不同来源脾结节生成细胞增殖与分化性能的比较

应用单个脾结节和性染色体作为天然的细胞遗传学标志,证明存在于纯系LACA或C_(57)胎鼠肝脏和成年小鼠骨髓中的脾结节生成细胞(简称CFU-S)大多具有重建照射小鼠髓系与淋巴系细胞的功能。因而,是一类淋巴-髓系干细胞。然而,存在于正常成年小鼠外周血中的CFU-S,虽然它们也可以在照射小鼠脾脏上生成由各系血细胞组成的脾结节,但其中至少有一部分已经失去了重建照射小鼠造血功能的能力,反映了CFU-S在功能上的不均一性。脾结节测试技术是目前测定造血干细胞的一项重要技术,但是,能够生成脾结节的细胞,不一定都具有造血干细胞的基本特性,一些由造血干细胞分化的多向性造血祖细胞也可能在照射的小鼠脾脏上生成脾结节。     

慢性连续性低水平γ射线照射(CCLLR)(25～70拉德/天)对小鼠造血功能的响影

本实验研究了六个月以内不同时间CCLLR对小鼠血细胞数、CFUs、CFUc含量和造血微环境(HM)的影响。在以70拉德/天照射2～3月时,可看到血细胞数、骨髓和脾脏内的CFUs和CFUc含量急剧而持续地下降。骨髓的组织学或则显示细胞增多或則出现再生不良以及血窦微循环损伤。以70拉德/天照射CBA/CA小鼠三个月后,将动物从照射野取出让其     

基质细胞支持的体外扩增造血细胞对致死剂量照射小鼠造血恢复的促进作用

目的 研究基质细胞支持条件下体外扩增的造血细胞回输体内后，促进经致死剂量照射小鼠造血功能恢复的作用。方法 在培养的小鼠骨髓基质细胞层存在的条件下，加入或不加入几种细胞因子组合，分别在小鼠骨髓单个核细胞液体培养体系中进行造血细胞体外扩增。将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死剂量照射的小鼠体内，并与单纯细胞因子存在条件下的扩增及末扩增造血细胞进行比较，动态观察小鼠的外周血象变化及其一般状况和生存宰。结果 ①单纯细胞因子介导小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)体外扩增后并不能增进这些细胞促进造血恢复的能力；②含有骨髓基质细胞底层的体外扩增，无论是否加入细胞因子，均有明显的促进移植受体造血功能迅速恢复的作用。     

造血干细胞(CFU)增生状态的研究

用Till和McCulloch(1961)的方法,能定量地测定小鼠的多能造血干细胞(CFUs)。一种方法是移植少量骨髓或脾细胞进入超致死剂量照射的受体鼠,8～10天以后计数脾脏内的集落数(外源性-CFUs)。另一种方法追查亚致死剂量照射     

小鼠骨髓基质细胞某些特性的观察

骨髓基质细胞是骨髓造血微环境的重要组成成分。了解骨髓基质细胞的特性对进一步认识造血微环境调控造血的机理及其在病理条件下的变化具有重要意义。本文用单层液体培养方法培养小鼠骨髓基质细胞,并对其某些特性进行了初步观察。材料和方法动物:选用本院繁殖纯系LACA雄性小鼠,日龄60～70天。骨髓基质细胞培养体系:日本制R PMI1640双蒸水溶液8份,加1份经56℃灭活的小牛血清和1份马血清,外加青、链霉素各100微克/毫升,用碳酸氢钠溶液调整pH到7.2。     

小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞增殖的影响

本文应用体外液体培养方法建立小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁层,在贴壁细胞层上做粒系造血祖细胞集落(GM-CFU-C)培养,观察胎肝造血基质细胞和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞生长的影响。实验结果表明,培养1～2周的胎肝造血基质细胞贴壁层能抑制 GM-CFU-C 的集落生成,此抑制作用可被消炎痛拮抗。随贴壁培养时间的延长,胎肝造血基质细胞贴壁层转而增加 GM-CFU-C 产率。不同培养时间的骨髓造血基质细胞贴壁层均能明显地促进 GM-CFU-C 的生长。文中讨论了造血基质细胞与造血的关系以及两种来源造血基质细胞作用不同的可能原因。     

骨髓长期培养的造血基质祖细胞的辐射敏感性

骨髓的长期培养体系使造血干细胞等所有造血细胞活存数周。这是由于培养过程中所形成的贴壁细胞层起到了造血微环境作用所致。把培养的这种贴壁细胞层接种到同系小鼠的肾包膜下,造血基质祖细胞形成异位造血灶。问题是培养的基质祖细胞在转移造血微环境的能力上是否和骨髓基质祖细胞相一致?辐射敏感性是细胞的最重要的特征之一。新鲜骨髓中转移造血微环境的细胞辐射敏感性的特征已有详细介绍。     

辐射对骨髓造血微环境影响的研究进展

骨髓造血完全依赖骨髓微环境的支持和调控,早期和近期的观察均提出了辐射对骨髓造血微环境基质细胞的远期影响,并发现在某些实验条件下,辐射后基质细胞的集落刺激能力上升,生长因子(如GM-GSF)和粘附分子(如VCAM-1)表达升高。     

川芎嗪促进放射损伤小鼠骨髓微环境修复的信号传导机理研究

目的　探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓造血微环境的影响及其信号传导机理。方法小鼠经60 Coγ射线 (6 0Gy)照射后即胃饲磷酸川芎嗪注射液 ,4mg 只 ,2次 d,连续 1 3d。分别于照射后第 3 ,7,1 4天处死小鼠 ,取尺骨制备石蜡切片 ,用免疫组化方法检测骨髓组织中因子Ⅷ相关抗原和VEGF受体flk 1的表达水平 ;培养骨髓基质细胞 ,用Westernblot方法分析骨髓基质细胞黏着斑激酶(磷酸化FAK)的表达水平。结果　川芎嗪组小鼠造血恢复明显比对照组快 ,照射后第 1 4天 ,川芎嗪组骨髓组织flk 1染色吸光度值 (A)显著高于对照组 (P <0 0 5) ,其基质细胞磷酸化FAK的表达在第1 4天时已接近正常水平 ,而对照组的表达仍较弱。结论　川芎嗪可以促进骨髓内皮细胞上flk 1的表达和基质细胞中FAK的磷酸化 ,是改善放射损伤小鼠骨髓微环境、促进造血恢复的的机理之一     

胚胎期受辐射对子鼠造血基质细胞功能的影响

目的　研究胚胎期 2 0Gy137Csγ射线照射后对子鼠造血基质细胞的远期影响。方法　建立胚胎期受辐射小鼠模型 ;以细胞计数检测股骨骨髓有核细胞 (BMNCs)数 ;用免疫组化ABC法检测基质细胞粒单系集落刺激因子 (GM CSF)和干细胞因子 (SCF)的表达 ;用体外小鼠骨髓细胞培养法以粒单细胞系祖细胞集落形成单位 (CFU GM )为指标观察基质细胞对正常骨髓造血的支持功能。结果　胚胎期受辐射小鼠BMNCs数明显低于正常小鼠 (P <0 0 1) ,其骨髓基质细胞生长因子GM CSF和SCF的表达均高于正常小鼠 (P <0 0 5 ) ,同时 ,胚胎期受辐射小鼠骨髓基质细胞对正常骨髓造血的支持能力也高于正常小鼠 (P <0 0 5 )。结论　 2 0Gy137Csγ射线对发育中的小鼠胚胎的造血基质细胞产生了明显影响。     

长期培养的骨髓的造血基质祖细胞的辐射敏感性

骨髓长期培养体系可支持各类造血细胞,其中包括造血干细胞达数周之久。这一理想的结果是基于在培养中可形成起造血微环境作用的贴壁细胞层。将贴壁细胞层回植给同系小鼠肾被膜下时,造血基质祖细胞可形成异位造血灶。问题是,这种基质祖细胞是否与能转移造血微环境的原初骨髓基质细胞相同。细胞     

辐射促进体外培养骨髓干细胞的增殖

目的:造血干细胞的增殖和分化,可认为是由造血微环境调控的。本实验目的在于在体外重建干细胞和造血环境的相互作用,并可见到辐射后造血干细胞发生和在体内同样的恢复和增殖。现报告如下: 方法:骨髓细胞在含有20%马血清的Fischer培养基中培养三周。形成贴壁底层后,在其上再加1×10~7骨髓有核细胞继续培养。培养液每周更换半量,取其细胞悬液计算CFUs和CFUc。在骨髓有核细胞双层培养24小时后进行照射,剂量率每分钟250R。此外,还观察了照射后贴壁细胞集落的辐射敏感性。结果:1)以贴壁细胞集落为指标测定了造血微环境的辐射敏感性,其D_0值约为100R。2)在本培养     

来源于横纹肌的造血灶刺激因子

造血干细胞体外培养时,除必要的培养液外,需要有滋养细胞层参与。参与粒细胞团形成的物质称为造血灶刺激因子(简写CSF)。在实验研究工作中,一般采用的造血灶刺激因子有胚胎细胞条件培养液、注射伤寒副伤寒甲菌疫苗后的小鼠肺脏培养液、大鼠注射内毒素后的血清,或者用肺组织块作双层培养。我们发现肌组织可产生丰富的造血灶刺激因子,可以实际应用。     

三、免疫活性细胞——免疫活性细胞的起源和分化(一)

免疫活性细胞是指能胜任免疫作用的淋巴细胞,它们能识别异物,并能通过增殖分化产生抗体或淋巴因子,从而发挥特异性免疫反应的细胞。由于单核-巨噬细胞系,白细胞(嗜中性、嗜酸性和嗜碱性粒细胞),肥大细胞和血小板等也参加免疫反应,因此,从广义上来讲,这些细胞也属于免疫活性细胞。 (一)起源免疫活性细胞多为血细胞,巨噬细胞虽不属血细胞,但它也发生于血源性细胞。因此,免疫细胞发生与血细胞发生过程是一致的,均来自造血干细胞。哺乳类的干细胞在胚胎早期主要来自卵黄囊的血岛,然后由胚肝、胚脾和骨髓产生(图1)。人类胚胎期造血分三期:早期在卵黄囊     

川芎嗪促进急性放射损伤小鼠骨髓造血修复作用的研究

目的　探讨川芎嗪促进急性放射损伤小鼠骨髓造血修复可能的机理。方法　取 5 6只昆明小鼠 ,随机分为 3组 :正常组、对照组和川芎嗪组。对照组和川芎嗪组进行6 0 Coγ射线一次性全身均匀照射 ,总吸收剂量为 6 0Gy ,吸收剂量率为 0 5 6Gy min ,照射后分别胃饲相同剂量 (2mg 只 ,2次 d)的生理盐水和川芎嗪 ,分别于照射后第 3、7、14天计数骨髓单个核细胞 (BMNC) ,检测骨髓组织中造血组织面积和血管内皮生长因子 (VEGF)及骨髓单个核细胞PECAM 1的表达水平。结果　川芎嗪组第 3、7、14天BMNC计数及骨髓造血组织面积均显著高于对照组 (P <0 0 1) ;川芎嗪组VEGF、PECAM 1的表达水平在第 3、7天明显高于对照组 (P <0 0 1) ,而第 14天其表达降低并明显低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　川芎嗪可能通过增强骨髓中黏附分子PECAM 1和VEGF的表达 ,以促进急性放射损伤后造血细胞和造血微环境的修复     

低剂量率γ线连续照射后造血损伤与恢复的长期观察

小鼠经低剂量率(70拉德/天)γ线连续照射25天后,造血干细胞和造血祖细胞数量大幅度减少。在连续观察的一年期间,虽然骨髓有核细胞数和晚红系祖细胞(CFU-E)很快恢复到了正常水平,但造血干细胞(CFU-S)、祖细胞(BFU-E、CFU-GM)却始终处于低下状态,其水平相当于向年龄正常动物的50～70%.骨髓造血微环境也同时受到不同程度的破坏,停止照射詹半年其CFU-F只恢复至正常的70%.这些结果表明,小鼠经低剂量率γ线连续照射后,造血组织中存在着潜在的损伤,它是产生一系列辐射远后效应的重要原因。     

rhM-CSF扩增的基质细胞联合造血干/祖细胞输注对小鼠造血重建作用的初步观察

增殖期造血细胞是机体中对辐射最敏感的细胞。各种急、慢性放射病 ,都直接或间接地与造血功能的改变 ,包括因造血功能衰竭所引起的出血和感染有关 ,造血干 祖细胞移植是改善急性放射损伤所致造血功能障碍的主要方法之一。骨髓基质细胞是组成骨髓造血微环境的主要细胞成份 ,由其产生的多种细胞因子对造血细胞归巢、增殖和分化产生关键的作用。有研究报道[1 ,2 ] 基质细胞与骨髓造血干 祖细胞(ＨＳＣ)联合回输可加快骨髓造血重建 ,但由于基质细胞来源困难 ,限制了该方法的应用。笔者应用ｒｈＭ ＣＳＦ体外有效地扩增小鼠骨髓来源基质细胞 ,继…     

CD34在放射损伤小鼠骨髓细胞的表达及其意义

目的 研究辐射所致造血功能障碍时造血干／祖细胞表面CD34抗原表达的变化及其意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）及斑点杂交的方法,初步检测了昆明种小鼠受6．0Gy辐射后不同时相点时骨髓单个核细胞CD34表达量的变化,并对其可能的机理及其临床意义进行了探讨。结果 放射损伤后小鼠骨髓单个核细胞CD34表达在受照后24h即明显增高,之后一直维持在较高水平,至照后15d时仍较正常时高50％。结论 在此照射剂量时小鼠骨髓内残存的、具有造血功能的早期造血祖细胞在骨髓造血的内稳态遭到破坏后,可代偿性地迅速增加其增殖能力和细胞数量,以加速造血的恢复过程。这可能是机体对损伤导致造血功能低下时的一种代偿性增生机理。     

间充质干细胞治疗急性骨髓型放射病的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)在治疗急性骨髓型放射病中的作用,并对其机理做初步的探索。方法BALBc雌性小鼠分成MSCs组和照射对照组,MSCs组经5.5Gy60Coγ射线照射,2h内尾静脉输注C57BL6雄性小鼠的MSCs,照射对照组照射后不作处理。观察各组外周血象变化、骨髓细胞凋亡、细胞增殖周期、骨髓病理变化、骨髓造血粒系祖细胞集落(CFUGM)以及基质细胞集落(CFU-F)计数。结果与对照组相比,MSCs组的三系血细胞下降慢,最低值抬高,并且造血恢复更迅速,尤其白细胞、血小板变化更明显。骨髓细胞凋亡率和P53蛋白表达量少于对照组。照后2d,MSCs组G0G1期比值较对照组明显下降(P<0.01),G2M期比值及S期计数较对照组显著升高(P<0.01)。照后4dMSCs组胸骨骨髓增生活跃,对照组增生减低,照后20dMS-Cs组新生造血灶多于对照。CFU-GM、CFUF计数在照后初期、极期、恢复期均高于对照。结论MSCs对急性放射病治疗有良好的治疗作用,其机制可能与MSCs减少细胞凋亡、改善造血微环境、促进干细胞增殖分化有关。     

银耳制剂对小鼠骨髓造血干细胞及其放射敏感性的影响

水文研究了银耳制剂对小鼠骨髓及造血干细胞的影响。腹腔注射后早期,骨髓有核细胞数明显下降,而外用血白细胞数未见增多,药物使骨髓CFU-S和GM-CFC生成率显著提高,但对其放射敏感性的影响较小。该制剂对照射动物造血功能的恢复有明显的促进作用,揣测与其改善造血微环境有关。