G蛋白在大鼠心血管对去甲肾上腺素脱敏反应中的作用

为了研究鸟嘌呤核苷酸结合蛋白（Ｇ蛋白）在慢性输入去甲肾上腺素（ＮＥ）所致大鼠心脏和主动脉对ＮＥ脱敏反应中的作用，采用大鼠皮下植入微量泵持续输入ＮＥ（０．１ｍｇ·ｋｇ－１·ｈ－１）模型，Ｇ蛋白α亚基及其ｍＲＮＡ水平用相应的抗体和ｃＤＮＡ探针按Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法测定．结果显示：输注６ｄＮＥ的大鼠主动脉中Ｇｓα，Ｇｉα和Ｇｏα均显著下降，但其ｍＲＮＡ无显著改变；心房及心室中Ｇｉα显著升高，Ｇｓα，Ｇｏα维持不变，而Ｇｉ２αｍＲＮＡ升高，心房中ＧｓαｍＲＮＡ下降．输入ＮＥ３ｄ的大鼠心房及心室Ｇｉα，Ｇｏα无改变，Ｇｓα４５和４２ｋＤ带显著下降，但５２ｋＤ带升高；心室中ＧｏαｍＲＮＡ的３．８和３．４ｋｂ带显著升高，而心房中５．４ｋｂ带升高，心室Ｇｉ３αｍＲＮＡ下降．上述结果表明输入ＮＥ可引起Ｇ蛋白的动态变化，提示Ｇ蛋白在ＮＥ慢性刺激引起的心血管反应性降低中可能起一定的作用，其早期以Ｇｓ下降为主，６ｄ时则以Ｇｉ升高为主     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化及细胞遗传学改变

利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究．结果表明：增殖旺盛细胞（ＥＧＶ）集落是ＲＴＥ细胞体外转化最早期的特征，ＥＧＶ转化频率与ＭＮＮＧ剂量呈明显的剂量反应关系．从０．３ｍｇＬ－１ＭＮＮＧ剂量组分离到２个ＥＧＶ集落，经消化，传代形成了永生化的细胞系（ＲＴＥＳ１，ＲＴＥＳ２），ＲＴＥＳ１为多倍体核型，２号和７号染色体数目增加至４个且呈高频发生（１００％）；ＲＴＥＳ２呈二倍体核型．电镜结果证实转化细胞来自大鼠气管上皮组织．以上结果提示，原代ＲＴＥ细胞体外培养模型是研究致癌物定量及致癌机理的理想模型系统．     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔（７０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，８ｗｋ）对大鼠心脏β肾上腺素受体（β－ＡＲ）及其亚型，外周血淋巴细胞β２－ＡＲ和血浆儿茶酚胺水平的影响．结果表明长期饮用普萘洛尔后：（１）心脏β－ＡＲ密度从对照组的４１±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调到６１±９ｐｍｏｌｇ－１蛋白，ＣＧＰ２０７１２Ａ竞争抑制曲线２位点分析结果显示为β１和β２－ＡＲ同等程度上调；（２）心脏β１－ＡＲｍＲ－ＮＡ水平不变而β２－ＡＲｍＲＮＡ水平显著增加；（３）β－ＡＲ及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β２－ＡＲ的功能改变更为显著；（４）血淋巴细胞β２－ＡＲ数目从对照组的１９±７ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调至３２±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白；（５）血浆去甲肾上腺素水平（０．２１±０．１２μｇＬ－１）明显低于对照组（０．３８±０．１５μｇＬ－１）．     

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，２个属于次级反应基因．另有２个片段的差异表达仅在蛋白合成抑制剂环己亚胺（ＣＨＭ）合并ＭＮＮＧ处理时才出现．反向缝隙印迹杂交分析印证了２个片段在ＤＤ－ＰＣＲ中发现的改变，同时分析的本实验室分离的２５个片段中，８个片段的变化被验证与ＤＤ－ＰＣＲ中的改变一致．序列分析结果显示这些片段与许多基因有高同源性，其中包括一些参与信息传导的基因．     

灵芝多糖体外对小鼠脾细胞IL-2,IL-3 mRNA表达的影响

目的观察灵芝多糖体外对小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－３ｍＲＮＡ的表达水平是否有影响。方法逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ｍＲＮＡ表达，凝胶图象光密度分析系统进行相对定量。结果在原代小鼠脾细胞培养开始时加入不同浓度的灵芝多糖ＧＬＢ７（５，１０，２０，４０ｍｇ·Ｌ－１），培养１２ｈ及２１ｈ后观察ＧＬＢ７与ＩＬ－２及ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达水平之间的量效关系。发现在一定范围内，随着ＧＬＢ７浓度的升高，ＩＬ－２及ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达水平也相应提高，对ＩＬ－２ｍＲＮＡ的提高率分别为１０．４％，２１．９％，３７．８％，４６．６％；对ＩＬ－３ｍＲＮＡ的提高率分别为１５．４％，３５．２％，５２．４％，７４．５％。１９９８－０４－０８收稿，１９９８－０７－２６修回＊国家自然科学基金资助课题，Ｎｏ３９４００１６５作者简介：王庆彪，男，２６岁，硕士；雷林生，男，３８岁，医学博士，副教授培养１２ｈ和３０ｈ的上清液中ＩＬ－２样活性及ＩＬ－３样活性处理组与对照组相比亦有明显升高，且有一定的浓度依赖关系。结论灵芝多糖的免疫增强作用与其在转录水平上促进ＩＬ－２及ＩＬ－３ｍＲＮＡ的表达有关     

血,尿α1—微球蛋白,β2—微球蛋白在糖尿病肾病早期诊断中的意义

采用放射免疫测定方法（ＲＩＡ）观察４３例糖尿病患者血,尿α１－微球蛋白（α１－ＭＧ）β２－微球蛋白（β２－ＭＧ）及血肌酐（ＳＣｒ）变化。结果显示：常规尿蛋白阴性,ＳＣｒ含量异常者占２５．５％,尿中α１－ＭＧ／Ｃｒ,β２－ＭＧ／Ｃｒ血α１－ＭＧβ２－ＭＧ异常者分别占７９．０７％,６７．４４％,３７．２１％,５５．８１％,各种微球蛋白测定的阳性率与ＳＣｒ比较,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结果说明血,     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏α_1肾上腺素受体亚型数量的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验及逆转录聚合酶链反应等方法观察大鼠长期饮用非选择性β肾上腺素受体拮抗剂普萘洛尔（７０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，８ｗｋ）对心脏α１肾上腺素受体（α１－ＡＲ）亚型分布及其功能的影响．结果表明大鼠饮用普萘洛尔８ｗｋ后心脏α１－ＡＲ总数量无显著变化，ＷＢ４１０１和尼古地平竞争抑制曲线两位点分析结果显示３种亚型受体所占比例发生了明显变化，α１Ａ－ＡＲ数量不变，α１Ｂ－ＡＲ数量减少，α１Ｄ－ＡＲ数量增加，α１－ＡＲ亚型ｍＲＮＡ水平的改变为α１Ａ－ＡＲ和α１Ｄ－ＡＲ显著增加，α１Ｂ－ＡＲ明显减少．但α１－ＡＲ３种亚型介导去甲肾上腺素正性变力效应的作用无显著改变．     

1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对内皮素促血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用内皮素－１（ＥＴ－１０．１μｍｏｌ·Ｌ－１）建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，观察了１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ０．１μｍｏｌ·Ｌ－１）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响．结果发现：ＤＤＰＨ能逆转ＥＴ－１所致［３Ｈ］ＴｄＲ参入量增多，阻止血管平滑肌细胞由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转ＥＴ－１引起的ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｓｉｓ原癌基因相关抗原及ｍＲＮＡ表达增强，Ｐ５３抑癌基因相关抗原及ｍＲＮＡ表达减弱．提示ＤＤＰＨ能抑制血管平滑肌细胞增殖，与癌基因调控的分子生物学机理有关．     

Effects of dexamethasone and ibuprofen on LPS-induced gene expresion of TNF_ α,IL-1β,and MIP-1α in rat lung

研究地塞米松（Ｄｅｘ）和布洛芬（Ｉｂｕ）对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的大鼠肺ＴＮＦα、ＩＬ-１β和ＭＩＰ-１α基因表达的影响．方法：荧光法测定肺中伊文斯蓝含量，Ｓｌｏｔｂｌｏｔ对细胞因子ｍＲＮＡ表达相对定量．结果：腹腔注射ＬＰＳ导致大鼠肺中ＴＮＦα、ＩＬ-１β和ＭＩＰ-１αｍＲＮＡ表达明显增加，与ＬＰＳ剂量有依赖关系，峰值分别在２，６，１２小时．在ＬＰＳ前１小时给药，Ｄｅｘ５０ｍｇ·ｋｇ－１和Ｉｂｕ９０ｍｇ·ｋｇ－１均明显降低肺中伊文斯蓝含量，同时ＴＮＦα、ＩＬ-１β和ＭＩＰ-１αｍＲＮＡ表达量亦明显减少．结论：ＬＰＳ诱导大鼠肺中ＴＮＦα、ＩＬ-１β和ＭＩＰ-１α基因表达，Ｄｅｘ和Ｉｂｕ通过抑制细胞因子表达而减轻肺损伤．     

急性氯化镉中毒肾损害大鼠尿γ－谷氨酰转换酶及其同工酶

大鼠一次ｉｐ氯化镉（１．５～１２．２ｍｇ·ｋｇ－１），染镉前和染毒后ｄ１，ｄ３，ｄ５观察尿β２－微球蛋白（β２－ＭＧ），Ｎ－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ），尿蛋白，肾小球滤过率（ＧＦＲ）和尿γ－谷氨酰转换酶（ＧＧＴ）及其同工酶，同时观察肾脏形态学改变．结果大鼠尿中β２－ＭＧ，ＮＡＧ和蛋白排出增加，９．２ｍｇ·ｋｇ－１以上组ＧＦＲ下降，形态学检查发现以肾小管损害为主的病理改变．大鼠尿ＧＧＴ异常增加并出现异常ＧＧＴ同工酶区带．     

三氧化二砷诱导人宫颈癌细胞凋亡及bcl-2高表达对其影响

采用脂染素（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）介导的ＤＮＡ 转染,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, ＭＴＴ和克隆形成实验,流式细胞术和细胞凋亡原位检测法探讨Ａｓ２Ｏ３ 对人宫颈癌ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞的生物学效应和ｂｃｌ－２ 高表达对这一效应的影响． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 处理的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞,存活率和克隆形成能力明显降低,细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰,细胞被阻滞在Ｇ２／Ｍ 期,有细胞凋亡时出现的ＤＮＡ 断裂． 而Ａｓ２Ｏ３ 处理的ｂｃｌ－２ 高表达的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞存活率和克隆形成能力增加,凋亡率减少,Ｇ２／Ｍ 期阻滞程度显著降低． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 可诱导ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞凋亡,Ｇ２／Ｍ 期阻滞可能是其诱导凋亡的原因之一;ｂｃｌ－２ 高表达可能通过减轻Ｇ２／Ｍ 期阻滞的程度而部分阻止Ａｓ２Ｏ３ 诱导的细胞凋亡．     

急性白血病患者多药耐药基因表达的检测及意义

为研究急性白血病患者多药耐药基因（ＭＤＲ１）民临床耐药、预后判断等关系，应用逆转录酶／多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了３６例急性白血病及１０例正常人骨ＭＤＲ１基因的表达，并以ＭＤＲ１／β２ＭＧ≥０．２定为ＭＤＲ１ｍＲＮＡ阳性。结果显示，１０便正常人ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达均阴性。初治患者中ＭＤＲ１ｍＲＮＡ阳性率为２５％，而复发和未缓解患者则达８０％。化疗缓解率在ＭＤＲ１ｍＲＮＡ阴性及阳性的急性白血病     

稀土化合物对MNNG致穿梭质粒pSP189突变的影响

为探讨稀土抗诱变作用机理，本研究以穿梭质粒ｐＳＰ１８９，经具致癌作用的烷化剂甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）或ＭＮＮＧ加柠檬酸稀土同时处理后，转染猴肾ＶｅｒｏＥ６细胞，从细胞中回收的质粒转化大肠杆菌ＭＢＭ７０７０。结果表明，ＭＮＮＧ浓度在１．５～６．０μｇ／ｍｌ范围，突变率明显的高于溶剂对照。稀土浓度分别为１０，２０及４０μｇ／ｍｌ与３μｇ／ｍｌＭＮＮＧ同时处理质粒，发现突变率分别为１５．２×１０－４、１０．０×１０－４及１２．７×１０－４，明显低于ＭＮＮＧ单独处理时的２５．１×１０－４，推测稀土可能阻断ＭＮＮＧ引起的Ｇ．Ｃ→Ａ．Ｔ转换，保护质粒ｐＳＰ１８９的靶基因ＳｕｐＦｔＲＮＡ免受损伤或影响某些基因表达。     

粉防己碱对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及对PDGF-B,bFGF和相关癌基因表达的影响

用［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］ＴｄＲ）参入法，电镜，免疫组化，原位杂交方法，在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）观察了粉防己碱（Ｔｅｔ，０．０３μｍｏｌ·ｋｇ－１·ｄ－１×８周ｉｇ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及对生长因子ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ的抗原表达及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达的影响．结果发现：Ｔｅｔ在降低ＳＨＲ血压（Ｐ＜０．０１）同时，能减少ＶＳＭＣ的线粒体，粗面内质网和［３Ｈ］ＴｄＲ参入量（Ｐ＜０．０１），并能逆转ＶＳＭＣ增殖时ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ抗原（Ｐ＜０．０５）及ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达增强．提示：Ｔｅｔ抑制ＳＨＲ的ＶＳＭＣ增殖与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关     

自身免疫性甲状腺病患者白细胞介素及受体基因表达的研究

目的 观察３７例自身免疫性甲状腺病（ＡＩＴＤ）患者甲状腺组织中相关白细胞介素（ＩＬ）及受体基因表达,并测定血清ＴＴ３,ＴＴ４及ＴＧＡ,ＴＭＡ的水平,结果表明格莱弗氏病（ＧＤ）患者ＩＬ－２,ＩＬ－２Ｒ及ＩＬ－６ｍＲＮＡＡ表达细胞阳性率与血清ＴＴ３,ＴＴ４水平呈正相关。桥本氏甲状腺炎（ＨＴ）患者ＩＬ－２,ＩＬ－２Ｒ,ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达细胞阳性率与血清ＴＧＡ ＴＭＡ呈正相关。     

抗抑郁剂吗氯贝胺的行为效应

加强５－羟色氨酸及β－苯乙胺致小鼠刻板行为实验表明，ｉｇ吗氯贝胺（Ｍｏｃ）对单胺氧化酶（ＭＡＯ）－Ａ的选择性抑制作用（ＥＤ５０＝０．３３ｍｇｋｇ－１，２ｈ）较ＭＡＯ－Ｂ（ＥＤ５０＝１２．７ｍｇｋｇ－１，２ｈ）强约３９倍．２４ｈ内ｉｐＭｏｃ３００ｍｇｋｇ－１有一定镇静作用．对运动系统无明显影响，不引起记忆及定向障碍．Ｍｏｃ６００ｍｇｋｇ－１不能对抗氧化震颤素引起的小鼠震颤和分泌增加．Ｍｏｃ的ＬＤ５０为小鼠：１．３－１．５ｇｋｇ－１ｉｇ；１９８－１９９ｍｇｋｇ－１ｉｖ；大鼠：５４１－５６２ｍｇｋｇ－１ｉｐ．Ｍｏｃ剂量依赖地对抗利血平引起的小鼠和大鼠睑下垂，活动减少和体温降低；使慢性应激刺激引起的小鼠活动性增高及穿箱逃避电击反应失败率增高得到恢复，提示其抗抑郁作用．     

老年原发性高血压患者血尿β2微球蛋白及尿微白蛋白的变化

目的 探讨老年原发性高血压（ＥＨ）血、尿β２微球蛋白（β２－ＭＣ）及尿微白蛋白（Ｍ－Ａ１ｂ）的变化。方法 对血尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐（Ｃｒ）正常的老年ＥＨ患者７７例对照组２４例测定血、尿β２－ＭＣ及尿Ｍ－Ａ１ｂ水平,进行对照分析。结果 ＥＨⅠ级对照组无差异（Ｐ〉０．０５）;ＥＨⅡ级组血、尿β２－ＭＧ及尿Ｍ－Ａ１ｂ均明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）;ＥＨⅢ级组与对照组有显著性差异（Ｐ〈０．０１）,且明     

Giβγ亚基介导的磷脂酶A2激活在激动剂所致CCL137细胞毒蕈碱性乙酰胆碱受体失敏中的作用

卡巴胆碱（ＣＣｈ）所致ＣＣＬ１３７细胞中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）激活和毒蕈碱性乙酰胆碱受体（ｍＡＣｈＲ）结合能力降低,均呈浓度和时间依赖关系,且ＰＬＡ２激活早于ｍＡＣｈＲ对配基结合量的降低,所需浓度亦小于后者．可使Ｇｉ蛋白失活的百日咳杆菌毒素能阻抑ＣＣｈ所引起的变化,表明Ｇｉ蛋白在其中起着某种作用．应用各种抗Ｇｉα,抗Ｇｉβγ或抗β血清,测知ＣＣｈ可使Ｇｉα明显减少,而游离的βγ和β亚基的量不变．足够量的抗Ｇ蛋白β亚基血清可完全阻抑ＣＣｈ所致ＰＬＡ２活性和ｍＡＣｈＲ结合能力的变化．结果提示,Ｇｉ蛋白βγ亚基激活的ＰＬＡ２在ＣＣｈ所致ＣＣＬ１３７细胞ｍＡＣｈＲ失敏中起关键作用．     

Gi蛋白βγ亚单位在氨甲酰胆碱所致CCL137细胞磷脂酰A_2激活中的作用

为研究氨甲酰胆碱（ＣＣｈ）所致ＣＣＬ１３７细胞中毒蕈碱型乙酰胆碱受体（ｍＡＣｈＲ）失敏时磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）激活的机理，应用百日咳杆菌毒素（ＰＴＸ），抗－βγ血清和纯化的Ｇｉβγ，分别观察了它们对ＰＬＡ２活性的影响．当在培养液中加入ＰＴＸ或抗－βγ血清时，可见ＣＣｈ不再能引起ＣＣＬ１３７细胞中ｍＡＣｈＲ失敏和ＰＬＡ２激活．反之，加入Ｇｉβγ或ＧＴＰ－γ－Ｓ则使ＰＬＡ２激活，且呈剂量依赖关系，前者尤为明显．结果表明，Ｇｉβγ在ＣＣｈ所致ＣＣＬ１３７细胞的ＰＬＡ２激活中起重要作用．     

细胞色素P4501A1基因mRNA的化学诱导及在人肝中的基础表达

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞该基因ｍＲＮＡ水平的诱导．结果显示：３－甲基胆蒽，苯巴比妥，β－萘黄酮在不同程度上能高诱导ＦＬ细胞１Ａ１ｍＲＮＡ表达．ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＣＨＬ细胞及Ｖ７９细胞存在基础表达，但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果提示其表达量极低．成人肝脏中１Ａ１亦存在极低的表达水平，而人胚胎肝脏不能用高灵敏度的ＲＴ－ＰＣＲ检测到痕迹表达，提示胚胎发育时期１Ａ１基因处于完全关闭状态．