同型半胱氨酸血症对人脐静脉内皮细胞增殖活性的影响

目的 观察不同浓度的同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作用不同时间后对细胞增殖和形态结构的影响.方法 在含有不同浓度的同型半胱氨酸培养环境及对照培养环境中,分别孵育内皮细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测同型半胱氨酸对内皮细胞增殖活性的影响,并进行细胞形态学观察.结果 同型半胱氨酸低浓度时对细胞生长的抑制不明显,随着浓度的增高,细胞生长抑制越明显,且呈浓度、时间依赖性.结论 高同型半胱氨酸可损伤内皮细胞,抑制细胞生长,有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展.     

高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达

目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P0.01,P0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P0.01;r=-0.5501,P0.01;r=-0.7772,P0.01;r=-0.6785,P0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

鸢尾素通过抑制氧化应激减轻高糖/高脂诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的 研究鸢尾素（irisin）是否通过抑制氧化应激减轻高糖/高脂所致心肌细胞损伤。方法 将培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）分为3组:正常对照组、高糖/高脂组及高糖/高脂+irisin组。各组培养24 h后检测细胞存活率、凋亡率、ROS产量、NADPH氧化酶gp91phox表达水平。结果 与正常对照组相比,高糖/高脂组细胞存活率显著下降,ROS产量、NADPH氧化酶gp91phox表达水平、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),irisin处理可以逆转上述改变（均P<0.05）。结论 高糖/高脂能够增加人脐静脉内皮细胞氧化应激,促进细胞凋亡;irisin可通过减轻氧化应激而发挥内皮保护作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法（1）将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分为10个实验组（0、10、50、200、500μmol／L Hcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组）,培养24h后,酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂（plasminogen activator,tPA）及纤溶酶原激活物抑制剂1（plasminogen activator inhibitor1,PAI-1）抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析（RT-PCR）法分析各组tPA及PAI-1的mRNA表达水平。（2）急性心肌梗死（AMI）患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI-1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果（1）500μmoL／L Hcy组PAI-1抗原及mRNA表达水平均明显增高（P〈0．05）。（2）以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高（P〈0．05）,而以10μmoL／L Hcy组为对照组时,500μmoL／L Hcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少（P〈0．05）。（3）500μmoL／L Hcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI-1抗原合成及mRNA表达（P〈0、05）。（4）AMI组Hcy、tPA及PAI-1均明显高于健康对照组（P〈0．05）。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI-1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI-1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞eNOS表达及NO含量的影响

目的 通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)一氧化氮合酶(eNOS)表达及NO含量的影响,探讨Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为5组,分别加入Hcy0、2.5、5、10及15 mmol/L,培养24h.通过MTT比色法测定细胞活力,采用RT-PCR法检测eNOS mRNA的表达,通过硝酸还原酶法测NO含量.结果 与对照组比较,Hcy(5 ～ 15 mmol/L)剂量处理组细胞活力明显下降(P＜0.05,P＜0.01),eNOS mRNA的表达显著降低(P＜0.01);NO的含量明显下降(P＜0.01),eNOS mRNA的表达变化及NO的含量变化呈现明显的剂量依赖性(P＜0.01).结论 Hcy可通过抑制eNOS mRNA的表达,使eNOS合成减少,活性降低,进而减少HUVECs内NO的生成,这可能是Hcy诱导动脉粥样硬化形成的病理机制之一.     

柴胡皂苷A通过抑制氧化应激和铁死亡减轻过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨柴胡皂苷A对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激和铁死亡的影响。方法利用H₂O₂诱导建立HUVEC损伤模型,设置对照组、H₂O₂组及柴胡皂苷A低、中、高剂量组。用CCK-8法检测细胞的存活率;试剂盒法检测细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;qRT-PCR法测定谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)的mRNA含量;Western blot法检测GPX4、ACSL4的蛋白表达。结果与对照组相比,H₂O₂组HUVEC存活率显著下降(P<0.05),GSH水平、SOD活性显著降低(P<0.05),MDA水平显著升高(P<0.05),GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),ACSL4 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);与H₂O_2<...     

同型半胱氨酸对内皮细胞Bcl-2基因甲基化水平的影响

目的　研究同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞Bcl-2基因启动子区甲基化水平及其表达的影响。方法以人脐静脉内皮细胞为实验对象,用含有不同浓度同型半胱氨酸的RPMI1640培养液对其作用48　h,MTT法测定细胞增殖生长能力并确定实验药物浓度;流式细胞术测定细胞凋亡水平;荧光定量PCR测定Bcl-2　mRNA表达;甲基化特异性PCR联合巢式降落式PCR测定Bcl-2启动子区甲基化水平。结果　同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的增殖能力有明显的抑制作用,OD值从0.99±0.05逐渐下降至0.28±0.03（P<0.01）,呈明显的剂量效应关系;与对照组相比,实验组细胞凋亡率由2.30%±0.60%上升至16.40%±0.73%（P<0.01）,Bcl-2　mRNA表达明显下降（P<0.01）,Bcl-2基因启动子区甲基化水平降低（P<0.05）。结论　同型半胱氨酸通过下调Bcl-2启动子区的甲基化水平导致其mRNA表达水平减少,继而诱发内皮细胞凋亡,这可能在同型半胱氨酸促动脉粥样硬化过程中起到重要作用。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(11 mmol/L、22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L葡萄糖),以上各组细胞培养48小时,采用流式细胞术及Hoechst 33258核染色观察各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+雷帕霉素组(雷帕霉素预处理24小时后加入33 mmol/L葡萄糖),以上分组细胞均培养48小时,Western blot分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、P-P70S6K、bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果 (1)与正常对照组早期凋亡率(2.9200 +0.0159)％相比,高糖组明显增加,且呈剂量依赖性[(4.8400 ±0.0092)％、(6.7200±0.0041)％、(8.4900 ±0.0047)％、(9.9500±0.0124)％,P均＜0.05)];高渗对照组早期凋亡率(2.9200±0.0023)％与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与正常对照组晚期凋亡率(2.3700±0.0059)％比较,高糖组晚期凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性[(3.2500±0.0280)％、(4.3600±0.0191)％、(5.9800±0.0083)％、(7.0100±0.0099)％,P均＜0.05];高渗对照组细胞凋亡率为(2.3600±0.0205)％,与正糖对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)与正常对照组比较,高糖组P-Tuberin/Tuberin(1.2774±0.0026比1.0052±0.0012)、P-P70S6K/P70S6K(1.2129 ±0.0065比0.8157 ±0.0030)、Bax/β-actin (0.7484±0.0004比0.3966 ±0.0029)表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),bcl-2/β-actin表达明显降低(0.2949±0.0010比0.6398±0.0011,P＜0.05);高糖+雷帕霉素组P-P70S6K/P70S6K(0.9287±0.0019)、Bax/β-actin(0.5558±0.0052)表达水平低于高糖组(P＜0.05),bcl-2/β-actin (0.4546±0.0023)表达高于高糖组(P＜0.05).结论 高糖可能通过激活Tuberin/mTOR活性,从而降低bcl-2、增加Bax表达而导致血管内皮细胞凋亡.     

氯喹对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探究氯喹(chloroquine, CQ)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的作用及机制。方法:用对数生长期的HUVEC进行实验,分为5组,对照组细胞不经药物处理,LPS组用10μg/mL LPS刺激细胞,低、中、高浓度CQ组用10μg/mL LPS和低、中、高浓度CQ(0.1、1和10μmol/L)共同作用细胞。培养24 h后用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测BCL-2、BAX、裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)蛋白的表达。结果:LPS刺激细胞后导致HUVEC活力降低、凋亡增加,同时BCL-2/BAX蛋白比值降低,裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达增高(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值无明显变化(P0.05);加入CQ作用后,低、中浓度CQ改善了LPS所致的细胞损伤,表现为细胞活力升高和细胞凋亡减少、BCL-2/BAX蛋白比值升高、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达降低(均P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值仍无明显变化(P0.05),而高浓度CQ对LPS所致的细胞活力抑制和细胞凋亡无明显改善作用,BCL-2/BAX蛋白比值无明显变化(P0.05),裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值则有所升高(P0.05)。结论:低、中浓度CQ可通过抑制细胞凋亡途径减轻LPS对HUVEC造成的损伤,低、中浓度CQ对于自噬没有影响;高浓度CQ可通过激活自噬、促进细胞凋亡途径加重LPS对HUVEC的损伤。     

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞分泌白细胞介素8

为探讨同型半胱氨酸对内皮细胞分泌白细胞介素 8的影响 ,及叶酸和牛磺酸对同型半胱氨酸作用的影响 ,将人脐静脉内皮细胞培养于不同浓度同型半胱氨酸中 ,采用酶联免疫吸附试验测定培养基中白细胞介素 8水平。结果发现 ,培养于同型半胱氨酸 (0 .1mmol L)中 4h、6h、8h和 1 2h ,白细胞介素 8分泌水平分别是对照组的1 .85倍、1 .88倍、2 .2 2倍和 1 .5 6倍 (P <0 .0 1 ) ;在不同浓度 (0 .0 5mmol L、0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)同型半胱氨酸中培养 8h ,各组内皮细胞白细胞介素 8的分泌水平分别是对照组的 1 .4 3倍、2 .1 6倍、2 .5 7倍和 2 .88倍(P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,并呈剂量依赖性 ;同型半胱氨酸与叶酸 (0 .0 5mmol L)或牛磺酸 (5mmol L)共同培养细胞 ,各组内皮细胞白细胞介素 8的分泌水平无显著差异 (P >0 .0 5 )。以上结果提示 ,病理浓度的同型半胱氨酸能刺激内皮细胞分泌白细胞介素 8增加 ,这可能是同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制之一 ;叶酸和牛磺酸可能阻断同型半胱氨酸的这一作用     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

为探讨同型半胱氨酸对血管内皮细胞合成蛋白聚糖的影响，采用400umol／L同型半胱氨酸作用于培养的人脐静脉内皮细胞，以^35S-Na2SO4为示踪物标记细胞合成的蛋白聚糖，通过离子交换层析，凝胶过滤层析分离蛋白聚糖。结果发现，实验组培养液中总蛋白聚糖降低，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖及硫酸软骨素-硫酸皮肤素蛋白聚糖含量也降低，但其百分含量未见改变。细胞层中蛋白聚糖未见明显变化。     

原花青素抑制同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的毒性作用

目的探讨原花青素对同型半胱氨酸介导的人脐静脉内皮细胞毒性作用的影响及其作用的分子机制。方法采用MTT及乳酸脱氢酶检测细胞活性,流式细胞仪检测活性氧的变化,并用试剂盒检测原花青素对超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性以及丙二醛浓度的影响。Western blot分析相关蛋白的表达与磷酸化水平。结果同型半胱氨酸处理细胞48 h显著降低细胞的存活率,升高细胞内活性氧水平与丙二醛含量,降低超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活性;而预先给予不同浓度的原花青素处理细胞1 h,可提高细胞存活率,并可有效抑制细胞内活性氧水平与丙二醛含量的升高,维持超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性。原花青素还显著抑制同型半胱氨酸诱导的细胞外信号调节激酶、p38和c-Jun氨基末端激酶的磷酸化。用特异性抑制剂分析证实,同型半胱氨酸介导的细胞毒性是丝裂原活化蛋白激酶所依赖的。结论原花青素能抑制同型半胱氨酸介导的人脐静脉内皮细胞的毒性,其细胞保护作用可能是通过维持细胞内抗氧化酶活性,降低细胞内活性氧水平,最终阻断活性氧激活的丝裂原活化蛋白激酶信号通路。     

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

探讨同型半胱氨酸是否可诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学方法观察其巨噬细胞炎性蛋白 1α的表达。结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞可表达巨噬细胞炎性蛋白 1α。暴露于同一浓度 (0 .1mmol L)同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8和 16h ,其巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、3.2 6倍和 3.35倍 ;免疫细胞化学发现 ,上述各组巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 71± 0 .0 0 6、0 .0 81± 0 .0 0 6和 0 .12 8± 0 .0 0 9,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。暴露于不同浓度 (0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)的同型半胱氨酸 ,孵育 8h后 ,各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、4 .35倍和 4 .5 7倍 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 81± 0 .0 0 6、0 .110± 0 .0 0 9和 0 .118± 0 .0 0 8,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸可诱导人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白。     

瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸损伤的人脐静脉内皮细胞

目的　探讨瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响。方法　原代培养HUVEC,2～3代进行实验,用一定浓度Hcy损伤HUVEC建立细胞损伤模型,然后瑞舒伐他汀干预研究,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活性,硝酸还原酶法检测细胞上清的一氧化氮（NO）含量,硫代巴比妥酸法检测MDA的水平;Real-time　PCR检测SOD1　mRNA表达的变化。结果　Hcy刺激24　h　SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度较空白对照组显著降低,MDA含量较空白对照组显著升高（P<0.05）;瑞舒伐他汀预处理2　h后再加入等浓度Hcy,刺激24　h后SOD1　mRNA表达量、NO、SOD浓度显著升高,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论　瑞舒伐他汀可通过改善SOD活性和减低MDA水平发挥抗氧化作用,且这种作用独立于它的降脂作用。     

Heat Shock Provides Delayed Protection against Oxidative Injury in Cultured Human Umbilical Vein Endothelial Cells

During both mild and severe ischemia, vascular endothelial cells lining large and small vessels of the ischemic organ are exposed to oxygen-derived free radicals resulting in oxidative damage to the organ. Heat shock has been shown to induce thermotolerance and also protect against ischemic injury, possibly via increased synthesis of heat shock proteins (HSPs). We hypothesized that heat shock preconditioning may protect human endothelial cells against oxidative damage. Cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were subjected to heat shock (42°C, 1 h) and allowed to recover for 2 or 20 h, at which times the cells were oxidatively stressed for 1 h by exposing them to 100–200μmol/l of hydrogen peroxide (H₂O₂). Cellular damage was assessed immediately and 18 h later by morphology and release of lactate dehydrogenase (LDH). No protection of HUVEC was seen using the 2-hour recovery interval, but a significant protection (P<0.05) was observed after the 20-hour delay. Northern blot analysis at 1 and 2 h after heating showed induction of HSP-70 mRNA. Western blot analysis demonstrated a significant increase in HSP-72 protein after 2 as well as 20 h of recovery from heat shock, although the amounts of protein at the two times were not significantly different. Furthermore, no differences in the activity of the antioxidant enzyme catalase were observed between heated and unheated HUVEC at 2 and 20 h after heat preconditioning. Thus, heat shock preconditioning inducesdelayedprotection against oxidative injury in HUVEC, and the mechanism of protection appears to involve more than the expression of HSP-72 or activity of catalase.     

同型半胱氨酸通过内质网应激反应促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的影响及其可能的机制。方法Hcy、内质网应激抑制剂4苯基丁酸(PBA)和牛磺酸(TAU)处理VSMC,茜素红染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定确定细胞钙化;Western Blot检测其内质网应激相关蛋白表达。结果不同浓度的Hcy(50、100、200和400μmol/L)促进VSMC钙化,与钙化组相比,VSMC钙含量分别增加了2.5倍、4.17倍、5.83倍和8.33倍(均P0.05),ALP活性分别增加了1.56倍、2.18倍、2.56倍和3.13倍(均P0.05)。Hcy可以促进内质网应激相关蛋白表达增加,与钙化组相比,给予Hcy后,p-PERK、p-IRE1和ATF6分别升高了37.8%、27.5%和26%(均P0.05)。给予PBA和TAU后,Hcy所诱导的内质网应激相关蛋白表达增加被抑制,与钙化+Hcy组相比,p-PERK降低64%和76%(均P0.01)、p-IRE1降低65%和41.1%(均P0.01)、ATF6降低50%和47%(均P0.01)、CHOP降低47.4%和39.5%(均P0.01)、PERK降低58.6%和69%(均P0.01)、GRP78降低79.5%和72.7%(均P0.01)。应用内质网应激抑制剂PBA和TAU可抑制Hcy诱导的VSMC钙化,茜素红染色发现钙化结节减少、ALP活性和钙含量降低;PBA和TAU还可抑制Hcy刺激的VSMC由收缩表型向成骨样细胞表型转变,与钙化+Hcy组相比,PBA和TAU处理组SMα-actin分别升高了2.9倍和3.1倍(均P0.01)、SM22α分别升高了1.8倍和2.3倍(均P0.01)、OPN分别降低了2.73倍和4.2倍(均P0.01)。结论 Hcy通过激活VSMC内质网应激反应促进VSMC钙化。     

内质网应激蛋白CHOP-10在缺血缺氧诱导人主动脉内皮细胞损伤中的作用

目的探讨人主动脉内皮细胞(HAEC)在缺血缺氧刺激下内质网应激(ERS)标志蛋白C/EBP同源蛋白10(CHOP-10)的表达变化及意义,并观察阿托伐他汀对上述过程的影响。方法将传代培养的HAEC分为正常对照组、缺血缺氧组、缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组以及缺血缺氧+阿托伐他汀组(0.l mol/L、1.0 mol/L、10.0mol/L),缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组采用CHOP-10 shRNA下调CHOP-10的基因表达;24 h后采用RT-PCR法检测细胞中CHOP-10的基因表达,Western blot法检测CHOP-10、Caspase-3和Caspase-8的蛋白水平;采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;采用CCK8法测定细胞增殖活力。结果与正常对照组相比,HAEC在缺血缺氧损伤时CHOP-10表达明显升高(P0.01),细胞分泌炎性因子IL-6及TNF-α增加(P0.01),凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达增加(P0.01),细胞增殖活力明显下降(P0.01)。阿托伐他汀能呈浓度依赖性地抑制HAEC CHOP-10表达,而缺血缺氧+CHOP-10基因沉默组或缺血缺氧+阿托伐他汀组,炎性介质IL-6、TNF-α的分泌也相应减少,细胞凋亡下降,增殖活力明显增加(P0.01)。结论缺血缺氧损伤可引起血管内皮细胞发生ERS及炎症反应,导致细胞增殖活力下降,凋亡增加,CHOP-10基因沉默或应用阿托伐他汀干预可减轻缺血缺氧时ERS及炎症反应而对血管内皮细胞产生保护作用。     

过表达Syndecan-4促进人脐静脉内皮细胞增殖

目的 内皮细胞增殖在血管新生中起着非常重要的作用.本研究拟观察过表达Syndecan-4对人脐静脉内皮细胞的促增殖作用并对其相关机制进行探讨.方法 分离和培养人脐静脉内皮细胞,分别将过表达Syndecan-4的腺病毒、空病毒转染至人脐静脉内皮细胞,用免疫染色法观察人脐静脉内皮细胞的Syndecan-4的表达水平和自聚现象,用Western blotting方法检测人脐静脉内皮细胞内Akt、内皮细胞氮氧化物合酶蛋白磷酸化的水平;用磷酸化组蛋白3、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷法观察人脐静脉内皮细胞的增殖情况.结果 与对照组相比,转染Syndecan-4组的人脐静脉内皮细胞增殖明显活跃,Syndecan-4表达明显增加,且存在自聚现象;Western blotting检测发现,Akt、内皮细胞氮氧化物合酶磷酸化水平较对照组明显升高.结论 过表达人脐静脉内皮细胞Syndecan-4可诱导Syndecan-4自聚,并可能通过活化下游Akt、内皮细胞氮氧化物合酶,促进人脐静脉内皮细胞的增殖.