硫化氢对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响

目的:观察硫化氢(H_2S)对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为四组(对照组、单独H_2S组、模型组及治疗组)。第28天行腹膜平衡试验;取壁层腹膜组织观察腹膜结构变化,检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况。检测大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA表达情况。结果:与对照组相比,模型组腹膜增厚伴血管增生、炎症细胞浸润增加,且间皮下α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著增加(P0.05);与模型组相比,治疗组腹膜形态明显改善,α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著减少(P0.05)。与对照组相比,模型组超滤量显著减少,腹膜通透性显著升高,治疗组大鼠腹膜转运功能显著改善(P0.05)。2.5%葡萄糖透析液刺激腹膜间皮细胞12h使肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA表达显著增加、上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著减少,同时MCP-1、IL-6、ICAM-1和TGF-β1 mRNA表达显著增加(P0.01);透析液中加入100μmol/L、300μmol/L NaHS可显著抑制上述炎症因子及纤维化因子表达(P0.01)。结论:在腹膜透析液中加入外源性H_2S可显著改善腹膜结构及功能损伤,并可部分逆转腹膜间皮细胞转分化,进而减少炎症因子和纤维化因子合成。     

促红细胞生成素对心脏成纤维细胞表型转化的影响及其信号机制

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CF)表型转化的影响,以及其可能的信号通路(TGF-β1-TAK1-p38MAPK)在其中的作用.方法 体外分离培养乳鼠心脏成纤维细胞,用10-6 mol/L的AngⅡ诱导培养心脏成纤维细胞表型转化,加入20 kU/L的EPO进行预干预,同时加或不加15 μmol/L的SB203580进行处理,以平滑肌肌动蛋白(SMA)表达作为心脏成纤维细胞表型转化的观察指标,应用免疫组织化学观察心脏成纤维细胞内SMA表达情况;采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内信号分子转化生长因子β1(TGF-β1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、转化生长因子激活性激酶1(TAK1)、p38MAPK以及磷酸化的TAK1(p-TAK1)和p-p38MAPK的表达情况.结果 20 kU/L的EPO能有效抑制AngⅡ诱导的CF细胞表型转化,减少CF细胞内α-SMA蛋白的沉积,降低CF表型转化相关信号分子TGF-β1、p-TAK1、TAK1、p-p38MAPK和p38MAPK的活化或表达,且加入SB203580后该作用增强.结论 EPO可抑制AngⅡ诱导的乳鼠心脏成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞,减轻心肌纤维化,并可降低相关信号分子mRNA及蛋白的表达,初步考虑EPO抑制心肌纤维化,减轻心室重构的作用是通过TGF-β1-TAK1-p38MAPK进行的.     

心房颤动患者血清TNF-α、TGF-β水平及其对心肌成纤维细胞趋化作用的影响

目的研究心房颤动与非心房颤动患者血清中转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的动态变化及其对心肌成纤维细胞趋化运动诱导能力的差异。方法采用酶联免疫吸附法检测心房颤动与非心房颤动患者血清中TGF-β、TNF-α蛋白含量;培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,取3~4代细胞采用Transwell装置检测不同浓度(1μg/L、10μg/L、50μg/L)的TGF-β、TNF-α诱导成纤维细胞运动的能力差异。结果血清中TGF-β、TNF-α含量各组均有明显差异,其中持续性心房颤动组最高,非心房颤动房性心律失常组明显高于阵发性心房颤动组,对照组最低;在不同浓度(1μg/L、10μg/L、50μg/L)TGF-β、TNF-α的趋化诱导作用下,迁移至下室的细胞50μg/L组较其它浓度组明显增高,10μg/L组次之,与其它各组比较均具有统计学意义。Logistic回归分析表明,迁移至滤膜下的细胞数与血清中TGF-β、TNF-α含量有相关性。结论各组血清中TGF-β、TNF-α含量不同,说明心房颤动的发生与潜在的炎症状态有关;TGF-β、TNF-α对心肌成纤维细胞具有趋化作用,心房颤动患者心肌成纤维细胞的趋化作用部分是由TNF-α、TGF-β介导的;血清中TNF-α、TGF-β水平变化间接反映了心肌损伤的存在、范围和程度。     

肺成纤维细胞在博来霉素致肺纤维化中的作用机制

目的:探讨肺成纤维细胞(PFC)在博来霉素(BLM)致肺纤维化中的作用机制。方法:采用差时贴壁法培养与纯化PFC,传至第3代备用。分为Control组:细胞用正常的培养基培养;BLM组:依次分为0.01mol/L BLM组、0.03mol/L BLM组、0.1mol/L BLM组、1mol/L BLM组及10mol/L BLM,每组每孔细胞分别加上述浓度的BLM,5×104个PFC/孔(12孔板),干预24小时。TGF-β1组:每个孔用2ug/L TGF-β1,5×104个PFC/孔(12孔板),干预24小时。免疫细胞化学法鉴定PFC与肺肌成纤维细胞(PMFC)。采用Real-time PCR及Western-blot技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及α-SMA mRNA表达与α-SMA蛋白水平。Brd U法检测细胞增殖。结果:BLM可剂量依赖性地抑制细胞增殖,BLM浓度从0.1mol/L始抑制PFC的增殖较对照组(P<0.05)。0.1mol/L BLM干预24小时后,α-SMA免疫细胞化学染色鉴定呈阳性,α-SMA mRNA的较对照组表达增加(P<0.05);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达较对照组显著增加(P<0.01);0.1mol/L BLM能明显升高α—SMA的蛋白表达水平。结论:PFC转化成PMFC且显著增加Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,成为BLM诱导肺纤维化中的重要作用机制之一。     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

PAI-1引起2型糖尿病合并NAFLD小鼠肝脏炎性反应和纤维化的机制研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积,炎性反应,纤维化等的影响。方法以C57BL/KSJ-Lepdb雄性小鼠作为T2DM合并NAFLD组(db/db组),同周龄C57BKS db/m雄性小鼠作为对照组(db/m组)。采用苏木素-伊红染色,油红О染色等方法检测小鼠肝组织切片脂质沉积;采用ELISA检测肝组织甘油三酯含量。以小鼠正常肝细胞NCTC1469作为研究对象,分为5组:对照组给予25 mmol/L葡萄糖(NG组)高渗对照组给予25 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇(HMA组)、高糖高脂组给予50mmol/L葡萄糖+0.75 mmol/L棕榈酸(HG+PA组)、高糖高脂+RNA干扰对照组(HG+PA+Si-NC组)用NC siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预,高糖高脂+PAI-1沉默组(HG+PA+Si-PAI-1组)用PAI-1的siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预。采用实时定量PCR和Western印迹方法检测炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β),肝纤维化相关指标转化生长因子-B(TGF-3),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)以及PAI-1的表达情况。结果与db/m组相比,db/db组小鼠肝组织中出现明显脂质聚集和纤维组织增生,甘油三酯含量增加,且MCP-1,IL-1β、TGF-β,a-SMA,ColⅠ和PAI-1的mRNA和蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。与NC组细胞相比,HG+PA组MCP-1、IL-1β、TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ、PAI-1表达量均明显上调(均P<0.05);与HG+PA组相比,HG+PA+si-PAI-1组PAI-1、MCP-1、IL-β、TGF-β、α-SMA和ColⅠ等表达量均明显下调(均P<0.05)。结论T2DM合并NAFLD小鼠模型肝组织中PAl-1表达明显增加,抑制PAI-1表达可明显改善肝组织炎性反应和纤维化水平。     

睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预研究

目的观察睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预效应。方法差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞,并分为4组:A组(培养液)、B组(60 μmol/L H_2O_2)、C组(30 nmol/L 睾酮+B组)、D组(氟他胺1μmol/L+C组)。用β半乳糖苷酶染色检测细胞的阳性率,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,二氯荧光黄荧光显色检测细胞内活性氧(ROs)。α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫化学染色反应细胞的表型转化,RT-PCR法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA、P16 mRNA和cyclin D1 mRNA的表达。结果与A组比较.B组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增加,ROS水平增加,P16 mRNA、cyclin D1 mRNA、TGF-β1 mRNA表达上调,细胞增殖能力明显下降,G_0/G_1期细胞比例增多,同时α-SMA免疫组织化学染色出现明显强阳性;与B组比较,C组上述各项指标下降;与C组比较,D组能部分阻断睾酮的各种保护作用。结论睾酮通过受体机制干预氧化应激诱导的心肌成纤维细胞的衰老,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一。     

MiR-125b对心肌梗死后成纤维细胞的调控机制研究

目的探讨微小核糖核酸125b(miR-125b)对成人心脏成纤维细胞(HCF-a)合成胶原、增殖、活化、迁移、凋亡的调控作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)通路的影响。方法体外培养HCF-a细胞,分为空白对照组和miR-125b模拟物转染组。采用RT-PCR和Western blot法检测胶原-Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白表达情况;采用MTT法检测HCF-a细胞增殖情况;采用Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,miR-125b过表达可明显上调Col-Ⅰ和Col-Ⅲ、α-SMA m RNA和蛋白的表达,促进细胞增殖、迁移和凋亡(P0.05)。另外,经RT-PCR检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达可明显促进TGF-β1 m RNA的表达水平(P0.05);经Western blot检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达对HCF-a细胞Smad2/Smad3蛋白磷酸化水平均有明显上调作用(P0.05)。结论Mi R-125b可以通过调控TGF-β1/Smad通路参与心肌纤维化进程。     

TGF-β1在AVP诱导的心肌成纤维细胞表型转化中的作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在精氨酸加压素(AVP)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化中的作用。方法:用胰酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将CFs分别与不同浓度的AVP、不同浓度的TGF-β1或添加了不同浓度的抗TGF-β1中和抗体的1×10-6mmol/L AVP共同孵育48 h后,用3H-脯氨酸掺入法检测CFs胶原合成的功能,用Western blot检测CFs中平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的表达量,用ELISA法检测CFs中TGF-β1的合成。结果:AVP可浓度依赖性地诱导CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量增加,其中1×10-6mmol/L AVP组CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量显著高于对照组(P<0.05)。AVP也可浓度依赖性地诱导CFs中内源性TGF-β1的合成增加,其中在1×10-6mmol/L AVP刺激下,CFs合成显著增加的内源性TGF-β1刚好达到外源性TGF-β1诱导CFs向MFs转化所需要的剂量(>2 ng/ml)。抗TGF-β1中和抗体虽然能够显著抑制在10-6mmol/L AVP诱导下CFs的3H-脯氨酸掺入率和α-SMA的表达量(P<0.05),但却不能将其抑制到与对照组相近的水平(P<0.05)。结论:AVP刺激下CFs中内源性TGF-β1合成的增加可部分地介导AVP诱导的CFs向MFs转化。     

吡非尼酮抑制转化生长因子β1诱导肺成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的:探讨吡非尼酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞胶原合成的影响及机制。方法 :以人胚胎肺成纤维MRC-5细胞为研究对象,用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号抑制剂SB203580和吡非尼酮处理TGF-β1诱导的肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖, Western blot检测细胞中Ⅲ型胶原酶(ColⅢ)、I型胶原酶(ColⅠ)蛋白表达和p38MAPK磷酸化水平。结果:TGF-β1诱导处理后的肺成纤维细胞增殖能力升高,细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化水平升高。吡非尼酮处理可以降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖能力,减少细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化蛋白表达。p38MAPK信号抑制剂SB203580处理具有协同吡非尼酮降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和表达蛋白ColⅢ、ColⅠ及p38MAPK磷酸化水平的作用。结论:吡非尼酮通过抑制p38MAPK信号,从而抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞胶原合成。     

转化生长因子β_1对心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)对原代培养的乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖与胶原合成的影响。方法出生1d~3 d的SD大鼠,用胰蛋白酶消化、差速贴壁法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,用不同浓度的TGF-β_1作用于心肌成纤维细胞,采用四氮唑盐(MTT)法测定CFs增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原分泌,蛋白印迹法(Western Blot)检测心肌成纤维细胞分泌的TGF-β_1蛋白表达。结果与正常对照组比较,10 ng/m L TGF-β_1组心肌成纤维细胞增殖明显(P0.05);心肌成纤维细胞羟脯氨酸含量明显增加(P0.01),同时TGF-β_1蛋白表达明显增加(P0.05)。结论 TGF-β_1可引起心肌成纤维细胞的增殖,胶原分泌增加,同时可使蛋白TGF-β_1蛋白含量增加。     

TGF-β1/p38MAPK通路在介导单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的 探讨TGF-β1/p38MAPK信号传导通路在老年单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化过程中的作用.方法 将老年SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、SB203580治疗组.分别至UUO术后第3、7、14天处死,取梗阻侧肾脏,观察病理改变;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肾小管上皮细胞中转化生长因子(TGF)-β1、p-p38、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达情况.结果 与假手术组比较,模型组及治疗组TGF-β1、p-p38MAPK 、α-SMA的表达显著升高(P＜0.05);而与模型组相比较,治疗组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著降低(P＜0 05).TGF-β1、p-p38MAPK和α-SMA三者的表达呈正相关(TGF-β1与p38MAPK之间r1=0.745,P＜0.05;p-p38MAPK与α-SMA之间r2=0.659,P＜0.05;TGF-β1与α-SMA之间r3=0.770,P＜0.05).结论 TGF-β1/ p38MAPK通路的激活可上调肾小管上皮细胞α-SMA的表达,促进上皮细胞转分化,并可能是调控UUO大鼠肾间质纤维化主要信号通路之一.     

转换生长因子-β_1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响

目的 研究转换生长因子-β_1(TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(HFLF)的窖蛋白-1、Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HFLF,以未加TGF-β_1的HFLF为对照组.分别以不同终浓度(2、5和10 μg/L)TGF-β_1处理的HFLF为实验组,每组5×10~8细胞,实验重复3次,逆转录-PCR和Western blot法分别检测TGF-β_1刺激3、6、12和24 h后各组窖蛋白-1及其mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达.组间均值比较采用单因素方差分析,采用直线回归模型进行相关性分析.结果 TGF-β_1作用后,HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系;TGF-β_1作用12 h,中剂量组(5 μg/L)窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达的积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P＜0.01);TGF-β_1作用24 h,中剂量组(5 μg//L)Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P＜0.01);相关分析结果显示,HFLF窖蛋白-1的蛋白表达下调与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调旱显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P＜0.05).结论 TGF-β_1可下调HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋门表达,并与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示HFLF窖蛋白-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关.     

气道上皮损伤对上皮下成纤维细胞转分化的影响及其在支气管哮喘气道高反应发生中的地位

目的探讨损伤气道上皮对上皮下成纤维细胞活化、转分化为肌纤维母细胞的影响及其在支气管哮喘(简称哮喘)气道高反应中的地位。方法原代培养的人气道上皮下成纤维细胞与经脂多糖(LPS)处理后给予机械划伤的人气道上皮细胞(16HBE)共培养,分别加入内皮素(ET)受体A拮抗剂BQ123、转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路特异性抑制剂,应用免疫组化、免疫印迹以及5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)掺入等方法,检测上皮下成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达与细胞增殖情况;将细胞转染反义内皮素转换酶(anti-ECE)mRNA表达载体并运用酶谱分析法,研究ET-1与基质金属蛋白酶(MMPs)的相互作用。结果损伤上皮诱导并增强了上皮下成纤维细胞α-SMA表达及细胞增殖,同时诱导了上皮下成纤维细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的活化;BQ123、TGF-β1中和抗体及p38MAPK、ERK1/2抑制剂均分别抑制或部分抑制了α-SMA的表达。与对照(转染空载体)及转染anti-ECEmRNA表达载体上皮细胞比较,转染空载体的上皮细胞损伤后上清液中ET-1分泌[机械划伤+LPS刺激的pEGFPN2转染16HBE组为(15·00±0·86)pg/ml;机械划伤+LPS刺激的anti-ECE转染16HBE组为(7·57±0·94)pg/ml]增加(P均<0·01)。结论损伤上皮通过释放ET-1和(或)TGF-β1诱导了上皮下成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化并促进了细胞的增殖,这一过程涉及了MAPKs家族的p38MAPK与ERK1/2信号通路的激活。     

乙酰半胱氨酸抑制人肺成纤维细胞增殖及胶原合成机制的初步探讨

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)抑制人肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制.方法 分离培养人肺成纤维细胞,并以肺泡上皮来源的细胞系A549作为对照.将细胞分为对照组(不加任何处理)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组(TGF-β_1为5μg/L)、NAC组(NAC为20 mmol/L)和联合组(5μg/L的TGF-β_1刺激24 h后换用不同浓度NAC继续作用24 h).用不同浓度NAC处理后,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;采用TGF-β_1刺激后加用NAC刺激,逆转录-PCR法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化,Western blot法检测cyclin E、α-肌动蛋白及信号转导与转录激活因子-3(STAT-3)蛋白的表达.结果 5、10、20、40 mmol/L的NAC对人肺成纤维细胞生长均有明显抑制作用,呈剂量依赖关系,而20 mmol/L的NAC对A549细胞无明显作用.10、20、40 mml\L的NAC可使G_0/G_1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低.经TGF-β_1刺激后,成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达明显增加,而NAC可抑制TGF-β_1诱导或未经诱导的Ⅰ型前胶原表达.TGF--β_1可诱导cyclin E和α-肌动蛋白的表达,其相对密度分别为0.98±0.09和1.56±0.23,20 mmol/L的NAC能明显抑制cyclin E的表达,其相对密度为0.52±0.04,但却小能抑制α-肌动蛋白的表达.TGF-β_1组和NAC组α-肌动蛋白的表达(相对密度分别为1.56 ±0.23和1.63±0.20)无明显差别.结论 NAC能够抑制人肺成纤维细胞cyclin E蛋白的表达,使细胞增殖阻滞于G_1期,从而抑制成纤维细胞发生增殖,抑制其胶原合成.对TGF-β_1刺激前后α-肌动蛋白的表达无明显抑制作用.     

替米沙坦和氨氯地平对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)及ROS的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10-6 mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平)。倒置显微镜下观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1(免疫荧光法测定)、ROS(荧光探针DCFH-DA分析)情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、ROS水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、ROS水平下降(P0.05)。TE+AM组与TE组、AM组相比心肌成纤维细胞在S期时增殖率下降,在G0/G1期、G2/M期时增殖率升高更明显(P0.05),心肌成纤维细胞中TGF-β1水平低于TE组、AM组(P0.05)。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1过度表达及ROS过度生成有关。     

苯肾上腺素对大鼠心肌纤维化的调节及其与转化生长因子-β1、果蝇母性DPP同源蛋白3及结缔组织生长因子信号通路的关系

目的:观察苯肾上腺素对压力超负荷介导的大鼠心肌纤维化(MF)的调节及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇母性DPP同源蛋白3(Smad3)及结缔组织生长因子(CTGF)信号通路的关系。方法:将雄性SD大鼠28只随机分为对照组、腹主动脉缩窄(AAC)组、AAC+苯肾上腺素组和AAC+哌唑嗪组,每组7只。通过心肌胶原形态学测定左心室组织胶原容积分数(CVF)观察大鼠MF的变化,应用免疫组化法检测各组大鼠左心室组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Smad3及CTGF表达,用蛋白免疫印迹(Western blot)法测定左心室组织α-SMA表达。结果:(1)心肌胶原形态学显示:与对照组比,AAC组、AAC+苯肾上腺素组和AAC+哌唑嗪组的CVF均明显升高(P均0.01);与AAC组比,AAC+苯肾上腺素组的CVF显著减少(P0.01)。(2)免疫组化法显示:与对照组比,AAC组、AAC+苯肾上腺素组和AAC+哌唑嗪组的α-SMA、TGF-β1、Smad3及CTGF表达均上调(P均0.01);与AAC组比,AAC+苯肾上腺素组的α-SMA、TGF-β1、Smad3及CTGF表达均降低(P均0.01)。(3)Western blot法显示:与对照组比,AAC组、AAC+苯肾上腺素组和AAC+哌唑嗪组的α-SMA表达均上调(P均0.05);与AAC组比,AAC+苯肾上腺素组的α-SMA表达降低(P0.01)。结论:苯肾上腺素可以改善压力超负荷诱导的大鼠MF,该作用可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路及下调CTGF有关。     

血管紧张素Ⅱ在缺氧诱导的人肺成纤维细胞表型转化及胶原合成中的作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)在缺氧诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)表型转化及胶原合成中的作用。方法:在缺氧条件下培养HLF-1细胞株,将细胞分为AngⅡ组、AngⅡ+替米沙坦(TST)组和对照组。采用免疫荧光法检测HLF-1细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平;采用Western blot法检测HLF-1细胞Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)蛋白的表达水平。结果:AngⅡ组HLF-1细胞α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较对照组明显上调,AngⅡ+TST组α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较AngⅡ组明显下降。结论:AngⅡ/血管紧张素Ⅱ1型受体信号通路可诱导缺氧性HLF表型转化以及胶原合成。     

过氧化体增殖物激活型受体γ抑制转化生长因子β1诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用。方法体外培养大鼠主动脉VSMC,先分为正常对照组、不同浓度TGF-β1组(1、2、4、8μg/L),观察TGF-β1对VSMC的影响;再分为正常对照组、钙化组(TGF-β1 4μg/L)、罗格列酮(RSG,20μmol/L)组、钙化+罗格列酮(RSG,20μmol/L)组,观察PPARγ激动剂罗格列酮对VSMC钙化后的作用,对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红S染色检测钙化结节的形成情况,Western blot检测VSMC标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PPARγ、成骨样细胞标志物Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,TGF-β1处理后的VSMC钙盐沉积和ALP活性明显升高(P0.05),且TGF-β1浓度为4μg/L时作用最明显,成骨样细胞标志物Runx2表达明显升高(P0.05),同时平滑肌细胞标志物α-SMA表达减少(P0.05)。而加入罗格列酮后,VSMC的钙盐沉积和ALP活性明显降低(P0.05),α-SMA、PPARγ表达明显上升(P0.05),相反,Runx2的表达则明显受到抑制(P0.05)。结论 TGF-β1可以诱导VSMC向成骨样细胞分化和钙化,而PPARγ激动剂罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导下VSMC钙化的发生。     

瓜蒌提取物治疗链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠心肌纤维化的实验研究

目的观察瓜蒌提取物对链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠心肌纤维化的治疗作用。方法采用链脲佐菌素诱导C57BL/6J小鼠糖尿病模型,瓜蒌提取物选取瓜蒌皮注射液作为研究药物,观察正常对照组、链脲佐菌素(STZ)组、STZ+低剂量瓜蒌组和STZ+高剂量瓜蒌组小鼠体重、随机血糖、心功能、左室心肌胶原容积分数、左室心肌肥大细胞数目、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化。结果 STZ组小鼠体重下降、血糖升高、左室肥大细胞浸润数目增加、左室胶原容积分数增加,免疫组织化学染色显示α-SMA和TGF-β1表达增加。治疗组左室肥大细胞浸润数目降低、左室胶原容积分数减少,免疫组织化学染色显示α-SMA和TGF-β1表达减少,瓜蒌高剂量组优于低剂量组。结论瓜蒌皮注射液可以改善STZ诱导糖尿病小鼠的心肌纤维化,可能机制为抑制肥大细胞在心肌组织中的浸润和激活。