阿尔茨海默病中肿瘤坏死因子-α基因多态性及表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与广东地区汉族人群散发性阿尔茨海默病(SAD)发病易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,检测44例SAD病人(AD组)及45例正常老年人(对照组)TNF-α基因的TNF-α1及TNF-α2等位基因频率。按比值比(OR)作疾病关联分析。用放免法检测两组的血清TNF-α含量。结果AD组的TNF-α2基因频率为0．182,明显高于对照组的0．078(OR=2．635,P=0．039)；AD组血清TNF-α含量为(567．85±102．43) ng/L,明显高于对照组的(389．73±56．68)ng/L(P＜0．05)。结论广东地区汉族人群中,TNF-α基因多态性与SAD有关联．TNF-α2等位基因与SAD的易感性有关。     

巴戟天醇提物对大鼠脑缺血再灌注损伤组织TNF-αIL-6表达水平的影响

目的探讨巴戟天醇提物(RMOEE)对大鼠脑缺血再灌注损伤组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组、脑缺血再灌注损伤模型组、RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组4组,每组10只。RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组大鼠连续1周按相应剂量进行RMOEE灌胃,而假手术组和脑缺血再灌注损伤模型组大鼠仅进行同体积生理盐水灌胃。末次给药1h后采用改良的Zea-Longa线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,测定各组大鼠脑组织含TNF-α、IL-6表达水平。结果 RMOEE3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组脑组织TNF-α、IL-6表达水平较脑缺血再灌注损伤模型组低(P0.05)。RMOEE 3.0g/(kg·d)组、RMOEE 1.5g/(kg·d)组TNF-α、IL-6表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。结论RMOEE可通过减少TNF-α、IL-6表达而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶基因启动子的影响

目的 探讨α-突触核蛋白对多巴胺代谢的调节机制.方法 以人基因组DNA为模板,PCR法扩增酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)基因区的部分DNA片段(-495～ 25),将其插入质粒pGL3-Basic,构建荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-THprom,转染多巴胺能神经元细胞系MES23.5和MES23.5/hα-Syn .结果 双荧光素酶活性分析表明,pGL3-Basic、pGL3-THprom和pGL3-Control在MES23.5细胞中表达的荧光素酶活性分别为5.60±0.67,26.80±4.11和32.90±4.75,而pGL3-THprom在MES23.5和MES23.5/hα-Syn 中表达的荧光素酶活性分别为26.80±4.11和14.40±0.61,差异极显著(P＜0.01).结论 这些结果提示扩增的DNA片段具有启动子活性,而α-Syn作为反式作用因子通过影响TH基因启动子的功能发挥对多巴胺代谢的负性调控作用.     

α1-抗糜蛋白酶基因、早老素1基因 与阿尔茨海默病的相关分析

目的探讨中国汉族人中α１抗糜蛋白酶（ＡＡＣＴ）基因、早老素１（ＰＳ１）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ）的相关情况。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法,在１２３例患者和１４０例正常人中观察ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性的分布,进行关联分析。结果１ＡＤ患者与ＰＳ１基因等位基因１正关联,与等位基因２和基因型２／２负关联,但与１／１基因型无关;２ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ无关联;３在三种ＰＳ１基因型中,ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ均无关;４在ＡＡＣＴ基因ＡＡ、ＴＴ基因型中,ＰＳ１基因多态性与ＡＤ负关联,而ＴＡ型中ＰＳ１基因与ＡＤ无显著相关。结论中国人群中,ＡＤ与ＰＳ１基因２／２型负关联,而与ＡＡＣＴ信号肽基因多态性无关;ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性之间也无明显的相互影响。     

α2-巨球蛋白基因多态在帕金森病及阿尔茨海默病中的分布

目的　比较α2 巨球蛋白 (α2 macroglobulin ,A2M)基因 18号外显子 5′端 5个碱基的插入/缺失 (Ins/D)多态、2 4号外显子上缬氨酸 /异亮氨酸 (I 10 0 0V)多态 ,在帕金森病 (PD)及阿尔茨海默病 (AD)患者中的分布情况。方法　采用聚合酶链式反应 限制性片断长度多态性 (PCR RFLP)方法 ,在 6 6例PD患者、115例AD患者中观察A2M基因两种多态的分布 ,并通过比值比 (OR)对A2M基因两种多态与PD、AD作相关分析。结果　A2M基因I 10 0 0V多态基因型及等位基因分布 ,在PD、AD组与健康对照人群间的差异有显著意义 (基因型PD :χ2 =7 4 0 9,df =1,P =0 0 0 6 5 ,AD :χ2 =6 6 2 5 ,df =1,P =0 0 0 9;等位基因PD :χ2 =5 183,P =0 0 2 3,AD :χ2 =4 2 12 ,P =0 0 4 0 ) ,其中Ⅳ杂合基因型与PD及AD均呈显著的正关联 (PD :OR =3 0 3,95 %CI:1 38～ 6 5 8;AD :OR =2 5 2 ,95 %CI :0 99～ 5 0 9) ;但PD、AD两组间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。各组间A2MIns/D多态基因型及等位基因的分布亦无明显差异。结论　A2M基因 2 4号外显子I 10 0 0V多态可能不仅是AD的疾病易患因子 ,也是PD的疾病易患因子。     

α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性机制的影响

目的探讨α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应机制的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组(A)、脑缺血再灌注组(B)和硫辛酸预干预组(C),应用线栓法制备大脑中动脉闭塞2 h后再灌注模型,分别于再灌注6 h、24 h、3 d、7 d采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死灶大小,采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测大鼠核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的表达。结果与假手术组比较,模型组NF-κB的表达于再灌注6 h即增高(P<0.05),TNF-α的表达于24 h增高(P<0.05),3 d时均达高峰(均P<0.05),7 d时仍高于假手术组(均P<0.05);与模型组比较,硫辛酸预干预组于脑缺血再灌注24 h、3 d、7 d时NF-κB和TNF-α表达降低;α-硫辛酸预干预组NF-κB各时点组内比较未见统计学差异(F=2.245,P>0.05)。与模型组比较,α-硫辛酸预干预组梗死体积明显减小,神经功能缺损评分降低(P<0.05)。结论α-硫辛酸对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能是α-硫辛酸抑制NF-κB、TNF-α的表达,从而抑制大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎症反应有关。     

白桦脂醇对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠认知及海马突触功能相关蛋白表达的影响

目的 探讨白桦脂醇对阿尔茨海默病（AD）小鼠的学习记忆功能的干预作用及海马突触功能相关蛋白表达的影响,为探索治疗AD提供新的可能。方法 采用白桦脂醇干预APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠,将小鼠随机分为模型组、药物高剂量组和低剂量组,C57BL/6J健康小鼠为对照组。通过行为学观察学习记忆能力、在体电生理记录海马神经元的生物电、TUNEL法检测神经元凋亡、Realtime PCR法检测PSD-95和Synapsin-I水平。结果 水迷宫检测结果发现白桦脂醇能改善模型小鼠认知功能障碍;电生理检测AD模型组长时程增强（LTP）幅值低于对照组,经过白桦脂醇干预治疗后,白桦脂醇各组LTP幅值较AD模型组升高;AD模型组神经元凋亡率显著高于对照组,经过白桦脂醇干预治疗后凋亡率下降;AD小鼠模型海马区PSD-95和Synapsin-I表达下降,但经白桦脂醇干预后其表达上升。结论 白桦脂醇通过使海马PSD-95和Synapsin-I的表达增加,发挥对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠认知功能的保护,使海马长时程增强。     

17β-雌二醇对解聚素金属蛋白酶9表达水平的影响

目的 研究17β-雌二醇对解聚素金属蛋白酶9(ADAM9)表达水平的影响. 方法 应用盐析法提取人类基因组DNA,扩增ADAM9基因启动子目的片断,构建表达ADA M9启动子的报告基因质粒.应用脂质体转染法,分别转染入人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、人胚肾细胞HEK293和宫颈癌细胞HeLa内.17β-雌二醇处理各组细胞后,检测ADAM9启动子转录效率.结果 成功扩增了ADAM9启动子区1676 bp目的片段,构建了ADAM9启动子报告基因质粒pGL-ADAM9,瞬时转染入细胞内.17β-雌二醇处理SK-N-SH细胞后,ADAM9启动子转录活性上升至31.250±1.328,较处理前的15.471±1.256增加约2倍,差异有统计学意义(P＜0.05).HEK293细胞内,ADAM9启动子转录活性上升至13.499±0.866,较处理前的8.513±1.356增加约1.6倍,差异有统计学意义(P＜0.05).HeLa细胞中没有观察到17β-雌二醇对ADAM9启动子转录活性的影响. 结论 17β-雌二醇能上调人ADAM9启动子的表达水平,是ADAM9基因表达的激活剂.     

α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶基因启动子的影响(英文)

目的探讨α-突触核蛋白对多巴胺代谢的调节机制。方法以人基因组DNA为模板,PCR法扩增酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase, TH)基因区的部分DNA片段(-495~+25),将其插入质粒pGL3-Basic,构建荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-THprom,转染多巴胺能神经元细胞系MES23.5和MES23.5/hα-Syn+。结果双荧光素酶活性分析表明,pGL3-Basic、pGL3-THprom和pGL3-Control在MES23.5细胞中表达的荧光素酶活性分别为5.60±0.67, 26.80±4.11和32.90±4.75,而pGL3-THprom在MES23.5和MES23.5/hα-Syn+中表达的荧光素酶活性分别为26.80±4.11和14.40±0.61,差异极显著(P<0.01)。结论这些结果提示扩增的DNA片段具有启动子活性,而α-Syn作为反式作用因子通过影响TH基因启动子的功能发挥对多巴胺代谢的负性调控作用。     

5α-双氢睾酮对解聚素金属蛋白酶9表达水平的影响

目的研究5α-双氢睾酮(5α-DHT)对解聚素金属蛋白酶9(ADAM9)表达水平的影响。方法应用盐析法提取人类基因组DNA,扩增ADAM9基因启动子区目的片断,构建表达ADAM9启动子的报告基因质粒。应用脂质体转染法,分别转染入人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)、人前列腺癌细胞(LNCaP)和人宫颈癌上皮细胞(HeLa)内。5α-DHT处理各组细胞后,检测ADAM9启动子转录效率。结果我们扩增了ADAM9启动子区1676bp目的片断,构建了ADAM9启动子报告基因质粒pGL-ADAM9,将其瞬时转染入上述细胞内。5α-DHT干预细胞后,ADAM9启动子转录活性与非处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论上述三种细胞中,5α-DHT对ADAM9启动子表达水平无显著影响。     

突触蛋白I片段促进α-突触核蛋白的聚集

目的 探讨突触蛋白I(Synapsin I,Syn I)被剪切后形成的C83片段对α-突触核蛋白聚集的影响。方法 在稳定表达α-突触核蛋白的HEK293细胞、小鼠原代神经元以及Tau P301S转基因小鼠体内分别过表达Syn I全长及其C83片段,通过细胞免疫荧光染色、蛋白免疫印迹技术以及免疫组织化学染色的方法观察Syn I全长及其C83片段对α-突触核蛋白磷酸化及聚集的影响。结果 Syn I C83片段促进HEK293细胞中α-突触核蛋白的磷酸化、泛素化以及聚集,并诱导小鼠原代神经元以及Tau P301S转基因小鼠体内α-突触核蛋白的磷酸化和聚集。结论 在细胞和动物模型中Syn I C83片段均可以促进α-突触核蛋白的聚集,这可能是Syn I C83片段导致认知功能障碍的重要原因之一。     

玉米醇溶蛋白的物理化学改性

背景：玉米醇溶蛋白作为缓控释材料和生物可降解药用辅料在药剂学领域有着广泛的应用。目的：对玉米醇溶蛋白的物理化学改性方法进行综合分析。方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1998-01/2010-10关于玉米醇溶蛋白的文章,在标题和摘要中以“玉米醇溶蛋白,玉米朊,改性,接枝”或“ZEIN,Modification,Graft”为检索词进行检索。选择文章内容与玉米醇溶蛋白改性研究相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。结果与结论：对玉米醇溶蛋白的改性研究进行总结有利于指导玉米醇溶蛋白的改性研究,从而增加玉米醇溶蛋白在药物制剂,生物医学工程方面的利用价值。     

α-分泌酶与阿尔茨海默病的治疗

淀粉样前体蛋白(APP)在脑内经β和γ分泌酶的作用生成β淀粉样蛋白(Aβ),也可在α和γ分泌酶的作用下从Aβ序列内部进行降解,生成sAPPα而避免Aβ的生成,sAPPα可对神经细胞产生神经营养和神经保护作用。Aβ在脑内沉积从而对细胞造成毒性作用即Aβ毒性学说被认为是阿尔茨海默病(AD)发病机制之一。目前AD的治疗策略主要集中于抑制β分泌酶和γ分泌酶的研究。新近的研究显示,一类属于解聚素和金属蛋白酶(主要指ADAM10、ADAM17和ADAM9)分子具有α分泌酶的功能,提高α分泌酶的表达可以降低Aβ,有可能在AD的治疗中具有潜在作用。     

α2-巨球蛋白基因与Alzheimer病的研究进展

Alzheimer病 ( AD)的定位克隆研究结果证实了 1 2号染色体上 AD疾病基因的存在。位于该染色体的α2 -巨球蛋白基因 ( A2 M)已作为 AD的功能候选基因 ,构成继载脂蛋白 E基因之后的另一主要 AD风险基因。A2 M基因与 AD的相关性研究业已成为 AD遗传学研究的热点 ,本文拟对此进行综述。     

HIF-2α/BMSCs移植对脑出血小鼠的影响

目的 探讨移植低氧诱导因子-2α(HIF-2α)过表达的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脑出血(ICH)小鼠的影响.方法 利用慢病毒包装质粒GV308携载HIF-2α 感染BMSCs构建过表达HIF-2α的BMSCs(HIF-2α/BMSCs).参照Rynkowski法建立小鼠ICH模型,分组移植等体积的HIF-2α/...     

慢性低氧低糖培养影响新生大鼠海马神经元α-分泌酶的实验研究

目的探讨慢性低氧低糖培养对新生大鼠海马神经元α-分泌酶活性及表达的影响。方法取新生24h的Wistar大鼠海马原代培养神经元并予以鉴定,培养第七天予以12h、24h、36h低氧低糖培养干预,MTT法检测海马神经元的活力,荧光法检测α、β-分泌酶活性,Western blot检测α-分泌酶蛋白表达水平。结果低氧低糖培养12小时组海马神经元α-分泌酶活性升高(P<0.01),低氧低糖培养24h、36h组α-分泌酶(TACE)活性无明显变化(P>0.05),低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元β-分泌酶(BACE1)活性升高(P<0.05);低氧低糖培养12h、24h、36h组海马神经元α-分泌酶蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论慢性低氧低糖培养降低新生大鼠海马神经元α-分泌酶的表达。     

乳铁蛋白对APP/PS1转基因小鼠神经病理的抑制作用

目的 探究乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠神经病理的抑制作用。方法选用6个月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠作为AD动物模型,将16只小鼠随机分为对照组和Lf组。各组对应给予生理盐水或人Lf(2mg·kg~(-1)),鼻饲3个月。免疫荧光激光共聚焦技术检测β?淀粉样蛋白(β?amyloid,Aβ)神经斑与星形胶质细胞和小胶质细胞的共定位;尼氏染色检测神经元的功能状态;Western blot检测神经核抗原(NeuN)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)和线粒体转录因子A(TFAM)的表达水平。结果 与对照组比较,鼻饲Lf组小鼠脑内Aβ阳性染色减弱,Aβ神经斑周围的星形胶质细胞的激活状态受抑制而小胶质细胞数量减少不明显,海马神经元的尼氏染色增强,GPX4、TFAM和NeuN等蛋白的表达上调。结论 人Lf可通过抑制神经炎症和氧化应激,从而有效保护APP/PS1小鼠的神经元,减缓APP/PS1转基因小鼠病理生理进程。