改良的悬滴培养法及其在鸡胚背根节体外培养中的应用

作改良了Maximow双盖片悬滴培养方法。将种植有组织植块的生长基质盖片粘贴于普通培养瓶之顶壁，并在培养瓶内加入一定量Hanks平衡盐溶液。利用其中NaHCO3和H2O作用能够释放CO2以及水分蒸发可以调节相对湿度的原理，在培养瓶中建立了一个相当于CO2孵箱的气体环境。瓶塞密闭后入37℃恒温箱中培养。利用改良的悬滴培养法对鸡胚背根节进行了体外培养，所有背根节均生长良好，神经突起明显增长，证实了本方法的可行性与可靠性。     

成骨细胞培养方法的改良

成骨细胞体外培养,对于在离体条件下,进行成骨细胞 的实验研究有广泛的实用价值。但由于骨组织结构的特殊 性,其细胞培养的难度大,成活率低。我们在实验过程中,参 照有关文献资料,对其培养方法作反复调整改良,取得较理 想的效果。改进后的方法操作简便,实用,细胞纯度高,易存 活。是一种较好的培养方法。 1　材料与方法 取手术切除的股骨组织,超净工作台内,无菌操作,沿近 股骨头端骨松质切割,获得0.5cm×0.5cm大小骨片。生理 盐水冲洗4～5次,1%庆大霉素浸泡30min,Hank s液反复冲 洗,将骨片移入无菌培养皿,缓慢加入0.25%胶原酶液 37℃…     

改良组织块培养法体外培养人角膜上皮干细胞

文题释义：角膜上皮干细胞：属于单能干细胞,具有细胞周期长、低分化状态、增殖潜力大、不对称分裂等特点,定位于角膜缘基底细胞层,又称之为角膜缘干细胞,对角膜上皮细胞更新及维持角膜透明起着重要作用。角膜缘干细胞的体外培养方法：主要包括酶消化培养法和组织块培养法。酶消化培养法是利用DispaseⅡ酶破坏角膜缘上皮细胞与基底膜之间的半桥粒连接,然后剥取角膜缘上皮层,再使用胰酶将其消化为单个细胞进行培养。组织块培养法没有经过酶的双重消化,将剖取的角膜缘组织块进行贴壁,细胞游离出组织块进行贴壁生长,需要一个漫长的过程。  摘要背景：角膜上皮干细胞定位于角膜缘,又称之为角膜缘干细胞,临床上由于眼表严重热烧伤、化学性烧伤、慢性炎症等原因引起的角膜缘干细胞缺乏或功能障碍治疗较为棘手。目前利用组织工程技术体外培养角膜上皮干细胞并进行临床移植成为新型有效的治疗方向。目的：探讨在无血清培养条件下采用改良组织块培养法培养人角膜上皮干细胞的可行性。方法：人角膜缘组织来自河南省眼库,植片直径小于8 mm角膜移植术后的供者剩余眼球材料,手术显微镜下剖取角膜缘上皮层外2/3区域,采用2种方法培养人角膜上皮干细胞,常规组织块培养组是将组织块上皮面向上贴壁,加入K-SFM培养液后置于 37 ℃、体积分数为5%CO₂细胞培养箱中培养;改良组织块培养组是先将组织块浸泡于K-SFM培养液中,置于细胞培养箱中孵育12 h,然后组织块上皮面向下贴壁培养。组织块周边有细胞游离出贴壁生长记作“培养第1天”,每日相差显微镜下观察细胞生长变化。利用免疫荧光染色技术检测改良组织块培养第5,10,14天时原代细胞中p63及K3的表达。结果与结论：①改良组织块培养组出膜时间明显短于常规组织块培养组(P < 0.05),出膜率明显高于常规组织块培养组(P < 0.05);②改良组织块培养组细胞生长状态良好,培养第10天可见小体积细胞较多,聚集成灶状分布;培养第14天可见细胞克隆灶,克隆灶内细胞体积较小,形态均一;③培养第5天,K3表达量较多,p63表达量较少;培养第10天,K3和p63表达量均增多;培养第14天,K3表达量未见明显增多,p63表达量明显增多;④在无血清培养条件下,改良组织块培养法能显著促进角膜上皮干细胞的游离,提高体外培养细胞数量,为人角膜缘上皮组织片的构建提供种子细胞。ORCID: 0000-0001-8370-174X(许中中) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

联合使用胶体金法和分离培养法在霍乱检测和诊断工作中的应用

霍乱具有发病快、易流行、危害严重的特点,早发现、早诊断对于霍乱防治工作尤为重要.单独使用分离培养法、胶体金法、PCR检测法均不能很好地早期发现霍乱疫情,而联合使用胶体金法、分离培养法可以充分发挥其各自优势,具有检测速度快、高灵敏度、高特异度的特点,且具有价格低廉的优势,适用于基层卫生系统进行有效的霍乱防治工作,具有推广意义.     

卧床患者病人服改良优点及临床应用

针对现用病人服不太人性化、更换不方便的缺点,我们结合卧床病人的生活需要和护理特性将其进行了改良,选择了小圆点、碎花、有色棉织布料,制作了两侧开衩宽带连接的圆领上衣,低圆领两袖开衩上衣,隐形开裆齐膝中裤。在临床使用中,病员感觉舒适,更换方便,非常人性化,保护了病人隐私,便于各项护理操作,更加贴近临床。     

改良式手工手术缝合法的应用

外科手术缝合是手术中重要的基本操作技术,是将已切开或外伤断裂的组织、器官等进行对合.随着科学的发展,临床上常使用吻合器,但吻合器易发生故障,缝合不全可导致一些严重并发症,且人体复杂的解剖结构,不允许每个手术部位都可以使用吻合器,故在临床上有很大的局限性[1-2].因此,临床手术过程中最常用的仍是传统手工缝合.本文根据临床经验将部分传统手工缝合加以改良介绍如下.     

成年小鼠室管膜下区神经干细胞分离及培养方法改良

目的:改良成鼠神经干细胞(NSCs)分离培养方法,优化培养条件,为系统研究成体干细胞增殖与分化特性以及利用成体干细胞进行细胞治疗奠定基础。方法:视交叉前1.5 mm处离段脑组织,分离前脑室管膜下区(SVZ),通过机械性消化与化学性消化相结合的操作方法制备细胞悬液,应用改良无血清培养基悬浮培养NSCs。nestin免疫荧光染色鉴定NSCs,1%胎牛血清诱导分化后免疫荧光染色鉴定NSCs多向分化潜能。系列稀释实验和5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入实验比较改良培养与常规培养NSCs自我更新能力和增殖潜能。结果:改良培养条件,NSCs 7～9 d可形成nestin阳性神经球。应用1%FBS诱导后,NSCs分化为形态各异的细胞,包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,分化比例分别是(18.6±3.5)%、(73.2±5.2)%和(3.6±0.4)%。系列稀释实验结果显示当细胞接种数量为500、1000和2000个,改良培养NSCs形成次代神经球数量较常规培养对照组明显增多(P<0.05),并且8 h BrdU掺入率也显著增高达(42.4±6.2)%(P<0.05),表明改良培养条件下NSCs自我更新能力和增殖活力良好。结论:本研究建立了一种简便、操作性强、重复性高的成鼠NSCs分离培养方法。     

创伤严重度改良评分法在应急突发事件中的应用及分析

目的探讨创伤严重度改良评分法(revised injury severity score,RISS)在应急事件中的应用。方法以2012年3月27日某生物制品厂生产车间爆炸事故为例,对7名伤者进行RISS评分,然后根据伤情进行处理。结果 7名患者经RISS评分后,迅速判断出伤情轻重,及时通知医院做相应的准备及必要的检查措施,简化了处理流程,节省了救治时间。结论 RISS评分在院前急救中运用有一定的指导意义。     

改良森田疗法联合正念训练对广泛性焦虑障碍的随机对照试验

目的:探索在改良森田疗法基础上联合正念训练对广泛性焦虑障碍的增效作用。方法:广泛性焦虑障碍住院患者150例,随机分成改良森田疗法联合正念训练组(联合组)和改良森田疗法对照组(单一组)各75例,最终联合组65例、单一组66例完成治疗。两组均接受药物治疗和改良森田疗法治疗,联合组同时加入正念训练,共5周。采用汉密顿焦虑量表(HAMA)、中文版神经症被束缚自评量表(SSTN)、五维度正念问卷(FFMQ)评估治疗效果。结果:5周治疗后,联合组HAMA、SSTN总分低于单一组,FFMQ总分高于单一组(均P<0.05)。结论:改良森田疗法联合正念训练对广泛性焦虑障碍患者的效果优于单用改良森田疗法。     

Ziehl-Neelsen改良染色法在痰涂片中的应用

针对结核杆菌菌体含有蜡质的特点和传统Ziehl Neelsen抗酸染色法存在的不足 ,笔者在以前工作的基础上对染色液的配方进行改良〔1,2〕,并结合微波辐射技术建立了一种快速、敏感、简便的痰涂片抗酸染色法。1　材料与方法1.1　材料　 5 3例结核杆菌痰培养阳性的痰液 ,每例涂片 2张 ,95 %乙醇固定 15～ 30min ,分别用Ziehl Neelsen改良染色法和传统的抗酸染色法染色 ,同时设阳性对照、阴性对照。1.2　染液配制　 (1)改良的Ziehl Neelsen染色液 :碱性复红无水乙醇饱和液 (相当 6 %浓度 ) 10ml,活性剂 5ml,蒸馏水85ml,先将碱性复红溶于无水乙醇…     

改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞

背景：乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。 目的：比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。 方法：取无龋滞留乳切牙12 颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34 和CD45 的表达。细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能。 结果与结论：两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显著性意义(P <0.05);牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达。然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显著性意义(P > 0.05)。说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法。     

一种改良的新生大鼠小胶质细胞原代培养方法

目的:改良现有的小胶质细胞纯化分离培养方法,建立稳定、高产的培养模型。方法:选用新生1～2d SD大鼠进行混合胶质细胞培养,然后结合营养剥离法及震摇法纯化分离小胶质细胞;利用CD11b/c(OX42)免疫细胞化学的方法对分离的小胶质细胞纯度进行鉴定。结果:改良的方法可稳定的获得5×104个/培养瓶(25cm2)的小胶质细胞,纯度达到95%,荧光倒置显微镜下观察细胞形态,分离第1 d小胶质细胞呈不规则圆形,折光不均匀,继续培养3-5 d,小胶质细胞逐渐出现单极或多极突起,7 d时部分细胞转为静止状态,呈分枝状。结论:改良的小胶质细胞培养方法产量多,纯度高,为小胶质细胞在中枢神经系统疾病相关研究提供了新的基础。     

HE+PAS+改良 Warthin-Starry染色技术联合诊断放线菌病

放线菌病(actinomycosis)是由以色列放线菌、牛放线菌或赖氏放线菌感染引起的慢性化脓性肉芽肿病变，可发生于身体任何部位，主要侵犯颌颈部和胸腹部。正常人口腔中的牙垢、龋齿、牙周袋、扁桃体陷窝等处均可找到放线菌，一般情况下不引起疾病，属于内源性条件致病菌。本病散在发生，发病率极低，易误诊为肿瘤，因而寻找一个简便而有效的     

新生大鼠脊神经节与心肌细胞联合培养的光镜观察

将新生大鼠的脊神经节与心肌细胞进行联合培养，用相差显微镜和Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色观察了神经元的生长以及神经纤维与心肌细胞之间的关系。脊神经节与心肌细胞联合培养７２￣９６小时可观察到神经纤维终止于搏动的心肌细胞表面。神经节组织块周围有许多神经纤维在心肌细胞表面相互交织成网状。交叉的神经纤维相互粘连在一起，终止于搏动的心肌细胞表面的一条神经纤维移动将会牵动邻近的交叉神经纤维网。Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色结     

综合医院与专科医院联合培养模式在儿科住院医师规范化培训中的应用

目的探索综合医院与专科医院联合培养模式在儿科住院医师规范化培训的优势及可行性。方法对2016—2018年采用北京协和医院儿科与首都儿科研究所附属儿童医院联合培养方案(联合观察组)的规范化培训(规培)住院医师及2013—2016年采用北京协和医院儿科单独培养(单独培养组)的规培住院医师分别进行教学质量评价系统问卷调查。比较其调查结果,分析两组在规培质量、教学态度和能力、教学效果等方面的差异。结果联合观察组在规培内容方面优于单独培养组(P0. 05);但在人文教育、启发式教学方面单独培养组更具优势(P0. 05)。结论联合培养模式对于儿科住院医师规范化培训可行,且在规培内容方面可以丰富病种、提高规培质量。需要统一的教学模式、完善的监督和反馈机制来保证。     

改良分步消化法培养原代软骨细胞

背景：胰蛋白酶和细菌胶原酶结合使用消化关节软骨基质获得大量纯度高的软骨细胞的方法步骤繁琐、过程复杂,容易污染,但更好的简单易行、安全可靠的方法至今少有报道。 目的：采用改良分步消化法进行软骨细胞培养,以获取大量纯净的软骨细胞。 方法：将新西兰白兔6只随机分2组,酶消化法组运用酶消化法分两步获取原代软骨细胞,对照组用传统法进行原代软骨细胞培养。培养1周后观察两组培养的软骨细胞的生长状态,并进行细胞鉴定、计数,评估改良后的方法对细胞的影响。 结果与结论：酶消化法组采用0.2%Ⅱ型胶原酶消化软骨细胞,与对照组相比,可将6 h以上的消化时间缩短至3 h。两组原代软骨细胞培养24 h均多呈圆形,悬浮状态,48 h后贴壁,培养1周后,两组软骨细胞可铺满培养瓶底。结果证实,采用改良分步消化法进行软骨细胞培养,在缩短了消化时间的同时其细胞生长及形态变化均无改变,可以顺利获取大量纯净的软骨细胞。