乙酰胆碱M1受体在红色闪烁光诱导豚鼠近视化模型中的表达

目的 探讨乙酰胆碱M1受体在红色闪烁光诱导豚鼠近视化模型中的表达及与近视发生发展的关系.方法 健康豚鼠16只随机分为对照组(正常自然光照射,放在视野开阔的笼中饲养)和近视组(红色闪烁光照射,放在完全密闭的纸箱中饲养).分别于实验前和实验8周用散瞳检影验光法测量屈光度,用A超测量眼轴长度.取豚鼠眼后极部组织,用RT-PCR法检测视网膜、巩膜和脉络膜中M1受体mRNA的表达.结果 M1受体mRNA在对照组和近视组巩膜和视网膜组织中均有表达,在脉络膜组织中无表达;近视组巩膜、视网膜组织M1受体mRNA的表达低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 M1受体在红色闪烁光诱导近视模型中的表达受抑制,与近视发生有一定的关联.     

频闪光对发育期豚鼠近视的影响

目的 探讨光污染对发育期豚鼠近视形成的影响.方法 选择健康3周龄豚鼠60只,随机分为6组(红光组、黄光组、绿光组、白光组、自然光1组、自然光2组),每组10只,分别用红、黄、绿、白色闪烁光照射,闪烁方式为亮2 s,暗2 s,交替进行,4个有色光组光照度均为800lux,均放在完全密闭的纸箱中饲养.自然光1组用正常自然光照射,放在四周密闭而上方开放的纸箱中饲养;自然光2组用正常自然光照射,放在视野开阔的笼中饲养.分别在暴露前、暴露后6周用散瞳检影验光法测量屈光度,用A超测量眼轴长度.结果 与自然光1组(0.75D)相比,暴露后6周红、黄、绿、白光组屈光度分别为-8.75 D、-6.56 D、-3.88 D、-4.84 D的,且差异有统计学意义(P＜0.01),眼轴延长.结论 闪烁光能促进豚鼠眼轴延长、诱发近视,且不同波长的单色闪烁光对近视形成的影响不同.     

碱性成纤维细胞生长因子对豚鼠透镜诱导性近视眼巩膜细胞凋亡的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对豚鼠透镜诱导近视眼(lens inducedmyopia,LIM)后极部巩膜细胞凋亡的影响及其在抑制近视形成中的作用机制。方法将4周龄的清洁级健康花色豚鼠随机分为正常对照组(双眼均不处理)、LIM 组、LIM PBS 组、LIM bFGF 低剂量(100 ng)组、LIM bFGF 中剂量(500 ng)组和LIM bFGF 高剂量(1000 ng)组,每组15只。除正常对照组外,其余各组右眼(实验眼)配戴-10 D 透镜7 d 后,将相应浓度的 bFGF 或 PBS 注入豚鼠玻璃体腔,3 d 后再次注射,配戴透镜15 d 后,取后极部巩膜组织,用电镜、终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导原位缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞术检测巩膜的凋亡细胞,应用 Ki-67免疫组织化学染色检测巩膜细胞增殖的情况。结果与正常对照组比较,LIM 组处理眼有明显近视形成[(3.57±0.78)D]和巩膜细胞的凋亡[凋亡率为(11.28±0.04)%],差异有统计学意义(P<0.05);与 LIM PBS 组比较,LIM bFGF 低剂量组、LIM bFGF 中剂量组和 LIM bFGF 高剂量组处理眼近视被抑制,凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着 bFGF 剂量加大,bFGF 抑制近视的作用增强。结论 bFGF 能通过降低后极部巩膜细胞凋亡率有效抑制豚鼠 LIM 的形成。     

高脂饮食引起小鼠皮下脂肪组织形态和功能异常的机制研究

目的探究高脂饮食对小鼠皮下脂肪组织细胞形态和功能的影响,为进一步认识皮下脂肪的特性和功能提供依据。方法将雄性C57BL/6小鼠分为高脂饮食组(HFD组)和正常饮食组(ND组),每组各10只,每4周记录小鼠体重,饲养20周取小鼠皮下脂肪组织HE染色观察细胞形态;用实时定量PCR检测皮下脂肪的脂肪功能因子(脂联素、瘦素、抵抗素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ)、炎症因子(白细胞介素-6和白细胞介素-1β)和内质网应激相关基因(激活转录因子4等)的m RNA表达量;用免疫组化法检测皮下脂肪组织中巨噬细胞标志物F4/80表达量。结果HFD组与ND组小鼠脂肪细胞面积的M (Q_R)分别为4 582.08 (5 312.65)μm~2和1 119.51 (737.67)μm~2,差异有统计学意义(P0.05)。HFD组与ND组相比,脂联素、抵抗素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的m RNA表达量均降低(P0.05),瘦素的m RNA表达量增高(P0.05)。HFD组与ND组小鼠F4/80阳性面积比例分别为(1.42±0.19)%和(4.81±0.71)%,白细胞介素-1β的m RNA表达量的M (Q_R)分别为0.371 (0.785)×10-3和0.192 (0.170)×10-3,差异均有统计学意义(P0.05)。结论高脂饮食可引起皮下脂肪细胞形态和功能异常,可能与炎症反应和内质网应激无关。     

LED红光照射对早期糖尿病大鼠视觉电生理及视网膜氧化应激的影响

目的观察LED红光照射对早期糖尿病大鼠视网膜电生理及氧化应激的影响,探讨光生物调节作用(photobiomodulation,PBM)对糖尿病大鼠视网膜病变的防治作用及其机制。方法 2014年9月—2015年10月选取健康雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组、50秒LED治疗组、240秒LED治疗组各10只,后三组采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,50秒LED治疗组及240秒LED治疗组分别给予LED照射治疗。9周后检测大鼠视网膜电图(electroretinogram,ERG)a波、b波的潜伏期和振幅,黄嘌呤氧化酶法检测视网膜锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测Mn SOD m RNA表达水平。计量资料采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 240秒LED治疗组ERG b波的潜伏期和振幅分别为(64.8±4.9)ms、(406.9±59.9)u V,与糖尿病组和50秒LED治疗组的(85.1±8.6)ms、(182.5±56.3)u V(84.9、±8.9)ms、(183.1±55.9)u V比较差异均有统计学意义(均P0.05)。240秒LED治疗组ERG a波潜伏期为(23.0±1.8)ms,与糖尿病组和50秒LED治疗组的(31.0±3.7)、(30.9±3.7)ms比较差异均有统计学意义(均P0.05)。240秒LED治疗组视网膜Mn SOD活性及其m RNA表达水平分别为(45.919±6.834)U/mg、(0.899±0.091),与糖尿病组和50秒LED治疗组的(20.045±6.786)U/mg、(0.257±0.056)、(21.096±6.798)U/mg、(0.289±0.049)比较差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 240秒LED治疗能逆转大鼠视觉电生理异常,提高其视网膜Mn SOD m RNA表达水平和Mn SOD活性,减轻视网膜氧化应激损伤,对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜早期病变具有保护作用。     

早产与足月出生近视幼儿眼球生物学测量结果比较

目的了解早产的近视幼儿眼球生物学指标的特异性,为研究早产对幼儿眼球发育和近视的影响提供依据。方法选取浙江大学医学院附属儿童医院眼科屈光门诊就诊的3～6岁近视幼儿,按照出生胎龄和出生体质量纳入早产组与足月产组,采用晶星-900眼生物测量仪测量角膜曲率、角膜厚度、前房深度和晶状体厚度等眼球生物学指标,并比较两组近视幼儿的差异。结果早产组23例46眼,足月产组38例76眼。早产组近视幼儿的前房深度为(2.92±0.40)mm,较足月产组的(3.12±0.21) mm浅(P0.05);早产组近视幼儿的晶状体厚度为(3.59±0.29) mm,较足月产组的(3.50±0.13) mm厚(P0.05);两组近视幼儿的近视度数、角膜曲率(K1/K2)、散光度数、散光轴向、角膜厚度、视网膜厚度、眼轴和阿托品化后的瞳孔直径比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 3～6岁早产近视患儿与足月出生的比较,前房较浅,晶状体较厚,未见其他特殊的眼球生物学测量差异。     

雷帕霉素对染尘大鼠肺组织胶原蛋白表达的影响

目的探讨雷帕霉素对染矽尘大鼠肺组织胶原蛋白表达的影响。方法对50只SPF级健康雄性大鼠建立肺纤维化模型,随机分为模型组和雷帕霉素组,两组均一次性气管灌注二氧化硅(250 mg/kg);同时,分别腹腔注射生理盐水和雷帕霉毒[2μg/(kg·d)],均隔天给药,持续28 d,分别于第7、14、28、60、90天,用酶联免疫法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)含量,用Massson染色观察大鼠肺组织病理组织学变化,用q RT-PCR法测定肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原m RNA含量。结果大鼠肺组织Massson染色结果显示,雷帕霉素组大鼠肺纤维化较模型组严重。随着时间的延长,模型组大鼠血清中TNF-α和TGF-β逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05)。雷帕霉素组大鼠血清中TNF-α和TGF-β随着时间的延长而升高,在60 d时降低,90 d时再次升高;除60 d外,其他时间均高于模型组(P0.05)。随着时间的延长,模型组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA逐渐升高,且差异有统计学意义(P0.05)。雷帕霉素组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA表达随各时间点呈降低-升高波动趋势,其中Ⅰ型胶原m RNA表达在除60 d外的各时间点均高于模型组,Ⅲ型胶原m RNA表达在7、28、90 d高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论雷帕霉素后期给药可能通过抑制m TOR信号通路而加重染尘大鼠的肺组织纤维化程度。     

Nd:YAG激光对大鼠视网膜组织caspase-9的影响

目的观察Nd:YAG激光致Long Evans大鼠视网膜损伤对其caspase-9 mRNA水平、蛋白表达水平和酶活性的影响。方法建造大鼠视网膜Nd:YAG激光照射损伤模型,眼底照相观察大鼠视网膜损伤,于照后即刻、3h、6h、12h、24h、3天和7天不同时相点,检测受损视网膜的caspase-9的mRNA和蛋白表达以及酶活性的变化,并与假照射组进行比较。结果 Nd:YAG激光照后LE大鼠视网膜组织中caspase-9 mRNA表达无明显变化,但在照后6h和12h,活化的caspase-9蛋白表达和caspase-9酶活性均明显升高(P0.01)。结论 Nd:YAG激光照射导致LE大鼠视网膜caspase-9活化。     

Mas1受体在人胎盘中的表达及在子痫前期患者胎盘滋养层细胞中的生物学功能

目的研究不同妊娠时期Mas1受体在健康孕妇胎盘中的表达变化, 分析Mas1受体在子痫前期(PE)患者胎盘中的表达水平, 及在滋养层细胞中的生物学功能。方法收集孕早期、孕中期、孕晚期正常孕妇胎盘绒毛组织, 并从孕早期绒毛组织中分离培养人滋养层干细胞, 通过免疫荧光化学和实时荧光定量PCR检测不同妊娠时期胎盘中Mas1受体表达情况;采用病例对照研究方法, 选择足孕PE患者作为病例组, 同期健康足孕产妇为对照组, 收集两组产妇胎盘绒毛组织, 利用免疫荧光化学和免疫蛋白印迹, 研究PE时Mas1受体表达变化;采用HTR8/Svneo和BeWo细胞, Mas1受体激动剂和阻断剂干预, 通过CCK8增殖实验和划痕实验检测Mas1受体对滋养层细胞增殖和迁移功能的影响。结果孕早期纳入8例, 孕中期纳入7例, 孕晚期纳入6例, 正常胎盘绒毛组织中Mas1受体主要表达于人滋养层干细胞膜和胞质, 且绒毛组织中Mas1受体m RNA孕晚期表达量明显高于孕中期;病例组纳入24例, 对照组纳入12例。与对照组相比病例组胎盘绒毛中Mas1受体表达显著降低;激活/抑制Mas1受体对HTR8/Svneo细胞和BeWo细...     

十溴联苯醚对C57BL/6小鼠组织中脂联素和PPARγ的影响

目的研究十溴联苯醚(BDE-209)对小鼠组织中脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的影响。方法 24只成年雄性C57/BL小鼠随机分为BDE-209染毒处理高(800 mg/kgbw)、中(600 mg/kgbw)、低(300 mg/kgbw)剂量组和未染毒的对照组,6周后采用反转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法测定小鼠肝、肺和脂肪中脂联素和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果 4组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重差异均有统计学意义(P0.05),其中高剂量组小鼠肺质量、脂肪质量和体重增重均大于对照组和低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪脂联素mRNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪脂联素m RNA表达量均高于对照组,但低于低剂量组(P0.05)。4组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量差异均有统计学意义(P0.05);其中高剂量组小鼠肝、肺和脂肪PPARγm RNA和蛋白表达量均高于对照组和低剂量组(P0.05)。结论 BDE-209可增加小鼠肺质量、脂肪质量和体重,可能与BDE-209激活了PPARγ受体,导致脂肪细胞异常分化和脂联素含量下降有关。     

长链非编码RNA lnc-GCLC-1稳定沉默的肝细胞株L02的构建与验证

目的利用慢病毒载体构建长链非编码RNA lnc-GCLC-1沉默的稳转L02肝细胞株,为研究lnc-GCLC-1功能提供基础。方法以lnc-GCLC-1为靶点,设计并合成4组双链发卡结构,分别与慢病毒载体psi-LVRH1GP连接构成重组质粒;转化感受态细胞获取大量重组质粒后电泳、测序鉴定;通过瞬时转染筛选出2个有效的短发卡RNA(sh RNA);将重组质粒转染293T细胞后,收集病毒液并感染L02细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。利用荧光显微镜观察细胞绿色荧光情况以检测转染效果,采用Real-time PCR鉴定转染细胞株,并检测lnc-GCLC-1沉默对GCLC m RNA表达的影响。结果电泳及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;sh RNA-2和sh RNA-4是有效的sh RNA;用0.5μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定低表达L02细胞株;在sh RNA-2和sh RNA-4稳定转染L02细胞株中,lnc-GCLC-1的表达水平均低于阴性载体组(P0.05),沉默效率分别为21.3%和64.82%;sh RNA-2组和sh RNA-4组GCLC的m RNA表达量均低于阴性载体组(P0.01)。结论本研究成功构建了lnc-GCLC-1沉默稳转L02细胞株。     

毒蕈碱型胆碱能受体M2亚型去整合素金属蛋白酶8及骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性分析

目的 分析毒蕈碱型胆碱能受体M2亚型(M2受体)、去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)及骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性。方法 选择2021年3月—2022年3月湖州市中心医院收治的112例支气管哮喘患儿为支气管哮喘组,同时选取通过健康体检的50例儿童为对照组。采用酶联免疫吸附试验测定血清M2受体、骨膜蛋白水平,采用实时荧光定量PCR法测定ADAM8相对表达量,使用常规通气法测定小气道功能相关指标。对比两组各指标表达水平、各指标在支气管哮喘组疾病不同时期、不同严重程度中的表达,并分析M2受体、ADAM8、骨膜蛋白与支气管哮喘患儿小气道功能的相关性。结果 支气管哮喘组M2受体、ADAM8、骨膜蛋白水平[(1.94±0.75)U/ml,(1.64±0.24),(84.65±12.66)μg/L]均高于对照组[(1.31±0.42)U/ml,(0.83±0.11),(70.42±9.12)μg/L],小气道功能指标用力呼气25%流速(FEF25)、用力呼气50%流速(FEF50)、用力呼气75%流速(FEF75)、最大呼气中期流量(MMEF)水平均低于对照组,差异均有统计学意义(均P...     

子痫前期孕妇胎盘组织中血管生成素-1 血管生成素-2及受体Tie-2的表达变化

目的探讨子痫前期孕妇胎盘组织中血管生成素-1 (Ang-1)、血管生成素-2 (Ang-2)及酪氨酸激酶-2受体(Tie-2)的表达变化在子痫前期发病机制中的作用。方法收集2016年3月-2018年3月在华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科行剖宫产分娩的100例孕妇的胎盘组织,其中正常妊娠组孕妇50例,子痫前期组孕妇50例。采用RT-PCR法检测Ang-1、Ang-2及受体Tie-2 mRNA的表达水平。结果正常妊娠组孕妇和子痫前期组孕妇胎盘组织中均有Ang-1、Ang-2及受体Tie-2 mRNA的表达;与正常妊娠组孕妇比较,子痫前期组孕妇胎盘组织中Ang-1 mRNA表达水平显著降低,Ang-2、Tie-2mRNA表达水平均显著升高(均P0.05)。结论胎盘组织下调Ang-1 mRNA的表达,上调Ang-2、Tie-2 mRNA的表达,可能在子痫前期的发病机制中发挥重要作用。     

高温高湿环境对自发性高血压大鼠胸主动脉细胞凋亡的影响

目的探讨高温高湿环境对大鼠胸主动脉血管功能的影响及其可能机制,为防控炎热环境下心血管疾病的发病提供科学的理论依据。方法将正常对照大鼠(Wistar kyoto rats,WKY)和自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)各24只,按每天热应激时间的不同随机分为6组,分别为WKY对照组、热应激8 h组、热应激24 h组及SHR对照组、热应激8 h组、热应激24 h组,每组8只。对照组室温为24℃,热应激组室温为32℃,热应激时间为1周。热应激前后分别测定各组大鼠血压;热应激结束后,用20%乌拉坦(1 ml/100 g)麻醉大鼠,分离大鼠胸主动脉血管,采用器官浴槽测定胸主动脉血管环对去甲肾上腺素的反应性;采用RT-PCR法检测大鼠胸主动脉血管组织凋亡基因caspase-3、Bcl-2、Bax的m RNA表达量;采用Western-blot方法检测胸主动脉血管组织凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白水平的变化。结果与热应激前比较,SHR热应激8 h和24 h组大鼠的收缩压和舒张压均明显升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.05)。与WKY大鼠比较,SHR大鼠的胸主动脉血管反应性升高,差异有统计学意义(P0.05)。高温高湿环境可使大鼠胸主动脉caspase-3m RNA表达量升高,Bcl-2 m RNA表达量降低,Bax m RNA表达量升高,差异均有统计学意义(P0.05)。SHR热应激8 h和24 h组大鼠的Bax m RNA表达量高于SHR对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论高温高湿环境对大鼠胸主动脉血管有一定的损伤,这些损伤作用可能与机体适应程度及细胞凋亡机制有关。     

中药对CCl4中毒性大鼠肝纤维化HGF m RNA表达量的影响

目的　从分子水平检测中药预防肝纤维化的作用及机制。方法　利用 CCl4 复合因素对SD大鼠复制肝纤维化模型 ,用中药灌胃预防 ,检测其生化指标、肝纤维化指标、病理情况以及肝组织中 HGF m RNA表达量。结果　肝纤维化组及中药预防组的 AL T、AST、A/ G均较空白组恶化 (P <0 .0 1) ,但中药预防组的 AL T、AST、A/ G的恶化程度低于肝纤维化组 (P <0 .0 1)。 HA(透明质酸 )、PC ( 型血清前胶原 )、L N (层粘蛋白 )、PL D(羟脯氨酸 )四项血清学指标的结果显示 :肝纤维化组及中药预防组均高于空白组 (P <0 .0 1) ,但中药预防组的升高幅度低于肝纤维化组 (P<0 .0 1) ,此四项指标的降低与病理组织切片反应肝纤维化的程度相一致。中药预防组与肝纤维化组肝组织 HGFm RNA的相对表达量比空白组高 (P <0 .0 1) ,中药预防组肝组织 HGFm RNA的相对表达量较肝纤维化组高 (P <0 .0 1)。结论　联合检测生化、肝纤维化指标可提高肝纤维化早期诊断 ;肝纤维化时肝组织 HG...     

小儿眼科患者手术麻醉前采用长托宁稳定心率的临床观察

麻醉前用抗胆碱药的目的是减少口腔和呼吸道分泌物,避免术中返流误吸和减少肺部并发症。长托宁(盐酸戊乙奎醚注射液)是一种新型抗胆碱药,具有选择性M1、M3和N1、N2受体拮抗作用,对中枢和外周均有很强的抗胆碱作用,而对M2受体无明显作用,可有效避免阿托品因缺乏M受体亚型选择性所致的心动过速与阻断突触前膜M2受体调节功能,且药效长,副作用少。我们对长托宁用作麻醉前儿童给药进行了临床观察,结果报告如下:1资料与方法1!1临床资料全麻的眼科手术患儿30例,随机分为阿托品组(A组)和长托宁组(B组),每组15例。病种包括先天性白内障人工晶体植…     

维生素D_3对溃疡性结肠炎豚鼠结肠组织凋亡作用的研究

目的探究补充VD_3是否可以抑制结肠组织的凋亡作用,进而改善豚鼠溃疡性结肠炎。方法将18只雄性豚鼠根据体质量随机分为3组,每组6只:对照组[VD_35μg/(kg·d)]、正常剂量VD_3组[VD_35μg/(kg·d)]和低剂量VD_3组[VD_30.25μg/(kg·d)]。试验期间用不含VD_3配方的饲料喂养,采用改良豚鼠灌胃法给予每组相应剂量的VD_3进行干预。干预5w后,正常剂量VD_3组和低剂量VD_3组豚鼠自由饮用2%的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)进行造模,对照组自由饮用蒸馏水。造模期间进行疾病活动指数评分(disease activity index, DAI);4d后处死,进行结肠大体形态学评分;经苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学评分;采用实时定量PCR(RT-PCR)检测结肠组织中细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平;透射电镜观察结肠上皮细胞结构。结果与对照组相比,正常剂量VD_3组和低剂量VD_3组DAI、结肠大体形态学以及组织病理学评分均升高(P0.05),正常剂量VD_3组DAI和组织病理学评分均低于低剂量VD_3组(P0.05)。与对照组相比,正常剂量VD_3组和低剂量VD_3组豚鼠结肠组织Caspase-3的mRNA表达水平[分别为(0.87±0.39、5.58±1.41、4.81±1.33)]明显增加(P0.05);与低剂量VD_3组相比,Bax在正常剂量VD_3组转录降低[分别为(7.33±1.89、2.76±1.34,P0.05)];与对照组相比,Bcl-2在正常剂量VD_3组和低剂量VD_3组的转录水平均降低[分别为(0.95±0.07、0.43±0.06、0.35±0.20,P0.05)]。结论补充正常剂量的VD_3可以抑制结肠组织的异常凋亡,对肠粘膜有一定的保护作用,缓解了DSS引发的结肠损伤。[营养学报,2019,41(5):460-464]     

苯甲酸雌二醇暴露对小鼠睾丸组织的氧化损伤

目的探讨外源性雌激素苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)产生氧化应激诱导雄性小鼠的生精功能障碍。方法将39只清洁级4周龄雄性昆明小鼠随机分为3组,分别为对照组(玉米油)和5、10 mg/kg EB染毒组,每组13只。采用肌肉注射方式进行染毒,染毒容量为5μl/g,隔天1次,持续28 d。染毒结束后,每组随机选3只雄性小鼠按1∶2比例与雌性小鼠合笼,记录配对雌性小鼠受孕数和产仔数。采用流式细胞术检测睾丸细胞周期各时相细胞所占比例。睾丸组织匀浆,采用化学比色法检测睾丸组织内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)活力和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测睾丸组织SOD、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)及caspese-3、Bax m RNA表达水平,采用Western blot技术检测睾丸组织Caspese-3、Bax蛋白表达水平。结果与对照组相比,各剂量EB染毒组小鼠睾丸组织G0/G1期和S期细胞所占比例均下降,而G2/M期细胞所占比例均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着EB染毒剂量的升高,小鼠睾丸G0/G1期和S期细胞所占比例均呈下降趋势,而G2/M期细胞所占比例呈上升趋势。与对照组相比,各剂量EB染毒组小鼠睾丸组织SOD、CAT、GSH-Px活力均降低,而NOS活力及MDA、NO含量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着EB染毒剂量的升高,小鼠睾丸组织SOD、CAT、GSH-Px活力均呈下降趋势,而NOS活力及MDA、NO含量均呈上升趋势。与对照组相比,各剂量EB染毒组小鼠睾丸组织SOD、CAT、GPx4 m RNA的表达水平均降低,而Caspase-3蛋白和m RNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着EB染毒剂量的升高,小鼠睾丸组织SOD、CAT、GPx4 m RNA的表达水平均呈下降趋势,而caspase-3、Bax蛋白和m RNA的表达水平均呈上升趋势。结论 EB可阻滞小鼠生精细胞周期,产生氧化损伤并上调caspase-3和Bax表达,这可能是EB引起雄性小鼠生精功能障碍的重要途径。     

双氢青蒿素对宫颈癌小鼠放疗的增敏作用观察及机制探讨

目的观察双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌小鼠放疗的增敏作用,并探讨其作用机制。方法选取小鼠宫颈癌细胞株U14常规培养、消化传代,取对数生长期U14细胞备用。取50只昆明小鼠,建立宫颈癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、放疗组、低剂量组(Low-dose,L)、中剂量组(Middle-dose,M)、高剂量组(High-dose,H)、DHA组。除模型组和DHA组均给予放疗,其中L组、M组、H组分别取5、10、20 mg/kg小鼠体质量的DHA+0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水混合均匀,DHA组给予5 mg/kg DHA+0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水混合均匀,均给予腹腔注射;放疗组和模型组给予0.01 ml/g小鼠体质量的生理盐水腹腔注射,均于照射前30 min干预。对比各组1周、2周、3周后抑瘤率变化;末次放疗次日将小鼠处死,以苏木精-伊红法(HE)染色观察各组肿瘤组织病理表现;以末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡率;以荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)信使核糖核酸(mRNA)表达;以蛋白质免疫印迹(WB)检测PI3K、AKT蛋白及磷酸化-AKT(p-AKT)表达,计算p-AKT/AKT。结果共有46只小鼠建模成功;抑瘤率时间、组间、交互作用上差异均有统计学意义,各组抑瘤率均随时间的延长显著升高(P0.05),L组、M组和H组抑瘤率均高于放疗组和DHA组(P0.05),M组和H组抑瘤率均高于L组(P0.05),H组抑瘤率高于M组(P0.05),放疗组和DHA组差异均无统计学意义;模型组可见肿瘤细胞排列紊乱、大小不均、染色深浅不同,偶见细胞轻度水肿,间质存在少量的炎性细胞浸润;放疗组和DHA组均可见部分肿瘤细胞坏死且细胞呈水肿状态,核固缩,深浅不同,间质有明显水肿;L组可见肿瘤细胞区域性坏死,接近坏死处的肿瘤细胞体积变小,核固缩,有明显的间质水肿,可见炎性细胞浸润;M组可见大片肿瘤细胞坏死,且坏死间隙有轻微液化,边界部分肿瘤细胞崩解为颗粒状间质水肿;H组可见区域性肿瘤细胞坏死,大量肿瘤细胞崩解,且间质有明显水肿;各组细胞凋亡率对比差异有统计学意义,放疗组、L组、M组、H组和DHA组均高于模型组(P0.05),L组、M组和H组均高于放疗组和DHA组(P0.05),M组和H组均高于L组(P0.05),H组高于M组(P0.05),放疗组和DHA组差异无统计学意义;各组肿瘤组织PI3K mRNA及蛋白、p-AKT/AKT表达对比差异有统计学意义,且放疗组、L组、M组、H组和DHA组均低于模型组(P0.05),L组、M组和H组均低于放疗组和DHA组(P0.05),M组和H组均低于L组(P0.05),H组低于M组(P0.05),放疗组和DHA组对比差异均无统计学意义,各组AKT mRNA对比差异无统计学意义。结论 DHA能够抗宫颈癌,且能够增强宫颈癌小鼠放疗敏感性,促进肿瘤细胞坏死和凋亡,推测与调控PI3K/AKT信号通路,下调PI3K mRNA及蛋白,抑制AKT的磷酸化有关。     

早产儿视网膜病变及相关因素分析

目的:研究早产儿视网膜病变(ROP)的发生率及发病的相关因素。方法:充分散瞳及表面麻醉后,在双目间接检眼镜下用巩膜压迫器压陷眼球周边部一周,观察视网膜血管发育情况。结果:早产儿308例,体重≥2 000 g 121例,<2 000 g187例;发现1期患儿37例,2期患儿14例,3期患儿6例、4期患儿2例,无5期患儿。ROP发生率为19.16%(59/308)。ROP组与非ROP组出生体重、孕周数、高碳酸血症发生率、吸氧时间、低氧血症、胆红素水平及蓝光照射时间比较,前者均明显高于后者(P<0.05)。结论:出生体重越低、孕周越小、给氧浓度越高及时间越长、胆红素水平越高、蓝光照射时间越长,越易发生ROP,是ROP发生的主要危险因素。