丹红注射液中主要有效成分在脑缺血大鼠体内药动学研究

目的建立同时测定给予丹红注射液主要组分后脑缺血再灌注损伤大鼠血浆中丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和羟基红花黄色素A(HYSA)质量浓度的HPLC-DAD方法,为其药动学研究提供准确可靠的方法。方法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,iv丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和HYSA后,收集血样,采用Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长280 nm用于检测丹参素、原儿茶酸、香草酸和丹酚酸B,403 nm用于检测HYSA,柱温为30℃,内标法定量。结果原儿茶醛在MCAO大鼠体内迅速被代谢,3 min即可检测到其代谢产物原儿茶酸和香草酸。丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的进样浓度分别在0.35~140 mg/L(R2=0.999 8)、0.15~60 mg/L(R2=0.999 0)、0.05~20 mg/L(R2=0.998 8)、0.25~100 mg/L(R2=0.999 6)、0.075~30 mg/L(R2=0.998 5)呈良好线性关系,平均回收率均在80%~120%,日内、日间RSD均小于10%,稳定性符合体内药物分析要求。大鼠iv给予丹红注射液主要有效成分后丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的主要药动学参数:AUC0~∞分别为(1143.862±230.840)、(427.024±59.293)、(135.785±47.631)、(418.631±66.242)、(288.788±87.809)mg·min/L,t1/2z分别为(71.496±29.067)、(82.379±26.279)、(40.331±6.006)、(125.164±59.709)、(177.577±112.836)min。结论所建立的HPLC-DAD分析方法专属性强,各成分分离度好,分析时长适宜,操作简单快速,可用于MCAO大鼠体内丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B、HYSA的同时测定及复方丹红注射液的药动学研究。     

注射用丹参多酚酸大鼠体内药物代谢动力学研究

目的研究不同给药剂量注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、丹酚酸B在大鼠体内的药代动力学特征。方法注射用丹参多酚酸以低(10 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(60 mg/kg)剂量以及累积剂量(25 mg/kg,连续给药7天)对大鼠进行静脉注射给药,以氯霉素作为内标物,采用UPLC-DAD-MS/MS分析手段检测血浆中迷迭香酸、丹酚酸B的浓度,绘制药物浓度-时间曲线并计算药代动力学参数。结果不同剂量注射用丹参多酚酸给药后,迷迭香酸和丹酚酸B的药代动力学行为均符合开放性二室模型一级动力学过程。结论该方法准确度高,专属性强,分析速度快,适用于注射用丹参总酚酸中迷迭香酸、丹酚酸B在大鼠血浆中的药代动力学分析。研究结果可为注射用丹参多酚酸的体内过程研究及其临床合理使用提供参考。     

基于微透析技术结合液质联用的丹酚酸B正常和高脂血症大鼠药动学比较研究

目的探讨丹酚酸B单体在正常大鼠和高脂血症大鼠体内的药动学特征。方法复制大鼠高脂血症动物模型,建立丹酚酸B微透析样品的液质联用检测方法,研究丹酚酸B低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)ig给药的正常和高脂血症大鼠的药动学特征。采用微透析技术定时采样,微透析样品经体内回收率校正后液质联用检测,以采样时间中点对血药浓度建立药-时曲线,采用非房室模型拟合获得药动学参数。结果正常大鼠丹酚酸B低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)主要药动学参数,达峰浓度(Cmax)分别为(38.551±6.692)、(95.550±12.544)、(204.251±20.342)ng/m L,达峰时间(tmax)分别为(1.125±0.000)、(1.375±0.125)、(1.125±0.125)h,药-时曲线下面积(AUC0~t)分别为(65.995±12.367)、(178.806±33.592)、(422.836±72.344)h·ng/m L,平均滞留时间(MRT)分别为(2.002±0.061)、(1.911±0.042)、(1.955±0.053)h;高脂血症大鼠丹酚酸B低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)主要药动学参数,Cmax分别为(49.265±7.317)、(113.986±15.294)、(246.454±30.476)ng/m L,tmax分别为(1.125±0.000)、(1.125±0.125)、(1.375±0.125)h,AUC0~t分别为(96.013±15.384)、(207.192±32.676)、(486.843±89.276)h·ng/m L,MRT分别为(2.161±0.049)、(2.089±0.033)、(2.097±0.035)h。结论结果表明液质联用检测方法灵敏度高、专属性强,能够满足分析要求。高脂血症各剂量组丹酚酸B Cmax、AUC0~t均高于正常组,平均滞留时间长于正常组,有利于体内长时间滞留来发挥疗效,但差异无统计学意义。     

以丹参茎叶总酚酸为底物的丹酚酸A化学转化研究及其抗氧化活性

目的：优选丹参茎叶总酚酸为底物转化丹酚酸A的工艺参数,并进一步评价其转化前后的抗氧化活性。方法：以丹酚酸A转化率为指标,考察不同酸、pH值、反应时间、反应温度、底物浓度(以丹酚酸B计)等因素对转化率的影响,结合正交试验结果,优选丹参茎叶酚酸部位化学转化工艺,对转化前后总酚酸的抗氧化活性进行评价。结果：优选的转化工艺为：盐酸调节pH值为3,底物浓度(以丹酚酸B计)15 mg/mL,反应温度135℃,反应时间2 h,转化率可达89%,转化后其化学构成发生改变,丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛含量显著提高。丹参茎叶总酚酸转化后对DPPH·和ABTS自由基的IC₅₀值分别为(3.00±0.16)mg/mL、(16.88±0.32)mg/mL,FRAP法为(1.15±0.03)mmol FeSO₄,较转化前表现出更优的抗氧化能力。结论：采用化学转化方法可有效实现丹参茎叶总酚酸高效转化为高附加值的丹酚酸A,提升其资源利用价值。     

基于药效成分丹酚酸B和阿魏酸在大鼠血浆的药代动力学研究丹参与川芎配伍

通过研究丹参和川芎的药效成分丹酚酸B与阿魏酸在大鼠体内的药代动力学规律,进而探讨丹参和川芎配伍机制.将大鼠随机分为3组尾静脉推注给药:丹参纯化物组(以丹酚酸B计给药50 mg·kg-1)、川芎纯化物组(以阿魏酸计给药0.5mg·kg-1)、丹参与川芎纯化物联合用药组(以阿魏酸计给药0.5mg.kg-1+丹酚酸B计给药50 mg·kg-1);于不同时间点采集血样,血浆经乙酸乙酯液液萃取纯化;以氯霉素为内标,采用超高效液相色谱(UPLC)测定血浆中丹酚酸B和阿魏酸的血药浓度;利用WinNonlin 6.2软件计算动力学参数,并用SPSS 19.0统计软件进行分析.建立包括线性方程、稳定性、重复性、精密度及回收率等在内的测定大鼠血浆中阿魏酸与丹酚酸B的UPLC分析方法,所建立的样品处理和分析方法均稳定可靠;所得到的主要药代动力学参数如药时曲线下面积(AUC)、平均滞留时间(MRT)、半衰期(t1/2)等均有显著性差异.实验结果表明丹参和川芎配伍能显著影响药效成分在大鼠体内的药动学过程,2药配伍可以促进丹酚酸B分布更广泛、消除减缓、体内作用时间延长;能促使阿魏酸的血药浓度提高,体内清除加快.     

高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B等3种有效成分

 目的测定丹参中丹酚酸B，丹参素和原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量。方法采用高效液相色谱法测定。以甲醇-5％冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，以对羟基苯甲酸为内标，检测波长为281 nm，柱温30℃。结果 丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B浓度分别在3.95～47.4 μg·mL^-1(r=0.999 6)，5.14～61.68μg·mL^-1(r=0.999 9)，16.8～117.6 μg·mL^-1(r=0.999 4)范围内呈良好线性关系，丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B的平均回收率分别为101.43%(RSD=2.88%，n=6)，99.89%(RSD=3.04%，n=6)和103.43%(RSD=1.52%，n=6)。结论方法简便，分离效果好，能同时测定丹参中丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量，结果准确可靠。     

LC-MS/MS测定6种丹参主要有效成分及其脑靶向分布研究

建立测定大鼠血浆及脑匀浆中原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的LC-MS/MS分析方法。实验采用液液萃取的方法对血浆及脑匀浆样品进行处理,采用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),以0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),多反应监测(MRM)。正离子模式下检测的离子对(m/z)为297.4/254.3(隐丹参酮),295.5/249.3(丹参酮ⅡA),285.2/154.0(内标地西泮);负离子模式下检测的离子对(m/z)为154.3/153.1(原儿茶酸),137.3/108(原儿茶醛),493.0/295.2(丹酚酸A),718.0/520.0(丹酚酸B),321.4/152.3(内标氯霉素)。血浆及脑匀浆中隐丹参酮、丹参酮ⅡA、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B的线性范围分别为:0.15~1 000,0.625~1 000,0.625~1 000,0.625~1 000,1.25~1 000,2.5~1 000μg·L-1;定量下限分别为0.15,0.625,0.625,0.625,1.25,2.5μg·L-1。建立的方法稳定、灵敏,可用于研究丹参6种成分的脑及血浆药物代谢动力学特性。通过动物实验比较了6种成分之间的血脑分配系数,初步评价其跨越血脑屏障的能力。     

月安煎不同配伍对丹酚酸B提取率的影响

目的采用HPLC法测定月安煎不同配伍组方中丹酚酸B的量,比较月安煎不同配伍对丹参中丹酚酸B提取率的影响。方法色谱柱为Synergi Polar-RP 80A(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶59∶1),体积流量1.0 mL/min,检测波长286 nm,柱温30℃。利用均匀设计法设计月安煎中丹参的不同配伍组合,利用建立的HPLC法测定各组合中丹酚酸B的提取率,利用逐步回归法分析各配伍方药对丹酚酸B提取率的影响。结果丹酚酸B在0.72～5.76μg呈良好线性关系(r=0.999 8),平均回收率为95.66%,RSD为1.1%。丹参中丹酚酸B的提取率与香附、石菖蒲、丹参药量呈正比,与白术药量呈反比,而与菟丝子无关。结论复方月安煎中丹参与不同方药配伍对丹酚酸B的提取率具有一定影响,最佳配比值得深入研究。     

HPLC同时检测丹参提取物中5种水溶性和脂溶性成分含量

目的:建立丹参提取物中丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA反相HPLC同步测定新方法.方法:选用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长285 nm.结果:丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA分别在进样量范围内与峰面积线性关系良好,r＞0.999 5,仪器精密度和稳定性RSD均＜2％,成分的回收率在97％ ～ 103％(n=3).测定了其5批丹参提取物含量.结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量丹参的5种水溶性及脂溶性成分.     

pH值对丹参水提动力学过程的影响

目的:考察提取液pH值对丹参水提动力学过程的影响.方法:采用高效液相色谱法测定不同pH提取条件下丹参提取物中丹参素、原儿茶醛与丹酚酸B的含量.综合考虑丹酚酸B的提取和分解两个影响因素,建立丹酚酸B的水提动力学模型,并对不同pH值下的模型参数进行计算.结果:随着pH值的增大,提取液中丹酚酸B含量下降,丹参素与原儿茶醛含量提高;丹酚酸B的分解速率常数增大,提取速率常数减小.结论:提取参数pH值对丹参制剂中丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛等有效成分的含量及其比例控制十分重要.     

丹酚酸B对急性心肌缺血大鼠血流动力学的影响及作用分子机制研究

目的探讨丹酚酸B(SalB)对大鼠急性心肌缺血(acutemyocardialischemia,AMI)模型血流动力学的影响,并探讨SalB抗心肌缺血的分子机制。方法建立Wistar大鼠AMI模型,随机分为假手术组、模型组、SalB小剂量组、SalB大剂量组。ig给药7d后,分别测定大鼠左室血流动力学指标,包括左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)。同时应用寡核苷酸芯片观察大鼠AMI后基因表达的变化以及SalB对其影响,提取各组心肌组织总RNA,与大鼠基因表达谱芯片进行杂交。结果SalB可以降低LVEDP,升高±dp/dtmax;大鼠心肌缺血后及SalB治疗后,相关基因表达发生明显变化,主要作用靶点为细胞结构类、炎性反应类等相关基因。结论SalB可以改善AMI大鼠心脏功能,大剂量应用对左室收缩和舒张功能均有显著提高作用。运用基因芯片技术能快速检测出缺血心肌及SalB治疗后心肌基因表达谱的改变,对差异表达基因的研究将有助于进一步揭示SalB抗心肌缺血的分子机制。     

氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:体外观察氧化苦参碱(OM)抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并初步探讨其作用机制.方法:用125,250,500,1000,2000 mg·L-1OM连续作用于90％汇合度的HepG2.2.15细胞9d,以MTT比色法观察药物细胞毒性;用酶联免疫法测定细胞上清液中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定细胞上清液中HBV DNA,细胞中HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:OM对细胞内HBV DNA和cccDNA,以及细胞外HBV DNA均有抑制作用,随着浓度升高抑制作用加强,2000 mg·L-1OM对细胞内HBV DNA,cccDNA和细胞外HBV DNA的抑制率分别为64.56％,52.12％,54.25％;对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,且浓度越高、处理时间越长,抑制作用越明显;在相同条件下对HBsAg的抑制作用强于HBeAg,OM浓度为2000 mg·L-1时对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为51.59％,17.88％.结论:OM能有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制,该作用是抑制病毒核酸复制和基因表达的结果.     

丹酚酸B对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究丹酚酸B对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨可能的作用机制。方法通过夹闭双侧肾动脉50 min后再灌注,建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,腹腔给药,观察各指标的变化。结果与模型组相比,丹酚酸B能显著降低血清中肌肝、尿素氮、丙二醛、白介素-6、白介素-8、肿瘤坏死因子-α以及尿液中尿蛋白的量,增强血清中超氧化物歧化酶的活性,并且对肾缺血再灌注后肾小球和肾小管的损伤有明显的保护作用。结论丹酚酸B对大鼠肾脏缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,这种保护作用可能是通过减轻氧自由基损伤以及缓解炎症反应来实现的。     

复方六月雪对鸭乙型肝炎病毒DNA的抑制作用

目的:观察复方六月雪(CLYX)对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA的抑制作用,为研究和开发新的抗HBV药物提供实验依据。方法:采用1日龄雏鸭接种广西麻鸭DHBV强阳性血清,13天后用PCR法筛选出DHBV强阳性鸭。随机分成5组:CLYX高、中、低剂量组、模型组和阳性对照组,每组10只,各组雏鸭均灌胃给药14天。于用药前(T0)、用药7天(T7)、14天(T14)及停药后3天(P3)分别采血,采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测血清DHBVDNA的含量。结果:CLYX各剂量组用药后血清DHBV DNA含量显著降低(P<0.01),停药3天后,CLYX低剂量组和阳性对照组血清DHBV DNA有反跳现象,而CLYX中、高剂量组血清DHBV DNA没有反跳现象。CLYX抑制DHBV DNA的作用有明显的量效和时效反应关系。结论:CLYX可有效地抑制DHBV DNA的复制。     

复方六月青对鸭乙型肝炎病毒诱导肝损伤的保护作用研究

目的研究复方六月青(CLYQ)对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)诱导麻鸭肝损伤的保护作用。方法采用DHBV诱导广西麻鸭乙型肝炎病毒肝损伤模型。于用药前(T0)、用药7d(T7),14d(T14)及停药后3 d(P3)分别检测鸭血清的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织病理变化。结果用药后CLYQ中、高剂量组鸭血清ALT和AST的含量显著降低(P<0.01),并且有量效和时效关系。鸭肝脏病理学检查表明CLYQ对DHBV引起肝损伤有显著的保护作用。结论 CLYQ可有效地保护DHBV诱导麻鸭肝损伤。     

草问荆总生物碱对小鼠脑单胺氧化酶-B活性的影响

目的 研究草问荆总生物碱(TAEP)对小鼠脑单胺氧化酶—B(MAO—B)活性的影响，揭示TAEP对中枢神经系统抑制作用的机制。方法 采用紫外分光光度法测定MAO—B的活性。结果 TAEP对小鼠脑MAO—B具有明显的激活作用，并具有对抗烟肼酰胺抑制小鼠脑MAO—B活性的作用。结论 TAEP是MAO—B的激动药，有单胺代谢作用，这可能是TAEP中枢抑制作用的作用机制之一。     

白术内酯Ⅰ对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜保护作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜保护机制。方法:实验动物随机分为空白对照组、模型组、白术内酯Ⅰ组(10、20、40 mg/kg),采用脱氧胆酸钠和热盐水交替灌胃、结合饥饱失常方法制备CAG大鼠模型,治疗8周后,采用ELISA法检测白细胞介素-8(IL-8)含量、Western blot法检测热休克蛋白70(HSP 70)、核转录因子-kB(NF-kB)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:与空白对照组对比,模型组HSP70蛋白表达降低(P0.01),IL-8含量(P0.01)增加、NF-κB和COX-2蛋白表达升高(P0.01);与模型组对比,白术内酯Ⅰ高、中、低3个剂量组提高HSP70蛋白表达,降低IL-8含量、NF-κB和COX-2蛋白表达(P0.05),以白术内酯Ⅰ组(40 mg/kg)作用显著。结论:白术内酯Ⅰ对CAG大鼠的保护作用是通过抗炎作用。     

鸡血藤醇提物体外抗病毒活性研究

目的 研究鸡血藤醇提物及其不同极性溶剂萃取物的体外抗柯萨奇B3病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒以及乙型肝炎病毒的活性.方法 鸡血藤药材60%醇提物经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后浓缩制得各不同极性溶剂萃取物,观察其药物毒性、病毒引起的细胞病变效应判断药物毒性及药物抗病毒效应.结果 鸡血藤醇提物无抗柯萨奇B3病毒和呼吸道合胞病毒活性,但具有抗甲型流感病毒、乙型肝炎病毒和单纯疱疹病毒Ⅰ型活性,且抗单纯疱疹病毒Ⅰ型效果显著.醇提物经初步萃取分离,得到5个不同极性溶剂萃取物,其中乙酸乙酯萃取物和水层留余物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型活性最显著.结论 鸡血藤醇提物及其乙酸乙酯萃取物和水层留余物在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型具有明显的抑制作用,适用于抗单纯疱疹病毒Ⅰ型治疗药物的深入研究与开发.     

阿德福韦酯固体脂质纳米粒体外抗病毒药效研究

 目的研究阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)经固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticle,SLN)转运后的体外抗乙肝病毒药效。方法采用溶剂扩散法制备包载阿德福韦酯的固体脂质纳米粒(ADV-SLN),以紫外分光光度法测定药物包封率和载药量;以硬脂胺-异硫氰基荧光素标记SLN,通过荧光倒置显微镜观察HBVDNA转染人肝癌细胞HepG2.2.15对SLN的经时摄取情况;采用酶免疫测定试剂盒测定HbsAg,HBeAg指标,采用实时定量PCR试剂盒测定HBVDNA指标。结果ADV-SLN药物包封率为(16.72±2.81)%,载药量为(3.86±0.42)%。SLN可被HepG2.2.15有效摄取并具一定的时间依赖性。与游离药物相比,ADV经SLN转运后,对HepG2.2.15表达的HbsAg,HbeAg,HBVDNA的抑制作用均有明显增强。结论阿德福韦酯经SLN转运后,药物疗效增强,在抗乙肝病毒靶向治疗中体现出良好的应用前景。     

脓毒症大鼠肝损伤机制及参附注射液治疗作用研究

目的:通过大白鼠肠穿孔建立脓毒血症模型,观察大白鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并使用参附注射液治疗,探讨大白鼠脓毒血症引起肝损伤的发病机制和参附注射液的治疗作用。方法:手术造成大白鼠肠穿孔并引发脓毒血症。健康大白鼠65只,随机分为正常对照组(NS组)、实验组(CLP组)和治疗组(SF组)。NS组开腹,分离出盲肠,穿线不结扎-穿孔,然后关腹,术后腹腔注射生理盐水(20mL/kg)。CLP组开腹,分离出盲肠,结扎并穿孔,然后关腹,术后腹腔注射生理盐水(20mL/kg),然后关腹。SF组术后腹腔注射参附,然后关腹,并每隔10h追加一次给药。根据不同时间点将CLP组和SF组分为3h、6h、12h、24h四个亚组,每个亚组各5只大鼠,在4个不同手术时间点分别通过腹主动脉取血,并无菌提取肝组织标本,检测单个核细胞中NF-κB活性、TNF-α水平。结果:与NS组对比,CLP组:①单个核细胞中NF-κB活性明显增高,6h最明显(P<0.01);②血清TNF-α浓度明显升高,6h最明显(P<0.01);SF组与CLP组对比,参附注射液可显著降低NF-κB活性、TNF-α水平(P<0.01)。结论:①NF-κB和TNF-α参加了脓毒血症的发生发展,导致肝脏损伤;②参附注射液可能通过减少NF-κB以及TNF-α的释放,减轻肝脏损伤,对脓毒血症起治疗作用。