病毒载体基因治疗药品的临床设计与评价思考

基因治疗是将外源性遗传物质通过多种方法转移到靶细胞中,用来治疗特定疾病。基因治疗已逐渐成为药品开发和风险投资领域的热点,或将成为未来治疗人类疾病的重要手段。然而,以病毒为载体的基因治疗相比传统药物开发存在诸多差异性。因此,本文将从病毒载体基因治疗产品的基本概念出发,结合美国食品药品监督管理局(FDA)的系列指南,通过对美国FDA批准上市的腺相关病毒载体的治疗药物Zolgensma,慢病毒载体的治疗药物Kymriah,逆转录病毒载体的治疗药物Yescarta,以及溶瘤病毒药物Imlygic的临床审评案例分析,从受试者选择,对照组与盲法,剂量与疗程,治疗方案,医学监查与随访多个维度对临床研究的设计和评价进行研究。研究结果提示以病毒载体为代表的基因治疗产品的临床试验设计需要着重考虑适合基因治疗的受试者群体、个体化的剂量选择模式、风险最小化的给药方案、以及根据不同载体特点确定的医学监察策略和长期随访时间等,以满足充分评价的需要。     

siRNA非病毒递送载体的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一种新技术。RNAi是指通过外源性或内源性的双链RNA在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解,进而引起不同水平的基因沉默。RNAi已经用于肿瘤、病毒感染、乙型肝炎等多种疾病的治疗。小干扰RNA(siRNA)是RNAi的效应分子,可在体内诱导RNAi效应。但是裸siRNA在体内容易被核酶(RNase)降解,且半衰期短,转染效率低。因此,siRNA需要借助递送载体进入细胞发挥治疗作用。病毒载体在基因治疗中有潜在的免疫原性、致突变等副作用。所以,非病毒载体成为当前的研究热点。本文对siRNA非病毒递送载体的研究现状进行了综述。     

基因治疗的载体系统及应用

目前的基因载体系统可分为病毒载体和非病毒载体。利用病毒载体介导的基因转移 ,以其高转染率和良好靶向性成为肿瘤基因治疗中应用最广泛的方法。非病毒载体由于其非免疫性和易于生产性而逐渐引起学者瞩目。基因治疗是一种用正常基因取代缺陷基因的治疗 ,目前主要用于肿瘤治疗 ,同时在基因治疗造血细胞疾病、心血管疾病、风湿性关节炎方面 ,已在动物试验中取得一定进展。1　基因载体系统本文介绍几种将外源基因引入宿主细胞的转移方法 ,这些方法可使外源基因短期 (数天 )或长期 (数星期或数年 )稳定的表达[1] 。通常可将这些方法分为病毒载…     

进行性肌营养不良的病毒载体治疗进展

进行性肌营养不良(Progressive muscular dystrophy)是一种缓慢进行性加重的以肌无力和肌萎缩为特点的遗传性肌肉病变。杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)为最常见的一种类型,是一种致死性的X-连锁遗传疾病,由编码肌营养不良蛋白的基因突变所致。该病目前无特效治疗方法,糖皮质激素被临床证实可延缓疾病进展,近年来基因治疗成为新的研究热点。本文就与基因治疗密切相关的病毒载体研究进行综述。     

慢病毒———基因转移的潜在新载体

随着对疾病分子机制认识的加深及生物技术的发展，基因治疗已成为治疗感染性疾病、遗传疾病、神经系统疾病以及肿瘤的新焦点。用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等，但是这些载体均存在不足之处，严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题，是无法高效转导非分裂期细胞，而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞，但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达，且反复应用容易引起免疫反应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞，还具有容纳外源性目的基因片段大、免疫反应小等优点，在基因治疗中具有广泛的应用前景。现以HIV-1为例，就慢病毒载体的生物学特征、慢病毒载体的构建、在基因治疗中的应用以及生物安全性等方面作一综述。     

基因治疗的基本原理和远景展望（上）

基因治疗，即用正常基因代替遗传缺陷基因，或关闭、抑制异常表达的基因，是治疗致死性遗传性疾病、癌症、艾滋病和其它后天获得性基因缺陷疾病的一种新方法。遗传性疾病是由生殖细胞异常引起的，包括癌症、艾滋病等在内的后天性疾病是由体细胞异常引起的，因而基因治疗主要包括生殖细胞基因治疗和体细胞基因治疗。生殖细胞基因治疗是将正常基因插入到生殖细胞（如精子、卵子或单细胞胚胎）中，而体细胞基因治疗是将正常基因插入到目     

借助于病毒的基因释放系统

在过去十年中，基因治疗方法已经成为新治疗技术的前沿。随着人们对载体生物学及疾病分子水平机制更深刻的了解，载体技术的巨大发展，已经显著地提高了人类基因治疗领域的水平。本文将讨论基因转移载体中借助于病毒的部分，着重阐述了目前最新建立的病毒载体，包括借助于小病毒、腺病毒、逆后病毒、斑病毒和疱疹病毒的载体及其新进展。过去的研究已表明，除了优化转基因表达的载体，减少与载体相关的免疫反应及载体产物外，还需要建立适宜的靶细胞载体转导的载体释放方法。这篇综述也将阐述一些目前先进的适宜载体给药的体内释放系统。     

多糖类材料在基因递释系统中的应用

基因治疗需要将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗目的。为了增加外源性基因的转染效率,必须借助适宜的载体,现常用的载体分为病毒载体(如腺病毒载体)与非病毒载体。与病毒载体相比,非病毒载体如多糖类载体具有来源广泛,安全性高,无毒,生物相容性好,高度可修饰性等特点,具有广泛的应用前景。文章就多糖类材料在基因递释系统中的应用进行了综述。     

一种基因治疗和基因免疫表达载体的构建

遗传物质DNA的体内导入为疾病的治疗开辟了一个新的方法，即基因治疗或基因免疫。百为了实现基因在体内的表达，一个高效，安全的真核表达是必不可少的，本研究构建了一个可用于基因治疗或基因免疫的真核表达载体pNCMV，此载体以一个来自巨细胞病毒的立即早期基因启动子作用为调控系列，并且分别引入了用于在原核和真核系统复制的，以及便于筛选的诸多元件，为了验证此载体的有效性，在CMV启动子下游插入了一段编码HBV表面抗原的基因序列，得到一个表达载体PNCMVS2-S，体外转染试验表明了此载体的能够产生具有免疫原性的表面抗原颗粒。     

聚乙烯亚胺纳米基因递送系统的研究进展

基因治疗在恶性肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、罕见病等重大难治性疾病的治疗中表现出巨大潜力。基因递送载体是基因治疗能否成功实施的关键所在,聚乙烯亚胺（PEI）是一种被广泛研究的阳离子基因递送载体,在不同细胞系和转染条件下均展现出稳定高效的基因转染效果,其中PEI25k更被视作基因转染的“黄金标准”。为解决PEI在基因递送中存在的体内转染效率低、细胞毒性大、靶向性低和负载基因溶酶体降解等问题,该文对基于PEI设计构建新型纳米递送系统用于基因治疗的研究进展进行综述,主要包括高相对分子质量线性PEI、多糖、亲水性的聚合物和右旋糖酐修饰的PEI,交联的低相对分子质量PEI,基于PEI的无机纳米递送载体以及基于PEI的药物与基因共递送载体系统,以期为进一步构建高效低毒的基因递送系统提供理论指导。     

慢病毒——基因转移的潜在新载体

随着对疾病分子机制认识的加深及生物技术的发展,基因治疗已成为治疗感染性疾病、遗传疾病、神经系统疾病以及肿瘤的新焦点。用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引…     

基因治疗的病毒性载体研究

<正> 基因治疗通常是指把遗传物质(DNA 或 RNA)引入到患者的细胞中,以达到治疗疾病的目的。1990年9月,美国科学家 Anderson 博士等人进行了首例基因治疗的临床试验。到目前为止,全世界范围内已经批准进行了400多个临床试验方案。1991年,复旦大学的薛京伦教授研究小组进行了我国第一例基因治疗临床试验。人类基因组的 DNA 序列工作框架图的     

基因治疗载体的研究现状

基因治疗是随着现代分子生物学技术的发展而诞生的一种生物医学治疗技术,主要涉及载体、目的基因和靶细胞三方面。将目的基因导入靶细胞,得到稳定高效的表达是基因治疗的关键问题,因而选择合适的载体是基因治疗成功的基础。目前应用的载体主要包括病毒载体和非病毒载体两类,此文就近几年来有关基因治疗载体的研究作一简要综述。     

肝癌靶向基因治疗载体研究进展

<正>目前对于肝癌治疗的研究已经进入分子水平,随着分子生物学的快速发展和基因工程技术的日臻成熟,肝癌的基因治疗已经迅速发展成为继手术切除、放化疗和介入治疗之后一个新的治疗模式。虽然已有许多将目的基因转入活细胞的方法,但仍存在转移效率不高、靶向性不高的问题。因此寻求一种高靶向性、高转染率的方法已成为研究肝癌靶向基因治疗的热点。在肝癌靶向基因治疗过程中,目前常用的治疗基因转移方法主要包括病毒载体和非     

导读

基因治疗与表达载体构建是本期文章收录的主题。基因治疗是指向靶细胞引入正常有功能的基因,以纠正或补偿致病基因所产生的缺陷,从而达到治疗疾病的目的。其中将目的基因导入靶细胞并使之表达是其关键环节,因此介导的表达载体的选择便显得格外重要。基因治疗载体可分为病毒性载体和非病毒性载体。病毒性载体中反转录病毒载体对淋巴细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞、肌细胞和多种肿瘤细胞均具有较高的转导效率;腺相关病毒载体被广泛用于治疗恶性肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病及器官移植     

癌基因治疗传递系统研究的新进展

基因治疗的主要目的是开发和利用高效无毒的基因载体，包裹和传递外源性基因材料到靶细胞。病毒型基因载体包括逆转录病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒相关病毒和痘病毒，基因传递效率高，但安全性差和基因载量低。非病毒载体包括阳离子聚合物、阳离子多肽和阳离子脂质体，基因传递效率比病毒载体低，但更安全、制备简单、基因包裹率高。     

阳离子聚合物在基因传递系统中的应用阳离子聚合物在基因传递系统中的应用

随着近代生物技术的发展与人类基因库的不断完善 ,各种与人类疾病相关基因逐步被揭晓 ,使人类从分子水平上认识某些疾病根源已逐步成为可能 ,为基因治疗提供了理论基础。基因治疗即ＤＮＡ给药系统 ,属于靶向给药系统 ,它不同于一般靶向药物作用于机体的某器官或某组织 ,它是细胞与分子水平上的靶向作用。基因治疗从 1980年第 1篇哺乳类基因转移公开报告[1]到 1994年 30 0余人接受临床基因治疗试验 ,整整花了 15年时间 ,1994年美国重组ＤＮＡ咨询委员会(ＲＡＣ)批准了人基因治疗方案。此后 ,许多分子疾病 (ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ)…     

新型非病毒载体聚乙烯亚胺体内应用的研究进展

聚乙烯亚胺是1995年发现的重要的真核细胞基因转染载体，在非病毒载体的研究中处于重要的地位。聚乙烯亚胺体外研究已取得显著的进展，但在体内基因治疗的应用面临着一系列局限。本文综述了非病毒载体聚丙烯亚胺体内应用的障碍和克服办法，包括聚乙烯亚胺-DNA复合物的脂质体包裹或聚乙二醇化修饰等。     

siRNA体内递送的研究现状

RNAi是用来沉默特定基因的一个强有力的研究工具,并为基因治疗策略带来新希望。目前已经用于治疗肿瘤、乙型肝炎、老年性黄斑变性等疾病。RNAi的效应分子为小分子干扰RNA（siRNA）,然而裸siRNA自身具有电负性、分子量大、极性强、半衰期短,以及容易被内源酶降解和肾小球滤过等缺陷,使其临床应用受到极大的限制。如何通过对siRNA进行化学修饰和载体构建,包括运用病毒性载体和非病毒性载体,以提高siRNA的体内稳定性,成为当前的研究重点。本文对siRNA结构的化学修饰、siRNA的载体递送以及临床试验等研究现状予以综述     

小干涉RNA导入哺乳动物体内的方法与策略研究进展

小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)是目前研究的比较活跃的一种小RNA。利用siRNA使基因沉寂从而调节目的蛋白的功能,在疾病的基因治疗中有巨大的应用潜力。该文从siRNA在哺乳动物整体水平研究的角度,对近年来siRNA的载体策略以及siRNA导入体内的方法和途径等方面的研究进展作一综述,并讨论了siRNA在体内应用的优势和可能存在的问题。