银杏内酯对体外培养的大鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响

目的 :探讨银杏内酯对体外培养的鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响。方法 :实验分成银杏组、NGF组和单纯对照组。取 E17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF及不含上述成份的 DMEM培养液 ,于体外分别培养 18d和 3 0 d后 ,用 TUNEL 法检测细胞凋亡情况 ,显微镜下计数各组的凋亡细胞。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果 :培养 18d和 3 0 d两个时期的银杏组凋亡细胞数均明显少于单纯对照组 ( P<0 .0 1) ,而略多于 NGF组 ,但其差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :银杏内酯具有类似NGF的作用 ,可有效抑制体外培养的胚基底前脑神经元凋亡     

神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植的影响

目的　研究神经营养因子NGF、BDNF对AD模型鼠海马移植后行为和形态学变化。方法　 2 4只AD模型鼠随机分成 4组 :单纯胚基底前脑细胞悬液移植组 (ST组 )、含NGF或BDNF胚基底前脑细胞悬液移植组 (NGF组 )、(BDNF组 )和模型对照组 ,移植后 3月进行行为测试并比较移植区AchE细胞数和纤维密度 ,运用方差分析和SNK检验进行组间比较。结果　行为测试移植 3组明显优于模型组 ,含因子组又较ST组效果好 (P<0 .0 1) ,两因子组间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;因子组存活细胞数均高于ST组 ,NGF组细胞数多于BDNF组 (P <0 .0 5 ) ,纤维密度两组相似 (P >0 .0 5 )。结论　海马内存活胆碱能神经元能代偿受损胆碱能神经元的功能 ,改善动物的学习记忆功能 ;NGF、BDNF均能促进胆碱能神经元存活 ,增加AchE细胞数目和突起 ,但BDNF促进神经元突起延伸作用较好 ,而NGF则对神经元保护作用较强     

刺五加皂甙对胚基底前脑AChE阳性神经元发育的影响

目的:探讨刺五加皂甙(Acanthopanax Senticousus Saponins,ASS)对胚基底前脑乙酰胆碱酯酶(acetyl-cholinesterase,AChE)阳性神经元发育的影响。方法:将孕17 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于24孔培养板中。分别加入含12.5、25、50、75 mg/L的ASS(ASS组),或100 ng/mL的神经生长因子(nerve growth factor,NGF组),及不含上述成份(对照组)的DMEM培养液,于体外培养18 d后,进行AChE组织化学染色,显微镜下统计各组每孔中的AChE阳性神经元数,并用CMM-301图像分析系统对AChE阳性神经元的细胞面积和细胞周径进行统计,数据用单因素方差分析进行统计学处理。结果:ASS各质量浓度组AChE阳性神经元数量均显著多于对照组(P<0.01);ASS各质量浓度组AChE阳性神经元的面积和周径的指标亦明显好于对照组(P<0.01)。结论:ASS可能通过促进胚基底前脑AChE阳性神经元的发育来改善认知功能。     

NGF和GM1联合应用对坐骨神经损伤大鼠初级传入神经元的保护作用

目的:探讨联合应用神经营养因子(NGF)和神经节苷脂（GM1）对大鼠周围神经损伤后初级传入神经元的保护作用。方法: 选用SD大鼠96只，随机分为对照组、NGF组、GM1组和NGF + GM1组。将大鼠右侧坐骨神经切断，神经两断端相距5?mm，硅胶管桥接，用不同的药物处理后，于术后不同时间取出背根神经节进行研究。结果：4周时神经元数和神经传导速度，NGF+GM1组多于或快于其它各组(P＜0.01），NGF组和GM1组均多于或快于对照组(P ＜0.01）；8周时，各实验组多于或快于对照组(P＜0.01），各实验组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:周围神经损伤后，联合应用NGF和GM1对初级传入神经元的保护作用优于单用NGF、GM1，且起效早。     

神经营养因子NGF、BDNF对鼠胚基底前脑胆碱能神经元发育生长的协同作用

目的：探讨神经营养因子ＮＧＦ、ＢＤＮＦ联合使用时对鼠胚基义离胆碱能神经元发育生长的协同作用。方法：实验分成ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＧＦ＋ＢＤＮＦ和对照４组。采用细胞培养和脑内移植手段及ＡＣｈＥ组化染色、显微测量和图象分析等技术。检测各组胚基底前脑培养４天和８天时的ＡＣｈＥ阳性神经元数、胞体直径、胞体发出的突直数及最长突起长度以及胚基底前脑移植至脑内４．５个月时移植区内ＡＣｈＥ阳性元数、细胞面积和纤维密     

银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响

目的:探讨银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响及可能的作用机制。方法:实验分银杏组、神经生长因子(NGF)组、脑原神经营养因子(BDNF)组和单纯对照组。取孕17天SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成分的DMEM培养液。于体外培养18天后,96孔培养板行MTT比色分析测定光密度值(A值),以检测培养的神经元活力。2块24孔培养板分别行NADPH-d和AchE组织化学染色,显微镜下计数各组每孔中一氧化氢合酶(NOS)、AchE阳性神经元数目,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理,数据用方差分析、SNK检验作统计学处理。结果:银杏组MTT比色分析的A值和NOS、AchE阳性神经元数目、细胞面积、细胞周长等指标均优于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论:银杏内酯在促进大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育方面具有类似NGF或BDNF的作用。     

神经生长因子与阿尔茨海默病的关系

神经生长因子（NGF）是一类影响神经元生存和发育、诱导神经元分化的生物活性物质，对神经元在发育时的生长、分化，以及成年神经元的维持是很重要的。阿尔茨海默病（AD）是一种慢性、进行性神经系统变性疾病，以基底前脑胆碱能神经元的退变为主要病理特征之一，其临床表现为进行性的记忆、理解、判断、定向等认知功能障碍，精神行为异常以及生活自理能力减退。研究发现，NGF能有效的保护基底前脑胆碱能神经元受损伤导致的神经变性、改善空间记忆，成为治疗AD的新的有效途径。近年来，对NGF与AD发病机制及其治疗关系的研究取得了很大进展，笔者就NGF与AD的关系作一综述。     

旺拉提取物对胆碱能损伤大鼠脑胆碱酯酶的影响

【目的】研究藏药旺拉提取物对胆碱能损伤大鼠脑胆碱酯酶活性和表达的影响。【方法】采用基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸的方法建立胆碱能损伤大鼠模型。实验动物分为假手术组、模型组、CE 5 mg/kg组,连续灌胃给药28 d。取大鼠脑额叶皮层、基底前脑区,观察大鼠脑病理改变,化学法测定胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶活性,免疫组化染色法检测乙酰胆碱酯酶表达。【结果】与假手术组相比,模型组大鼠脑额叶皮层、基底前脑神经元细胞发生坏死等病理变化,胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶活性明显下降(P<0.05),乙酰胆碱酯酶表达水平下降[P<0.05,脑额叶皮层乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(4.6±0.4)×104,基底前脑乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(2.5±0.2)×104]。与模型组大鼠比,CE 5 mg/kg可抑制胆碱能损伤大鼠脑的病理改变,对乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶活性影响不大,但可明显提高乙酰胆碱酯酶的表达水平[P<0.05,脑额叶皮层乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(6.2±0.4)×104,基底前脑乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(3.2±0.2)×104]。【结论】CE对胆碱能神经系统有一定的保护作用,这可能是CE改善学习记忆能力的途径之一。     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

生长因子诱导骨髓基质细胞向胆碱能神经元分化的研究

目的建立生长因子定向诱导骨髓基质细胞（BMSCs）分化为胆碱能神经元的体系。方法 SD大鼠原代BMSCs体外培养,分别用神经生长因子（NGF）、NGF加碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、NGF加bFGF和表皮生长因子（EGF）诱导1、3、5 h,免疫荧光染色鉴定神经元表面标志微管联合蛋白-2（MAP-2）和胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶（ChAT）,计数阳性细胞率。结果原代培养BMSCs传至第5代已基本纯化,NGF 100 ng/ml能有效诱导BMSCs分化为神经元,NGF、bFGF和EGF联合诱导可使BMSCs定向分化为胆碱能神经元,分化率为（67±8）%。结论 NGF、bFGF和EGF联合使用是诱导BMSCs定向分化为胆碱能神经元的有效组合,细胞分化率高。     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响ＳＧ神经元存活和生长的因素,取５００只Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ４０期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质。以简易细胞钓蛋白带（ＰＢＦＣ）技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率（Ｒｆ）。将有神经细胞贴附的各Ｒｆ范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ－３、ＧＤＮＦ兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Ｗ     

鸡胚脊髓背角感觉神经元诱向因子的初步分离及鉴定

为探讨脊髓背角内影响SG神经元存活和生长的因素,取 500只Hamburger 40期鸡胚脊髓背角组织匀浆,离心后提取上清液,用SDS-PAGE电泳初步分离脊髓背角内的蛋白质.以简易细胞钓蛋白带(PBFC)技术找寻有神经细胞贴附的蛋白带并求相对迁移率(Rf).将有神经细胞贴附的各Rf范围凝胶剪下并将胶内各蛋白带电转移至硝酸纤维膜上,用NGF、BDNF、NT-3、GDNF兔抗血清于硝酸纤维膜上分别进行Western杂交.PBF C结果显示: 在电泳胶Rf 0.10～0.19、0.30～0.35、0.50～0.55、0.60～0.67、0.90～0.94 处发现有多少不等的神经元附着.而Western杂交结果表明,在上述各Rf范围均有强弱不等的多条阳性杂交带.分别为NGF、BDNF、GDNF者;NGF、BDNF、NT-3者;NGF、BDNF、NT-3者 ;NGF、NT-3者、BDNF、NT-3者.提示:40期鸡胚脊髓背角提取液各Rf蛋白带的促神经元存活作用,至少涉及NGF、BDNF、NT-3、GDNF中的两种或三种.     

PKC在NGF促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用

目的：研究蛋白激酶C(PKC)在神经生长因子（NGF）促进胚胎大鼠脊髓神经元生长发育中的作用。方法：体外培养胚胎大鼠颈段脊髓神经元，施加NGF，观测神经元生长发育情况并检测胞膜及胞浆PKC活性。结果：培养2，4d时，实验组与对照组相比细胞膜PKC活性增强；膜质比增高，4，7d时神经元存活数量增多，神经突起生长明显增强。结论：在NGF促进体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元生长发育过程中，PKC有可能发挥了正向调节作用。     

人胚胎脊髓神经干细胞生长及分化过程中BDNF的作用研究

目的研究脑源性神经营养因子对人胚胎脊髓神经干细胞生长和分化的影响。方法孕20周水囊引产胎儿标本经家属同意捐赠,分离培养脊髓神经干细胞,分为正常对照组、BDNF蛋白组、BDNF抗体封闭组,计数神经球数目并以MTT法检测细胞活力,免疫组织化学检测NeuN和GFAP的表达情况并进行计数。结果与对照组相比,BDNF蛋白组神经球数目或MTT值均无明显变化,BDNF抗体封闭组的神经球数目和MTT值有明显减少(P<0.05);BDNF蛋白组NeuN阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),GFAP阳性细胞数与对照组相比有明显减少(P<0.05),BDNF抗体封闭组NeuN或GFAP阳性细胞数均少于对照组(P<0.05)。结论外源性BDNF可促进人胚胎脊髓神经干细胞向神经元样细胞分化;内源性BDNF在人胚胎脊髓神经干细胞的增殖分化过程中发挥重要作用。     

嗅鞘细胞移植后脊髓挫伤大鼠几种神经营养因子的表达变化

目的探讨嗅鞘细胞移植脊髓挫伤大鼠后,在其神经损伤及修复过程中三种神经营养因子（脑源性神经营养因子、神经生长因子、睫状神经营养因子）的表达变化及意义。方法体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞。40只健康SD大鼠,雌雄不拘,在移植前一星期使用NYU-撞击机,利用10g-25mm的致伤力,制作T10脊髓挫伤模型。40只脊髓挫伤大鼠随机分为OECs移植组和对照组（注射无血清培养液组）,又根据取材时间不同分为术后1天、7天、14天、21天组。动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化。取手术部位头端和尾端0.5cm脊髓,采用免疫组织细胞化学染色检测技术检测三种神经营养因子（BDNF、CNTF、NGF）在各组脊髓中的表达变化。结果行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;免疫组织化学检测显示,嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度,延缓白质神经纤维的减少,促进髓鞘的修复与再生。与对照组比较,嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中三种神经营养因子表达明显增加（P〈0.05）。结论嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态,促进脊髓组织中多种神经营养因子的表达。     

大鼠骨髓基质干细胞的神经分化以及神经生长因子的表达

目的 探讨大鼠骨髓基质干细胞神经分化以及神经生长因子的表达.方法 体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC),传代至第6代,进行神经诱导分化.先以bFGF (10 ng/ml)预诱导24 h,然后以胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)10 ng/ml在胎肠培养基(fetal gut condition midium,FGCM)条件下诱导10 d.免疫荧光法检测神经元标志神经特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白(NF)的表达.RT-PCR法检测神经营养因子GDNF和神经生长因子(nerve growth factor,NGF) mRNA的表达.结果 流式细胞检测BMSC高表达CD90(99.7%), 而CD45表达阴性.诱导10 d后,部分细胞在形态上表现出神经元样改变,免疫荧光染色神经元标志NSE和NF阳性,而胶质细胞标志GFAP阴性.RT-PCR检测显示,BMSC诱导前低表达神经营养因子NGF和GDNF mRNA,而诱导后表达水平显著增加.结论 GDNF不仅能在体外诱导BMSC分化为神经样细胞,而且能促进神经营养因子表达显著增加.