时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展现状

标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度敏感性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,包括放射免疫(RIA),酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。TRFIA具有零本底、灵敏度高、重复性好、特异性强、线性范围宽和应用广泛等特点,是继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新的里程碑,是当代配基分析中最有发展前景的分析手段。本文就时间分辨免疫荧光分析技术作如下综述。     

血浆 C 蛋白快速均相酶免疫测定法

近年来,C 蛋白抗原是用免疫测定法(Laurell)、夹层酶免疫测定法(EIA)和放射免疫测定法(RIA)进行定量的。这些方法不仅费时,还需要将结合和游离的抗原分离。在RIA 中,使用放射性同位素时,不仅需要特殊的设备,同时对物品也要进行认真的去污处理。作者报告的快速均相EIA(H-EIA)测定法克服了上述的缺点。这种方法是基于酶标记抗原与抗体结合时酶活性的变化,而且无需分离结合和游离的蛋白。     

时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展现状

标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度敏感性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,包括放射免疫(RIA),酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA).TRFIA具有零本底、灵敏度高、重复性好、特异性强、线性范围宽和应用广泛等特点,是继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新的里程碑,是当代配基分析中最有发展前景的分析手段.本文就时间分辨免疫荧光分析技术作如下综述.     

配体结合分析的某些进展

自60年代初Yalow和Berson首先用放射免疫分析法测定人血清胰岛素以来,配体结合分析技术(Ligand Binding Assay)有了惊人的发展。本文拟简述近年来其有关方法学的某些进展。标记类型在配体结合分析中,可作为标记物的有放射性同位素、噬菌体、化学发光前体物、酶、红细胞、荧光素、胶乳颗粒、微脂体、金属原子和稳定的游离原子团。配体结合     

电化学发光免疫测定(ECLI)技术及其临床应用

电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence im-munoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。它是一种在电极表面由     

链亲和素一半抗原衍生物在免疫分析中的应用

生物素一亲和素系统(Biotin—Avidin Sys-tem,BAS)在免疫分析领域的应用日益广泛。亲和素和链亲和素(SA),都可以用~(125)I、酶或烯土元素铕(Eu~(3+))等标记,作为通用示踪剂用于放射免疫分析、酶免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之中。作者报道链亲和素(SA)可以用半抗原分子标记,作为蛋白示踪联结剂应用于竞争性的免疫分析试验中。作者将SA 与皮质醇偶联;生物素化的甲状腺球蛋白(TG)用Eu~(3+)螯合剂4,7—二磺苯—1,10—     

增强发光酶免疫分析技术的新进展

放射免疫分析法(RIA),因其高度的灵敏,特异和方便而被广泛地应用于医学、生物学的基础研究及临床诊断。但RIA 的缺点是接触放射性对污物人体的危害及放射性污物处理麻烦等。由于这些弊端,促进了非同位素标记技术的研究在免疫分析领域的进展,并形成了非同位素的免疫分析与RIA 竟相争艳的局面。     

骨钙素测定技术进展

本文重点对骨钙素(Osteocalcin;Oc)测定技术的进展进行综述。通过对放射免疫法,化学发光免疫法,酶免疫法和亲和素—生物素酶免疫法从原理、操作、正常参考值,以及方法学优缺点等较系统评价,认为放射免疫分析法是目前测定骨钙素较理想的方法。     

免疫印迹法、酶联免疫法及放射免疫法

目的:评价免疫印迹法检测胰岛自身抗体(GAD-A、ICA、IAA)与酶联免疫法测ICA、GAD-A放射免疫法测IAA结果的一致性.方法:采用免疫印迹法测定81例糖尿病患者胰岛自身抗体,将结果与酶联免疫法测定的GAD-A、ICA,放射免疫法测定IAA结果进行比较.结果:免疫印迹法阳性检出率为:GAD-A 51.8%,ICA 18.5%,IAA 27.1%;酶联免疫法(GAD-A、ICA)、放射免疫法(IAA)阳性检出率:GAD-A 32.1%,ICA 34.5%,IAA 30.8%;上述两组结果进行比较,两组相比ICA和GAD-A有统计学差异(P<0.05),IAA无统计学差异.两组结果一致率比较:GAD-A 50.6%,ICA 64.2%,IAA 69.1%.结论:与临床常用酶联免疫法检测GAD-A、ICA,放射免疫法检测IAA比较,免疫印迹法和酶联免疫法在ICA及GAD-A阳性检出率上的差异有显著性,和放射免疫法在IAA阳性检出率上差异无显著性.     

时间分辨荧光免疫分析技术在医学领域的应用

<正>标记免疫分析技术是在抗原与抗体特异性反应的基础上标记各种可测量的标记物,是目前在微量检测领域独具优势的免疫分析技术。20世纪60年代初期,Yallow和Berson创立了放射性免疫分析方法(RIA),因其具有极好的微量分析性能而迅速被应用于临床诊断和医学科学研究,但因其放射性危害、试剂昂贵且保存期短等劣势被限制了进一步发展。此后酶     

硅纳米线生物传感器在疾病诊断中的应用

<正>临床检验诊断学的发展日新月异,新技术、新方法不断出现,极大提升了实验室的检验能力,也为临床诊断提供越来越重要的帮助。在低浓度生物分子检测方面,现有检测方法以标记式检测技术为主,如酶联免疫吸附法、荧光免疫分析法、放射免疫检测法和化学发光免疫分析法等,它们通过标记于抗原或抗体上的酶、荧光素、同位素或化学发光剂产生的信号来指示检测分子的含量,具有灵敏度高,特异性好的优势,但也存在一些不足之处:(1)标记过程繁琐、耗时,标记技术会造成检测时     

Elecsys(R)2010型电化学发光免疫分析仪的一次故障和处理

Elecsys(R)2010型全自动电化学发光免疫分析系统采用了瑞士罗氏公司电化学发光免疫测定专利技术,由日立公司生产,是继放射免疫、酶联免疫、荧光免疫、化学发光之后的新一代标记免疫分析检验设备.这里报道了Elecsys(R)2010故障一例,希望对使用该设备的检验工作者有所启示.     

磁性分离酶联免疫法测定血清TSH临床应用

血清促甲状腺激素(TSH)的测定国内多用放射免疫法(RIA)灵敏度虽高,但操作复杂,且有放射性污染,对人体有害并污染环境.应用磁性分离酶联免疫测定法(IEMA),可克服上述缺点.本文对比IEMA与RIA检测血清TSH含量的结果并作初步的临床评价.     

一种高灵敏度标记免疫分析方法——免疫聚合酶链反应

一种高灵敏度标记免疫分析方法——免疫聚合酶链反应周棱贺佑丰标记免疫分析方法发展至今，已相继使用了多种标记物，如放射性同位素、酶和底物的显色、荧光及化学和生物发光等，扩大了待测物的范围并提高了免疫分析的检测极限。聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａ...     

荧光免疫分析技术及其应用

近十多年来,放射免疫分析技术已成为微量测定体内各种激素、药物及蛋白质等物质的标准方法。其优点是特异性强、灵敏度高。但由于有的放射性同位素标记品半衰期较短,以致运输及保存比较困难,而且操作费时。近年出现了以荧光素取代放射性同位素标记抗原的一种新技术〔荧光免疫分析(Fluorescent immunoassay)和以荧光素标记抗体的免疫荧光分析(Immunofluoroassay)〕。其优点是:①无放射性、②贮存期长,可制成长期使用的试剂盒、③所需仪器设备较少。基于以上优点,目前已出现荧光免疫分析逐渐取代放射免疫分析的趋势。     

两种方法标记^99mTc抗CEA单抗及其鼠放免显像的比较研究

目的评价两种方法99mTc标记抗CEA单抗与结肠癌肿瘤细胞表现相关抗原的亲和性.方法分别采用2巯基乙醇法(2-ME)和亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)法,以新鲜99mTc淋洗液标记抗CEA单抗,并对荷人结肠癌裸鼠进行SPECT显像,比较两种标记方法的显像效果.结果2-ME法标记单抗在实验所得最佳标记条件免疫活性(B/T%)69.1%,标记率为88.7%,胶体含量8.1%.2-IT法标记的单抗免疫活性可达73.2%,标记率为93.7%,胶体含量4.8%.稳定性以2-IT方法为佳标记后1、2、6、12小时放化纯皆在90%以上,标记操作时间和标记方法二者各有优缺点.二者在荷瘤裸鼠的瘤体内显像清晰,2-IT法标记抗体的瘤本比值(T/NT)为5.33±1.11,2ME法为4.11±1.53,血池和肝肾的放射性以2-ME法为高.结论表明以2-IT法和2-MT法预处理抗CEA单抗皆具有达到外接巯基的目的,可有效进行99mTc标记,较少损伤蛋白活性,标记方法简单,放射性核素标记的抗CEA单抗对瘤体具有较高的亲和力,适用于SPECT显像.其中以2-IT法标记率高,胶体含量少,稳定性强,T/NT值大等优点,更适用于放射免疫显像     

用免疫酶标分析法测定纤维蛋白原降解物(FDP)

应用酶标抗原竞争法测定血清FDP,灵敏度高于血凝抑制技术,与放射免疫分析法一致.其原理是将待测的FDP抗原和已标记过氧化物酶的FDP混合,再与兔抗人纤维蛋白原(Fg)的抗血清一起保温,待测FDP和已标记酶的FDP在与抗体结合时发生竞争,应用免疫吸附剂(羊抗兔丙种球蛋白,即第二抗体敏化的玻璃细珠)把已结合上抗体的酶标记FDP复合物与游离的未结合抗体的标记FDP分离,结合到免疫吸附剂上的标记抗原,可在过氧化氢和邻联茴香胺(orthodianiside)存在下,测定过氧化物酶活性.材料制备:(一)抗人Fg血清,免疫电泳上出现清晰D、E碎片;(二)FDP是以Fg10mg加20U链激酶,37℃孵育30分钟,用Kunitz抑制剂终止反应,得早期FDP,使凝血酶时间延长至2分     

免疫技术在蛋白质定性定量上的应用 三、酶连接免疫吸附测定法

在标记的抗原抗体检测法中,最先发展起来的是免疫荧光技术,随后是放射免疫测定法,这两种标记的检测法一经建立就充分地显示出它们具有高度敏感性,所以一直沿用到现在。由于放射免疫测定法试剂较贵,同位素的半寿期短,需要复杂的设备来判读结果,在运送和操作过程中还必须有特殊的防护措施等问题,因而放射免疫测定法通常都在设备条件较好的实验中心进行。在放射免疫测定法的基础上发展起来的酶免疫     

用ELISA定量测定人血清载脂蛋白A-1

血清高密度脂蛋白(HDL)的主要载脂蛋白apoA-1的定量测定在临床上具有重要意义。apoA-1的定量测定常用放射免疫法、免疫电泳法和免疫浊度法。本文作者用ELISA[一种“三明治”式酶联免疫法)定量测定人血清apoA-1,具有灵敏度高、抗体用量少、避免放射性、样本处理能力大等优点。本法所用的兔抗人apoA-1抗体均经亲和层折法纯化。聚乙烯酶标板先用纯化apoA-1抗体包被,37℃保温3小时后于4℃放置过夜;倒去包被液后用洗涤液洗涤三次,加入100μl适当稀释的标准apoA-1或待测血清样本,37℃保温2小时;倒去样本液并洗涤5次,加入100μl辣根过氧化物酶标记的纯化apoA-1抗体,置37℃保温2小时后,再次倒去抗体并如前洗涤。最后加入100μl酶反应     

免疫分析标记物技术的革新

本文综述标记物技术的历史及新进展,并概述新的标记物使用在经典免疫分析及免疫测量分析的优缺点.讨论:酶标记物技术的新进展如渠道(channeling)技术、酶受体—供体系统,酶蛋白重激活分析.荧光偏振化免疫分析,时间分辨荧光分析是二种较新的荧光技术.发光标记物如叮啶酯,由于其稳定、敏感、检测容易而有希望.若干新的粒子标记技术已研究成功,其中最有意义的是溶液粒子标记物及脂质体标记物.比较了这些新的标记物和放射性标记物的优缺点.其主要原理是患者标本中的抗原与放射性标记抗原互相竞争固定数量的抗体结合部位.