Ang-2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的：探讨促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系;观察反义 Ang-2基因转染对人胃癌细胞 SGC-7901的影响。方法：用 Western Blot法检测 Ang-2蛋白在 10例胃癌组织及 10例正常胃组织中的表达,用免疫组化法检测 53例不同病理分期的胃癌组织中 Ang-2蛋白的表达;应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的 pEGFP-N1-anti Ang-2转染体外培养的人胃癌细胞 SGC-7901,以空载体(pEGFP-N1 )转染组和未转染组作对照, RT-PCR及免疫组化检测转染后 Ang-2基因及蛋白的表达, MTT法和流氏细胞术检测反义 Ang-2基因转染对细胞生长和细胞调亡的影响;分别用上述三组细胞注射于裸鼠皮下,对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量。结果：Ang-2蛋白在正常胃组织中不表达,在胃癌组织中呈阳性表达,并且随病理分期进展表达呈增强趋势;RT-PCR及免疫组化显示反义Ang-2基因转染组无 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,MTT法检测显示反义 Ang-2基因转染组活细胞数较其它两组均低（P＜0.05）,流氏细胞术检测显示其调亡率较其它两组明显增高（P＜0.01）;转染了反义 Ang-2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢（P＜0.05）,肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少（P＜0.05）。结论：胃癌组织中 Ang-2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵袭能力密切相关;反义 Ang-2基因转染可封闭人胃癌细胞 SGC-7901中 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,抑制其体外生长,促进其凋亡;并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

反义促血管生成素2基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的抑制作用

目的：观察以pEGFP-N1为载体的促血管生成素2（angiopoietin2,Ang2）反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中Ang2蛋白的表达,研究其对人胃癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用重组质粒转染反义Ang2的pEGFP-N1载体（pEGFP-N1-anti Ang2）、pEGFP-N1空载体质粒以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT-PCR技术与免疫组化法检测Ang2基因及其蛋白的表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：RT-PCR与免疫组化均示pEGFP-N1-anti Ang2转染组无Ang2 mRNA及其Ang2蛋白的表达,MTT检测表明pEGFP-N1-anti Ang2转染组活细胞数较其它两组均低,差异有统计学意义（F=10.39,P=0.002 4）,流式细胞仪检测则显示其凋亡率较其它两组明显增高,差异有统计学意义（?字2=3 188.98,P＜0.000 1）。结论：pEGFP-N1-anti Ang2成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭Ang2 mRNA表达,使已转染pEGFP-N1-anti Ang2的人胃癌细胞Ang2蛋白的表达减少,并抑制人胃癌细胞的恶性表型。     

下调胃癌细胞PDGF-D表达对共培养HUVECs生长和功能的影响

目的：探讨通过RNA干扰下调血小板源性生长因子-D（PDGF-D）基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达对与其共培养的脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）生长和功能的影响.方法：构建靶向PDGF-D的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体,转染胃癌SGC-7901细胞后,通过RT-PCR,Western Blot检测干扰前后PDGF-D的表达;用ELISA法检测培养液上清中血管内皮生长因子（VEGF）的含量;将胃癌细胞SGC-7901与HUVECs共培养后,细胞计数法检测细胞生长变化,流式细胞术测量细胞周期变化,血管形成实验检测HUVECs的血管形成能力.结果：PDGF-D-shRNA1,PDGF-D-shRNA2重组载体均能使SGC-7901细胞中PDGF-D基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调（P〈0.05）,且后者抑制效果更好;干扰后胃癌细胞培养液上清中的VEGF下降;与转染后的SGC-7901细胞共培养的HUVECs生长速度明显变慢,且无管状结构形成.结论：重组真核载体能有效抑制SGC-7901细胞的PDGF-D表达,并通过减少VEGF的表达来抑制HUVECs生长和血管形成能力.     

si-RNA介导FGFR1基因沉默对胃癌细胞生长及凋亡的影响

目的探索靶向沉默成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）表达对胃癌细胞SGC-7901生长及凋亡的影响。方法通过Westernblotting法研究FGFR1蛋白在胃癌细胞SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1的表达情况;设计合成特异性针对FGFR1基因的小干扰RNA（siRNA）及阴性对照-siRNA（NC-siRNA）;采用瞬时转染法将siRNA转入胃癌细胞SGC-7901中,Westernblotting法检测转染siRNA-FGFR1后对SGC-7901细胞中FGFR1蛋白表达的影响。通过MTT法检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞增殖抑制的时间-效应关系,以及克隆集落形成实验检测siRNA-FGFR1对SGC-7901细胞克隆集落形成的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术检测siRNA-FGFR1对胃癌细胞凋亡的影响。结果与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901的FGFR1蛋白表达水平明显增高（P＜0.05）;siRNA-FGFR1转染SGC-7901细胞后,FGFR1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）;胃癌细胞增殖生长曲线提示,用siRNA技术沉默胃癌细胞中FGFR1的表达后,相较于空白组和NC-siRNA组,siRNA-FGFR1组细胞增殖明显受抑制,另外胃癌细胞SGC-7901克隆集落形成明显受抑制;流式细胞术结果表明,正常组与NC-siRNA组中胃癌SGC-7901细胞早期凋亡百分比差异无统计学意义（P＞0.05）,而siRNA-FGFR1组细胞早期凋亡百分比显著升高（P＜0.01）。结论siRNA-FGFR1可抑制FGFR1蛋白在人胃癌细胞SGC-7901中的表达,并抑制胃癌细胞的生长,促进其凋亡。以FGFR1为靶点的小RNA干扰技术有望成为胃癌靶向治疗的新方法。     

胃癌裸鼠移植瘤生长过程中反义血管内皮生长因子-C的作用

目的:通过观察胃癌裸鼠移植瘤的生长过程,研究反义血管内皮生长因子-C(Anti-sense vascular endothelial growth factor-C,Anti-sense VEGF-C)基因转染胃癌细胞后对其在裸鼠的成瘤性和肿瘤脉管生成中的作用.方法:将30只裸鼠随机分成3组,将转染了anti-sense VEGF-C基因、转染空白质粒及未转染质粒的人胃癌细胞系SGC-7901 3种细胞的细胞悬液,分别接种于3组裸鼠皮下,使之在裸鼠皮下产生肿瘤结节,观察肿瘤生成的速度并对肿瘤组织中的微淋巴管及微血管进行检测.结果:转染anti-sense VEGF-C基因裸鼠肿瘤生长速度明显减慢且瘤体较小(P＜0.05).第1、2、3周,转染anti-sense VEGF-C组肿瘤组织中微淋巴管密度较其他2组明显减少(P＜0.05):转染anti-sense VEGF-C组分别为4.0±2.2/HF、6.0±3.1/HF和9.0±2.7/HF;转染空白质粒组分别为6.0±8.7/HF、9.0±3.5/HF和18.0±7.2/HF;未转染质粒组分别为7.0±4.9/HF,9.0±6.4/HF和19.0±6.5/HF.但新生血管生成的数量3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:anti-sense VEGF-C转染对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠成瘤性及肿瘤淋巴管生成有明显的抑制作用,但对肿瘤新生血管的形成影响不大.VEGF-C可能参与了胃癌新生淋巴管的形成过程.     

siRNA干扰survivin对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默survivin基因表达对人胃癌SGC-7901细胞用期、增殖、凋亡的影响及其作用机制的初步探讨.方法 针对survivin mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.MTT法检测SGC-7901细胞增殖;RT-PCR法检测survivin、caspase-3基因表达;Western blot检洲survivin、caspase-3表达;细胞免疫组织化学检测survivin表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 survivin siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中survivin的表达,与空白对照组比较.survivin siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P＜0.05);survivin在mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),caspase-3在mRNA水平变化不明显(P＞0.05),而在蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);survivin siRNA组细胞凋亡率增高(P＜0.05).结论 survivinsiRNA可以下调胃癌SGC-7901细胞survivin基因的表达,抑制细胞的生长活性,并促进其凋亡.     

五倍子酸对人胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响

目的：探讨五倍子酸（GA）对人胃癌SGC-7901细胞转移的影响,阐明其作用机制。方法：培养人胃癌SGC-7901细胞,将其分为对照组及3.125、6.250、12.500、25.000、50.000和100.000 mg·L^-1GA组。MTT法检测各组SGC-7901细胞增殖抑制率,细胞划痕实验检测各组细胞转移能力,免疫细胞化学法检测各组SGC-7901细胞中血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。结果：与对照组比较,不同剂量GA组SGC-7901细胞增殖抑制率明显升高,并呈剂量依赖性（F=59.451,P<0.01）。与对照组比较,不同剂量GA组SGC-7901细胞的划痕愈合率明显降低（P<0.01）,12.500和25.000 mg·L^-1 GA组细胞中VEGF蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：GA通过抑制人胃癌SGC-7901细胞中VEGF蛋白的表达来抑制SGC-7901细胞增殖及迁移。     

外源性反义血管内皮生长因子-C基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响

目的:观察以pCI-neo为载体的血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,并研究其对人胃癌细胞体外生长的影响.方法:应用重组质粒pCI-neo-antiVEGF-C和pCI-neo空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,再用免疫组化和Western-blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法分析其对细胞生长的抑制作用.结果:免疫组化和Westem-blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P＜0.05).结论:pCI-neo-anti VEGF-C成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭VEGF-C mRNA,使已转染pCI-neo-anti VEGF-C的人胃痛细胞VEGF-C蛋白的表达减少,并能抑制胃癌细胞SGC-7901的体外生长,为进一步研究VEGF-C的生物学功能及胃癌的基因治疗研究创造了条件.     

甲基化CpG结合结构蛋白2在胃癌的表达及靶向抑制

目的：研究甲基化CpG 结合结构蛋白2（methyl-CpG-binding domain protein 2,MBD2）在胃癌的表达及靶向抑制。方法：免疫组化法对40例胃癌及配对胃黏膜组织,免疫荧光法对胃癌细胞SGC-7901行MBD2表达研究。构建3个靶向抑制MBD2的siRNA（MBD2-siRNA-1、MBD2-siRNA-2、MBD2-siRNA-3）。转染MBD2-siRNA入SGC-7901,RT-PCR及Western blot验证MBD2的抑制效果。噻唑蓝比色法检测SGC-7901增殖率。结果：胃癌组织MBD2表达较对照胃黏膜组织增强（χ2=6.646,P=0.010）;且低分化胃癌与伴幽门螺杆菌感染的胃癌中MBD2表达更强（ χ2值分别为9.730、8.700,P值分别为0.01和0.04）。MBD2蛋白在胃癌胞核分布。MBD2-siRNA可成功转染SGC-7901,并成功筛选靶向抑制MBD2的siRNA（MBD2-siRNA-2）。发现转染MBD2-siRNA-2后96 h,SGC-7901增值率被抑制。结论：MBD2在胃癌表达增强,抑制MBD2可能抑制胃癌增殖。     

胃癌耐药细胞株SGC7901/阿霉素中miR-185的表达及对细胞多药耐药性的影响

目的 检测miR-185在胃癌组织及细胞株中的表达,探讨miR-185在胃癌多药耐药性（MDR）发生机制中的作用。方法 选取2014年3-5月于河北医科大学第四医院行胃癌切除术的20例患者胃癌及癌旁组织标本,荧光定量PCR技术检测胃癌及癌旁组织和人胃腺癌细胞株SGC7901、正常胃上皮细胞株GES-1、耐阿霉素（ADR）的胃癌MDR细胞株SGC7901/ADR的miR-185表达水平。采用miR-185模拟物或无关对照序列转染细胞株SGC7901/ADR,检测其对化疗药物ADR、5-氟尿嘧啶（5-FU）、草酸铂（L-OHP）的敏感性,荧光定量PCR和Western blotting技术检测多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、LRP的mRNA及蛋白表达水平。结果 癌旁组织和胃癌组织miR-185相对表达水平分别为（0.910±0.142）、（0.243±0.045）,差异有统计学意义（t=20.025,P＜0.001）。细胞株GES-1、SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平分别为（0.903±0.117）、（0.630±0.101）和（0.191±0.030）,差异有统计学意义（F=46.850,P＜0.001）。其中,细胞株SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于GES-1,细胞株SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于SGC7901（P＜0.05）。ADR、5-FU和L-OHP对不同转染处理后的细胞株SGC7901/ADR抑制率比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,ADR、5-FU和L-OHP对miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR抑制率高于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。经不同转染处理后,细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平低于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。结论 胃癌细胞miR-185表达下调,通过上调miR-185的表达可提高胃癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是miR-185调控部分多药耐药基因的表达。     

环氧合酶-2在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达及其意义.方法应用免疫组化法检测40例胃癌石蜡标本及10例正常胃组织中COX-2的表达.结果 COX-2在正常胃组织中没有表达,而胃癌组织中表达阳性率为60%,其阳性表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 COX-2表达与胃癌的发生、发展及转移有关.     

Grb2 与mTOR在胃癌中的表达

目的 探讨胃癌组织中Grb2 与mTOR的表达及其与胃癌临床病理因素和预后的关系。方法 应用免疫组织化学法观察326例胃癌组织Grb2 与mTOR的表达特点,结合临床病理资料进行统计学分析。结果 Grb2 和mTOR在正常胃粘膜上皮和管状腺瘤组织中未见阳性染色或仅少量细胞呈淡黄色。167例(51.2%)胃癌组织Grb2 染色阳性,其中79例Grb2 高表达,Grb2 表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度及临床分期呈正相关（P<0.05）。175例（53.7%）胃癌组织mTOR染色阳性,其中高表达92例, mTOR表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及临床分期呈正相关（P<0.05）。两者表达具有高度的一致性（P<0.01）,且均与预后有关。结论 Grb2 和mTOR在胃癌中出现异常表达,两者共同促进了胃癌的发生及发展,可作为胃癌治疗的靶点。     

环氧化酶-2和survivin在胃癌组织中的表达及其意义

目的:检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及抑制凋亡基因家族成员survivin在胃癌组织中的表达,并探讨其意义。方法:利用半定量RT-PCR法检测82例胃腺癌及对应的正常胃组织中COX-2和survivin的表达。结果:①COX-2及survivin在正常胃组织中均不表达,在胃癌组织中的表达阳性率分别为51.2%及62.2%。②COX-2和survivin表达量与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低两者表达量越高,高分化胃腺癌与低分化胃腺癌比较,差异有显著性统计学意义(P<0.05)。结论:COX-2和survivin在胃癌中的表达高于正常组织,与肿瘤的分化程度有关。     

胃癌组织hMSH2基因突变的检出

[目的]研究hMSH2基因表达及其突变在胃癌发生中的作用。[方法]应用反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测24例胃癌组织及15例癌旁组织的hMSH2mRNA表达情况。[结果]胃癌组的hMSH2mRNA检出率为50％（12／24）,高于癌旁胃黏膜组的20％（3／15）;胃癌组织突变检出率为20．8％（5／24）,高于癌旁胃黏膜的0％（0／15）;5例突变中,杂合性突变2例,纯合性突变3例。在配对的15例中,仅胃癌组检出突变3例,均为纯合性突变。[结论]胃癌的发生伴随着hMSH2基因的表达上调,这种表达上调可能与该基因突变有关。     

胃癌螺旋CT诊断与癌组织中环氧合酶-2蛋白的测定

目的:探讨螺旋CT 对胃癌的诊断价值及螺旋CT征象与癌组织中环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达间的关系.方法:胃癌患者55例(男39例,女16例;TNM分期:Ⅰ期5例,Ⅱ期13例,Ⅲ期20例,Ⅳ期17例;浸润深度:T2 9例,T3 29例,T4 17例;淋巴结转移:N0 18例,N1 11例,N2 26例)行低张力水充盈螺旋CT三期增强扫描,术后采用免疫组织化学SP法检测肿瘤组织中COX-2的表达,并将螺旋CT结果与病理、COX-2表达进行对比分析.结果:螺旋CT三期增强扫描对55例胃癌患者T分期诊断的准确性为83.6%(46/55),N分期的准确性为78.2%(43/55),TNM分期的准确性为80.0%(44/55).55例胃癌组织中COX-2阳性表达率为63.7%(35/55),与螺旋CT征象的浆膜浸润、淋巴结转移及TNM分期均相关(χ2＝4.243,P＝0.039;χ2＝10.228,P＝0.001;χ2＝14.556,P＝0.000).结论:螺旋CT可较准确反映胃癌的浸润、转移及TNM分期,螺旋CT与COX-2测定相结合,可以提高对胃癌浸润、转移的诊断准确性.     

血管生成素样因子2与周围血管病变的相关性研究

周围血管病变(PVD)是糖尿病最常见并发症之一^[1-2],其特点为全身的动脉粥样硬化,导致动脉壁增厚变硬、管腔狭窄及闭塞,引起所供应的组织或器官缺血、坏死^[3]。胰岛素抵抗(IR)是引起2型糖尿病的重要原因。因此,研究PVD与IR的相关性极为重要。IR影响因素中,血管生成素样因子2(ANGPTL2)是一个重要的炎症介质,通过加速白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子产生,增强IR^[4],并且产生血管炎症。     

Ang-2、MVD在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨血管生成素-2（Ang-2）在人胃癌组织中表达及其与微血管密度（MVD）和临床病理特征的关系。方法应用免疫组化两步法检测51例人胃癌组织中Ang-2、CD34的表达，并以24例正常胃黏膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行MVD计数，并结合临床资料进行统计学分析。结果胃癌组织中Ang-2的表达明显高于正常胃组织（P〈0．01），Ang-2的表达与MVD呈明显正相关（r=0．71，P〈0．01），Ang-2表达与胃癌的大小、有无淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关（P〈0．01）。胃癌组织中的MVD明显高于正常胃组织（P〈0．01）。结论胃癌组织中Ang-2过度表达可能在肿瘤的血管生成和进展过程中起着重要作用。     

S期激酶相关蛋白2与胃癌关系的研究

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率一直居恶性肿瘤的第一位。细胞周期失控与肿瘤发生密切相关。细胞周期的调控是个复杂的过程,主要有两个调控点。一个是G1/S转折点,控制细胞进入S期(G1期检测点);另一个处于G2/M转折点,控制细胞进入M期(G2期检测点)。细胞周期是在细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI)共同调节下进行的。泛素蛋白酶体(SCF)途径具有降解细胞周期调控因子作用,而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对细胞周期关卡起调控作用。近几年…     

细胞周期蛋白E2基因mRNA在胃癌组织中的表达

目的了解细胞周期蛋白E2（Cyclin E2）基因mRNA在胃癌组织中的表达情况及Cyclin E2与临床肿瘤病理的关系，探讨Cyclin E2在胃癌发生、发展、侵袭与转移中的作用。方法收集40例手术切除并经病理检查证实的胃癌组织标本，用于RNA提取。按Lauren方案分为肠型胃癌11例，弥漫型胃癌29例；按有无胃周围淋巴结转移分为转移组28例，非转移组12例。临床分期采用UICC的TNM方案，Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期27例。用RT-PCR法检测胃癌组织Cyclin E2基因mRNA表达。结果肿瘤组织表达Cyclin E2 mRNA均明显高于正常对照组织（P〈0.05）。在肿瘤组织中可见Cyclin E2 mRNA在有淋巴结转移的肿瘤组织表达明显高于非淋巴结转移的肿瘤组织（P〈0.01），TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者Cyclin E2 mRNA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期者（P〈0.05）。肿瘤组织中Cyclin E2 mRNA表达与性别及Lauren分型无关（P〉0.05）。结论Cyclin E2基因可能促使胃癌转移，其表达水平可能有助于临床分期。