豚鼠耳蜗和内淋巴囊上皮钠通道的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)α、β、γ亚基的表达及其意义.方法 用兔抗大鼠ENaC α、β和γ亚基的多克隆抗体,采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α、β、γ-ENaC的表达模式.另用α-ENaC cDNA质粒合成探针,原位杂交法检测豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α-ENaC mRNA的表达.结果 免疫组化显示,在豚鼠耳蜗中,α-ENaC蛋白强烈表达于螺旋缘,而螺旋韧带、Corti器、Reissner膜等处的表达较弱;β-ENaC蛋白在螺旋韧带、螺旋缘和螺旋神经节、Corti器、Reissner膜等处的表达均呈弱阳性;γ-ENaC蛋白则在螺旋韧带的上半部、螺旋缘和螺旋神经节等处的表达呈强阳性,Corti器、Reissner膜等处也有阳性表达.三个亚基在血管纹中均呈阴性表达.在内淋巴囊中,α、β和γ亚基均较明显地表达于上皮细胞和上皮下纤维组织.原位杂交显示,α-ENaC mRNA除了表达于螺旋缘、螺旋韧带下部外,还表达于血管纹,而在内淋巴囊的上皮细胞和上皮下纤维组织也均呈阳性表达.结论 ENaC的各个亚基以不同的模式分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊的各个区域,形成功能性通道参与内淋巴的调节,从而保持内耳内环境的稳定.     

醛固酮对豚鼠耳蜗功能及AF9蛋白表达的调节作用

目的检测豚鼠耳蜗组织中AF9蛋白的表达情况,分析醛固酮对耳蜗功能及AF9蛋白表达影响,探讨醛固酮与AF9蛋白在内淋巴积水中的作用。方法将28只豚鼠随机分为两组,对照组及实验组(Ald组)分别腹腔注射50μl生理盐水、0.1mg/kg/d醛固酮,各5天。1月后通过听性脑干反应(ABR)检测耳蜗功能学改变;应用苏木素-伊红染色(HE)检测两组耳蜗组织形态学差异,利用免疫组织化学(IHC)检测AF9蛋白在耳蜗组织中的定位表达以及醛固酮作用前后AF9蛋白的差异表达模式。结果醛固酮作用后,ABR提示Ald组听力阈值较对照组升高(P<0.05)。HE证实Ald组豚鼠耳蜗存在内淋巴积水,IHC显示AF9蛋白在血管纹、前庭膜、螺旋缘、Corti器、螺旋神经节及前庭阶骨膜均有表达,并且Ald组耳蜗AF9蛋白在血管纹及前庭膜表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论耳蜗组织中存在与Na+代谢相关的AF9蛋白,醛固酮可能通过下调AF9蛋白表达来参与内淋巴代谢,进而影响内耳功能。     

内耳上皮钠通道、水通道蛋白与内淋巴代谢相关性的研究进展

梅尼埃病的主要病理表现为膜迷路积水,但膜迷路积水的具体作用机制尚未完全明确。已有研究证实,膜迷路积水与内耳离子、水转运通道息息相关。对内耳上皮钠通道(ENaC)、水通道蛋白(AQPs)与内淋巴代谢相关性的研究进行综述,探讨膜迷路积水形成机制,为进一步研究梅尼埃病的发病机制和治疗提供科学依据。     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(aquaporin，AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法 用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体，采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果 在耳蜗组织中，AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域，如血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节等，AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外，其余区域的表达与AQP1和AQP4相似，AQP2则仅表达于Reissner膜。在内淋巴囊组织中，AQP1、AQP3和AQP4在内淋巴囊上皮细胞和上皮下纤维组织均呈强阳性表达，只是AQP3的表达强度稍弱于AQP1和AQP4，而AQP2在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织均呈阴性表达。结论 水通道蛋白1、3、4以相似的方式广泛分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中，而AQP2则仅表达于Reissner膜，提示不同亚型的AQP可能在不同区域协同作用参与内淋巴的调节，从而保持内耳内环境的稳定。     

水通道蛋白-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊的表达

目的:检测水通道蛋白(AQP)-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法:运用免疫组织化学二步法及免疫荧光染色检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP-1,3的表达。结果:AQP-1主要表达于耳蜗螺旋韧带基底部、Corti器基底膜及鼓阶内侧上皮面及内淋巴囊上皮细胞下的基质组织中;AQP-3主要表达于血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节细胞及内淋巴囊的上皮细胞及其下的基质成分中。结论:AQP-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中存在广泛表达,但其功能仍未明确。     

水通道蛋白在内淋巴囊和肾脏的表达及加压素对水通道蛋白表达的影响

OBJECTIVE: To confirm the expression of aquaporin2,3,4 (AQP2,3,4, water channel protein) in rats' endolymphatic sac (ES) and kidney, and to investigate and compare the effects of antidiuretic hormone (AVP) and DDAVP [(deamino-Cys1,D-Arg8)-Vasopressin, V2-receptor agonist] on the expression of AQP2 in rats' ES and kidney. METHODS: Thirty healthy Swards white rats were divided into the negative control, AVP group and dDAVP group, respectively, and were cardiacally perfused. The temporal bones and kidneys were taken out, then processed and sectioned by paraffin-embedded technique. The sections of ES were labeled with fluorescent antibody by immunohistochemical method, and kidney's with avidin-biotin-peroxidase complex method (ABC). The expression of AQP-2,3,4 were confirmed in the ES of rats, and the different effects of the AVP and DDAVP onto the ES and kidney were observed. The slides used were analyzed by image-analyzer and the subsequent data were dealt with statistically. RESULTS: In the cytomembrane and cytoplasm of ES' epithelia, the constant and clear fluorescent reaction could be observed in normal control group with the first antibody of AQP2,3,4. Significant feeble fluorescent reaction of the first antibody of AQP-2 was revealed in AVP group and DDAVP group and showed much lower of gray (P < 0.01), less intensive of fluorescent (P < 0.01) under the fluorescence microscope. In the principal cell of renal collecting duct, it was on the contrary. Compared with the control group, significant stain was revealed in AVP group and DDAVP group and showed lower of gray (P < 0.05), greater density (P < 0.05), higher IOD (P < 0.05) and more stained area (P < 0.05). There is no different between the AVP group and DDAVP group in expression of AQP-2 in two sites. CONCLUSIONS: AQP-2,3,4 were expressed both in rats' epithelia of endolymphatic sac (ES) and principal cell of renal collecting duct. AVP promotes the expression of AQP2 in kidney but inhibits in ES. AVP maybe play important role to control the expression of AQP-2 in ES and kidney probably by the role of AVP-V2R-cAMP-AQP2.     

正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的检测正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白（aquaporins,AQPs）的表达,探讨其机理和意义。方法 20只健康豚鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组（膜迷路积水模型组）豚鼠腹腔注射醋酸去氨加压素,4μg&#183;kg-1&#183;d-1,共1周,诱导其内耳膜迷路积水,对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。用免疫组化方法检测两组豚鼠内耳水通道蛋白的表达,并进行比较。结果对照组豚鼠内耳中有AQP0、1、2、3、5、7、8的表达,其中AQP0仅在血管纹和螺旋神经节细胞有较弱的表达;AQP1分布于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节等;AQP2表达在血管纹、Corti’s器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中;AQP3、7、8三者的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中表达,包括Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘、椭圆囊壁、球囊壁、内淋巴囊等;AQP5则表达在Corti’s器、内外螺旋沟、螺旋神经节、螺旋韧带纤维细胞。实验组豚鼠内耳中,血管纹AQP2的表达与对照组较正常豚鼠表达增加,其它亚型AQPs的表达与对照组无明显差异。结论正常豚鼠内耳中有多种AQPs表达,膜迷路积水后豚鼠内耳中AQP2的表达增强,提示膜迷路积水可能与AQP2表达上调有关。     

水通道蛋白—2及加压素的调控——水通道蛋白—2在内淋巴囊的表达和调控

水通道蛋白－2（AQP2）是一种加压素调控的四聚体通道蛋白，是水转运的特异性通道，主要表达于肾脏集合管主细管腔铡（顶端）的细胞膜上和细菌质内。研究发现不论是人类还是大鼠的内耳组织，水通道蛋白－2仅在内淋巴囊表达，其它内耳组织则未见表达；而AQP2是肾脏尿液的重吸收，充血性心衰的水潴留等生理、病理机制的重要环节。这个发现无疑对有关内耳水代谢疾病的研究，如梅尼埃病，开辟了一个新的方向。APQ2在肾脏和肉淋巴囊的特异性表达，进一步揭示了耳肾相关的机制，也提示了要巴囊在耳肾相关中的重要地位。     

水通道蛋白2在内淋巴囊上皮和肾脏中表达的研究

目的 探讨水通道蛋白2(Aquaporins 2,AQP-2)和加压素(anti-diuretic hormone,AVP)在内耳水代谢中的作有机制.方法 15只(30耳)成年大鼠,随机分为三组,每组5只(10耳).A组(对照组):腹腔注射生理盐水;B组(AVP组):腹腔注射AVP(0.2 U/g),C组(DDAVP组):尾静脉注射V2受体促效剂去精氨酸加压素([deamino-Cys1,D-Arg8]-Vasopressin,DDAVP)1 ng/只.采用间接免疫荧光法标记内淋巴囊(endolymphatic sac,ES)中AQP-2的表达,ABC法标记肾脏中AQP-2的表达.结果 AQP-2-抗在内淋巴囊上皮胞膜胞浆显示荧光染色,B组和C组的内淋巴囊上皮胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组降低(P＜0.01);B组和C组AQP-2的表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).B组和C组肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组增强(P＜0.05),B组和C组AQP-2表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).结论 AVP促进肾脏表达AQP-2,提高肾脏重吸收的功能,同时抑制内淋巴囊上皮表达AQP-2,从而降低内淋巴囊上皮对水的重吸收;AVP对肾脏和内淋巴囊AQP-2表达的调节可能是通过AVP-V2R-cAMP-AQP2途径实现.     

水通道蛋白在内淋巴囊和肾脏的表达及加压素对水通道蛋白表达的影响

目的　从形态学上直接验证水通道蛋白 (aquaporin ,AQP) 2、3、4在内淋巴囊上皮的表达 ;观察加压素 (anti diuretichormone,AVP)及血管加压素受体 2 (V2receptor,V2 R)受体促效剂去精氨酸加压素 [(deamino Cys1,D Arg8) vasopressin ,dDAVP]对AQP2在内淋巴囊上表达的变化 ,并与肾脏比较 ,为耳肾相关提供参考。方法　成年大鼠 5只 ,经活体心脏灌注 ,取双侧颞骨 ,按石蜡包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认AQP2、3、4在内淋巴囊的表达 ;使用成年大鼠 10只观察AVP及DDAVP对AQP2在内淋巴囊和肾脏上表达的变化。结果　荧光显微镜下 ,AQP 2、3、4一抗在内淋巴囊上皮胞膜胞浆显示荧光染色 ,肾脏集合管主细胞胞膜胞浆有稳定清晰染色反应。AVP组 (B组 )和DDAVP组 (C组 )的内淋巴囊上皮胞膜胞浆AQP 2的表达明显较阴性对照组 (A组 )降低 ,表现为荧光减弱 ,图像分析示灰度明显减弱 (P <0 0 1) ;B组和C组AQP 2的表达则差异无显著性。B组和C组肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP 2的表达明显较A组增强 ,表现为棕黄色颗粒染色明显加深 ,图像分析示灰度明显减弱 (P <0 0 5 ) ,密度明显增加 (P <0 0 5 ) ,总积分密度 (totalintegrateddensity,IOD)明显提高 (P <0 0 5 ) ,面积明显增加 (P <0 0 5 ) ;B组和C     

Cochlear Health and Cochlear-implant Function

Journal of the Association for Research in Otolaryngology - The cochlear implant (CI) is widely considered to be one of the most innovative and successful neuroprosthetic treatments developed to...     

巨细胞病毒感染耳蜗上皮细胞差异表达的miRNA筛选及验证

目的 分析巨细胞病毒感染与未感染小鼠耳蜗上皮细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在巨细胞病毒感染过程中的作用及其调控机制.方法 通过构建小鼠巨细胞病毒感染的小鼠耳蜗上皮细胞模型,用高通量检测技术进行全转录组测序,检测巨细胞病毒感染72小时后耳蜗上皮细胞中miRNA的表达情况,利用生物信息学技术分析差异表达的miR...     

Lipid Lateral Mobility in Cochlear Outer Hair Cells: Regional Differences and Regulation by Cholesterol

The outer hair cell (OHC) lateral plasma membrane houses the transmembrane protein prestin, a necessary component of the yet unknown molecular mechanism(s) underlying electromotility and the exquisite sensitivity and frequency selectivity of mammalian hearing. The importance of the plasma membrane environment in modulating OHC electromotility has been substantiated by recent studies demonstrating that membrane cholesterol alters prestin activity in a manner consistent with cholesterol-induced changes in auditory function. Cholesterol is known to affect membrane material properties, and measurements of lipid lateral mobility provide a method to asses these changes in living OHCs. Using fluorescence recovery after photobleaching (FRAP), we characterized regional differences in the lateral diffusion of the lipid analog di-8-ANEPPS in OHCs and investigated whether lipid mobility, which reflects membrane fluidity, is sensitive to membrane cholesterol. FRAP experiments revealed quantitative differences in lipid lateral mobility among the apical, lateral, and basal regions of the OHC and demonstrated that diffusion in individual regions is uniquely sensitive to cholesterol manipulations. Interestingly, in the lateral region, both cholesterol depletion and loading significantly reduced the effective diffusion coefficient from control values. Thus, the fluidity of the OHC lateral plasma membrane is regulated by cholesterol levels in a non-monotonic manner, suggesting that the overall material properties of the lateral plasma membrane are optimally tuned for OHC function in the native state. These results support the idea that the cholesterol-dependent regulation of prestin function and electromotility correlates with changes in the properties of the lipid environment that surrounds and supports prestin.     

Nicotine-induced Endocytosis of Amiloride-sensitive Sodium Channels in Human Nasal Epithelium

In previous studies we developed and introduced a method to examine the transport mechanisms of ions in primary cell cultures of human nasal epithelium. In the current study, substances, especially nicotine, that influence these mechanisms are investigated. Specimens of nasal and paranasal epithelium of patients treated by endonasal surgery because of chronic sinusitis (     

人工耳蜗植入对前庭功能影响的研究进展

人工耳蜗植入术(Cochlear implant,CI)已开展三十余年,是重度、极重度感音神经性耳聋患者重获听力的重要治疗手段。CI术后儿童中前庭症状鲜有发生,而成年人CI术后出现前庭功能症状较常见,特别是老年人风险更高。绝大多数CI术后前庭功能受损的患者在经康复训练后前庭功能得到了补偿,表明术后出现的前庭症状是可恢复的。CI术后前庭功能变化的原因和影响因素众多,涉及了个体、手术、检查方法、术后康复等多个方面。结合CI术前、术后评估及术后处理对策对术后前庭功能的保留提供了参考。     

速尿对小鼠螺旋神经节神经元细胞钾、钠通道电流的影响

目的 探讨速尿对小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion neuron,SGN)细胞延迟整流钾通道和钠通道电流的影响.方法 分离并酶解生后1~6 d的15只小鼠耳蜗SGN细胞,利用全细胞膜片钳技术记录外向延迟整流钾通道和内向钠通道,并观察速尿对钾、钠离子通道的影响.结果在SGN细胞外加入速尿以后,延迟整流钾电流可被阻滞到+200~+300 pA左右,钠电流可被阻滞到速尿作用前峰电流幅值的30%左右.在速尿作用稳定后的1、5、10 min时开始洗脱速尿,延迟整流钾电流和钠电流分别可以恢复到速尿作用前峰电流幅值的98%、64%、25%和96%、76%和54%.结论 速尿可在不同程度上阻滞SGN细胞的延迟整流钾通道和钠通道,并随着速尿作用时间的延长,其对离子通道的损害越大.     

中耳手术中电钻噪声对耳蜗功能的影响

目的 探讨中耳手术中电钻噪声对耳蜗功能的影响.方法 对32例单侧慢性化脓性中耳炎患者行乳突根治及鼓室成形术,术中采用TES-1351声级计检测使用不同规格电钻钻头对手术产生的噪声,比较手术耳及非手术耳手术前、术后2周及3个月时1、2、4、6、8 kHz各频率的平均骨导听阈.结果 术中不同规格电钻钻头发出的噪声强度为93~112 dB SPL,手术耳术后2周1、2、4、6、8 kHz骨导平均听阈较术前升高(P<0.05),而在术后3个月时1、2 kHz平均骨导听阈与术前差异无统计学意义(P>0.05),但4、6、8 kHz平均骨导听阈仍高于术前水平(P<0.05).非手术耳术后2周及3个月时1、2 kHz骨导平均听阈与术前相比有所提高,但其差异无统计学意义(P>0.05);而4、6和8 kHz骨导平均听阈仍较术前升高(P<0.05).结论 中耳手术中电钻噪声对耳蜗功能有一定损伤,以高频区明显.     

L-型钙通道阻滞药尼福地平对耳蜗功能的影响

目的　探讨L -型钙通道阻滞药尼福地平对豚鼠耳蜗功能的影响。方法　 4 6只健康杂色豚鼠随机分为四组 ,分别全耳蜗灌注含 0 .15、0 .5、3μmol L尼福地平的人工外淋巴液及不含尼福地平的人工外淋巴液 (对照组 ) ,灌流前及灌流 12 0min后圆窗记录耳蜗微音电位 (cochlearmicrophonics ,CM)和耳蜗听神经复合动作电位 (com poundactionpotential,CAP)。比较各组相同时间点的CM振幅和CAP阈值。结果　人工外淋巴液组 (对照组 )灌流后CAP阈值无改变 (P >0 .0 5 ) ,其余组灌流后CAP阈值均升高 (P <0 .0 5 ) ,并随浓度增加阈移增大。灌流后各组CM振幅与 10 0dB声强度时CM振幅比较的相对振幅均下降 ,随浓度增加CM振幅下降更明显。 6只灌流 3μmol L尼福地平的豚鼠 30min后CAP阈值升高 ,CM振幅下降 ,改为单纯人工外淋巴液灌流 90min后 ,CAP阈值及CM振幅有部分恢复。结论　尼福地平对耳蜗功能有抑制作用且有剂量依赖性和部分可逆性 ,间接证明耳蜗毛细胞上存在L-型Ca2 + 通道     

耳蜗外毛细胞静纤毛束变异与听功能改变的关系

目的　探讨耳蜗毛细胞静纤毛束变异与听功能改变的关系。方法　测定 2 0只豚鼠听性脑干反应(ABR)阈和畸变产物耳声发射 (DPOAE)振幅 ,观察耳蜗毛细胞静纤毛变异形态 ,计数变异的毛细胞数目。结果　耳蜗毛细胞静纤毛束变异主要为第一排外毛细胞静纤毛转位 ,多呈 90° ,少数达 180°,两臂长短不一 ,“W”型夹角变大。在这些动物中 ,ABR反应阈变化不明显 ,DPOAE振幅显著增大。结论　豚鼠耳蜗外毛细胞静纤毛束变异具有普遍性 ,变异者伴有一定的听功能改变 ,DPOAE可作为判断变异的指标。