GABA／孕酮激发豚鼠精子聚磷酸肌醇降解及其在顶体反应中的作用

目的 研究GABA／孕酮（P4）激发精子聚磷酸肌醇（PPI）降解及其在顶体反应（AR）中的作用。方法 将豚鼠精子在MCM培养基获能培养5.5h,^32P-标记精子1h,经Percoll密度梯度离心洗涤,然后以AR刺激剂激发精子AR,并对精子膜脂进行提取、分离和鉴定;同时,以相差显微镜评价精子AR％。结果 1、GABA刺激二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）和一磷酸磷脂酰肌醇（PIP）迅速降解,而磷脂酸（PA）增加;在5min时PIP2和PIP明显下降,10min几近完成。而AR明显滞后,15min才达到峰值：2、A23187、P4和GABA均可激发PPI降解和AR增加,其能力依次为A23187＞P4≥GABA;3、新霉素可明显地抑制Ca^2 /GABA或P4及A23187刺激PIP2和PIP降解,PA产生和AR增加;4、PPI降解需Ca^2 参与。当EGTA或Ca^2 通道阻滞剂（La^3 ）存在时,PIP2和PIP降解,PA产生和AR升高均被明显抑制。结论 天然激动剂GABA或P4刺激豚鼠精子膜PPI降解是引起AR的基础,该作用是通过Ca^2 介导,激活膜磷脂酰肌醇特异磷酸脂酶C（PIC)而完成的。     

17β-雌二醇诱导人精子顶体反应及胞内钙离子增加的研究

目的探讨雌激素对人精子的激活作用及其可能的作用机制。方法以17β-雌二醇(E2)及非透膜性大分子雌二醇-牛血清白蛋白交联物(E2-BSA)分别作用于生育力正常男性的精子,以三色法染色评价精子顶体反应(AR)发生率,流式细胞术检测精子内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的变化。结果E2可引起获能精子AR率明显增加,使[Ca2 ]i快速升高,对非获能精子则无明显影响;E2-BSA同样可以提高获能精子AR率及[Ca2 ]i,其作用与E2相似;E2诱导获能精子[Ca2 ]i升高依赖于胞外Ca2 的内流。结论雌激素对人精子有一定的激活作用,该作用可能是通过与人精子膜上的雌激素结合位点作用后使胞外Ca2 内流而实现的。     

重组人透明带3肽段rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发顶体反应及其机制

目的探讨大肠杆菌重组表达的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348生物学特性和功能，研究rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348能否诱发人精子顶体反应及其相关机制。方法rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应用金霉素染色法进行评价，同时研究了G特异蛋白抑制剂白日咳毒素（PTX）、钙离子螯合剂EGTA和T型钙通道抑制剂pimozide对rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应的影响；同时用荧光分光光度计监测rhuZP3a^22-176或rhuZP3b^177-348刺激获能精子胞内钙（[Ca^2＋]i）浓度的变化。结果不同浓度的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348均能诱导人精子AR，其中rhuZP3a^22-176诱导人精子AR呈浓度依赖方式。PTX、EGTA和pimozide可以分别抑制rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应。rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应是由于刺激获能人精子[Ca^2＋]i升高所致，但rhuZP3a^22-176诱发[Ca^2＋]i升高的方式与rhuZP3b^177-348诱发[Ca^2＋]i升高方式不尽相同，rhuZP3a^22-176只能引起[Ca^2＋]i升高，而rhuZP3b^177-348既有[Ca^2＋]i升高，又伴有持续升高。上述精子[Ca^2＋]i升高可被EGTA和pimozide抑制。结论rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348通过激活G蛋白使胞外钙通过T型钙通道内流促使[Ca^2＋]i上升，从而引起精子顶体反应，这与人类天然ZP3诱导顶体反应作用相似。     

雌激素对正常人精子运动参数及胞内钙离子的影响

目的研究雌激素在体外对正常人精子运动参数和胞内钙离子的影响。方法用不同浓度的雌激素类物质17β-雌二醇（E2）作用于人精子，以计算机辅助精子分析系统（CASA）观察人精子体外运动参数的变化；用腺苷酸环化酶抑制剂预处理人精子，通过流式细胞术检测E2、非透膜性大分子物质雌二醇-牛血清白蛋白复合物（E2-BSA）对精子胞内Ca^2＋浓度的影响。结果0．1μmol／L的E2可显著提高精子前向运动百分率、平均曲线运动速度、平均直线运动速度和平均路径速度（P〈0．05），10μmol／L的E2明显降低精子的前向运动百分率、平均曲线运动速度和平均路径速度（P〈0．05），0．01μmol／L的E2对精子的各项运动参数无显著影响；E2（0．1μmol／L）、E2-BSA（5μmol／L）作用后，精子胞内Ca^2＋浓度均显著升高（P〈0．05）；腺苷酸环化酶抑制剂可明显抑制E2或E2-BSA引起的精子胞内Ca^2＋浓度的升高（P〈0．05）。结论雌激素在体外可增强正常人精子的运动力，该效应可能是通过雌激素与人精子膜上雌激素受体结合后，升高精子胞内Ca^2＋的浓度以及激活腺苷酸环化酶而实现的。     

人精子甘露糖受体的表达及其与精子—透明带相互作用的关系

目的（1）探讨人精子甘露糖受体（MR）的表达与精子所处生理状态的关系。（2）研究MR在精子－透明带相互作用的作用。方法：（1）用人卵泡液（hFF)作为诱导获能和顶体反应（AR）的介质，继而以异硫氰酸荧光素（FITC）偶联的甘露糖基化牛血清白蛋白（DMA）为探针检测精子甘露糖受体的表达，同时用金霉素（CTC）荧光染色试验监测精子在受hFF作用后所处的获能和AR状态，并分析MR的表达与精子获能和AR的关系。（2）以MR的配基－DMA预先处理经过获能培养的精子，通过半透明带试验（HZA）观察DMA对精子－透明带结合的精子－透明带相互作用的关系。（3）在精子－透明带作用一段时间后加入DMA以进一步了解MR在精子－透明带识别与结合中的作用。结果：（1）hFF处理后，与体外获能6h组相比，两组间精子的获能（B型）率差别无意义（P＞0．05），AR率与MR表达率差别有意义（P＜0．05），（2）MR的表达与CTC监测的精子获能状态无关（P＞0．05），而与顶体反应状态呈正相关关系（P＜0．05），（3）DMA不能抑制精子与透明带的结合，却可以使初步与透明带结合的精子解除结合而脱落。（4）MR的表达率与透明带上的精子结合数无关（P＞0．05），结论：（1）hFF的诱导精子AR的同时促进精子表达MR。（2）MR的表达并非获能的本质及标志，而是AR贩．的结果：（3）MR的表达与精子－透明带的初次识别无关，而可能是在二次识别和和结合中作用。     

Ca^2＋对人精子穿透无透明带金黄地鼠卵的影响

应用人精子穿透无透明带金黄地鼠卵（SPA）技术，在BWW培养液中分别以不同浓度的Ca^ （1．71mmol,3.42mmol,5.13mmol,1.71mmol和ETA0．50mmol,1.71mmol和EGTA1．71mmol),对10例人精液标本进行分析，研究Ca^ 对人精子体外获能和穿透无透明带金黄地鼠卵的生物学效应，同时用透射电镜观察精子的亚细胞结构变化。结果表明：对照组（Ca^ 1．71mmol)穿透率为82．2％，而试验组的穿透率显著降低（P＜0．01），分别为9．5％，0，17．2％，0。Ca^ 对人精子亚微结构的影响主要发生在精子的顶体和颈部。本试验初步表明Ca^ 与人精子获能和顶体反应存在着一定的依存关系，Ca^ 浓度过高（＞1．71mmol）或过低（＜1．71mmol)，对精子获和穿透能力都有明显的抑制作用。     

磷脂酶A_2的调节机制

PLA2广泛存在于细菌、植物、哺乳动物的组织、细胞和分泌物中。它的生理功能包括参与磷脂重建、肺泡表面活性物质代谢、细胞信号传递、宿主反应、促进血液凝固等。PLA2是具有甘油磷脂分解活性的酶类家族。通过催化细胞膜的磷脂酰胆碱（Pc）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（Ps）的二位酰基（sn-2）水解，产生以花生四烯酸（AA）为主的游离脂肪酸及溶血卵磷脂。从的代谢产物PGs、LTs、血栓素（TXA2）、脂氧素（LX）以及磷脂产物PAF等均具有强烈的生物活性。PLA2又是所有这些脂质介质的限速酶。可见，PLA2在疾病发生发展中起着非常重要的作用。     

缺血预处理对心肌组织酶的活性影响实验研究

目的 观察缺血预处理(IPC)对体外循环(CPB)中缺血再灌注心肌组织磷酯酶A2(PLA2)和ATPase活性的影响，评价其对心肌的保护作用，并初步探讨其可能的作用机制。方法 在猫CPB模型的基础上，比较IPC组和缺血再灌注组CPB中心肌组织PLA2及Na^ -K^ -ATPase、Ca^2 -Mg^2 -ATPase、Ca^2 -ATPase活性。结果 IPC处理组可明显减轻CPB中缺血再灌注导致的PLA2活性升高和ATPase活性下降。结论 IPC可能通过减轻缺血再灌注期间的Ca^2 超载及抑制细胞膜磷脂水解而发挥其心肌保护作用。     

膜联蛋白A1在小鼠精子的定位

目的对小鼠精子膜联蛋白A1(AnxA1)进行定位,了解其与精子睾丸后成熟、获能、顶体反应的关系。方法用间接免疫荧光染色对睾丸、附睾精子以及诱导获能、顶体反应的精子进行膜联蛋白A1定位,同时用考马斯亮蓝染色法鉴定顶体反应率。结果取自睾丸、附睾头、体、尾部的精子膜联蛋白A1均分布于顶体帽区及尾部;诱导获能、顶体反应的精子头部荧光呈现2种类型:顶体帽型(Cap),赤道段-顶体后区型(Ep)。获能组精子Cap型(97.3±1.0)%,Ep型(2.7±1.0)%;顶体反应组精子Cap型(41.8±4.1)%,Ep型(58.2±4.1)%。考马斯亮蓝染色呈顶体反应(AR)型精子获能组为(5.4±2.5)%,顶体反应组为(64.7±3.7)%。相关分析表明AnxA1荧光标记Ep型百分率与考马斯亮蓝染色AR型百分率呈高度正相关(P<0.001)。结论在附睾成熟过程中及获能后小鼠精子膜联蛋白A1分布无明显变化,顶体反应后转移至赤道段、顶体后区,可能参与精子的钙依赖事件如顶体反应、精卵融合过程。     

考马斯亮蓝染色评价哺乳动物精子顶体反应发生的效果

精子获能是正常受精的前提，形态学表现为顶体反应(Acmsome reaction,AR)。目前，对AR评价尚缺乏简单、有效的方法，有报道考马斯亮蓝可用于小鼠精子顶体反应发生的检查，但尚未见其他哺乳动物的研究报道。本实验以小鼠、猪、牛、羊精子为材料，通过与台盼蓝-姬母萨枪查方法的比较，评价考马斯亮蓝在哺乳动物精子顶体检查上的准确性和可靠性。     

钠/氢离子交换抑制剂心保护研究进展

心肌细胞内Ca^2 超载是心肌缺血／再灌注损伤的决定性因素，现知心肌内Ca^2 超载是由于心肌缺血时细胞内Na^ ／K^ -ATP酶活性降低，细胞内H^ 浓度升高，激活Na^ ／K^ 交换通道(Na^ ／K^ exchanger，NHE)，使细胞内H^ 浓度下降，Na^ 浓度升高，导致Na^ ／Ca^2 交换机制增强，结果细胞内Ca^2 积累，造成Ca^2 超载，引起心肌细胞损伤。     

从塞内加尔刺桐中得到的磷脂酶C抑制剂耳形鸡血藤黄素及8-prenylluteone

磷酸肌醇(PI)的转化在许多刺激物如生长因子、激素等诱导的细胞内信息传递途径中起重要作用。磷脂酶 C(PLC)则控制 PI 转化的速率,催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯(PIP_2)水解生成1,4,5-三磷酸肌醇酯(IP_3)和二酰基甘油酯(DAG)。PIP_2刺激细胞内Ca~(2+)的释放,而 DAG 则激活蛋白激酶 C。Ca~(2-)浓度的增加和蛋白激酶 C 的激活会引起一系列反应,最终导致 DNA 的合成和细     

FABP5促进RAW264.7细胞氧化LDL的初步研究

目的:探究RAW264.7细胞中脂肪酸结合蛋白5(FABP5),磷脂酶A2(PLA2),不饱和脂肪酸(UFAs)在低密度脂蛋白(LDL)氧化中的作用。方法:培养RAW264.7细胞,利用UFAs中的不同浓度的油酸(OA)、亚油酸(ALA)、花生四烯酸(AA)刺激后利用Western Blot检测细胞FABP5蛋白质水平;用LDL刺激RAW264.7细胞不同时间,分别用PLA2总活性分光光度法定量检测试剂盒测定细胞内PLA2活性变化,Real-time PCR及Western Blot测定FABP5基因的表达;LDL刺激细胞后分别测定脂质筏和非脂质筏FABP5蛋白质水平,探究FABP5的转位。结果:不同浓度的OA,ALA,AA长时间刺激RAW264.7细胞后,FABP5的蛋白表达量出现不同的变化;LDL短时间刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后,细胞内PLA2活性升高;LDL刺激RAW264.7细胞较长时间后,FABP5的mRNA和蛋白质水平均较对照组上升;提取脂质筏后发现,LDL刺激15min的巨噬细胞的脂筏中FABP5水平较对照组的升高,而非脂筏部分则出现相反的结果。结论:推测LDL刺激会激活PLA2,而PLA2水解甘油磷脂产生UFAs,这些UFAs招募并结合FABP5,激发氧化应激通路,促进LDL的氧化。     

嘌呤受体P2X7激活介导大鼠视网膜神经节细胞死亡的实验研究

 【目的】研究嘌呤受体P2X7激动剂、拮抗剂对大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的影响。【方法】（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine以标记RGCs。检测P2b激动剂BzATP（0、50、100、500μmol／L）和特异性拮抗剂OxATP（100μmol／L）对体外培养RGCs存活率的影响；（2）体外培养未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGCs，以10μmol／L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后。利用Ca^2＋影像测定仪分别测定P2X7激动剂BzATP（50μmol／L）和拮抗剂OxATP（100μmol／L）对RGCs胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】P2X7受体激动剂BzATP可引起体外培养的RGCs死亡，反应呈剂量依赖性，EC50=35μmol／L。在50μmol／L浓度下，BzATP约杀死30％的RGCs；而100μmol／L OxATP则可明显减轻BzATP对RGCs的毒性作用，使RGCs存活率从77％±4％提高至96％±3％（P〈0．001）。BzATP可引起RGCs胞内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使胞内Ca^2＋升高（1022±113）nmol／L。在OxATP作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高（63±13）nmol／L（P〈0．001）。【结论】嘌呤能P2X7受体激活可导致大鼠视网膜神经节细胞死亡和胞内钙离子浓度升高。     

茶多酚对膀胱移行上皮肿瘤EJ细胞内Ca2+的影响

目的：研究茶多酚对膀胱移行上皮肿瘤EJ细胞内钙离子（Ca^2＋）的影响，以探讨茶多酚信号转导过程与EJ细胞内Ca^2＋浓度的关系。方法：体外培养膀胱肿瘤EJ细胞．采用噻唑蓝还原（MTT）法和激光扫描共聚焦显微镜测定不同浓度（10、20、40、80、160／μg／m1）茶多酚作用前后的膀胱肿瘤EJ细胞生长抑制及Ca^2＋浓度随时间变化的情况。结果：不同浓度茶多酚对膀胱肿瘤EJ细胞株均有明显的抑制作用（P〈0．05～0．01）．并与时间、剂量存在依赖关系。随着茶多酚浓度的增加，细胞内的Ca^2＋浓度逐渐上升．最高增加到原水平的10倍以上。结论：茶多酚可引起膀胱肿瘤EJ细胞内Ca^2＋浓度的显著变化．证实Ca^2＋参与了膀胱肿瘤EJ细胞茶多酚信号转导过程。茶多酚具有诱导膀胱肿瘤细胞凋亡和影响肿瘤细胞膜Ca^2＋的通透性，使Ca^2＋在细胞非核部分聚积的双重功效。高Ca^2＋浓度可能是诱发肿瘤细胞凋亡的重要原因。     

壳聚糖磷脂酰胆碱对AD大鼠脑内PKC-δ及Iba1表达的影响

目的探讨壳聚糖磷脂酰胆碱对海马注射Aβ25-35所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、钙结合蛋白(Iba1)表达的影响。方法随机将50只Wistar大鼠分为对照组,AD模型组,壳聚糖磷脂酰胆碱低、中、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态2.5μLAβ25-355μg/μL制备AD模型,用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组织化学方法检测大鼠脑内PKC-δ、Iba1的表达。结果壳聚糖磷脂酰胆碱明显缩短Aβ25-35所致AD模型大鼠的潜伏期,增加穿越平台的次数,显著降低PKC-δ、Iba1的阳性表达。结论壳聚糖磷脂酰胆碱通过下调脑组织PKC-δ表达,抑制小胶质细胞增生和激活,减轻脑皮层和海马神经元炎性反应,对Aβ25-35所致AD模型大鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用。     

整合素VLA-5介导人精子激活作用的研究

目的　探讨人精子膜上的整合素 VL A- 5是否参与了人精子的激活。方法　采用整合素 VL A - 5的特异性配体纤连蛋白 ( Fn)作用于生育组和不育组人精子 ,以三色法染色观察 Fn作用前后顶体反应 ( AR)率的变化 ;预先用 Fluo- 3 /AM负载人精子 ,用流式细胞仪检测 Fn作用前后精子 [Ca2 + ]i 荧光强度的变化。结果　生育组 10 0nmol/L的 Fn作用于人精子后 AR率由 8.64 %± 2 .5 6%增高到 16.0 9%± 3 .18% ( P<0 .0 1) ,钙离子的荧光强度值由静息状态的 5 .73± 2 .45升高到 6.61± 2 .40 ( P<0 .0 1)。不育组 Fn作用前后 AR率由 7.0 9%± 0 .94%增高到10 .44 %± 2 .3 0 % ( P<0 .0 5 ) ,钙离子的荧光强度值无显著改变。结论　人精子膜上的整合素 VL A - 5参与了人精子的激活过程     

塞曲司特对致喘介质诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩的影响

目的 在体外研究血栓素A2受体拮抗剂塞曲司特对组胺、乙酰胆碱、KCI诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩作用的抑制影响，并与短效β2受体激动剂沙丁胺醇比较。方法用定量药理分析方法测定和记录：(1)用塞曲司特孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCI诱发的豚鼠离体气管条的收缩；(2)用沙丁胺醇孵育前后组胺、KCI诱发的豚鼠离体气管条的收缩；(3)塞曲司特、沙丁胺醇对组胺诱导的豚鼠肺条收缩的影响。结果(1)组胺、乙酰胆碱在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩，塞曲司特抑制了组胺、乙酰胆碱诱发的收缩；(2)对60mmo1／LKCI诱发的气管条收缩，塞曲司特、沙丁胺醇均可抑制其最大收缩反应；(3)对组胺诱导的肺条收缩，塞曲司特、沙丁胺醇均明显拮抗了其收缩。结论塞曲司特对致喘介质诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩有明显的抑制作用，是一种有效的支气管扩张剂。     

肝内胆管结石患者胆管黏膜和胆汁的Hp、IL活性及自由基、PLA2的检测与意义

目的探讨幽门螺杆菌与肝内胆管结石形成之间的关系。方法从肝内胆管结石患者中检测胆道幽门螺杆菌,并测量阳性和阴性组胆汁中的IL-2、IL-4、自由基以及PLA2含量。结果 54例中检出 15例(27．8％)。阳性组IL-2表达为(3．44±1．29)μg／ml,明显低于对照组的(4．97±2．09)μg／ml;IL-4表达为(14． 34±8．29)pg／ml,明显高于对照组的(6．7±2．1)pg／ml;自由基表达为(20．98±3．711)nU／ml,明显高于对照组的 (15．15±3．73)nU／ml,PLA2活性表达为(872．37±70．02)μmol／(L·s),明显高于对照组的(586．42±57．42)μmol／ (L·s)。差异均有显著性意义(P<0．01)。自由基与PLA2活性的增高同IL-2活性降低以及IL-4活性的增高呈明显正相关。结论肝内胆管结石患者存在有Hp感染因素,并有可能通过IL及自由基、PLA2促进肝内胆管结石的形成。     

PLA/MWNTs/HA复合材料的制备和性能研究

采用超声辅助原位湿法合成多壁碳纳米管／羟基磷灰石纳米复合材料(MWNTs／HA)，并通过溶液浇铸法制备了PLA／MWNTs／HA复合材料薄膜。考察了MWNTs／HA纳米粒子含量对复合膜性能的影响，并通过力学性能、SEM、FTIR、以及DMTA对复合膜性能进行了表征，结果表明：随着纳米粒子质量分数的增加，复合膜的拉伸强度呈下降趋势；拉伸模量和储能模量呈现先下降后上升的趋势；玻璃化转变温度则呈现不断上升趋势。