婴儿肥厚型心肌病一家系ＧＡＡ基因的突变分析

摘　要： 【目的】 鉴定一个婴儿肥厚型心肌病家系ＧＡＡ基因的致病性突变。【方法】 分析一例患病女婴的临床及家系资料;提取先证者及其父母和姐姐的外周血ＤＮＡ,ＰＣＲ扩增ＧＡＡ基因的全部２０个外显子及剪接位点序列,对ＰＣＲ产物进行直接测序。【结果】家系分析表明该病的遗传方式可能为常染色体隐性遗传;心脏彩超提示患儿有肥厚型心肌病;先证者ＧＡＡ基因有两个复合杂合性突变：遗传自母亲的外显子１３的ｃ．１８４３Ｇ＞Ａ（ｐ．Ｇ６１５Ｒ）错义突变和遗传自父亲的外显子１８的ｃ．２６０８Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ｒ８７０Ｘ）无义突变。先证者未患病的姐姐只携带了ｃ．２６０８Ｃ＞Ｔ杂合性突变。该两种突变均尚未在大陆地区患者中发现。该两个突变已被证实可引起突变等位基因编码的蛋白残存的ＧＡＡ酶活性严重减少。【结论】ＧＡＡ基因的ｃ．１８４３Ｇ＞Ａ和ｃ．２６０８Ｃ＞Ｔ复合杂合性突变导致了该患儿出现以肥厚型心肌病为特征的经典婴儿型Ｐｏｍｐｅ病（或糖原贮积症Ⅱ型）。该研究进一步证实了ｃ．１８４３Ｇ＞Ａ突变与婴儿型Ｐｏｍｐｅ病相关;同时也表明了对常染色体隐性遗传的婴儿肥厚型心肌病进行ＧＡＡ基因检测或ＧＡＡ酶活性检测的必要性。     

聚合酶链反应技术在腓骨肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨应用聚合酶链反应（ＰＧＲ）技术建立中国人腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）基因诊断的方法。方法 分别应用ＰＣＲ－双酶切、聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）或ＰＣＲ直接测序等方法对３２个确诊的ＣＭＴ家系进行了ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、Ｇx３２等致病基因的突变检测。结果 ２１．９％的ＣＭＴ家系患者有Ｇx３２、ＭＰＺ和ＰＭＰ２基因的突变。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测到１０个家系有异常泳带,经ＰＣＲ测序证实有５个为多态;另５个为与疾病相关的致病的点突变,即４个Ｇx３２和１个ＭＰＺ基因的点突变。PCR-双酶切诊断了２个包含ＰＭＰ２２基因在内的大片段重复突变的ＣＭＴ１Ａ型家系。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ仅１个家系患者异常泳带,该结果也可经ＰＣＲ－ＳＳＣＲ方法检出。结论 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－双酶切可作为Ｇx３２、ＭＰＺ、ＰＭＰ２２基因的点突变和ＣＭＴ１Ａ的大片段重复突变的初筛的方法,而ＰＣＲ－ＤＧＧＥ方法用于Ｇx３２基因的突变检测不理想,点突变应经ＤＮＡ测序证实。     

云南经典型苯丙酮尿症基因Exon—11突变的检测

为了探讨云南省经典型ＰＫＵ基因突变特征,为基因诊断提供依据,应用ＰＣＲ－ＡＳＯ探针斑点杂交和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析技术,对１４个ＰＫＵ家系１４名患儿的ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ－１１进行检测。结果：检出两种突变Ｙ３５６Ｘ（ＴＡＣ→ＴＡＡ）和Ｖ３９９Ｖ（ＧＡＴ→ＧＴＴ）,突变频率均为７．１４％,前者略高于北方人群,后者低于北方人群。提示：云南ＰＫＵ患者ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ－１１突变不同于北方人群,这对提高云南省     

乳腺癌P53基因点突变的检测

目的：探讨Ｐ５３基因点突变检测在乳腺癌预后判断中的意义。方法：应用聚合酶链反应———单链构像多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）方法对３５例乳腺癌患者的Ｐ５３基因位点的点突变进行检测。结果：３例出现点突变，经ＤＮＡ序列分析，１例为第１３６密码子ＣＡＡ（Ｇｌｎ）被ＣＡＧ（Ｇｌｎ）替代，１例为第２２７密码子ＴＣＴ（Ｓｅｒ）被ＧＣＴ（Ａｌａ）替代，１例为第２７３密码子ＣＧＴ（Ａｒｇ）被ＣＡＴ（Ｈｉｓ）替代。结论：Ｐ５３基因突变可能是引起乳腺癌分化不良的因素之一，并可能预示着乳腺癌预后较差。     

人体结直肠癌Ki－ras基因点突变检测

采用ＰＣＲ和寡核苷酸探针杂交技术检测了３５例结直肠癌和５例息肉活检组织ｋｉ—ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变。发现１０例结直肠癌具有点突变，其中ＧＧＴ→ＧＴＴ（Ｇｌｙ→Ｖａｌ）突变３例，ＧＧＴ→ＧＡＴ（Ｇｌｙ→Ａｓｐ）突变７例；１例息肉有突变（ＧＧＴ→ＧＴＴ）。     

前列腺癌细胞雄激素受体基因CAG重复序列改变的初步研究

目的 了解前列腺癌细胞雄激素受体（ＡＲ）基因ＣＡＧ重复序列有否改变。方法 显微镜下分别取１１例前列腺癌标本的肿瘤细胞及非肿瘤细胞，提取ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后，用变性胶电泳测得肿瘤细胞和非肿瘤细胞ＤＮＡ含ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列片段的相对长度。结果 有３例（２７．３％）前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列较非肿瘤细胞短。其余８例前列腺癌细胞ＡＲ基因ＣＡＧ重复序列与非肿瘤细胞相同。结论 一些病例的前列腺癌     

遗传性因子Ⅶ缺乏症一家系基因分析

目的 鉴定遗传性凝血因子Ⅶ（ＦⅦ）缺乏症一家系的ＦⅦ基因突变。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）分段从基因组ＤＮＡ扩增出先证者及正常人的ＦⅦ基因各显子ＤＮＡ片段,经ＰＣＲ产物直接测序法,分析各片段序列;采用ＰＣＲ结合限制性内切酶ＨｇｉＣ Ⅰ酶切分析先证者及其家系成员的ＦⅦ基因组ＤＮＡ片段。结果 先证者的ＦⅦ基因第３２９密码子存在ＴＧＴ→ＧＧＴ错义突变;限制性内切酶酶切的结果确证先证者为Ｃ３２９Ｇ纯合型突变,家系中有３个成员为Ｃ３２９Ｇ杂合型突变。结论 在国内外首次发现存在于遗传性ＦⅦ缺乏性患者的ＦⅦ基因第３２９密码子ＴＧＴ→ＧＧＴ突变,导致所编码的半胱氨酸被甘氨酸替代;ＰＣＲ结合限制性内切酶ＨｇｉＣ Ⅰ酶切分析可用于该突变的快速诊断。     

利用PCR—SSCP及克隆分析对HERG基因突变的新发现

为研究ＱＴ延长综合征（ＬＱＴＳ）致病的分子遗传学基础。我们在ＰＣＲ基础上建立ＳＳＣＰ方法对ＬＱＴ患者和正常对照者ＨＥＲＧ基因的突变进行研究。并且利用克隆技术对突变进行确证。通过ＳＳＣＰ分析,在１例正常对照者中发现异常条带,该突变无法用直接测序确证,因此我们将其转入质粒,克隆后再进行测序。结果提示在ＨＥＲＧ基因７５２位点（５′→３′）异常插入９个碱基。突变型为杂合子。突变导致蛋白通道氨基酸序列中插入ＧｌｙＡｌａＧｌｙ。与其他已报道的突变不同,本文所发现的３个氨基酸的插入突变不是ＬＱＴＳ发生的遗传基础。     

肿瘤抑制基因P53及其与肿瘤关系的研究进展

肿瘤抑制基因Ｐ５３及其与肿瘤关系的研究进展ＲＥＳＥＡＲＣＨＡＤＶＡＮＣＥＳＯＦＴＵＭＯＲＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲＧＥＮＥＰ５３ＡＮＤＩＴ＇ＳＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＷＩＴＨＣＡＮＣＥＲ王尧河综述（河南医科大学病理学教研室郑州４５００５２）肿瘤抑制基因是当...     

临床标本中108株念珠菌的分离鉴定结果及药敏分析

目的　探讨念珠菌的鉴定分类及药敏情况。方法　用沙保氏弱培养基分离真菌,用真菌ＡＴＢ 试剂条做菌种鉴定分类及药敏分析。结果　１０８ 株念珠菌中,白色念珠菌６２ 例,热带念珠菌２８ 例,假热带念珠菌４ 例,克柔氏念珠菌５ 例,季也蒙念珠菌６ 例,近平滑念珠菌３ 例。念珠菌对５－ 氟胞嘧啶（５－ ＦＣ） 、两性霉素Ｂ（ＡＭＢ）、制霉菌素（ＮＹＳ）、咪康唑（ＭＩＺ） 、益康唑（ＥＣＯ）、酮康唑（ＫＥＴ） 的敏感率分别为８７－０３％ 、９２－６％ 、９１－７％ 、５６－５％ 、３７－９％ 、２１－２％ 。结论　应重视念珠菌的分离鉴定,及时测定药物敏感性以指导临床正确用药具有现实意义。     

肝豆状核变性8号14号外显子基因突变的检测

目的：筛选中国人肝豆状核变性的高频突变点。方法：对中国人肝豆状核变性３９个家系４５个患者的８号、１４号外显子进行ＰＣＲＳＳＣＰ筛选，对有异常者进行序列分析（放射自显影），并通过该突变点的酶切再次筛选。结果：Ｅｘｏｎ８发现有３个泳动异常，两个为多态现象，对１例明显异常者序列分析表明：①患者的序列发现同义突变Ｃ２２５０→Ｇ，错义突变Ｇ２２７３→Ｔ发生Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ，引起功能缺失。患者上述两个突变同时存在。②患者父亲在２２５０位点Ｃ及Ｇ碱基同时存在，在２２７３位点Ｇ及Ｔ碱基同时存在。③发现患者为纯合子，其父为杂合子，母亲为正常序列。针对Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变在所有病人中进行酶切，发现２例纯合子占病人总数４４％，１１例杂合子占２４４％。酶切的阳性率为２８．８％。结论：本结果支持８号外显子７７８密码子作为中国人肝豆状核变性的高频突变点。本研究中出现类似杂合性丢失（ＬＯＨ）现象，提示ＬＯＨ现象可能发生在除肿瘤之外的其他遗传疾病中。Ｅｘｏｎ１４未见异常，与欧洲人明显不同。     

蝰蛇ammodytes磷酯酶A2基因密码运用的研究

运用多变量统计分析法，对蝰蛇ａｍｍｏｄｙｔｅｓ五种磷酯酶Ａ＿２基因的密码运用进行了研究。结果提示：①基因的密码运用有明显的偏爱性，喜欢在密码的第三位上使用鸟嘌呤（Ｇ）和胞嘧啶（Ｃ）。表明这些基因在进化中承受了ＧＣ突变的压力，位于染色体Ｒ带上和ＧＣ丰富的区域。②基因密码的有效数（ＮＣ）从５０．９至５６．７；在ＮＣ坐标里，它们位于ＧＣ３Ｓ曲线之上部（ａｍｍｏｄｙｔｉｎＩ＿２除外）；在密码第三位上Ｃ的量不等于Ｃ。提示这些基因同义密码的偏爱性不仅由ＧＣ突变压力所致，也受到翻译选择性作用的影响。③与来自单细胞生物（如大肠杆菌、酵母菌等）和较高等的真核细胞生物（果蝇）的高表达基因密码运用方式相比较，发现它们都偏爱密码ＴＡＣ、ＴＴＣ、ＡＴＣ和ＧＡＣ。这是世界上第一篇关于ＰＬＡ＿２基因密码运用的报道。     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况。８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９的第三个碱基发生了ＡＧＧ／ＡｒｇＡＧＴ／Ｓｅｒ突变。以上结果提示，ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变主要以点突变为主，主要发生在密码子２４９，其突变率、突变谱和突变方式与启东等ＨＣＣ高度流行区相似     

人体结直肠癌Ki—ras基因点突变检测

采用ＰＣＲ和寡核苷酸探针杂交技术检测了３５例结直肠癌和５例息肉活检组织Ｋｉ－ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变，发现１０例结直肠癌具有点突变，其中ＧＧＴ－ＧＴＴ（Ｇｌｙ－Ｖａｌ）突变３例，ＧＧＴ－ＧＡＴ突变７例；１例从有突变（ＧＧＴ－ＧＴＴ）。     

临床标本中108株念球菌的分离鉴定结果及药敏分析

目的 探讨念珠菌的鉴定分类及药敏情况。方法 用沙保氏弱培养基分离真菌,用真菌ＡＴＢ试剂条做菌种鉴定分类及药敏分析。结果 １０８株念球菌中,白色念球菌６２例,热带念珠菌２８例,假热带念球菌４例,克柔氏念球菌５例,季也蒙念珠菌６例,近平滑念球菌３例。念球菌对５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）、两性霉素Ｂ（ＡＭＢ）、制霉菌素（ＮＹＳ）、咪康唑（ＭＩＺ）、益康唑（ＥＣＯ）、酮康唑（ＫＥＴ）的敏感率分别为８７．０３％     

ONCOGENIC TRANSFORMATION OF SYRIAN HAMSTER EMBRYO CELLS BY 5．3－MeV α PARTICLES AND A TUMOR PROMOTER PHORBOL ESTER

ＯＮＣＯＧＥＮＩＣＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＯＦＳＹＲＩＡＮＨＡＭＳＴＥＲＥＭＢＲＹＯＣＥＬＬＳＢＹ５．３－ＭｅＶαＰＡＲＴＩＣＬＥＳＡＮＤＡＴＵＭＯＲＰＲＯＭＯＴＥＲＰＨＯＲＢＯＬＥＳＴＥＲＳｈｏｕＪｉａｎｇ（寿江）；ＧｏｎｇＹｉｆｅｎ（龚诒芬）...     

EVALUATION OF CAPTOPRIL RENOGRAPHY WITH~（99m）Tc－MAG_3 IN THE DIAGNOSIS OF RENOVASCULAR HYPERTENSION

ＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮＯＦＣＡＰＴＯＰＲＩＬＲＥＮＯＧＲＡＰＨＹＷＩＴＨ~（９９ｍ）Ｔｃ－ＭＡＧ_３ＩＮＴＨＥＤＩＡＧＮＯＳＩＳＯＦＲＥＮＯＶＡＳＣＵＬＡＲ　ＨＹＰＥＲＴＥＮＳＩＯＮＫａｎｇＺｅｎｇｓｈｏｕ；（康增寿）ＣｈｅｎＦａｎｇ；（陈方）ａｎｄＷａ...     

血管紧张素原基因 M235T 分子变异与冠心病的关系

目的研究血管紧张素原（ＡＧＴ）基因Ｍ２３５Ｔ分子变异与中国人冠心病（ＣＨＤ）发生的关系。方法采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性分析，对７６例ＣＨＤ患者和７６例无ＣＨＤ证据的对照组进行ＡＧＴ基因Ｍ２３５Ｔ等位基因检测。结果ＣＨＤ患者ＡＧＴ基因２３５ＴＴ型（０．７０）和Ｔ２３５等位基因（０．８２）的频率显著高于对照组（分别为０．４２和０．６３，Ｐ＝０．００２和Ｐ＜０．０１）。经校正ＣＨＤ的主要危险因素后，ＡＧＴ基因２３５ＴＴ型仍可显著增加ＣＨＤ发生的危险性（比数比为３．５６，Ｐ＝０．０１２）。结论中国人ＡＧＴ基因Ｍ２３５Ｔ分子变异与ＣＨＤ显著相关，ＡＧＴ基因２３５ＴＴ型可能是ＣＨＤ的重要危险因素之一。     

贵州地区149株临床白念珠菌对抗真菌药物的敏感性

目的：探讨贵州地区临床不同来源白念珠菌的25S rDNA基因分型与抗真菌药物敏感性的关系.方法：采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）制定的M27-A3方案中的酵母菌微量稀释法,检测贵州地区149株临床白念珠菌对常见抗真菌药物的敏感性.结果：149株白念珠菌均对两性霉素B敏感,对5-氟胞嘧啶、氟康唑的敏感率分别为96.64％和93.96％,而对伊曲康唑的敏感率较低为46.31％;外阴阴道念珠菌病（VVC）来源菌株对伊曲康唑敏感性低于深部组织感染菌株;各25S rDNA基因型别的白念珠菌对4种抗真菌药物的敏感性差异无统计学意义.结论：贵州地区白念菌株对伊曲康唑的敏感性较低,这些不敏感菌株多数来源于外阴阴道念珠菌病,贵州地区白念珠菌25S rDNA基因型别在4种抗真菌药中的耐药率无差别.     

遗传性多发性外生性骨疣Ⅱ型与Ⅳ型致病基因的克隆

运用位置克隆与同源筛选相结合的方法克隆了位于１１ｐ１１的ＥＸＴ２基因，并对２０个ＥＸＴ家系的３７个病人进行了ＳＳＣＰ和测序分析。结果发现２个病人含有ＧＧ插入突变，证实了所克隆基因为ＥＸＴ２基因。同时，运用同源筛选法克降了ＥＸＴ４基因，并将其定位地１ｐ３６．１带。