraction. These findings warrant confirmation using larger trials.

     

大鼠肝贮脂细胞,肝细胞的同时分离和培养

目的:建立肝脏细胞的共培养和研究同一个体不同细胞的代谢,深入探讨肝纤维化的细胞机制。方法与结果:采用胶原酶肝脏原位灌流,消化肝脏将细胞分散,通过离心初步分得肝实质细胞和非实质细胞,肝实质细胞采用49.2％淋巴细胞分离液行密度梯度离心,获得精制肝细胞;非实质细胞经进一步酶消化,再用18％Nycodenz行密度梯度离心,得到纯化的贮脂细胞。肝细胞得率为5×10~7/肝～10×10~7/肝,存活率>85％,贮脂细胞得率为2×10~7/肝～4×10~7/肝,存活率>98％,纯度>95％。经本方法同时分得的两种细胞在得率,纯度和活率方面与单独分离的细胞相近,且具经济、简便、稳定的特点。结论:建立了同时分离培养肝细胞和贮脂细胞的方法。