三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系,为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础.方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测其不同反应体系的扩增效果,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系.结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系:25 μLPCR反应体系中,内含10×PCR Buffer 2.5 μL,1.5 mmol/L Mg~(2+),200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L 引物,40 ng模板,1.0 U Taq DNA聚合酶.扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性60 s,72℃延伸90 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存.结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究.     

金线莲遗传多样性的ISSR分析

目的研究金线莲Anoectochilus roxburghii种质资源及其伪品的遗传多样性。方法采用ISSR方法,对24份试验材料进行PCR扩增,对扩增结果进行电泳检测。对条带进行"0"、"1"矩阵标记后,应用NTSYSpc软件,计算材料间的遗传距离,按照UPGMA法进行聚类分析,构建聚类图。结果采用ISSR技术可以鉴别出台湾金线莲、福建金线莲和公石松。地理分布和形态差异较大的福建金线莲具有相近的遗传关系。结论金线莲野生种质资源间存在较丰富的遗传多样性,为金线莲的品种选育带来巨大空间。     

柴胡ISSR—PCR反应体系的建立与优化

目的建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系；筛选适宜引物，并确定最佳退火温度。方法CTAB法提取叶片DNA，通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件，利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×Taq酶缓冲液，2．0mmol／L MgCl2，各0．15mmol／L的dNTPs，0．3μmol／L引物，1．5U Taq酶（上海生工），20ng模板DNA，2％去离子甲酰胺。在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的引物，最佳退火温度为49．9～63．6℃（因引物不同而异）。结论建立了柴胡ISSR—PCR反应体系，筛选出30条引物并确定了最佳退火温度，为应用ISSR技术鉴定柴胡种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。     

福建药用植物金线莲研究进展

福建药用植物金线莲具有丰富的营养物质,为高效安全的天然药物。本文对金线莲的化学成分、 提取分析、生物活性等方面的最新研究进展进行综述,并讨论金线莲药用植物的研究与开发。     

珍稀中草药金线莲的RAPD研究

为了鉴别金线莲的品种,探索同属植物之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,并制定正品金线莲的DNA指纹图谱,采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall．)．Lindl．、台湾开唇兰A.formosanus Hay．进行了鉴定,结果选择的7个引物对3个品种共扩增出98个位点,其中3个引物为高特异性引物。结论 RAPD技术不仅能鉴别种间差异,而且能揭示同种不同产地植物的遗传变异。     

金银花种质资源遗传多样性的ISSR 分析

目的：探讨金银花种质资源的遗传多样性,为其育种提供参考。方法：对采自金银花主产区的18 个农家品种及野生忍冬和近缘种灰毡毛忍冬共计36 个样品进行ISSR-PCR 分析,采用NTSYS-pc 软件计算金银花不同农家品种及近缘种间的Jaccard 遗传相似系数,按非加权配对算术平均法（UPGMA）建立所研究类群的系统聚类图。结果：12 条引物共扩增出129 个条带,其中多态带为114 条,占总扩增条带数的88.37%,金银花种质资源具有较丰富的遗传多样性。从聚类分析图可以看出,金银花不同样本首先聚在一起,表明是一自然类群;野生忍冬与栽培品种具有明显的遗传差异;主产区传统品系毛花系列遗传相对较稳定,而鸡爪花系列品种繁杂,遗传变异大;新品种九丰一号已独立成一稳定品种。结论：ISSR 标记可以为金银花的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。     

金线莲与内生真菌共生培养体系的建立

目的 :建立金线莲与内生真菌共生培养体系 ,为研究内生真菌促进金线莲生长机理及金线莲栽培新方法奠定基础。方法 :在金线莲组培苗基础上 ,将金线莲苗与真菌共培养 ,定期观察记录金线莲苗与真菌的生长状态 ,根据菌 苗共生特点筛选适合金线莲与内生真菌共生的培养条件。结果 :建立了金线莲与内生真菌的共生培养体系。最适共生培养基为 (mg·L^-1) :NH₄NO₃825 ,KNO₃950 ,MgSO₄185 ,肌醇 10 0 ,其它有机成分为MS培养基有机成分量的 2 /3 ,蔗糖 15 g·L^-1,其它成分同MS培养基 ,琼脂 9g·L^-1,pH 5 .8。培养条件为培养温度 2 4～ 2 5℃ ,光照 15 0lx ,光照时间 11h。结论 :在此共生培养体系中金线莲苗与所筛选出的优良菌种可形成内生菌根 ,并可长期共生 ,且真菌有促进金线莲生长发育作用。     

正交试验优化黄连ISSR反应体系的研究

目的:优化黄连(味连,Coptis chinensis Franch.)ISSR反应体系。方法:利用正交试验设计,从Mg2 、dNTP、引物、BSA4种因素3个水平进行优化。结果:确立了适合黄连ISSR分析的反应体系,即在25μL反应体系中,内含1×PCR buffer、1.5mmol/L Mg2 、200μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、40ng模板、1U TaqDNA聚合酶。结论:利用此优化反应体系能得到清晰、稳定的图谱。     

药用金线莲组培类原球茎研究初报

药用金线莲组培类原球茎研究初报福建省药材公司研究所（３５０００３）陈钢，林兰英，王建勤主题词兰科，药用植物，组织培养，＠金线莲药用金线莲为兰科植物花叶开唇兰Ａ－ｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ（Ｗａｌｌ．）Ｌｉｎｄｌ．的全草［１］。陈泽宇...     

水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的 建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据.方法 使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择.结果 在25 μL总体积中,其中包括10×PCR缓冲液2.5 μL、Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTP0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,最佳退火温度为49.7℃.结论 所建立的最佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析.     

花叶开唇兰与台湾银线兰的SSR标记技术鉴别

目的 利用SSR分子标记技术建立金线莲基原植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii及其常见混淆品台湾银线兰A.formosanus的鉴别依据.方法 根据花叶开唇兰转录组数据进行分析筛选SSR引物,通过DNA提取、PCR扩增以及引物多态性筛选等方法鉴别花叶开唇兰及台湾银线兰,从而鉴定药用金线莲真伪....     

青牛胆SRAP标记反应体系的建立与优化

目的为青牛胆的物种鉴定和遗传图谱的构建寻找一种新的途径。方法采用序列相关扩增多态性(Sequence related amplified polymorphism,SRAP)技术对青牛胆DNA进行PCR扩增,逐级优化反应参数。结果优化得到稳定重复性好的青牛胆SRAP反应体系。结论SRAP技术在分子水平上对青牛胆进行鉴定是一种行之有效的手段,为今后进一步的青牛胆物种鉴定、遗传图谱的构建等研究奠定基础。     

药用菊花种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的 分析药用菊花遗传多样性,为其种质资源评价和合理开发利用提供分子佐证.方法 用ISSR分子标记对不同采集地的31份种源(菊花29份、野菊1份、菊花脑1份)进行遗传关系分析.结果 22个引物共扩增出182个条带,其中149条具有多态性,多态位点百分率为81.87%,有效等位基因数(Ne)为1.348 1,Nei's基因多样性指数(He)为0.219 1,Shannon信息指数(I)为0.345 1.聚类分析和主坐标分析结果 相近,将31份种源大致分为野菊和菊花脑、北方药用菊花、南方药用菊花3个类群.结论 ISSR分子标记适合于药用菊花的品种鉴定和遗传多样性分析.     

珠子草遗传多样性的ISSR分析

目的对分布于我国及缅甸、老挝30个居群的珠子草进行遗传多样性分析,为珠子草遗传连锁图谱构建、种质资源保存及遗传育种等研究提供一定的理论依据。方法采用ISSR分子标记技术,对采自我国云南、广西、广东、福建、海南及缅甸、老挝共30个珠子草居群进行多态性和聚类分析。结果从60个ISSR引物中筛选出23条进行扩增,共扩增得到条带158条,其中共有条带43条,多样性条带115条,多态位点百分率(PPB)为72.78%,Nei’s基因多样性(H)为0.483 2,Shannon’s多态性信息指数(I)为0.676 0,多态性较高。结论我国珠子草居群大致分为沿海及内陆两大类,个别居群呈现明显的居群特异性,种质资源遗传多样性较高。     

青葙SRAP体系的建立和优化

目的 探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质问的亲缘关系奠定基础.方法 用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06 U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30 mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2 浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mmol/L)8水平单因素试验.在25 μL体系中加入模板DNA 20 ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测.结果 建立了适合青葙的SRAP体系,在25 μL体系中,DNA为20 ng,Taq酶浓度为0.04 U/μL,dNTP浓度为0.30 mmol/L,Primer浓度为0.30 μmol/L,Mg2 浓度为2.5 mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果.结论 本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究.为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础.     

明党参与川明参群体遗传结构及分子鉴定的ISSR分析

目的:明党参和川明参群体遗传遗传多样性、遗传结构及分子鉴定的研究。方法:对7个不同野生群体的明党参和1个栽培群体的川明参进行ISSR分析。利用POPGENE分析软件分析了群体的遗传多样性和遗传结构。结果:共检测了152个位点,总的多态性位点百分率P为90.8％,群体遗传分化值Gst为57.5％,明党参群体水平的遗传多样性(A=1.272;P=27.26％;I=0.132;H=0.087)高于川明参群体(A=1.217;P=21.7％;I=0.103;H=0.067)。结论:明党参的遗传多样性较高,遗传变异主要存在于不同群体间。川明参的遗传多样性低于明党参。聚类分析结果表明,川明参与明党参在DNA水平出现了相当的遗传分化。并通过ISSR分析筛选出了川明参一个特有的分子标记。对明党参和川明参的系统发育关系也进行了探讨。     

黄连种质资源遗传多样性的ISSR研究

目的：进行黄连Coptis chinensis种质资源的遗传多样性研究。方法：对32份黄连种质进行ISSR分析。利用TREECONW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图。结果：16条引物共得到106条扩增条带,其中有51条呈现多态性,占48.1%。遗传相似系数变化范围0.825 8~0.935 1。聚类结果显示黄连种质亲缘关系与地理分布无明显相关性,但可以看出来源于同一地区的部分黄连种质聚在一起,呈现出一定的地域性分布规律。结论：栽培黄连的遗传多样性水平较低,种质间的亲缘关系较近。     

三叶木通AFLP反应体系的建立及优化

目的 为研究三叶木通种质资源遗传多样性,建立并优化三叶木通AFLP反应体系.方法 以三叶木通叶片为材料,对影响AFLP反应体系中连接、预扩增和选择性扩增的各因素进行分析,建立优化的AFLP反应体系.结果 建立三叶木通AFLP反应优化体系:连接体系加入T4连接酶2 U,Mse I接头100 pmol,EcoR I接头10 pmol;预扩增反应总体积20 μL,加入连接产物2.0μL,E-0、M-0各100 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.875mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U;选择性扩增反应总体积20 μL,加入5 μL稀释100倍的预扩增产物,E3、M3各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.875 mmol/L,Taq DNA酶1.5 U.结论 建立适用于三叶木通种质资源遗传多样性研究的AFLP反应优化体系.     

三叶青相关序列扩增多态性-聚合酶链式反应体系的建立与优化

目的建立浙江和江西产的三叶青(Tetrastigma hemsleyanum)SRAP-PCR的反应体系和扩增程序。方法应用L9(34)正交设计方法,以三叶青基因组DNA为模板,研究了Mg2+、dNTP、引物和模板DNA 4种PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,根据梯度PCR仪引物的条带数量及清晰度选择退火温度。结果优化后的25μL反应体系包含:10×PCR buffer2.5μL,2.5mmol/L MgCl2,0.15mmol/Ld NTP,0.15μmol/L引物,1.0U Taq DNA聚合酶,50ng DNA模板。扩增程序的最佳退火温度为51℃。并筛选出8对扩增产物丰富,多态性好的引物。结论正交设计优化的三叶青SRAP反应体系,经过10份样品检验,证明该体系稳定可靠,多态性好,可用于三叶青遗传多样性分析。