调节性T细胞在原发性干燥综合征中的异常表达

目的 观察调节性T细胞在原发性干燥综合征(pSS)患者外周血和唇腺中的表达.方法 选取23例pSS患者和15名健康对照组,通过流式细胞术检测2组之间外周血调节性T细胞的表达情况,采用免疫磁珠分选外周血CD4+T细胞,提取叉头样转录因子(Foxp3)的mRNA,进行实时荧光定量的聚合酶链反应(PCR)检测.选取23例pSS患者和5例除外pSS的原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者,通过免疫组织化学方法分析2组之间唇腺组织中CD4+和Foxp3+T细胞的表达差异.采用t检验进行统计 学处理.结果 pSS组[(5±6)％]外周血Foxp3+T细胞的表达比健康对照组[(10±5)％]明显降低(t=2.190; P=0.036); Foxp3-mRNA的含量pSS组(0.08±0.05)与健康对照组(0.09±0.03)之间差异无统计学意义(t=0.695;P＞0.05);与PBC对照组唇腺中CD4+T细胞[(11±6)％]和Foxp3+T细胞[(3.2±1.1)％]比较,pSS患者唇腺中CD4+T细胞[(30±10)％]和Foxp3+T细胞[(10.7±5.8)％]表达增加(t=4.072,2.840;P均＜0.05).结论 调节性T细胞在pSS外周血表达降低,而在唇腺中的表达并未减少,二者之间表达不一致,Foxp3参与了pSS的发病.     

英夫利西诱导活动期克罗恩病临床缓解对白细胞介素-21及其受体水平的影响

目的 探讨克罗恩病(CD)患者接受英夫利西(IFX)治疗前后IL-21及其受体(IL-21R)表达水平的变化并分析其临床意义.方法 收集2009年6月至2011年7月同济大学附属第十人民医院符合研究标准的22例CD患者,分别在第0、2、6周时给予IFX治疗.以同期16例健康体检者为健康对照组.健康对照组于体检时、CD患者于治疗开始前和治疗第10周时取静脉血,并经结肠镜检查取肠黏膜活组织检查标本.观察CD患者克罗恩病活动指数(CDAI)、ESR、C反应蛋白(CRP)的变化.使用流式细胞仪分析外周血CD4+T淋巴细胞IL-21R表达水平变化.使用荧光定量PCR方法分析肠黏膜组织内IL-21 mRNA表达水平变化.数据处理采用t检验.结果 治疗前,CD患者外周血CD4+T淋巴细胞IL-21R表达水平(12.25％±3.25％)和肠黏膜组织内IL-21mRNA表达水平(1.38±0.32)均明显高于健康对照者(分别为4.25％±1.41％和0.44±0.18),差异均有统计学意义(F=15.88、6.75,P值均＜0.05).第10周时,CD患者外周血CD4+T淋巴细胞IL-21R表达水平(8.12％±2.05％)和肠黏膜组织内IL-21 mRNA表达水平(0.77±0.24)均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(t=4.880、8.019,P值均＜0.01).治疗前,CD患者的ESR、CRP和CDAI分别为(46.8±11.4) mm/1 h、(52.4±11.5) mg/L、319±74,治疗后则分别为(23.5±9.0)mm/1 h、(11.6±4.6) mg/L、113±42,差异均有统计学意义(t=9.485、16.458、11.100,P值均＜0.05).结论 活动期CD患者经IFX治疗后IL-21表达水平下降,提示IL-21可能参与IFX诱导活动期CD临床缓解.     

miR-146a对原发性胆汁性肝硬化辅助性T细胞增殖调控作用的研究

目的 研究miR-146a对原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者T细胞增殖以及白细胞介素(IL)-2分泌的调控作用.方法 荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例PBC患者和20名健康个体外周血单个核细胞( PBMC)、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、B细胞和单核细胞内miR-146a的表达.将miR-146a表达载体和表达抑制体转染入PBC患者辅助性T细胞内,以抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激辅助性T细胞,以CCK-8法检测辅助性T细胞增殖能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养基内IL-2水平,以RT-PCR法监测辅助性T细胞内miR-146a的表达.2组间的比较采用t检验.结果 PBC患者PBMC内miR-146a的表达(0.46±0.20)较健康个体(1.00±0.26)明显降低(t=7.47,P＜0.01).PBC患者辅助性T细胞和单核细胞内miR-146a的表达(分别为(0.33±0.13,0.56±0.11)较健康个体(分别为1.00±0.14,1.00±0.11))明显降低(t=6.15,4.97;P＜0.01或P＜0.05),但PBC患者与健康个体细胞毒性T细胞(0.98±0.15,1.00±0.12,t=0.22,P＞0.05)和B细胞(0.91±0.06,1.00±0.14；t=0.97,P＞0.05)内miR-146a的表达量之间的差异无统计学意义.抗CD3和抗CD28可以诱导辅助性T细胞表达miR-146a(刺激前:1.00±0.18；刺激后:9.12±2.05；t=8.81,P＜0.01).PBC患者辅助性T细胞较健康个体具有较强的增殖能力{PBC:0.35±0.06[吸光度(A值)]；健康个体:0.26±0.04(A值)；t=2.83,P＜0.05}以及释放IL-2[ PBC (686±109)pg/ml;健康个体(512±72) pg/ml；t=2.96,P＜0.05]的能力.miR-146a可以抑制PBC患者T细胞的增殖以及分泌IL-2的能力.结论 miR-146a可以负向调控活化的PBC患者辅助性T细胞增殖以及分泌IL-2的能力.PBC的发病机制可能与患者辅助性T细胞内miR-146a表达降低、对细胞增殖的抑制作用减弱有关.     

辅助性T细胞17在人类免疫缺陷病毒合并结核感染致病中的作用

目的 观察HIV合并结核感染患者IL-17的表达情况,探讨Thl7细胞在HIV合并结核感染致病中的作用.方法 将54例确诊的HIV感染患者,分为单纯HIV感染组、HIV合并潜伏结核感染组和HIV合并结核感染组,采用全血胞内细胞因子染色方法,使用BD FACSCanto流式细胞仪检测各项指标,FACSDiva软件分析CD4+ IL-17+T淋巴细胞及CD4+ IFNΥ+T淋巴细胞表达情况,组间比较采用独立样本配对t检验.结果 3组患者CD4+T淋巴细胞计数及病毒载量无明显区别;CD4+ IL-17+T淋巴细胞表达百分比单纯HIV感染组为(1.40±1.01)％,HIV合并结核潜伏感染组为(1.29±0.86)％,两组比较差异无统计学意义(t=0.336,P＞0.05),但均显著高于合并结核感染组的(0.58±0.43)％(t=3.680,t=2.516,P＜0.05);3组患者之间CD4+IFNγ+T淋巴细胞表达百分比分别为(32.8±24.0)％、(40.3±21.9)％和(46.1±31.2)％,3组比较,差异无统计学意义(t=-0.939,t=-1.602,t=-0.646,均P＞0.05).结论 HIV合并结核感染患者出现明显的Th17应答下调,Th17细胞可能在HIV合并结核感染中起着重要的抗结核免疫保护作用.     

乙型肝炎病毒感染者不同疾病阶段外周血T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1及血清细胞因子的表达

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态)患者T淋巴细胞表面程序性死亡受体-1(PD-1)和血清细胞因子的表达差异.方法 2011年4月至2011年9月无锡市第五人民医院住院或门诊的HBV感染者105例,HBV感染后免疫耐受期、免疫清除期、非活动携带状态患者各35例,另选20名健康人作为对照组.收集研究对象的外周血,流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞表面PD-1的表达水平,ELISA检测血清IL-10、IFN-γ的表达水平.数据处理采用t检验,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 HBV感染组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(12.35±3.48)％,高于健康对照组的(4.65±1.21)％(t=9.76,P＜0.01);HBV感染组CD4+T淋巴细胞表面PD-1表达水平为(4.95±2.87)％,健康对照组为(4.08±2.14)％,两组比较差异无统计学意义(t=1.29,P＞0.05).免疫耐受组、免疫清除组、非活动携带组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平分别为(15.87±3.18)％、(7.69±3.64)％和(10.12±2.84)％,均高于健康对照组(t值分别为15.12、3.61和8.17,均P＜0.01),免疫耐受组CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平高于免疫清除组(t=10.01,P＜0.01).慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达水平与IL-10呈正相关(r=0.377,P＜0.05),与IFN-γ呈负相关(r=-0.620,P＜0.05).结论 慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达上调,PD-1水平与血清Th1细胞因子IFN-γ呈负相关,与血清Th2细胞因子IL-10呈正相关;HBV感染慢性化可能与PD-1高表达有关.     

类风湿关节炎CD4+T细胞白细胞介素-9白细胞介素-17干扰素-γ的表达及意义

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4+T细胞胞内白细胞介素(IL)-9、IL-17、干扰素-y的表达及意义.方法 取RA患者活动期25例、稳定期25例和健康人20名外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠阴选获得CD4+T细胞,通过流式细胞术(FCM)检测CD4+T细胞内IL-9、IL-17、干扰素-γ水平;应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-9、IL-17、孤核受体(RORγt)、干扰素-γ mRNA水平.采用方差分析法进行组间比较,采用Pearson相关分析法进行相关性分析.结果 免疫磁珠阴选CD4+T细胞纯度达90％以上.RA患者病情活动组IL-9、IL-17、干扰素-γ的水平显著高于病情稳定组,分别为(1.62±0.23)％与(1.15±0.24)％(P＜0.01)、(1.47±0.20)％与(1.04±0.26)％(P＜0.01)、(8.1±0.6)％与(6.9±1.0)％(P＜0.01);RA组显著高于健康对照组(P＜0.01);RA病情活动组IL-9、IL-17、RORγt、干扰素-γmRNA水平高于病情稳定组,分别为(3.0±0.6)与(1.8±0.4)(P＜0.01)、(4.2±0.9)与(2.3±0.7)(P＜0.01)、(4.1±0.7)与(2.9±0.3)(P＜0.01)、(4.0±0.8)与(2.3±0.6)(P＜0.01),RA组IL-17、RORγt、干扰素-γ mRNA表达又显著高于健康对照组(P＜0.01);RA患者胞内IL-9水平与胞内IL-17(r=0.632,P=0.001)、干扰素-γ(r=0.515,P=0.008)、DAS28 (r=-0.519,P=-0.009)、外周血ESR水平(r=-0.857,P=0.038)呈正相关,而与C反应蛋白水平(r=0.38,P=0.61)无明显相关性.结论 RA患者体内IL-9、IL-17和干扰素-γ表达增高,可能参与RA炎症.     

HBeAg导致慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2型细胞因子失衡

目的 探讨HBeAg对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)功能的调节作用. 方法 以重组的HBeAg体外刺激CHB患者和健康志愿者的PBMC,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验法检测其刺激前后Th1/Th2型细胞因子的变化情况,并观察HBeAg对CHB患者PBMC表面细胞程序性死亡受体(PD)1及其配体(PD-L)1表达的影响.两组间资料比较采用独立样本t检验; PD-1/PD-L1表达水平与HBV DNA拷贝数的相关性采用Spearman相关分析.结果 HBeAg刺激后可使HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD3+CD4+T淋巴细胞内干扰素(IFN)γ表达水平(0.17％±0.08％与0.17％±0.04％)明显低于未刺激组(0.30％±0.16％与0.32％±0.12％),t值分别为-2.382和-4.190,P值均＜0.01;培养上清液中白细胞介素(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子α含量明显高于未刺激组(HBeAg阴性CHB患者的t值分别为2.504,3.583和4.324,健康志愿者t值分别为3.542,6.246和5.273,P值均＜0.01).HBeAg刺激PBMC后,HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD14+细胞表面PD-L1表达水平分别为13.02％±4.98％和3.10％±2.47％,明显高于未刺激组的5.89％±1.56％和0.97％±0.83％,t值分别为4.815和3.454,P值均＜0.05.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CD3+CD4+T淋巴细胞内IFNγ表达水平为0.23％±0.09％,明显低于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.34％±0.15％和0.35％±0.09％(t=-3.177,P＜0.01 ; t=-4.541,P＜0.01);而IL-4表达水平为0.39％±0.16％,明显高于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.26％±0.12％和0.23％±0.12％,t值分别为3.382和4.393,P值均＜0.01.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CDB+T淋巴细胞表面PD-1和PD-L1表达水平明显高于HBeAg阴性CHB患者及健康志愿者(P值均＜ 0.01),CD14+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平显著高于HBeAg阴性患者和健康志愿者,t值分别为5.092和5.473,P值均＜0.01 ; HBeAg阴性CHB患者外周血中CD3+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平明显高于健康志愿者(t=3.214,P＜0.01).结论 HBeAg可以明显抑制Th1型细胞因子IFN γ的产生,促进Th2型细胞因子IL-6和IL-10分泌,上调外周血PBMC表面PD-1/PD-L1的表达,从而有利于形成对HBV感染的免疫耐受.因此,HBeAg可能是造成慢性HBV感染者体内免疫耐受的重要因素之一.     

L-选择素在系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+CD25~+T淋巴细胞的表达及其与Foxp3的相关性

目的了解黏附分子L-选择素(L-selectin,CD62L)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞的表达,及其与CD4+CD25+Treg细胞转录因子Foxp3的相关性。方法用流式细胞仪检测68例SLE患者外周血CD4+、CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L和Foxp3的表达。根据SLEDAI评分,68例SLE患者中活动组36例,稳定组32例;健康对照组35人。结果活动组SLE患者外周血CD4+CD25+CD62L+T淋巴细胞为(1.71±1.60)%,低于对照组的(5.87±3.03)%(P0.01)和稳定组的(4.91±1.69)%(P0.01),差异具有显著性意义;且与SLEDAI呈负相关(r=-0.695,P=0.000),与补体C3水平呈正相关(r=0.522,P=0.000)。活动组SLE患者外周血CD4+CD25+CD62L+Foxp3+T淋巴细胞为(1.06±0.47)%,低于对照组的(3.17±0.87)%(P0.01)和稳定组的(3.46±1.15)%(P0.01),差异有显著性意义。CD4+T淋巴细胞CD62L的表达与CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L和Foxp3的表达呈负相关(r=-0.689,P=0.000;r=-0.568,P=0.000);CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L的表达与Foxp3的表达呈正相关(r=0.891,P=0.000)。结论CD62L在SLE患者外周血CD4+CD25+T的低表达及与Foxp3表达密切相关,可能在SLE发病中起着重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量和Foxp3mRNA的表达水平与疾病活动性的相关性

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞的数量及其功能基因Foxp3 mRNA的表达水平与SLE疾病活动性和肾脏损伤的相关性.方法 采用四色流式细胞术以Foxp3-异硫氰酸荧光素(FITC )/CD25-藻红蛋白/CD4-多甲藻叶绿素蛋白(PerCP)/CD3-藻蓝蛋白7抗体组合检测40名健康对照者及42例SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞的数量,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达水平,并分析其与SLE患者疾病活动指数(SLEDAI)、补体C3及血清抗双链DNA(dsDNA)抗体的关系.统计学方法采用t检验和Spearman相关分析.结果 活动期SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量显著低于健康对照组[(4±3)％与(7±4)％,P＜0.05],稳定期与健康对照组差异无统计学意义(P＞0.05);活动期SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值显著低于稳定期患者[(4±3)％,(9±6)％与(5±4)％,(10±6)％,P均＜0.05];活动期SLE患者外周血Foxp3 mRNA的表达水平明显低于稳定期和对照组(P＜0.01,P＜0.05);SLE患者并发肾病组外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量及CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值显著低于SLE非肾病组(P＜0.05).相关分析显示,SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量与SLEDAI呈负相关(r=-0.5782,P＜0.05);CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞/CD4+比值与SLEDAI呈负相关(r=-0.4913,P＜0.05),与补体C3呈正相关(r=0.3687,P＜0.05);SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞数量与Foxp3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.6142,P＜0.0l).结论 SLE患者外周血CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞和Foxp3 mRNA的变化可能是导致SLE疾病发生和发展的关键因素之一,与疾病的活动性有密切关系.     

老年脓毒症休克患者CD4+CD25+调节性T细胞的变化及对预后的影响

目的 探讨老年脓毒症休克患者CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Treg)的变化及对预后的影响.方法 选择老年脓毒症休克患者75例,采用流式细胞仪检测患者外周血第1、4天和第7～10天CD4+CD25+叉头转录基因P3(FoxP3)/CD4+比例和白细胞DR抗原(HLA-DR)表达.结果 老年脓毒症休克患者平均年龄(69.2±7.5)岁,28 d病死率为53.3%.(1)休克死亡组与生存组CD4+CD25+FoxP3/CD4+比较,第1天(1.76±0.31)对(1.68±0.24)%,第4天(1.94±0.32)%对(1.82±0.28)%,差异均无统计学意义(P＞0.05),第7～10天休克死亡组(2.65±0.28)%,明显高于存活组(1.79±0.27)%,差异有统计学意义(t=11.30,P＜0.01);(2)死亡组第4天和第7～10天HLA-DR表达持续低下,显著低于生存组(t=7.29,t=16.80,均P＜0.01),并分别与CD4+CD25+FoxP3/CD4+比例呈显著负相关(r=-0.39,P＜0.05;r=-0.58,P＜0.01);(3)多元Logistic回归分析显示,脓毒症休克患者第7～10天CD4+CD25+FoxP3/CD4+(OR=3.47,95%CI:1.33～10.0)和HLA-DR(OR=0.27,95%CI:0.14～0.73)是影响其死亡的独立危险因素.结论 老年脓毒症休克患者CD4+CD25+Treg持续上升,提示机体免疫功能抑制,脓毒症休克死亡的危险性增加.     

慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定前后T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及白细胞介素-10、干扰素-γ的变化

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者应用拉米夫定抗病毒治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Treg)及IL-10、IFN-γ水平的变化.方法 选择CHB患者90例,在应用拉米夫定抗病毒治疗前及治疗后52周时,用流式细胞仪检测患者外周血T淋巴细胞亚群;在治疗前及治疗后12、24、36、52周时,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg频率,用双抗体夹心ELISA法检测IL-10、IFN-γ水平.组间及组内总体均数比较采用方差齐性的单因素方差分析或Dunnett's检验,组内治疗前后两时段均数比较采用配对t检验.结果 在90例CHB患者中,完全应答的32例患者的CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=4.055、3.267、2.328,均P＜0.05),外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.40±0.60)%、(4.99±0.59)%、(4.54±0.72)%、(3.86±0.95)%、(3.44±0.76)%;IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10逐步上升,IL-10水平逐步下降.部分应答的43例患者的CD4+T淋巴细胞及CD4+/CD8+较治疗前升高(t=3.484、2.018,均P＜0.05),CD8+T淋巴细胞较治疗前无明显差异,外周血CD4+CD25+Treg频率在0、12、24、36、52周时分别为(5.65±0.60)%、(5.23±0.63)%、(4.65±0.98)%、(4.42±0.97)%、(4.32±0.82)%,IFN-γ水平、IFN-γ/IL-10升高,IL-10水平降低.无应答的15例患者的外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+、外周血CD4+CD25+Treg频率及IFN-y水平、IFN-γ/IL-10、IL-10水平较治疗前无明显变化.结论 应用拉米夫定治疗过程中,获得满意应答的CHB患者的外周血CD4+CD25+Treg频率下降,CD4+/CD8+、IFN-γ/IL-10的比例升高.

Abstract：

Objective To explore the correlation between the efficacy of lamivudine (LAM)therapy and changes of T lymphocyte subsets,CD4+ CD25+ regulatory T lymphocytes (Treg),and levels of interleukin-10 (IL-10)and interferon-gamma (IFN-γ)in the peripheral blood of patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods Ninety CHB patients were enrolled in this study.T lymphocyte subsets in the peripheral blood were detected by flow cytometry at baseline and week 52 of LAM therapy.The frequencies of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood were detected by flow cytometry and levels of IL-10 and IFN-γ were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)at baseline,week 12,24,36 and 52.The comparisons of overall means between groups and within groups were done by analysis of variance or Dunnett's test.The comparison of means before and after LAM therapy was done by paired t test.Results In 32 complete-responders of 90 CHB patients,the proportions of CD4+ T lymphocytes,CD8+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ ratio were increased significantly after LAM therapy (t=4.055、3.267、2.328,all P＜0.05); the frequencies of CD4+CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.40±0.60)%,(4.99±0.59)%,(4.54± 0.72)%,(3.86±0.95)% and (3.44±0.76)%,respectively; the levels of IFN-γ,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while the IL-10 level was decreased after LAM therapy.In 43 partial-responders,the proportion of CD4+T lymphocytes and ratio of CD4+/CD8+ were increased after LAM therapy (t= 3.484,2.018,both P＜0.05); the proportion of CD8+ T lymphocytes was not changed significantly after therapy; the frequencies of CD4+ CD25+ Treg at baseline,week 12,24,36 and 52 were (5.65±0.60)%,(5.23±0.63)%,(4.65±0.98)%,(4.42±0.97)% and (4.32±0.82)%,respectively;IFN-γ level,IFN-γ/IL-10 ratio were increased,while IL-10 level was decreased.In 15 non-responders,the proportion of T lymphocyte subsets,the frequency of CD4+ CD25+ Treg,the levels of IFN-γ and IL-10 were not changed significantly after LAM treatment.Conclusions In CHB patients who have achieved response after LAM therapy,the frequency of CD4+ CD25+ Treg in the peripheral blood is decreased,while ratios of CD4+/CD8+ and IFN-γ/IL-10 in the peripheral blood are increased.     

肺结核患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡与细胞因子相关性及临床意义研究

目的探讨肺结核患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡与血清IL-4、IL-6、TGF-β的相关性及其临床意义。方法分离结核病患者和健康者外周血单个核细胞,标记后用流式细胞仪测定CD4+T淋巴细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附试验测定42例肺结核患者及28例健康人群血清IL-4、IL-6、TGF-β水平。结果结核病患者外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率(15.8820±4.6500)显著高于对照组(7.9389±4.16564)(t=7.491,P<0.01),血清IL-4水平(0.6219±0.78565)较对照组(0.2120±0.07367)显著升高(t=2.732,P<0.05)。肺结核患者中涂阳组IL-6水平(0.0602±0.01833)较涂阴组(0.0905±0.05023)显著升高(t=-2.296,P<0.05),TGF-β水平复治组(0.1128±0.04704)较初治组(0.0748±0.01659)显著升高(t=-3.019,P<0.05)。外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与IL-4水平呈正相关(r=0.366,P<0.05);血清IL-6的含量与TGF-β的含量呈正相关(r=0.829,P<0.01)。结论结核病患者CD4+T淋巴细胞凋亡率显著增加,可能与肺结核感染免疫有关;IL-4、IL-6和TGF-β是抗结核感染免疫的重要调节因子,其血清水平可作为监测病情活动和转归的重要指标。     

原发性胆汁性肝硬化T淋巴细胞亚群分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的T淋巴细胞亚群及共刺激信号表达的特点及临床意义.方法 以未经治疗的98例PBC患者为研究组,性别、年龄匹配的健康人30名作为对照组.以流式细胞仪技术检测外周血淋巴细胞亚群以及T淋巴细胞表面的共刺激信号CD28.结果 PBC与对照组T细胞亚群差异有统计学意义:PBC组CD4+T淋巴细胞升高,CD8+T淋巴细胞下降,CD4+/CD8+比值上升(P<0.05);CD4+CD28-T细胞和CD8+CD28-T细胞明显增加(P<0.05).结论 PBC存在免疫调节功能的异常,其中CD28的表达明显减少;CD8+CD28-的细胞群可能在PBC中有一定的免疫调节作用.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体表达与调节性T细胞相关性分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2、4、9(TLR2,TLR4,TLR9)表达及PBMC中CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)特点和影响因素.方法 采用流式细胞术检测PBC患者(52例)和健康对照者(22例)外周血PBMC中TLR2、4、9阳性细胞及Tregs比例,比较其在PBC患者和健康对照者中的差别并分析TLR与Tregs相关性.结果 PBC患者Tregs比例低于健康对照者[(1.53+1.33)vs(4.42±1.43),P＜0.0001],TLR4阳性细胞比例高于健康对照者[(36.95±3.53)vs(32.84±8.06),P=0.003];PBC患者Tregs比例与TLR9阳性细胞比例呈负相关(R2 =0.115,P=0.016),健康对照者Tregs比例与TLR2,4和TLR2,4,9联合表达阳性细胞比例呈负相关(R2=0.326,P=0.007;R2 =0.226,P=0.034).结论 PBC患者外周血PBMC中Tregs比例降低,TLR4表达升高,可能受肝硬化失代偿期腹腔感染的影响.     

LncRNA 017418及细胞因子在细粒棘球蚴rP29免疫小鼠中的表达分析

目的初步探讨长链非编码RNA 017418(lncRNA 017418)和细胞因子在细粒棘球蚴重组蛋白P29(rP29)诱导小鼠产生免疫反应中的表达。方法重组融合表达菌株pET28a-P29/BL21与LB液体培养基混合孵育,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯化rP29。36只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、佐剂组和免疫组,每组12只,免疫组将纯化的10μg rP29与等体积弗氏完全佐剂混合乳化后,腹部皮下3点注射,总剂量100μl/鼠,佐剂组注射等体积弗氏完全佐剂,对照组不作处理;首次免疫后2周,相同剂量加强免疫1次,加强免疫采用弗氏不完全佐剂。加强免疫后2周,无菌环境下制备脾细胞悬液,分离淋巴细胞;流式细胞术分选淋巴细胞亚群CD4^+T、CD8^+T和B淋巴细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA 017418、Notch1、白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10在淋巴细胞中的表达量;采用SPSS 17.0统计学软件和GraphPad Prism6.0软件对实验结果进行分析。结果经IPTG诱导表达、亲和层析法纯化,rP29蛋白相对分子质量(Mr)约为31000。qRT-PCR检测lncRNA 017418在脾淋巴细胞中的相对表达量,免疫组为2.25±0.10,高于对照组(0.81±0.05)和佐剂组(0.99±0.13)(P<0.01)。流式细胞术分析的CD4^+T、CD8^+T和B淋巴细胞所占比例分别为:对照组22.0%、9.2%和59.8%,佐剂组22.8%、7.6%和60.7%,免疫组22.1%、9.7%和60.4%。LncRNA 017418在免疫组CD4^+T淋巴细胞中的相对表达量为1.49±0.03,高于对照组(0.97±0.02)和佐剂组(1.06±0.10)(P<0.01),LncRNA 017418在免疫组CD8^+T细胞中的相对表达量为1.87±0.12,与对照组(2.06±0.14)和佐剂组(2.00±0.09)相比,差异无统计学意义(P>0.05),LncRNA 017418在免疫组B淋巴细胞中的相对表达量为1.03±0.03,与对照组(0.97±0.07)和佐剂组(1.08±0.12)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Notch1在免疫组CD4+T淋巴细胞中的相对表达量为1.92±0.04,高于对照组(1.10±0.10)和佐剂组(1.20±0.08)(P<0.01),IL-2的相对表达量为1.45±0.07,高于对照组(1.07±0.08)和佐剂组(1.09±0.11)(P<0.05);IFN-γ的相对表达量为1.51±0.11,高于对照组(0.92±0.05)和佐剂组(1.03±0.14)(P<0.01、0.05);IL-10的相对表达量为0.52±0.01,低于对照组(0.95±0.04)和佐剂组(1.05±0.10)(P<0.01);对照组和佐剂组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关系数分析lncRNA 017418与Notch1、IL-2、IFN-γ之间存在正相关关系(r=0.8244、0.5902、0.8415,均P<0.01),与IL-10之间存在负相关关系(r=-0.4432,P<0.05)。结论LncRNA 017418在细粒棘球蚴rP29诱导的小鼠中表达上调,Notch1、IL-2、IFN-γ在CD4+T淋巴细胞中表达上调,IL-10在CD4+T淋巴细胞中表达下调。     

慢性乙型肝炎患者CD3+CD56+淋巴细胞及其表型与病情的关系

目的 探讨CD3+CD56+淋巴细胞与慢性乙型肝炎(CHB)患者病情变化和转归的关系.方法 CHB患者53例,HBV携带者17例,19名健康体检者为对照组.研究对象均抽取外周血2～3ml,采用流式细胞技术测定CD3+CD56+淋巴细胞,并进一步分析CD3+CD56+淋巴细胞表面CD4,CD8、T细胞抗原受体(TCR)V α 24,TCR α/β以及TCR γ/δ的表达.结果CHB组CD3+CD56+淋巴细胞为7.4%±4.6%,慢性HBV携带者组为4.5%±3.5%,对照组为4.4%±3.7%,CHB组CD3+CD56+淋巴细胞明显升高.3组人群CD3+CD56+淋巴细胞TCR V α 24的表达,差异无统计学意义.慢性HBV携带者组CD3 CD56+细胞表达的TCR V α 24为2.8%±1.4%,明显高于对照组1.7%±1.0%.CHB组CD3+CD56+细胞CD8和TCRα/β的表达分别为61.9%±16.8%和68.1%±16.9%,对照组为49.2%±15.6%和56.4%±17.9%,CHB组均明显高于对照组.CHB组和HBV携带者组TCR γ/δ的表达,分别为29.6%±15.4%和30.5%±14.8%,CHB组和HBV携带者明显低于对照组41.4%±19.4%.CHB重度患者CD3+CD56 1细胞CD8和TCR α/β的表达分别为69.0%±14.0%和76.1%±12.9%,CHB中度患者CD8的表达为66.4%±14.9%,均明显高于CHB轻度患者51.4%±16.2%和62.1%±14.6%. 结论 慢性乙型肝炎的活动可能与CD3+CD56+淋巴细胞的CD8高表达有关.     

霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及相关细胞因子水平变化特点及意义

目的探讨霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及炎性细胞因子水平变化特点及意义。方法选取2017年1月—12月在我院治疗的霉菌性阴道炎患者182例作为观察组,同时选取女性健康志愿者110例作为对照组,检测2组受试者阴道分泌物中T淋巴细胞及细胞因子水平,同时对观察组阴道分泌物进行真菌培养。结果 182例患者中,病原菌以白色念珠菌为主,占43.41%;观察组阴道分泌物CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平分别为(52.12±10.45)%、(33.30±8.23)%和(25.10±9.22)%,明显低于对照组(P均0.05);观察组阴道分泌物IL-2、TNF-α和IFN-γ分别为(7.21±1.42)pg/ml、(17.90±4.55)pg/ml和(19.81±4.50)pg/ml,明显低于对照组(P均0.05),而IL-4和IL-10分别为(40.32±8.33)pg/ml和(25.66±4.33)pg/ml,明显高于对照组(P均0.05);复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显低于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05),而IL-4和IL-10明显高于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05)。结论霉菌性阴道炎病原体以白色念珠菌为主,Th1/Th2细胞介导的细胞免疫参与了疾病过程。     

雌激素受体α基因多态性对熊去氧胆酸治疗原发性胆汁性肝硬化疗效的影响

目的 探讨雌激素受体α(ERα)基因多态性对熊去氧胆酸(UDCA)治疗女性原发性胆汁性肝硬化(PBC)疗效的影响.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法 检测65例女性PBC患者ERα基因1号内含子PvuⅡ和XbaⅠ酶切位点多态性.患者每日均予UDCA(13～15 mg/kg,分3次口服)治疗.随访患者临床症状和血清总胆红素(TBil)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)变化情况,共随访24个月.结果 共60例患者获完整随访资料.XX和PP型患者4项指标均缓慢下降,但至随访结束时未达治疗有效标准.Xx型患者4项指标亦缓慢下降,至随访结束时达治疗有效标准.Pp、pp、xx型患者4项指标均快速下降至治疗有效标准.UDCA治疗PBC有效率75%(45/60).PP、Pp、pp型患者和XX、Xx、xx型患者在UDCA治疗有效组和无效组中的分布差异均有统计学意义(x2=12.13、P=0.003和x2=9.95、P=0.007).Pp、pp、Xx、xx型患者有效率[分别为82.61%(19/23)、80.65%(25/31)、9/14、83.33%(35/42)]高于PP、XX型者(分别为1/6和1/4).结论 PBC患者ERα基因多态性影响UDCA的疗效.     

慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义。 方法 对2012年7月至2013年6月间住院诊治的50例COPD合并肺结核患者（研究组）、50例肺结核患者（肺结核对照组）、50例COPD患者（COPD对照组）,以及50名健康志愿者（健康对照组）的细胞免疫功能进行检测。采用流式细胞仪抗体双标法检测各组人员的外周血自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）、T淋巴细胞亚群（CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋）的表达率,采用ELISA法测定患者血清中白细胞介素（IL）-1、可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）、IL-6、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。 结果 COPD对照组的NK细胞比率［（15.34±8.11）%］高于研究组［（12.37±6.96）%］和肺结核对照组［（12.53±7.14）%］（t值分别为2.20和2.08,P值均＜0.05）,研究组CD4＋ T淋巴细胞比率［（30.09±11.09）%］低于肺结核对照组［（39.80±9.42）%］（t=2.80,P〈0.01）。研究组的IL-1表达水平［（30.14±20.84）ng/L］高于COPD对照组［（23.54±9.94）ng/L］（t=2.00,P〈0.05）;COPD对照组的sIL-2R的表达水平［（114.70±49.32）pmol/L］低于研究组［（168.78±94.92）pmol/L］与肺结核对照组［（182.68±74.91）pmol/L］（t=4.07和5.12,P值均＜0.01）;在IL-6的表达上,肺结核对照组［（75.62±75.97）ng/L］高于研究组［（51.46±35.86）ng/L］与COPD对照组［（48.90±30.04）ng/L］（t值分别为2.68和2.97,P值均＜0.01）;研究组［（28.82±32.40）ng/L］与肺结核对照组［（29.90±23.79）ng/L］的IFN-γ表达均高于COPD对照组［（16.60±9.27）ng/L］（t值分别为2.89和3.15,P值均＜0.01）。 结论 与对照组相比,研究组患者存在以NK细胞、CD4＋ T淋巴细胞为主的细胞免疫功能低下,同时还存在IL-1、sIL-2R、IL-6、IFN-γ等细胞因子表达异常。     

艾滋病患者胃黏膜与外周血中人类免疫缺陷病毒感染和CD4~+T淋巴细胞数量的区室性差异的探讨

目的 探讨AIDS患者胃黏膜与外周血中HIV感染和CD4~+T淋巴细胞数量的区室性差异.方法 选取AIDS患者35例,对照组为HIV抗体阴性者10例,均进行胃镜检查并收集外周血.PCR法制备地高辛标记HIV-1长末端重复序列(LTR)、gag基因的双链cDNA探针,核酸原位杂交方法观察胃黏膜组织冰冻切片和外周血单个核细胞(PBMC)涂片H1V感染情况,免疫组织化学方法检测CD41T淋巴细胞,数据结果行t检验.结果 AIDS未治疗组胃黏膜中HIV阳性率为(1.67±1.48)%,PBMC中为(19.37±9.23)%.AIDS未治疗组与高效抗反转录病毒治疗(HAART)组各组间的胃黏膜HIV阳性率差异尤统计学意义(t=-0.996,t=-0.794,t=-0.461;P＞0.05).PBMC涂片中,治疗1～4年组HIV阳性率为(4.25±3.47)%,明显低于未治疗组的(19.37±9.23)%(t=3.000,P＜0.05).AIDS未治疗组胃黏膜单个核细胞(MMC)中CD4+T淋巴细胞阳性率为(12.53±8.14)%,PBMC中CD4+T淋巴细胞阳性率为(19.00±9.55)%,HAART1～4年组胃黏膜MMC中CD4~+T淋巴细胞计数为(37.44±18.00)%,仍低于对照组的(50.35±3.41)%(t=-4.620,P＜0.01),但PBMC中CD4+T淋巴细胞计数与对照组比较,差异无统计学意义(t=-2.094,P＞0.05).结论 胃黏膜与外周血中HIV感染和CD4~+T淋巴细胞数量存在区室性差异.