半定量反转录-聚合酶链反应分析大鼠不同组织肌肉生长抑制素基因的表达

目的:有许多实验已证实,肌肉牛长抑制素基因在骨骼肌中有特异性表达,在胚胎成体心脏以及乳腺组织中也检测到表达;但也有报道心脏、肺、脑、肾脏等多种组织中均未检测到肌肉生长抑制素的表达.本实验拟验证肌肉生长抑制素基因在大鼠不同组织中的表达情况.方法:实验于2006-11/2007-05在新乡医学院分子生物学实验室完成.①实验动物:2月龄清洁级SD大鼠,体质量240～280g.②实验方法:采用Trizol试剂从大鼠的肺脏、脑、骨骼肌和心脏组织中提取总RNA.③实验评估:采用半定量反转录-聚合酶链反应技术检测人鼠肿、脑、骨骼肌和心脏组织中肌肉牛长抑制素基因的表达情况.结果:在肺、骨骼肌和心脏组织中均检测到肌肉生长抑制素的表达,以骨骼肌中的表达量最高,而在脑中未检测到.结论:肌肉生长抑制素在各个组织中表达情况不一,主要在骨骼肌中进行表达,是组织差异性表达基因.     

氯化胆碱与制动性骨骼肌萎缩肌肉生成抑制素mRNA的表达

背景:研究发现类胆碱物质可增加乙酰胆碱的弥散及终板电流的幅度,对神经肌肉接点功能退化有一定的对抗作用.目的:观察氯化胆碱对制动性骨骼肌萎缩的防治作用及对骨骼肌萎缩大鼠肌肉生成抑制素mRNA表达的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只.采用可塑性石膏固定模型组和治疗组大鼠右后肢制备肌萎缩模型.治疗组每日灌胃氯化胆碱(150 mg/kg),对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水.4周后解剖右后肢腓肠肌,检测腓肠肌收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平及肌肉生成抑制素mRNA的表达.结果与结论:与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著降低(P < 0.05或P < 0.01),肌肉生成抑制素mRNA表达显著增高(P < 0.01).与模型组比较,治疗组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著升高(P < 0.05),肌肉生成抑制素mRNA表达显著降低(P < 0.05).说明氯化胆碱能够显著提高制动性萎缩骨骼肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平,减少肌肉生成抑制素mRNA的表达,从而有效抑制骨骼肌制动性萎缩的发生.     

抗阻练习模型大鼠骨骼肌中胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素的变化

背景：抗阻练习对人体骨骼肌系统和代谢的良性作用大部分都与其引起的肌肉肥大相关。但抗阻训练对骨骼肌中肌肉生长调节的正向调节因子和负向调节因子的影响尚不十分清楚。目的：采用大鼠负重爬梯抗阻练习模型,探讨抗阻练习对大鼠骨骼肌局部胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素的影响。方法：SD大鼠随机分成实验组和对照组。采用负重爬梯的抗阻练习模型,每周训练3次,负重从体质量的30%逐渐增加到200%。训练10周后取左侧腓肠肌,用免疫组织化学法和RT-PCR法分别测定肌肉中胰岛素生长因子1多肽含量和肌肉生长抑制素的表达。结果与结论：10周抗阻练习后,实验组大鼠腓肠肌中胰岛素生长因子1多肽含量明显增加,肌肉生长抑制素mRNA的表达显著下降。大鼠骨骼肌中的胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素都对抗阻练习非常敏感,在肌肉对抗阻练习的适应过程中分别起到正向和负向调节作用。     

抗阻练习模型大鼠骨骼肌中胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素的变化

背景:抗阻练习对人体骨骼肌系统和代谢的良性作用大部分都与其引起的肌肉肥大相关。但抗阻训练对骨骼肌中肌肉生长调节的正向调节因子和负向调节因子的影响尚不十分清楚。目的:采用大鼠负重爬梯抗阻练习模型,探讨抗阻练习对大鼠骨骼肌局部胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素的影响。方法:SD大鼠随机分成实验组和对照组。采用负重爬梯的抗阻练习模型,每周训练3次,负重从体质量的30%逐渐增加到200%。训练10周后取左侧腓肠肌,用免疫组织化学法和RT-PCR法分别测定肌肉中胰岛素生长因子1多肽含量和肌肉生长抑制素的表达。结果与结论:10周抗阻练习后,实验组大鼠腓肠肌中胰岛素生长因子1多肽含量明显增加,肌肉生长抑制素mRNA的表达显著下降。大鼠骨骼肌中的胰岛素生长因子1和肌肉生长抑制素都对抗阻练习非常敏感,在肌肉对抗阻练习的适应过程中分别起到正向和负向调节作用。     

氯化胆碱与制动性骨骼肌萎缩肌肉生成抑制素mRNA的表达

背景：研究发现类胆碱物质可增加乙酰胆碱的弥敝及终板电流的幅度,对神经肌肉接点功能退化有一定的对抗作用。目的：观察氯化胆碱对制动性骨骼肌萎缩的防治作用及对骨骼肌萎缩大鼠肌肉生成抑制素mRNA表达的影响。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。采用可塑性石膏固定模型组和治疗组大鼠右后肢制备肌萎缩模型。治疗组每目灌胃氯化胆碱（150mg／kg）,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。4周后解剖右后肢腓肠肌,检测腓肠肌收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平及肌肉生成抑制索mRNA的表达。结果与结论：与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）,肌肉生成抑制索mRNA表达显著增高（P〈0.01）。与模型组比较,治疗组大鼠腓肠肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平均显著升高（P〈0.05）,肌肉生成抑制素mRNA表达显著降低（P〈0.05）。说明氯化胆碱能够显著提高制动性萎缩骨骼肌的收缩张力、肌湿质量、蛋白质水平,减少肌肉生成抑制素mRNA的表达,从而有效抑制骨骼肌制动性萎缩的发生。     

不同时期应用肌肉生长抑制素抑制剂对小鼠骨折的愈合作用

背景:近期研究发现肌肉生长抑制素基因敲除小鼠骨骼肌量明显增加,整个骨架的强度和矿化增加,其在骨折修复早期即有表达。目的:检测小鼠腓骨骨折后不同时间应用肌肉生长抑制素对骨折处骨痂量及骨密度的影响。方法:建立小鼠腓骨骨折模型。造模成功的48只小鼠随机均分为仅造模的对照组、造模后不同起始时间腹腔注射相同剂量肌肉生长抑制素抗体的0d组,1,2周组,造模后4周测量骨折处骨痂骨密度,观察细胞肌肉生长抑制素含量变化和肌肉组织变化。结果与结论:造模成功率80%。各组小鼠体质量差异无显著性意义(P>0.05),0d组腓肠肌质量和股痂骨密度明显高于其他3组(P<0.01),其他3组比较差异无显著性意义。与其他3组比较,0d组肌肉细胞组织形态及细胞内肌肉生长抑制素含量也有直观差别。说明造模后及早应用肌肉生长抑制素抑制剂可增加小鼠骨折处骨密度促进骨折处肌肉增生。     

基底膜蛋白多糖对肌萎缩相关因子myostatin和IGF-1信号表达的影响

目的 旨在观察基底膜蛋白多糖（perlecan）对小鼠肌卫星细胞中肌肉生长抑制素（myostatin）和胰岛素样生长因子-1(IGF-1,也被称为促生长因子)等肌肉萎缩相关因子信号表达的影响。方法 应用单一肌纤维卫星细胞分离培养技术,分离出高纯度肌肉卫星细胞,通过添加perlecan因子,利用蛋白免疫印迹法（Western blot）、定量RT-PCR等技术方法观察Perlecan对Myostatin和IGF-1信号表达的影响。结果 通过添加perlecan因子能促使肌肉卫星细胞中Myostatin含量增加,以及下游信号通路smad磷酸化过表达;促使IGF-1含量减少,以及下游信号通路Akt磷酸化表达降低（P<0.05）。结论 Perlecan可通过调节肌肉萎缩相关因子Myostatin和IGF-1表达,对肌肉萎缩发挥调控作用。     

人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70融合蛋白的克隆与表达及其活性鉴定

目的:为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题,拟克隆入骨保护素功能区与分枝杆菌热休克蛋白70肽段融合基因,进一步观察其在大肠杆菌中的表达并鉴定活性.方法:实验于2006-05/2007-09在首都医科大学免疫学系实验室完成.采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因,构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒.以此为模板,聚合酶链反应扩增骨保护索-热休克蛋白70功能区DNA,构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70,将其转化E.coli.BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷诱导后收集菌体蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白的表达,以破骨细胞生长抑制实验及抑炎实验检测该融合蛋白的生物学活性.结果:①实验最终获得人骨保护素全长基因片段,人骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA片段已被正确插入到pET-28a载体中,转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白.②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示约在Mr22000处有蛋白的超表达,而未诱导菌株未发现有此条带.③蛋白免疫印迹检测表明,融合蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合.④破骨细胞生长抑制实验表明,该融合蛋白能够减少破骨细胞的生成数量,具有体外抑制骨破坏的生物活性.⑤抑炎实验表明,融合蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应程度的作用,说明融合蛋白中热休克蛋白70具有抑制炎症的生物学活性.结论:在E.coli.BL21(DE3)中表达了骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白,体外功能实验证实该融合蛋白具有一定的生物学活性.     

与内皮抑制素相互作用的蛋白及其抑制血管生成作用的分子机制

目的：探讨与内皮抑制素相互作用的蛋白，阐明其抑制血管生成作用的分子机制。方法：实验于2002-01／2004-12在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。应用酵母双杂交系统3，以内皮抑制素为诱饵，筛选人肝cDNA文库，寻找与之相互作用的蛋白。再利用一对一酵母回复性杂交、β-GAL实验和生物信息学分析技术筛除假阳性克隆。结果：成功构建稳定表达内皮抑制素基因的载体；酵母双杂交共获得281个克隆，经验证，6个为阳性克隆，测序发现其中一个克隆为未知序列；FASTCAT试验发现阳性克隆中4个克隆可明显的与内皮抑制素相互作用。结论：6个阳性克隆表达的蛋白可能能与内皮抑制素相互作用，并不同程度的参与了内皮抑制素调节的血管生成过程。     

血清肌肉生长抑制素及超敏C-反应蛋白与老年患者肌肉减少症的相关性

目的:测定老年骨骼肌肉减少症患者血清肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)、超敏C-反应蛋白(hy persensitive C-reactive protein,hs-CRP)的水平,探讨二者对老年患者肌肉减少症的临床意义。方法:收集肌肉减少症患者血清40例,对照组42例,测定两组血清MSTN,hs-CRP水平,并分析肌肉减少症组MSTN,hs-CRP的相关性。结果:肌肉减少症组血清MSTN,hs-CRP水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:血清MSTN,hs-CRP水平均为诊断肌肉减少症的较为敏感、准确、可靠的指标,在老年肌肉减少症患者的诊断、治疗、病情监测上有一定意义。     

Myostatin expression in ventricular myocardium in a rat model of volume-overload heart failure

BACKGROUND: Mechanical stress increases myocardial myostatin expression. However, the expression of myostatin in chronic heart failure resulting from volume-overload and after treatment with beta-blockers is little known. The authors hypothesize that myostatin plays a role in the failing myocardium because of volume-overload. MATERIALS AND METHODS: Aorto-caval shunt was created over a 4-week period in adult Sprague-Dawley rats to induce volume-overload heart failure. RESULTS: Heart weight and body weight ratio significantly increased after shunting. The left ventricular end-diastolic dimension also significantly increased. Treatment with carvedilol in the shunt group reversed the increase in heart weight and ventricular dimension to the baseline values. Myocardial and skeletal myostatin proteins were up-regulated in the shunt group. The mRNA of myocardial myostatin also increased in the shunt group. Treatment with carvedilol reversed both protein and mRNA of myocardial myostatin to the baseline values. Treatment with N-acetylcysteine and doxazosin partially decreased myostatin mRNA and protein expression as compared with the shunt group. Carvedilol normalized the increased immunohistochemical labelling of myocardial myostatin in the shunt group. CONCLUSION: Myocardial myostatin mRNA and protein expression were up-regulated in the rat model of volume-overload heart failure. Treatment with carvedilol is associated with a limitation of increased myostatin expression in the failing ventricular myocardium.     

The role of myostatin and bone morphogenetic proteins in muscular disorders

Skeletal muscle is the largest organ in the human body, and plays an important role in body movement and metabolism. Skeletal muscle mass is lost in genetic disorders such as muscular dystrophy, muscle wasting and ageing. Chemicals and proteins that restore muscle mass and function are potential drugs that can improve human health and could be used in the clinic. Myostatin is a muscle-specific member of the transforming growth factor (TGF)-β superfamily that plays an essential role in the negative regulation of muscle growth. Inhibition of myostatin activity is a promising therapeutic method for restoring muscle mass and strength. Potential inhibitors of myostatin include follistatin domain-containing proteins, myostatin propeptide, myostatin antibodies and chemical compounds. These inhibitors could be beneficial for the development of clinical drugs for the treatment of muscular disorders. Bone morphogenetic protein (BMP) plays a significant role in the development of neuromuscular architecture and its proper functions. Modulation of BMP activity could be beneficial for muscle function in muscular disorders. This review will describe the current progress in therapy for muscular disorders, emphasising the importance of myostatin as a drug target.     

Red blood cell extracellular vesicles deliver therapeutic siRNAs to skeletal muscles for treatment of cancer cachexia

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Hepatic perivascular mesenchymal stem cells with myogenic properties

Pericytes are multipotent mesenchymal stem cells located on the walls of blood vessels in various organs and are characterized as CD146⁺ cells. In this study, we first immunohistochemically detected pericytes in the perivascular regions of liver from two mouse genotypes, namely wild‐type (WT) and myostatin null (Mstn^?/?). We further isolated pericytes using sorting as CD146⁺ CD34^? CD56^? CD45^? cells. The main finding of this study involves the contrasting fibrogenic vs. myogenic behaviour of liver pericytes from WT and Mstn^?/? mice, respectively. Sorted CD146⁺ liver pericytes (WT and Mstn^?/?) expressed PDGFRβ, NG2, vimentin, adult stem cell markers CD73, CD105, CD44 and could be readily differentiated into adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages. Furthermore, these CD146⁺ cells from WT and Mstn^?/? livers did not express myostatin, in contrast to the total liver tissue of WT. The absence of αSMA and GFAP made these cells easily distinguishable from hepatic stellate cells. When subjected to standard myogenic differentiation with low serum the CD146⁺ cells from WT liver differentiated into myofibroblasts (fibrogenic) and the CD146⁺ cells from Mstn^?/? liver differentiated into multinucleated myotubes (myogenic). Finally, we transplanted CD146⁺ pericytes into tibialis anterior muscle of dystrophic mice and established the generation of novel myofibres, thereby proving their cell therapy potential. The liver tissue microenvironment with myostatin in WT and the absence of myostatin in Mstn^?/? conditions might exert a paracrine effect in determining the fate of pericyte‐like cells in the liver.     

血清肌肉生长抑制素和肌肉环指蛋白-1对慢性阻塞性肺疾病急性加重期并发肺动脉高压的预测价值

目的 观察慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)急性加重期并发肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)患者血清肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)和肌肉环指蛋白-1(muscle ring finger protein-...     

Multi-omics comparisons of different forms of centronuclear myopathies and the effects of several therapeutic strategies

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产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。