重组人HSP70的制备及其提呈抗原作用的研究

研究重组人热休克蛋白70(HSP70)的制备及其提呈抗原的作用.采用不含葡萄糖的M9ZB培养基及终浓度为0.02 mmol/L IPTG和5 mmd/L乳糖诱导带有人HSP70基因表达质粒的工程菌,表达效率达到60%,经DEAE阴离子交换层析柱可获得纯度＞90%的HSP70.该纯化产物可于体外结合肿瘤抗原肽.利用含5%甘油的非变性PAGE分析可以快速鉴定HSP70与肿瘤抗原肽的结合.HSP70-肿瘤抗原肽复合物在体外可以激活淋巴细胞的特异性杀肿瘤功能.提示重组人HSP70可作为提呈抗原肽的制剂用于肿瘤免疫治疗.     

热休克蛋白70抗原肽提取及活性测定

热休克蛋白（HSP）是一类应激性蛋白，具有分子伴侣的作用，通常以热休克蛋白-抗原肽的形式存在，能诱导针对该肿瘤细胞的特异性免疫反应。在HSP家族中，HCA70肿瘤免疫原性最强，但其纯化过程需要快速蛋白液相层析系统（FPLC）。这对缺乏FPLC设备的实验室来说，要分离纯化HSP是极其困难的。故探讨一条简便、实用的HCA的提取方法，以便用于临床对热休克蛋白的应用。     

食管癌可溶性抗原和超抗原构建肿瘤疫苗的免疫活性成分分析

目的对食管癌可溶性抗原和超抗原SEC构建的肿瘤疫苗中的免疫活性成分进行分析,从而为探讨其抗癌机制打下理论基础。方法提取食管癌抗原,和超抗原SEC构建成肿瘤疫苗;分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,经肿瘤疫苗联合作用,进行体外培养,观察其增殖活性;流式细胞术FCM和细胞毒试验测定效应细胞表型和杀伤活性;提取食管癌细胞中的细胞膜抗原（mAg）、热休克蛋白70（HSP70）、DNA、RNA和细胞内多肽（Peptides）,用于诱导PBMC增殖,培养6d,用3H-Tdr掺入法测定细胞增值,确定其有效成分。结果经肿瘤疫苗刺激的PBMC组增殖活性最强,于72h达到高峰,并且特异性刺激CD8＋T细胞群增值。肿瘤疫苗刺激的PBMC组诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯PBMC组（P〈0.01）。食管癌细胞中的膜抗原和细胞内多肽能显著刺激PBMC增殖。结论食管癌抗原与超抗原构建的肿瘤疫苗能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效、特异的抗肿瘤效果,具有免疫活性的成分是细胞中的mAg和细胞内多肽。     

脂肽疫苗

肽疫苗与普通全蛋白 (或基因免疫中的全基因 )相比有诸多优点 ,如纯度高 ,可诱生高特异性免疫应答。但是 ,合成肽诱发免疫需要毒性佐剂。脂肽作为肽疫苗的一种形式 ,早在十年前就已被发现 ,它们可以在无佐剂条件下诱生全面的免疫应答。本文介绍了脂肽疫苗的过去 ,研究进展以及与脂肽疫苗合成、配方及接种途径有关的问题。脂肽疫苗粘膜应用的进展将为抗粘膜表面感染的病原体提供理想的策略。     

肿瘤细胞HSP-70多肽诱导CTL及其抗瘤作用机制的研究

目的：探讨鼠S180细胞HSP－70多肽诱导杀伤性T淋巴细胞（CTL）及其特异性抗瘤作用机制。方法：从43℃9h热休克诱导HSP高表达与S180细胞提纯80μg/mlHSP-70多肽，体外刺激小鼠脾淋巴细胞扩增，活化，然后用MTT法测定其杀瘤活性，并用电镜观察其培养上清诱导S180细胞的形态学变化。结果：S180细胞HSP－70多肽体外免疫扩增的小鼠脾淋巴细胞对S180和H22细胞的杀瘤率分别为83．61％和9．98％，其培养上清能培养S180的细胞出现程序化死亡的形态学变化。结论：S180细胞HSP－70多肽能刺激小鼠脾淋巴细胞产生特异性杀伤S180细胞的免疫活性细胞，该细胞还能发泌免疫活性物质诱导肿瘤细胞凋亡。     

脂肽疫苗

肽疫苗与普通全蛋白(或基因免疫中的全基因)相比有诸多优点，如纯度高，可诱生高特异性免疫应答。但是，合成肽诱发免疫需要毒性佐剂。脂肽作为肽疫苗的一种形式，早在十年前就已被发现，它们可以在无佐剂条件下诱生全面的免疫应答。本文介绍了脂肽疫苗的过去，研究进展以及与脂肽疫苗合成、配方及接种途径有关的问题。脂肽疫苗粘膜应用的进展将为抗粘膜表面感染的病原体提供理想的策略。     

HIV rgp160加蛋白体、明矾和/或亚微粒乳剂能激发HIV肽和蛋白的抗体应答

在开发抗人类免疫缺陷症病毒(HIV)感染的疫苗的同时,也要求开发能增强免疫应答的疫苗投递系统及佐剂。有效的疫苗投递系统及佐剂的判定标准是其能否增强抗蛋白抗原的特异性肽表位的抗体应答。由于HIV减毒活疫苗的应用受到限制,HIV疫苗研究则侧重开发病毒重组蛋白亚单位疫苗。吸附于明矾佐剂的包膜蛋白疫苗正在进行免疫治疗及免疫预防的临床研究。许多资料表明改变疫苗中抗原配方可增强其免疫原性,因该抗原能诱导较强的肽表位特异性血清IgG抗体应答。     

抗βhCG蛋白疫苗的抗肿瘤作用

以人绒毛膜促性腺激素β亚基(βhCG)的羧基端109~118的6段串联重复表位为靶点、热休克蛋白65(HSP65)为载体,设计一种新型的蛋白疫苗HSP65-X6-βhCGCTP37,探讨其能否抑制小鼠前列腺癌,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的HSP65-X6-βhCGCTP37免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗βhCGIgG类抗体。Western blot实验证明小鼠血清中的抗体能够特异性识别βhCG表位。淋巴细胞增殖实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防性实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37激发的免疫应答对于RM-1肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低(P<0.05)。同时有效地减少了小鼠的肺转移(P<0.01);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。HSP65-X6-βhCGCTP37蛋白疫苗能有效地抑制小鼠前列腺癌的生长。     

跨膜型超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A融合蛋白的抗肿瘤作用

目的　为扩大超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的抗瘤谱 ,制备跨膜型SEA融合蛋白 ,研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法　在荷B16黑色素瘤的C5 7BL/ 6小鼠上 ,观察跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用和免疫保护作用 ,并通过乳酸脱氢酶 (LDH)释放法检测治疗组和免疫组小鼠脾细胞的天然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T细胞 (CTL)活性。结果　融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 ,并延长其生存期 ,其脾细胞的NK和CTL活性显著增强。同时 ,该肿瘤疫苗对同种肿瘤细胞攻击可产生较强的免疫保护作用。结论　跨膜型SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有显著的抗肿瘤作用 ,可有效激发荷瘤小鼠机体的特异性和非特异性抗肿瘤免疫应答 ,增强CTL和NK活性。     

HSP类自体肿瘤疫苗Vitespen

热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）为一类高度保守的应激诱导蛋白,其功能是作为分子伴侣在不同的细胞腔隙中运输多肽和释放由主要组织相容性复合物（MHC）Ⅰ类分子递呈的肽类如免疫原性肽。在HSPs家族中,葡萄糖调节蛋白GRP94（即糖蛋白gp96）及HSP-90、-70、-110和GRP170已在肿瘤组织中被发现并被分离出,它们可诱发抗肿瘤的细胞免疫,但其本身并无免疫原性,只是作为抗原肽类的一种载体或分子伴侣,形成一种源于肿瘤的HSP-肽复合物（HSPPCs）,方能引发对肿瘤的特异性免疫作用。     

新型肿瘤疫苗载体

用减毒病毒传递抗原 ,通常能获得对疫苗的最佳免疫应答。虽然减毒病毒通常对健康接受者几乎不会造成任何问题 ,但是却能在免疫损害者中引起感染。法国科学家已研制了可消除这种担扰的新型肿瘤疫苗的载体。　　研究者将志贺毒素 B亚单位 ( STB)融合至源于小鼠癌细胞的肿瘤肽 P81 5制成疫苗 ,此疫苗能诱导显著的抗鼠癌细胞的细胞毒性 T细胞应答 ,而且无需佐剂。在体外实验期间 ,以用 SL8(一种 CD8T细胞表位 )制备的、同样的融合毒素作为抗原也能诱导树突状细胞提呈该肽 (产生强烈免疫应答的关键步骤 ) ,而将毒素和肽分开免疫则不能产生上…     

鞭毛蛋白融合蛋白作为佐剂或疫苗诱导的特异性免疫应答

研究表明鞭毛蛋白能够激发宿主免疫应答。据报道鞭毛蛋白是有效的佐剂，在体内能增强T细胞应答，推测可将鞭毛蛋白作为疫苗佐剂来诱导和加强免疫应答。为了评价鞭毛蛋白能否作为一种载体用于佐剂或疫苗的研制，美国Sidney Kimmel癌症中心Cuadros制备了鞭毛蛋白一增强性绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白，并报告了其诱导特异性免疫应答的结果。     

小鼠HSP27/HSPB1单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备针对热休克蛋白27/热休克蛋白B1(HSP27/HSPB1)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用HSP27/HSPB1作为免疫抗原免疫BalB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,进行克隆化培养后接种于小鼠腹腔制备HSP27/HSPB1单克隆抗体,并利用间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光技术对所制备的抗体进行鉴定。结果获得了一株可稳定分泌HSP27/HSPB1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为4C9C7,其亚类是IgG1,分泌的单克隆抗体能特异性结合组织和细胞中的HSP27/HSPB1蛋白。结论本实验成功制备了可稳定分泌HSP27/HSPB1单克隆抗体的杂交瘤细胞及HSP27/HSPB1特异性的单克隆抗体,可应用于各种相关的科学研究。     

一种带有组氨酸标签的抗糖尿病疫苗的构建、表达、纯化及鉴定

利用组氨酸标签系统提高抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的产量,简化纯化工艺。通过PCR方法,在融合蛋白HSP65-6P277的N端添加6个组氨酸标签后,定向克隆到pET28a原核表达载体中成功构建了组氨酸标签融合表达载体pET28a-HIS-HSP65-6P277。通过乳糖诱导,融合蛋白HIS-HSP65-6P277在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中以可溶形式表达,镍柱亲和层析纯化后,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明表达产物是约70 k具有6个组氨酸标签肽的融合蛋白;分离纯化融合蛋白的时间从原来的15～20 d缩短为2～3 d,产量提高到56 mg/L。组氨酸标签系统可以较好的简化抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的纯化工艺,提高产量。     

重组病毒载体疫苗的研究进展

重组病毒载体疫苗的原理是将外源基因插入病毒基因组以构建重组病毒,免疫机体后在体内表达相应蛋白并诱导特异性免疫应答。该类疫苗具有载体种类多、插入片段长、能同时诱导体液免疫和细胞免疫等优势,能克服灭活疫苗的效力维持时间短和减毒活疫苗回复突变的弊端。此文综述了重组病毒载体疫苗的最新研究进展,为将来的研究提供参考。     

抗CD40抗体增强宫颈癌肽疫苗的治疗作用

目的：探讨抗CD40抗体对宫颈癌肽疫苗治疗作用的影响。方法将乳头状病毒结构性蛋白 E7表位肽（ E749－57,H－2Db限制性,CD8 T细胞表位）与Toll样受体7配体（Gardiquimod）组成疫苗,C57BL／6小鼠给予疫苗及抗CD40抗体免疫后取得外周血及脾组织CD8 T细胞,利用流式细胞仪分析特异性CD8 T细胞数量,Elisa检测CD8 T细胞与TC－1细胞（表达HPV E7蛋白的小鼠宫颈癌细胞）共孵育后干扰素（ INF－γ）表达水平。另取15只皮下荷瘤小鼠,监测免疫后肿瘤生长速度。结果与单用疫苗组相比,抗 CD40抗体明显增加小鼠外周血肿瘤特异性 CD8 T细胞数量（16．50±0．8185％ vs 9．747±1．834％,P＝0．0282）,且内源性CD8 T细胞体外与TC－1细胞共孵育可以分泌INF－γ,体内显著抑制皮下肿瘤生长（ P＜0．001）。结论抗CD40抗体增强肽疫苗诱发的免疫应答,有潜力成为一种良好的佐剂。     

作用于精子的避孕疫苗

以精子抗原制备疫苗是一种有希望的避孕方法 ,FA- 1是精子特异性糖蛋白 ,具有识别和结合卵细胞透明带 (ZP)的受体活性。编码 FA- 1抗原的 c DNA已克隆并测序。用重组 FA- 1抗原免疫动物 ,通过诱导精子特异性免疫应答 ,引起长期可逆的生育力抑制。该抗原也与人免疫不育相关。具有高度组织特异性和各种重组和 /或合成精子抗原表位的疫苗 ,如 FA- 1抗原 ,单独免疫即具有高度免疫原性 ,因此可作为有效的抗精子避孕疫苗     

树突状细胞在肿瘤免疫治疗领域的研究进展

树突状细胞具有摄取、加工及呈递抗原至T淋巴细胞的能力,在机体的抗肿瘤免疫过程中具有重要作用.本文对肿瘤抗原肽、肿瘤细胞蛋白提取物或肿瘤相关基因等致敏的树突状细胞疫苗以及肿瘤细胞与树突状细胞的融合疫苗等介导的抗肿瘤免疫治疗在动物试验与临床试验的研究进行综述.     

对HIV-1 env DNA疫苗免疫应答的遗传学控制

含有编码1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)env蛋白的HIV-1特异性DNA疫苗可诱导强的体液和细胞介导免疫应答。作者用不同品系的小鼠研究了HIV-1特异性DNA疫苗诱导抗体产生及迟发型超敏反应(DTH)的遗传学控制。     

白细胞介素-12的免疫调节作用及临床应用

白细胞介素-12(IL-12)是由抗原呈递细胞产生的、具有多种免疫调节作用的细胞因子，其主要活性是诱导自然杀伤细胞(NK细胞)和T细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)，增加NK细胞的杀伤能力以及细胞毒T细胞的特异性细胞毒活性。IL-12可作为治疗药物以内源性抗原的佐剂形式促进肿瘤或病毒特异性免疫，抑制肿瘤生长或治疗病毒感染；IL-12也可作为疫苗组成成分以外源性抗原的佐剂形式促进和增强保护性细胞介导的免疫应答。