高产绿原酸杜仲细胞悬浮培养体系优化研究

目的优化杜仲细胞悬浮培养及其产绿原酸的条件。方法研究基本培养基种类、激素质量浓度、碳源种类及质量浓度、pH值、接种量和摇床转速等因素对杜仲细胞生长和绿原酸产量的影响,建立了高产绿原酸的悬浮细胞培养体系。结果B5培养基+0.5 mg/L NAA+0.6 mg/L 6-BA、蔗糖30 g/L、初始pH 5.0~5.5、接种量20g.FW/L以及摇床转速110 r/min为杜仲细胞悬浮培养的适合条件。结论优化后的培养条件为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。     

铁皮石斛原球茎悬浮培养研究

目的　建立铁皮石斛原球茎悬浮系 ,作为人工种子繁殖体。方法　对铁皮石斛原球茎悬浮培养条件进行比较选择 ,并测定生长增殖状况。结果　悬浮培养的原球茎分散性好、整齐均一。悬浮培养的最适培养基为 1/ 4 MS+40 mg/ L Vc,p H5 .6 ,摇床转速为 5 0 r/ m in,15 d继代一次 ,黑暗培养。培养基中添加 0 .5 m g/ LABA预培养 30 d,原球茎的质量提高、同步性更好。结论　首次报道了铁皮石斛原球茎悬浮系的建立 ,为铁皮石斛大规模培养开创了新途径。     

长鞭红景天细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化长鞭红景天Rhodiola fastigiata细胞悬浮培养体系及生长条件.方法 研究基本培养基、激素、碳源、氮源等因素对长鞭红景天细胞生长和红景天苷产量的影响,建立高产红景天苷的细胞悬浮培养体系.结果 MS培养基+BA5.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L为长鞭红景天细胞悬浮培养的最适培养条件.结论 对培养条件进行优化,为利用长鞭红景天细胞大规模生产天然活性成分奠定基础,为缓解野生长鞭红景天资源的匮乏提供可行途径.     

冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究

用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬 凌草愈伤组织,并探讨 了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表 明：从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以 MS 2,4D 1 mg/L NAA 0.5 mg/L 培养基较好 ,愈 伤组织诱导率高达 96.80%。用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而 以悬浮培养 15～18 d 的单细胞为材料,接种密度为 5×103个/毫升时,进行条件培养 和 看护培养,植板率达 21.63%。本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬 凌草素细胞株时参考。     

喜树胚轴细胞悬浮培养的优化和喜树碱的积累

目的优化喜树胚轴细胞悬浮培养体系生产喜树碱。方法将由喜树种子下胚轴诱导的愈伤组织进行悬浮培养,研究了基本培养基、激素和培养条件对培养物生长的影响,测定了培养细胞生长和喜树碱积累的动态变化。结果悬浮培养细胞在M S培养基中细胞生长良好,细胞分散性和喜树碱积累优于在其他培养基中。最佳激素组合为2,4-D 0.2 m g/L NAA 0.5 m g/L 6-BA 0.5 m g/L,细胞继代周期以12 d左右为宜,悬浮细胞适合在22~26℃,120 r/m in下生长。悬浮培养细胞在第4~20天为对数生长期,细胞倍增时间为t(d)=3.92-d 1,细胞干重至第20天达到最大,为27.44 g/L。在细胞对数生长期内,喜树碱积累与细胞生长呈线形正相关性,第20天喜树碱质量分数达到最大值9.319×10-5,喜树碱产量为2.56 m g/L。结论M S基本培养基适合喜树胚轴细胞悬浮培养,细胞生长前20天内,培养体系中喜树碱积累与细胞生长呈正线形相关性。     

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征。方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量。结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基最适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中最大比生长速率0.044·d^-1,倍增时间15.8 d,最适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75％和0.0261％。结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能。     

石斛毛状根诱导及培养条件的优化

目的:建立石斛毛状根体系.方法:用发根农杆菌A4菌株诱导石斛外植体获得毛状根,并对毛状根的培养条件进行优化.结果:以蔗糖(3%)为碳源,添加水解乳蛋白(1g/L)的1/2MS培养基为毛状根的最佳生长条件.     

川贝母细胞团块悬浮培养生产生物碱的研究

目的:建立川贝母细胞团块悬浮培养体系,筛选出快速获取细胞团块增殖的最佳培养条件和激素配比。方法:以MS培养基为基本培养基,比较了接种量、激素配比和生长调节物质等对川贝母细胞团块悬浮培养的影响,并比较了细胞团块在不同培养条件下的生长情况,测定了增殖细胞团块中总生物碱含量。结果与结论:用川贝母细胞团块进行悬浮培养,其生长速度明显快于固体培养;细胞团块中总生物碱含量均高于市售川贝母和野生川贝母鳞茎;川贝母细胞团块悬浮培养最适的接种量为30 g/L,最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

霍山石斛原球茎分化影响因素的探讨

目的以霍山石斛原球茎为试材,以1/2MS为基本培养基,研究不同浓度萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(简称6-BA)、香蕉泥、土豆泥对霍山石斛原球茎分化的影响。方法试验方案为4因素3水平L_9(3~4)正交设计,数据处理软件为DPS7.05。结果 NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗长势的影响均显著,最优浓度分别为0.5mg/L、1.0 mg/L、0g/L、100g/L;NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗黄化率的影响均显著,最优浓度分别为1.0mg/L、2.0 mg/L、50g/L、100g/L;NAA和土豆泥两个因素对原球茎分化过程重量的增加影响显著,最优浓度分别为0.5mg/L、100g/L,而6-BA和香蕉泥对原球茎分化过程重量的增加影响不显著。结论霍山石斛原球茎分化培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+香蕉泥50g/L+土豆泥100g/L+食糖20g/L+琼脂6.0g/L时,分化苗长势、黄化率及增重均显著优于其他处理,分化率100%,60d增殖倍数3.13。     

稀土元素镧、铈对霍山石斛试管苗离体生长的影响

目的:研究不同浓度稀土元素镧(La)、铈(Ce)对霍山石斛试管苗生长和生理特性的影响。方法:以霍山石斛试管苗为研究对象,采用植物组织培养技术在基本培养基中添加不同浓度的稀土元素La、Ce,90 d后统计各项生长指标并对超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(CAT)活性进行测定。结果:在基本培养基中添加15 mg/L La处理组的霍山石斛与对照组长势相当,随着La浓度增加,对霍山石斛侧芽高度和侧芽增殖倍数呈现抑制作用,浓度为25 mg/L时抑制作用最强,但各处理浓度对SOD活性均有一定促进作用;添加5~25 mg/L Ce均有利于霍山石斛侧芽生长,促进作用随浓度增加逐渐增强,浓度为25 mg/L时效果最明显,且各处理浓度对SOD活性均有一定促进作用,对CAT活性先抑制后促进;当添加浓度组合分别为15 mg/L La+25 mg/L Ce或25 mg/L La+25 mg/L Ce时,有利于霍山石斛试管苗生长。结论:La和Ce对霍山石斛试管苗的生长影响较大,并影响其SOD和CAT活性。     

库页红景天的研究进展

库页红景天Rhodiola sachalinensis是一种珍贵稀有的药用植物，除了主要药效成分红景天苷和酪醇外，还含有丰富的其他苷类化合物、氨基酸、微量元素、挥发油、多糖等成分。药理研究证明其具有免疫调节、抗病毒、抗缺氧、降血糖、神经细胞保护、肝脏保护、益智、抗氧化、防辐射等多种药理学作用。由于花粉败育、生境恶劣和人工采挖，野生库页红景天已濒临灭绝。随着相关技术的快速发展，通过细胞、组织和器官的大规模培养定向生产红景天的有效成分具有广阔的前景，本文对该领域的研究进展进行了回顾、归纳和综述。     

紫草组织培养中细胞发育时期与紫草宁形成关系的研究

目的：植物细胞初生代谢是次生代谢的基础,细胞的发育状态有关,从几个方面探讨细胞发育状态与色素形成能力的关系。方法：研究了接种量对营养生长期间细胞生长的影响,比较了营养生长阶段不同生长时期细胞的色素形成能力,并检查了各发育时期的分裂指数,同时测定了紫草宁合成阶段色素合成的时间进程。结果接种量约每毫升培养基0．083－0．117g愈伤组织时,细胞生长良好,营养生长阶段细胞的发育时间和生理生化状态与色素合成的能力密切相关。细胞分裂高峰期以后,细胞合成紫草宁的能力开始增加,细胞营养生长静止期色素民能力达到饱和。色素形成时期色素合成曲线同细胞生长曲线一样呈S型。以上结果揭示,细胞首先满足自身基本的生命活动,在此基础上才能积累中间或次生长代谢物,因而细胞的发育时期与色素的形成能力密切相关,结论：本研究为紫草组织培养工业化生产紫草宁提供了基本数据。     

高山红景天生物学特性与资源培育研究进展

高山红景天属于濒危野生保护植物,为了解决其资源短缺的问题,近些年开展了大量的有关其生物学特性及资源培育的研究工作.综述高山红景天生态环境、物候学和遗传学等生物学特性和人工栽培、组织培养、细胞培养以及其他利用生物技术方法对其进行人工培育的方法,并提出了未来的发展方向.     

角膜上皮细胞体外培养的研究进展

作者从角膜上皮细胞的一般体外培养方法、培养基的选择、载体的选择和鉴别方法等方面对角膜上皮细胞培养体系进行了综述。     

南方红豆杉悬浮培养细胞团区域化及营养功能分化的研究

对南方红豆杉Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ,ｍａｉｒｅｉ细胞悬浮培养过程中的分化、细胞团区域化及营养功能分化等现象进行了研究。通过光学显微镜和电子显微镜对细胞团切片及淀粉颗粒染色从形态学上进行系统观察,发现悬浮培养细胞团从外向里呈明显的３个区域;表层细胞由成年细胞组成,中层细胞是由增殖能力旺盛的细胞组成,中心区域的细胞细胞核已消失,出现分化的管状分子。在电镜下可见胞间连丝。通过对细胞内淀粉     

高糖条件下牛视网膜毛细血管周细胞增殖与凋亡的研究

目的观察高糖对牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)增殖和凋亡的影响。方法建立牛视网膜毛细血管周细胞体外培养模型,将传至第三代的周细胞用常规培养液制作细胞悬液、计数并接种于96孔培养板(或培养瓶)中,待细胞贴壁后,分组加入含不同葡萄糖浓度(5.5、10、20、30、40mmol/L)的DMEM培养液,分别培养2～8天后收集细胞。用MTT法、流式细胞仪(FCM)检测,研究高糖对周细胞的影响。结果①高糖10mmol/L培养4、6、8天组和高糖20、30L、40(mmol/L)培养2、4、6、8天组周细胞增殖均有明显抑制作用,其抑制率以40mmol/L、8天组最高(P<0.01)。②高糖10、20、30、40mmol/L培养2～8天均能促进周细胞的凋亡,其凋亡细胞数以40mmol/L、8天组最多(P<0.01)。结论①高糖对周细胞的增殖有明显抑制作用,高糖以剂量依赖性方式使周细胞减少,随着葡萄糖浓度升高和时间延长,周细胞形态学改变更明显,高糖对周细胞增殖的抑制率也增大。②高糖能促进周细胞凋亡,其凋亡百分率随糖浓度的增高和培养时间的延长而增加。     

凹叶厚朴细胞悬浮培养的研究

目的研究凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etils.Subsp.biloba（Rehd.etwils.）Law的细胞悬浮培养。方法以凹叶厚朴茎段诱导的愈伤组织为材料,应用L9（34）正交设计研究植物生长调节剂对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响,通过单因素试验,考察初始接种量、蔗糖浓度、pH值对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响。结果植物生长调节剂6-BA是影响凹叶厚朴悬浮细胞生长的主要因素;最佳初始接种量为8ml;最佳蔗糖浓度为30g/L;最佳pH值为6.5时。结论初步建立了适合凹叶厚朴悬浮细胞培养的体系。     

猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法

目的:建立实验小型猪的冠状动脉内皮细胞体外培养方法。方法:冠状动脉血管块短暂酶消化后采用植块法进行培养。结果:植块培养2日细胞从植块中移出;培养6日植块周围细胞呈铺路石样特征,传代/纯化一次后5日细胞单层贴壁生长,融合成片。细胞因子Ⅷ免疫荧光检测内皮细胞表达阳性,纯度100%。结论:成功建立猪冠状动脉内皮细胞体外培养方法,此方法操作简单、快速,得到细胞纯度高。     

东北红豆杉细胞两液相培养生产紫杉醇的研究

反应-分离耦合技术是红豆杉细胞培养生产紫杉醇的关键技术。作者采用两液相培养技术，深入研究有机溶剂的种类、浓度、加入时间和相毒性对红豆杉细胞悬浮培养细胞生长和产生的影响。结果表明油酸和邻苯二甲酸二丁酯适合作此体系两液相培养的有机溶剂，合适的浓度为8％，加入时间为第7日～10日，与对照组相比，两液相培养的紫杉醇产量提高4倍。