他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞成熟过程及其同种免疫刺激活性的影响(英文)

目的研究他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞(DC)成熟过程和同种刺激活性的影响。方法20只大鼠随机分为对照组、他克莫司、脂多糖(LPS)及LPS+他克莫司组,分别取骨髓细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4(IL-4)培养6d,收集贴壁细胞即DC。对照组不再加其他试剂,他克莫司组在开始培养时即加入他克莫司10μg·L-1,LPS组在细胞培养结束前18h加入LPS100μg·L-1,他克莫司+LPS组分别按上述要求加入他克莫司和LPS。用流式细胞术测定DC表面CD80和CD86的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法观察其对同种T细胞的刺激能力。结果与对照组比较,LPS刺激后,DC表面CD80和CD86表达明显增加,培养上清中IL-12浓度升高,其刺激同种T细胞的能力增强。与对照组和LPS组比较,他克莫司可使DC表面CD80和CD86表达明显降低,IL-12分泌减少,刺激同种T细胞的能力减弱。结论他克莫司可抑制体外培养的DC成熟及其同种刺激活性。     

α干扰素对慢性乙型肝炎患者树突状细胞表型的影响

目的观察α干扰素治疗对慢性乙型肝炎患者树突状细胞(Dendriticcells,DCs)表型的影响,进一步探讨α干扰素治疗慢性乙型肝炎的具体机制。方法分离32例慢性乙型肝炎患者及10名健康人外周血中的单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)进行体外诱导培养,使之发育成DCs,流式细胞仪测定其表面共刺激分子的表达。对32例慢性乙型肝炎患者进行α干扰素治疗3个月后,再次检测DCs表面分子的表达水平,并将治疗前后的数据进行分析、比较。结果与正常对照组相比较,慢性乙型肝炎患者组PBMCs来源的DCs表面共刺激分子CD83、CD86的表达水平明显降低(P<0.05)。在α干扰素治疗3个月后,慢性乙肝患者组其DCs表面CD83、CD86的表达水平与治疗前相比均明显升高(P<0.05),与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论α干扰素可以上调DCs表面共刺激分子的表达水平,促进DCs的成熟,这可能是α干扰素治疗慢性乙肝的重要机制之一。     

不同细胞因子诱导树突状细胞体外抗肿瘤效应研究

目的研究不同细胞因子诱导的树突状细胞(DC)体外抗肿瘤效应。方法常规分离健康人外周血单核细胞,分别采用粒巨噬集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素(IL)-4,肿瘤坏死因子(TNF),GM-CSF、IL-4、α干扰素(IFN-α)细胞因子组合将其诱导为DC,并分别负载SMMC7721细胞冻融抗原;用流式细胞仪检测第9天时细胞表面HLA-DR、CD1α、CD80、CD83的表达;采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测各组刺激自体淋巴细胞增殖能力,并检测各组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对SMMC7721细胞株的杀伤率。结果第9天显微镜下观察各组细胞,其细胞形态无明显差异,但流式细胞仪显示IFN-α组DC其膜表面标志CD80、CD83、CD1a表达上调,在刺激同种T细胞增殖能力方面,较TNF-α组DC效果明显。且IL-12分泌明显增加。在肝癌细胞株SMMC7221杀伤实验中,培养液中加入IFN-α后杀伤效应明显。结论与TNF-α相比,IFN-α诱导DC一定程度上能增强其特异性杀伤能力。     

TNF—α和IFN-α对人外周血树突状细胞功能活性的影响比较

目的研究不同细胞因子诱导的人外周血树突状细胞（dendritic cells,DC）其功能活性的不同。方法常规分离健康人外周血单核细胞,分别采用GM-CSWIL-4／TNFα、GM—CSWIL-4／细胞因子组合将其诱导为DC,用ELISA法检测各组细胞培养至第9天时其上清液中IL．12含量;用流式细胞仪检测第9天时细胞表面HLA—DR、CD1α、CD80、CD83的表达;采用MTT法检测各组刺激自体淋巴细胞增殖能力。结果第9天显微镜下观察各组细胞,IFN—α组DC细胞形态均一,有明显突起,FACM显示IFN—α组DC其膜表面标志CD1α、CD80、CD83表达上调,在刺激同种T细胞增殖能力方面,较TNF-α组DC效果明显。且IL-12分泌明显增加。结论与TNFα相比,IFN仪能在一定程度上增强其诱导的DC功能。     

人胃癌细胞培养上清液对树突状细胞表型的影响

目的 研究胃癌细胞培养上清液对树突状细胞(DCs)表型的影响.方法 酶联免疫法检测胃癌及正常胃上皮细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-10和肿瘤生长因子(TGF)-β1蛋白含量.自健康人外周血获取DCs,流式细胞仪(FCM)检测加入上述细胞培养上清液后DCs表型CD83、CDS0、CD86、HLA-DR的变化.结果 OCUM-2MD3、BGC-823和HGC-27细胞株的胃癌细胞培养上清液中均可检测到VEGF蛋白;IL-10、TGF-β1蛋自在OCUM-2MD3、BGC-823细胞株中有表达,在HGC-27中未见表达.镜下观察细胞具有DCs典型的形态特征,单纯用GM-CSF和IL-4培养的细胞低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD83,加人肿瘤坏死因子(TNF)-α后,表达水平明显上调.加入细胞培养上清液后,FCM检测不同胃癌细胞组各表型表达均显著降低,而正常胃上皮细胞组无明显变化.结论 应用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外刺激,可成功扩增出成熟DCs.胃癌细胞可通过分泌VEGF、IL-10、TGF-β1等抑制DCs成熟,降低其抗原提呈功能,而进行免疫逃逸.     

干扰素抗病毒应答与慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的关系

目的:探讨干扰素抗病毒应答与慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DCs)功能的关系。方法:分别采集23例慢性乙型肝炎患者干扰素治疗前和治疗满4mo时的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养7 d使DCs增殖、成熟。以间接免疫荧光流式细胞技术检测DCs的表型;以ELISA法检测DCs单独培养上清液中IL-12的水平;用DCs与HBsAg共同孵育,丝裂霉素C处理后,再与自体PBMCs共同培养,加入H-TDR,收集细胞测定cpm值。实验中以8例正常健康人作为对照。结果:干扰素完全应答组DCs表面CD,HLA-DR和ICAM-1的表达较治疗前均显著增加(均为P<0.05),且CD,CD,HLA-DR和ICAM-1的增高与无应答组相比具有显著性意义(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01和P<0.05);完全应答组DCs分泌IL-12的水平在治疗后显著增加(P<0.01);DCs的抗原提呈作用在治疗前、后,完全应答组比无应答组均显著增强(P<0.01和P<0.001),而部分应答与无应答组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:慢性乙肝患者干扰素的抗病毒应答与外周血DCs的功能状态有关,干扰素能显著促进患者DCs功能的改善,进而可能增加患者对治疗的应答。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-6对造血干细胞分化发育为树突状细胞的影响

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的白细胞介素6(IL-6)对脐血CD34 造血干细胞(HPC)体外诱导分化为树突状细胞(DCs)的影响.方法 淋巴细胞分离液分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34 HPC,采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) IL- 4 肿瘤坏死因子α(TNF-α)方案体外诱导分化形成DCs,加入高IL-6水平的SLE患者血清观察对细胞分化的影响.在培养的7、10和14d收集细胞,流式细胞术检测表型,细胞增殖/毒性(CCK-8)试剂盒分析DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力.结果 在高IL-6水平SLE血清的作用下,由HPC分化而来的DCs表达CD80、CD86上升,刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力增强;IL-6中和抗体能够降低这种DCs的CD80、CD86表达水平和对同种异体淋巴细胞增殖的刺激能力.结论 SLE血清中的IL-6对造血干细胞向DCs分化、发育及DCs功能的活化可能起促进作用.     

鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞

目的 探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法.方法 用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6 d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(Poly I∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入Poly I∶C和CI A23187.第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性.结果 Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力.结论 PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC.     

Chemerin/ChemR23通过诱导未成熟的树突状细胞参与呼吸道合胞病毒感染的免疫调节

目的:探讨Chemerin/ChemR23通过作用于树突状细胞(DCs)对呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎免疫应答的调节作用。方法:纳入普通RSV肺炎患儿46例,对照组外科无肺部症状的手术患儿19例。获取外周血分离培养树突状细胞,两组患儿均使用磷酸盐缓冲液(PBS)和Chemerin刺激树突状细胞至48 h,分别检测树突状细胞ChemR23、CD80和CD86的表达。结果:(1)外周血分离出的树突状细胞,培养第7天,表面出现毛刺样凸起及典型的树突状细胞形态改变。培养第15天,细胞表面毛刺明显增多并呈聚集样改变。培养第7天的悬浮细胞ChemR23、CD80、CD86均表达阳性。(2)RSV肺炎患儿外周血DCs经Chemerin刺激24 h和48 h后ChemR23阳性表达显著高于PBS组(29.3%±6.5%vs 24.8%±5.8%,25.2%±8.3%vs 21.0%±8.3%,P均<0.01);对照组中,DCs经Chemerin刺激24 h和48 h后ChemR23阳性表达率与PBS组比较差异均无统计学意义。(3)RSV肺炎组中,DCs经Chemerin刺激24 h和48 h后C...     

胃癌患者外周血树突状细胞的体外扩增、鉴定及内吞能力测定

目的 探讨胃癌患者外周血诱导扩增树突状细胞(DCs)的方法,观察其形态、表型、内吞及递呈抗原能力.方法 从胃癌患者外周血中分离单个核细胞(PBMNCs),在重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的诱导下培养扩增树突状细胞.光学显微镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪(FACS)分析其表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能,辣根过氧化酶(HRP)内吞实验检测其群体内吞能力.结果 PBMNCs经过rhGM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养9 d后,具典型的DCs形态,细胞表型为主要组织相容性复合体-2(MHCⅡ)类分子(HLA-DR)(69.70±6.12)%、CD80(65.32±5.19)%、CD86(71.65±7.61)%、CD1a(58.65±3.28)%和CD14(16.82±1.25)%,具有极强的激发MLR的能力,显示成熟DCs的特征.DCs群体的内吞能力约在培养第6天达高峰,之后有明显下降.结论 该方法是一种可靠的诱导、扩增DCs的方法,在其具有活跃的内吞能力时,肿瘤抗原致敏可作为胃癌生物治疗的手段之一.     

聚乙二醇干扰素α-2b对慢性乙型肝炎患者的免疫调节及抗病毒效果分析

目的 探讨不同剂量聚乙二醇干扰素α-2b与恩替卡韦联合治疗慢性乙型肝炎的抗病毒效果,及其对免疫调节功能的影响.方法 选择2014年1-12月利川市人民医院收治的慢性乙型肝炎患者180例,按治疗方法分为高剂量组、低剂量组和对照组,每组60例.对照组单纯口服恩替卡韦进行治疗,高剂量组和低剂量组分别在对照组基础上给予聚乙二醇干扰素α-2b 1.5 μg/kg和1.0 μg/kg肌内注射,治疗48周后比较3组近期疗效、乙型肝炎病毒-DNA(HBV-DNA)水平、T淋巴细胞亚群变化、自然杀伤细胞(NK)活性与白介素-2(IL-2)变化及不良反应情况.结果 治疗后,高剂量组与低剂量组的完全应答率与持续应答率均高于对照组(P＜0.05),且高剂量组高于低剂量组(P＜0.05);高剂量组和低剂量组HBV-DNA和CD8+水平低于对照组(P＜0.05),且高剂量组低于低剂量组(P＜0.05);高剂量组和低剂量组NK活性、IL-2、CD3+、CD4+和CD4 +/CD8+水平高于对照组(P＜0.05),且高剂量组高于低剂量组(P＜0.05);高剂量组和低剂量组不良反应总发生率均低于对照组(P＜0.05).结论 高剂量聚乙二醇干扰素α-2b与恩替卡韦联合治疗慢性乙型肝炎,能够有效抑制病毒复制,增强机体免疫力,提高近期疗效,且不良反应少.     

Effects of IL-12 and IL-18 on HBcAg-specific cytokine production by CD4 T lymphocytes of children with chronic hepatitis B infection

The influence of IL-12 and IL-18 was evaluated on hepatitis B core antigen (HBcAg)-specific cytokine production (IFN-gamma, IL-4, IL-5 and IL-10) by CD4 T lymphocytes isolated from peripheral blood of children with chronic hepatitis B. CD4 T cells were isolated from peripheral blood of 20 children with chronic active hepatitis B, cultured for 48h in presence of rHBcAg and of co-stimulators, IL-12 or IL-18 or IL-12+IL-18 or in their absence (control). Production of studied cytokines was examined using the ELISPOT assay. Co-stimulation with IL-12 or IL-18 was found to significantly augment the HBcAg-specific secretion of IFN-gamma. However, the most pronounced stimulatory effect was observed in the presence of IL-12+IL-18 and resulted in peak levels of IFN-gamma production. The obtained results allowed concluding that the anti-HBV activity of Th1 lymphocytes is strongly induced by IL-12+IL-18 and may contribute to viral clearance in children with chronic hepatitis B infection.     

慢性乙型肝炎患者血清IL-12、IL-6的水平变化和CD_（28）表达的研究

目的探讨IL-12、IL-6和淋巴细胞CD28分子在慢性乙型肝炎发病中的作机制。方法严格按照病例入选标准选取50例患者和20例健康志愿者,每例空腹抽取外周静脉血5 ml,3000 rpm离心10 min,吸取上层血清1.0 ml,放置-70℃冰冻保存备检,同时通过流式细胞仪检测所有患者外周血CD2＋8淋巴细胞所占比例。采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测患者外周静脉血血清中细胞因子IL-12、IL-6的水平,比较慢性乙型肝炎患者与健康对照组及急性乙型肝炎之间Th1和Th2细胞因子表达的差异。结果HBeAg（-）慢性乙型肝炎患者IL-12、IL-6水平显著高于健康对照组（P〈0.01）,HBeAg（-）慢性乙型肝炎患者CD2＋8T淋巴细胞所占比例升高,显著高于健康对照组（P〈0.01）,急性乙型肝炎组水平最高,HBeAg（-）慢性乙型肝炎患者CD2＋8T淋巴细胞水平低于HBeAg（＋）慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论慢性乙型肝炎患者Thl型细胞因子表达强弱与HBV感染肝脏的炎症活动密切相关;Th2细胞因子表达增强,与HBV的持续感染、免疫耐受形成有关;CD28分子在乙型肝炎病毒的清除过程中起重要作用。     

丙氨酰-谷氨酰胺对AECOPD患者CD4＋、CD8＋淋巴细胞及IL-8、TNF-α的影响

目的 观察静脉补充丙氨酰-谷氨酰胺（AG）对慢性阻塞性肺疾病急性加重（acuteexacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD）患者CD4＋/CD8＋T细胞及IL-8、TNF-α的影响.方法 通过静脉对AECOPD患者补充丙氨酰-谷氨酰胺,ELISA法检测IL-8、TNF-α表达水平,流式细胞仪检测CD4＋、CD8＋、CD3＋淋巴细胞变化.结果 与对照组比较,丙氨酰-谷氨酰胺治疗组（AG组）临床缓解率高于对照组（93.33％vs 73.33％）;治疗后AG组IL-8[（102.11±13.57） ng/ml]、TNF-α[（0.83±0.26）μg/L]水平低于对照组[（137.46±12.9） ng/ml、（1.34±0.42）μg/L],两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;治疗后,两组CD4＋/CD8＋比值比较差异无统计学意义,但AG组CD3＋淋巴细胞绝对值（0.69×109/L）高于对照组（0.50×109/L） （P＜0.05）.结论 谷氨酰胺可促进AECOPD患者T淋巴细胞的增殖,并同时减少IL-8、TNF-α的表达,从而可能对AECOPD起到治疗作用.     

青藤碱对类风湿关节炎树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎(RA)树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响。方法分离10例RA患者外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4联合刺激,半定量逆转录聚合酶链反应检测CD80mRNA、CD86mRNA表达的改变。结果与空白对照组比较,经青藤碱高、中、低剂量干预的树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达减少(P<0.01或P<0.05),青藤碱3个剂量组之间比较表达存在差异(P<0.05)。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA的表达,阻断对其T细胞的协同刺激而达到治疗RA的作用。     

Interferon gamma induction in human melanoma cell/allogeneic leukocyte co-cultures is enhanced by interleukin 18 but drug resistant melanoma cells are poorer inducers of IFN-gamma

Human melanoma Colo 679 cells were made resistant to doxorubicin (adriamycin, ADM) by continuous exposure to ascending concentrations of the drug and Colo/ADM80; a variant which grew continuously in the presence of 80 ng/ml of ADM was thus established. Human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) produced interferon gamma (IFN-gamma) when cultured with mitomycin C (MMC)-treated parental Colo 679 cells. The synthesis of IFN-gamma was synergistically enhanced by adding interleukin-18 (IL-18) and this was IL-12-dependent because a neutralizing antibody against IL-12 almost completely inhibited IFN-gamma production while control antibodies (Abs) were inactive. The cellular sources of IFN-gamma were found to be B cells, CD8+ T cells and CD4+ T cells as revealed by flow cytometry after double staining for surface antigens and staining for intracellular IFN-gamma. Interestingly, the resistant cell line induced much less IFN-gamma production than the parental cell line under the same co-culture conditions; however, IL-18 could still enhance the production of IFN-gamma. In conclusion, our study shows that acquired resistance to anti-cancer agents can also reduce immune responses to cancer cells. However, the immunostimulatory cytokine IL-18 could still enhance IFN-gamma production in drug resistant tumor cell-PBMC cultures indicating that such immunostimulatory agents could still be beneficial in immunotherapy for patients with recurrent drug resistant tumors.     

Differential downstream effects of CD40 ligation mediated by membrane or soluble CD40L and agonistic Ab: a study on purified human B cells

With the addition of various cytokines, the CD40-CD40 ligand (CD40L) system can act as a T-helper cell surrogate to permit B lymphocytes to produce large amounts of polyclonal Ig. In the present study, we tested six CD40-CD40L stimulation models: (i, ii) soluble agonistic 89 and G28.5 mAbs ; (iii, iv) 89 and G28.5 bound via their Fc fragments on CDw32-transfected mouse fibroblasts; (v) purified, soluble, trimeric human CD40L molecules (sCD40L); and (vi) human CD40L expressed by a CD40L-transfected mouse fibroblastic cell line (LCD40L). Target B cells consisted of purified blood and tonsillar CD19+ lymphocytes cultured in the presence of CD40 stimuli and IL-2 and IL-10, added at the onset of each B cell culture. A) There was differential expression of CD69, CD80 and CD86 exposure to sCD40L and LCD40L was ensued by the strongest % MFI changes over control. B) In blood B cells, mAbs and sCD40L induced IgA, IgM and IgG production almost equally well; LCD40L proved less efficient. In contrast, in tonsil B cells, LCD40L induced significantly more IgA, IgG1, IgG3 and IgM production than other signals. Using certain CD40/CD40L stimuli to model in vitro Ig production, a system used regularly in many laboratories, may affect the interpretation based on the cell type and on the CD40/CD40L system used.