联用Plackett-Burman与Box-Behnken设计控制青黛制备过程中靛玉红的生成

目的:筛选出青黛炮制过程中显著影响靛玉红生成的因素,优化最佳水平组合,确定生成靛玉红的最佳工艺。方法:以鲜叶产靛玉红的质量分数(mg·g-1)为指标,采用Plackett-Burman设计,Box-Behnken设计效应面分析等统计学方法,筛选出显著影响因素及最佳水平组合。结果:青黛的浸泡、打靛工艺确定为浸泡前不除蜡、浸泡液pH7、溶剂用量-鲜叶质量(mL∶g)15、浸泡不避光、浸泡48h、温度60℃、通气时间180min、加氨水调节打靛前pH至10.5。结论:系统考察了青黛炮制过程中各个影响因素对产生的有效成分靛玉红的影响,使工业化生产控制靛玉红的生成变为现实,为进一步研究青黛炮制原理奠定了基础。     

青黛炮制浸泡发酵环节微生物群落结构与吲哚类成分转化研究

马蓝叶的浸泡发酵是青黛炮制的重要环节,主要目的在于促进靛蓝、靛玉红前体物质的合成、内源性酶以及其他有效成分的溶出,但忽略了微生物在发酵过程的作用。该研究基于16S扩增子测序和生物信息学分析技术对青黛浸泡发酵与石灰打靛过程微生物群落结构变化进行研究,并对发酵液中的靛蓝、靛玉红、靛红、色胺酮、吲哚苷等成分进行含量测定,研究微生物与主要成分变化的关联关系。结果表明,随着发酵的进行,微生物多样性逐渐下降,尤其是打靛后微生物多样性降至最低。变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门是发酵过程主要的优势群落,且随着发酵的进行,微生物结构不断变化,变形菌门随着发酵时间增加,相对丰度逐渐降低,打靛后降至最低;厚壁菌门相对丰度升高,拟杆菌门先下降后升高。青黛中有效物质的含量也表现出了不同的规律,随着发酵的进行吲哚苷含量逐渐下降,靛蓝呈现先上升后下降趋势,靛玉红、靛红呈现先下降后上升趋势,色胺酮含量逐渐升高,这可能与微生物在不同成分的合成过程所扮演的作用有关。该研究初步阐明了微生物在浸泡发酵过程中的重要作用,为青黛炮制工艺过程的控制与高质量青黛饮片的制备提供了科学依据。     

青黛饮片亲水性改性工艺的优选研究

目的通过筛选增强青黛亲水性的改性剂来研究改性剂与青黛作用方式,并优选出最佳改性工艺,制备适宜汤剂给药的新型饮片,满足临床用药需求。方法以接触角为亲水改性效果评价指标,通过筛选出不同醇类试剂中最优的改性剂,再经过不同的干燥温度对改性青黛进行热稳定性考察,结合不同醇类试剂、靛蓝、靛玉红的微观结构来初步探讨改性剂与青黛改性作用机制以及改性效果的热稳定性。通过单因素试验考察探讨接触角与改善青黛亲水性的关系,并采用均匀设计初步确定最佳工艺。结果不同醇类试剂相较于普通青黛都有改性效果,改性过程中醇分子的-CH3和-OH贡献不同,一元醇碳链越长改性效果越好,多元醇-OH越多改性效果越好,但从试剂的适用性及安全性考虑最佳改性剂为乙醇,最优改性工艺:改性剂用量为19%的乙醇、研磨23 min。结论醇类能有效改善青黛的润湿问题,使用乙醇作为改性剂可行性好,改性工艺稳定可靠,可以成功制备出青黛饮片。     

古今青黛饮片形式的变化:靛花与粗靛质量的系统对比研究

青黛的药用历史悠久,其加工炮制过程具有特殊性及复杂性。明代以前,药用青黛取打靛形成的顶层泡沫状物的干燥品“靛花”,现代生产工艺将打靛形成沉淀物“粗靛”除杂干燥后制得青黛成品,古今青黛饮片形式已经发生了重大的转变。因此,该文采用现代分析技术对粗靛与靛花进行质量对比研究。首先基于UPLC-Q-TOF-MS进行化学成分分析,HS-SPME/GC-MS/MS方法分析气味化学成分,测定粗靛和靛花中靛蓝、靛玉红、总灰分与水溶性浸出物的含量,无机成分组成,并且观察其微观形态及表面元素组成。最后通过脂多糖和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热模型对靛花和粗靛的解热活性进行对比,发现靛花解热作用起效更快且药效更持久,而粗靛的解热作用不明显。该研究对青黛加工炮制工艺研究具有重要意义,为青黛的质量标准制定与现代炮制装备研制提供了参考。     

“蓝”类植物中的前体物质转化为“靛”的机制探讨

目的:通过查阅国内古籍和国外近代文献,介绍了"蓝"类植物的炮制品青黛从染料产业过渡到医药产业的过程;明确了生成靛的前体物质分别为靛红烷A、靛红烷B、靛红烷C和吲哚苷;阐明了前体物质转化为靛的机制;总结了多种测定前体物质含量的方法;为我国青黛炮制原理研究提供事实依据,为制靛工艺进入现代工业范畴奠定了基础。     

甘草-青黛药对配伍的增溶作用考察

目的:考察青黛-甘草药对配伍的增溶效果。方法:将甘草与青黛、甘草酸分别与靛蓝和靛玉红、柠檬酸与青黛进行配伍,采用HPLC测定各试验品中靛蓝、靛玉红的含量。结果:青黛与生、炙甘草配伍,溶液中靛蓝和靛玉红的含量均明显增多,炙甘草较生甘草约低30%;将甘草酸单铵盐直接分别与靛蓝、靛玉红按比例混合,两者含量均显著增多,约增溶4～8倍,其中2∶1为最佳比例;青黛配伍不同比例柠檬酸,溶液中靛蓝和靛玉红含量无明显变化。结论:甘草配伍青黛可达到增溶目的,甘草酸起主要作用,为中药药对配伍应用提供理论依据。     

北京地区青黛药材商品质量调查及分析

目的调查北京地区14种青黛商品,进行含量测定,并分析影响青黛质量的主要因素。方法按《中国药典》2010版方法测定青黛中靛蓝和靛玉红的含量。结果 14种青黛商品中靛蓝平均含量为2.031%,靛玉红含量为0.066 7%。结论目前市场上青黛药材商品质量存在很大差异,一些样品的靛蓝、靛玉红含量无法达到药典规定的指标。     

甘草—青黛药对配伍的增溶作用研究

目的：青黛难溶,与甘草配伍以增加其在水中的溶解度,提高药液中青黛有效成分的含量及生物利用度。 方法：将甘草与青黛、甘草酸分别与靛蓝和靛玉红、柠檬酸与青黛进行配伍,均以HPLC法分别测定各实验中靛蓝、靛玉红的含量。 结果：青黛与生、炙甘草配伍,溶液中靛蓝和靛玉红的含量均明显增多,但炙甘草较生甘草的低约30%左右;将甘草酸单铵盐直接与靛蓝、靛玉红分别按比例混合,测得两者含量均显著增多,约增溶4~8倍左右,且2:1为最佳比例;青黛配伍不同比例柠檬酸,溶液中靛蓝和靛玉红含量无明显变化。 结论：甘草配伍青黛到达了增溶的目的;甘草酸起主要作用,是以其表面活性进行增溶;同时为中药药对配伍应用找到了一定的理论依据。     

间歇式泡沫浮选分离青黛的实验研究

目的：研究泡沫浮选法用于青黛分离的间歇式操作工艺。方法：以靛蓝回收率、纯度比为评价指标，对气流速度、进料浓度、pH、进料体积等操作参数进行单因素考察，研究其对泡沫浮选效果的影响。结果：在112L／h～256L／h范围的变气速操作，浓度为0．4g／mL的粗靛浆液，不调pH值，进料体积为1000mL时，以靛蓝计纯度比为2．3左右，泡沫中靛蓝回收率达到90％左右。结论：泡沫浮选技术应用于青黛分离工艺稳定可行。     

炒沙苑子炮制工艺的研究

目的 优化炒沙苑子的炮制工艺,为建立炒沙苑子炮制规范提供理论依据。方法 以沙苑子苷、水分和外观性状作为评价指标进行综合评分,通过单因素考察和正交试验设计研究和筛选炮制过程中的主要因素为炒制温度和炒制时间,并对其影响因素进行优化,确定最佳炮制工艺。结果 炒沙苑子最佳炮制工艺为：炒药锅设置温度120℃,炒制时间10min。结论 炮制工艺参数优化后,经验证炮制工艺稳定、可行。     

Plackett-Burman设计联用星点设计-效应面法优化山药中二氧化硫残留量测定前处理工艺

目的:运用Plackett-Burman试验设计和星点设计-效应面法优选山药中二氧化硫残留量测定前处理的最佳工艺.方法:以二氧化硫提取量为指标,采用单因素试验考察提取方法、溶剂用量、振荡速度、提取温度、提取时间及NaOH溶液质量分数对二氧化硫残留量测定前处理工艺的影响.运用Plackett-Burman试验设计筛选影响显著的因素,以NaOH溶液质量分数和溶剂用量为自变量,二氧化硫提取量为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归和二项式拟合,通过效应面法选择工艺条件,并进行预测分析.结果:最佳前处理工艺为NaOH溶液质量分数0.7％,料液比1∶50.99,提取率实测值与预测值偏差3.23％.结论:优选的前处理工艺简便、预测性良好,为中药材中二氧化硫残留量测定时样品的前处理提供参考.     

基于QbD理念的三七总皂苷定量分析方法持续改进研究

该文提出基于质量源于设计(QbD)的中药分析方法持续改进策略。以三七总皂苷(PNS)5种皂苷类成分的超高效液相色谱(UPLC)定量分析方法开发为例,完成分析方法从HPLC到UPLC的转换。在UPLC开发中,采用Plackett-Burman设计和Box-Behnken设计理解关键方法参数(CMP)与关键方法属性(CMA)之间的关系,建立贝叶斯概率设计空间;优选稳健色谱条件为初始乙腈20%,等度时间10 min,梯度变化速率6%·min~(-1),分析时间17 min,采用Accuracy profile进行方法学验证。在相同的分析目标(ATP)下,从色谱条件、CMP辨识结果、CMP-CMA关系模型、系统适用性等方面对PNS的HPLC和UPLC定量分析性能的一致性进行比较,结果表明UPLC可缩短分析时间、提高关键峰对分离度、色谱系统适用性满足要求,UPLC可替代HPLC进行PNS定量分析。     

朝天罐中总黄酮的提取工艺优选

目的:优选朝天罐中总黄酮的提取工艺.方法:采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,以总黄酮得率为指标,通过正交试验考察提取时间、乙醇体积分数及料液比对总黄酮提取工艺的影响.结果:最佳提取工艺为加20倍量75％乙醇提取3次,每次1h,总黄酮得率1.83％.结论:该优选工艺简单可行,可推广使用,为朝天罐资源的充分利用提供了实验依据.     

基于质量源于设计理念的红花颗粒制备工艺及物理指纹图谱研究

目的基于质量源于设计(quality by design,Qb D)理念对红花颗粒进行制备工艺研究,并对颗粒进行质量控制。方法以红花为模型,采用湿法制粒,以颗粒的羟基红花黄色素A保留率、总黄酮保留率、颗粒成型率、松密度、振实密度、相对均齐度指数、豪斯纳比、休止角、干燥失重及吸湿率作为评价指标,单因素结合Box-Behnken设计响应面法对颗粒制备工艺参数进行研究。采用物理指纹图谱法对红花颗粒各项物理属性指标进行综合表征,建立由7个指标(松密度、振实密度、相对均齐度指数、豪斯纳比、休止角、干燥失重及吸湿率)构成的颗粒物理指纹图谱,评价不同批次颗粒的质量一致性。结果优选出红花颗粒制备工艺:药辅用量比为1∶0.8,润湿剂(95%乙醇)用量为32%,于70℃干燥120min。10批红花颗粒物理指纹图谱相似度均高于0.99。结论建立的红花颗粒制备工艺稳定可行,物理质量标准科学合理,可以为中药制剂的研发提供新的思路。     

Doehlert设计法优化紫珠中苯乙醇苷的提取工艺

目的:研究乙醇回流法提取枇杷叶紫珠中苯乙醇苷的优化工艺。方法:以料液比、提取时间、乙醇体积分数为3个考察因素,苯乙醇苷含量为指标,运用响应面分析法中的Doehlert设计法进行试验设计,并采用统计学和数学软件对试验数据进行分析,拟合出苯乙醇苷类的最优提取工艺条件。结果:优选的提取条件为以12倍量90%乙醇回流提取2次,每次2 h。结论:应用Doehlert设计的响应面优化法具有使用方便、预测性好的特点,值得推广应用。     

正交试验法优选赶黄草的提取工艺

目的:优选赶黄草的提取工艺.方法:以槲皮苷提取量为指标,采用正交试验考察乙醇用量、提取时间、提取次数和乙醇体积分数对提取工艺的影响.HPLC测定槲皮苷含量.结果:提取次数对赶黄草提取工艺的影响最大,最佳提取工艺为加10倍量80％乙醇提取2次,每次0.5h.结论:优选的提取工艺稳定可行.     

沙苑子酒蒸炮制工艺优选

目的:优选酒蒸沙苑子的炮制工艺.方法:以沙苑子苷含量、水浸出物及总黄酮含量为测定指标,采用L9(34)正交设计考察闷润时间,蒸制时间,加酒量3个因素对沙苑子酒蒸工艺的影响.结果:最佳炮制工艺为闷润1h,蒸制3h,加酒量30％.结论:优选的酒蒸沙苑子工艺稳定可行,为沙苑子质量标准控制提供试验依据.     

板蓝根切制工艺的优选及切制前后指纹图谱的变化研究

目的：优选板蓝根软化切制的工艺条件;通过比较不同产地板蓝根药材切制前后指纹图谱的差异性,客观反应润药切制对药材总体成分的影响。方法：以药材软化时加水量、润制时间和饮片切制厚度为考察因素,以水溶性浸出物为指标,采用正交设计,优选板蓝根软化切制的条件;采用反相高效液相色谱法,Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相乙腈-水,梯度洗脱,检测波长238 nm,进样量10 μL。对板蓝根粗粉和水润切制后的饮片进行HPLC测定,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行比较。结果：板蓝根软化切制的最佳工艺为：0.6倍量的水,浸润24 h,饮片厚度为2 mm;结论：建立了板蓝根药材醋酸乙酯萃取物HPLC指纹图谱。板蓝根在切制前后,指纹图谱对照谱图差异明显,切制后中等极性部分损失较多。     

龙葵中澳洲茄边碱的提取工艺

目的:研究龙葵药材中澳洲茄边碱的最佳提取工艺。方法:以澳洲茄边碱提取率为指标,采用L9(34)正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数对提取率的影响,优选出最佳的提取工艺。用高效液相法测定澳洲茄边碱的含量。结果:优选出的澳洲茄边碱最佳提取工艺为用80%乙醇20倍量回流提取2次、每次4 h。结论:提取工艺合理可行,适用于龙葵中澳洲茄边碱的提取。     

正交试验法优选蜜炙款冬花的炮制工艺

目的:优选蜜炙款冬花的炮制工艺。方法:以性状、款冬酮和醇溶性浸出物的质量分数为综合评价指标,选取闷润时间、蜂蜜用量、炒炙温度及时间为考察因素,采用L9(34)正交试验优选蜜炙款冬花的炮制工艺。结果:最佳炮制工艺条件为加蜂蜜40%,闷润4 h,100～110℃温度下炒炙6 min。结论:优选的炮制工艺稳定可行,可用于款冬花的质量标准研究。