微囊藻毒素-LR诱导肝细胞氧化应激

目的 研究微囊藻毒素-LR在不引细胞毒性的剂量（3～30μg／L）时对肝细胞的氧化应激。方法以HL-7702细胞株为模型，检测细胞内的酶系统损伤情况。结果细胞内过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）随着毒素剂量的升高和作用时间的延长而降低，而乳酸脱氢酶（LDH）渗出率及丙二醛（MDA）含量同对照组相比差异无统计学意义。结论微囊藻毒素-LR在非细胞毒性的剂量下可引起肝细胞的氧化应激，但尚不足以导致脂质过氧化。     

微囊藻毒素-LR的研究进展

微囊藻毒素-LR(MC-LR)是由蓝藻产生的一种毒性极强的毒素,在水体污染日益严重的今天,它已对生态环境和人类健康造成严重的威胁,成为全球殛待解决的重大环境问题.本文通过对MC-LR的结构性质、毒性作用、作用机制、检测方法和治理手段等方面进行综合阐述,旨在为环境管理与人类健康服务.     

微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞DNA甲基化的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)暴露对小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶(DNMTs)mRNA表达的影响。方法将40只健康SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(含0.02%DMSO)和5、10、20μg/kg MCLR染毒组,每组10只,雌雄各半。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒20 d。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠肝细胞DNA中的脱氧胞苷和5-甲基脱氧胞苷含量,并计算DNA的总体甲基化水平;采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B m RNA的表达水平。结果 10、20μg/kg MC-LR染毒组小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平,DNMT1、DNMT3A及DNMT3B mRNA的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平与DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达水平均呈正相关(P0.05)。结论 MC-LR可抑制小鼠肝细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达,降低DNA总体甲基化水平。     

不同荧光探针检测微囊藻毒素-LR诱导的氧自由基

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝细胞内超氧阴离子自由基(O<,2><'.->)、羟自由基(OH)水平的影响,探讨不同荧光探针的检测效果.方法 调整人肝癌HepG2细胞密度为5×10<'4>mL,分别设终浓度为10,30,100μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)对照组以及MC...     

微囊藻毒素-LR毒性的分子机制研究进展

本文回顾了微囊藻毒素-LR细胞毒性的分子机制研究进展,介绍了微囊藻毒素-LR通过抑制PP2A 活性调节细胞生命活动的主要毒性机制,简述了其与DNA 损伤、细胞骨架破坏的关系,印证了微囊藻毒素-LR的强细胞毒性.开展微囊藻毒素-LR毒性的研究对人类健康具有十分重要的意义.     

微囊藻毒素-LR的DNA损伤作用研究

目的探讨微囊藻毒素LR(MCLR)在不引起细胞毒性剂量情况下,能否引起细胞的DNA损伤,同时比较了MCLR对人肝细胞株(HL7702)和KB细胞(人口腔表皮癌细胞)的作用情况。方法利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定细胞毒性,彗星试验检测细胞的DNA损伤。结果当MCLR在剂量为10～100μgL时,对这两种细胞活性无显著性影响,而HL7702细胞在30μgL时出现DNA损伤,且随着毒素剂量的增加,其DNA损伤更加明显。但在同等实验剂量下,未能见到KB细胞的DNA损伤。结论MCLR具有潜在的遗传毒性;且它导致的DNA损伤有具有胆汁酸转运系统的肝细胞系中表现出得更为显著。     

微囊藻毒素-LR对传代细胞的毒性

目的 从多种传代细胞株中，筛选对微囊藻毒素-LR敏感的细胞株，探讨建立经济、简便研究该毒素传代细胞模型的可能性。方法 不同宿主来源的8种细胞株(KB细胞，NIH／3T3细胞，H-4-Ⅱ-E细胞，Hela细胞，Vero细胞，HepG2细胞，Caco-2细胞，HL-60细胞)与不同浓度的微囊藻毒素-LR作用，细胞培养24，48，72。96h后观察其形态学变化，利用体外细胞法(MTT)测定其细胞毒性终点(判断细胞活性)及乳酸脱氢酶试验测定细胞膜受损情况。结果8种细胞株中，KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞在培养96h，毒素浓度大于18．8μg／ml时，呈现明显剂量-反应关系。KB细胞与毒素接触8h后就有显著的形态学改变，其实验结果的重现性和稳定性非常好；乳酸脱氢酶试验显示微囊藻毒素-LR可导致KB细胞膜损伤。结论 微囊藻毒素-LR对KB细胞和H-4-Ⅱ-E细胞有明显的细胞毒性作用。从形态学变化、试验结果的重现性、稳定性和敏感性考虑，KB细胞可用作研究该毒素的传代细胞模型。     

活性氧在微囊藻毒素-LR诱导细胞凋亡效应中的作用探讨

[目的]研究微囊藻毒素．LR（MC—LR）对原代大鼠肝脏细胞的促凋亡效应以及探讨活性氧（ROS）在这一效应中的作用。[方法]采用胶原酶灌注法获取原代大鼠肝脏细胞,用William’s E培养液重悬后接种于铺被鼠尾胶原的孔板内,分为1个对照组和4个染毒组,370C、5％CO2条件下培养3h后换液并染毒各梯度浓度的MC—LR,使各染毒组毒物终浓度分别为1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L。染毒相应时间后,采用中性红比色实验检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内ROS含量。[结果]中性红比色实验发现,至染毒期末观察到1×10^-5、1×10^-6mol／L两个染毒组的肝脏细胞几乎全部死亡（〉95％）,1×10^-7mol／L染毒组部分肝脏细胞死亡（约30％）;流式细胞术观察到MC—LR染毒后早期（5min）诱导细胞调亡,同时观察到肝脏细胞内短时间（15min）快速产生大量的ROS。[结论]MC—LR诱导原代大鼠肝脏细胞快速产生大量的ROS,这可能是MC-LR诱导细胞凋亡并最终导致细胞死亡的毒性作用机制之一。     

MTT法观察微囊藻毒素-LR对原代大鼠肝细胞的双向毒性作用

[目的]系统性探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)引起肝细胞毒性效应的量效和时效关系特点. [方法]采用胶原酶灌注法建立原代大鼠肝细胞模型,并通过抗大鼠细胞角蛋白 (CK18)的特异性抗体来进行免疫荧光染色观察细胞纯度.对分离培养得到的原代肝细胞分别给予10-5～10-12mol/l的MC-LR,在给药后的24、48、72和96h后分别采用MTT法观察细胞存货率的改变情况. [结果]分离培养所得细胞均为肝实质细胞,细胞纯度为100%;高剂量MC-LR(μM水平)能引起细胞死亡或凋亡,而低剂量MC-LR(nM～pM水平)则具有促进细胞增殖的效应,双效性作用的分界浓度10-7mol/L左右. [结论]MC-LR对原代培养肝细胞的毒性效应上表现为双向性.     

太原市大型水库微囊藻毒素-LR污染调查

目的了解太原市汾河一库和汾河二库微囊藻毒素-LR(MC-LR)污染状况,为制订防治微囊藻毒素-LR 污染的政策提供参考依据。方法分别于2005年5月(枯水期)、10月(平水期),在汾河一库和汾河二库的入口、中心、出口处采集水面下0.5 m 处水样5 L。采用高效液相色谱法(HPLC)检测水样中的微囊藻毒素-LR 含量。结果枯水期汾河一库水样中微囊藻毒素 LR 的平均含量为0.875 μg/L,约为平水期(0.283 μg/L)的3倍;枯水期汾河二库水样中微囊藻毒素-LR 的平均含量为0.815μg/L,约为平水期(0.048μg/L)的17倍,且均呈入口>中心>出口的趋势。枯水期汾河一库和汾河二库入口处水样中微囊藻毒素-LR含量均超过《生活饮用水卫生规范》(2001)中的限值(1μg/L)。结论汾河一库和汾河二库都存在 MC-LR 污染,且以枯水期较为严重。     

宁波市部分水域微囊藻毒素-LR污染状况调查

微囊藻毒素(Microcystin,MC)是一组环状七肽结构,主要由蓝藻产生,具有肝毒性。随着环境污染加重和水体富营养化加剧,微囊藻毒素引起的中毒事件时有报道。WHO《饮用水水质准则》规     

太湖水体中微囊藻毒素-LR污染状况调查

目的 了解环太湖水体中微囊藻毒素(MC-LR)的污染和分布状况,为生活饮用水安全性预警提供决策依据,为自来水的深度处理提供理论支持.方法 在太湖水体中设置15个采样点,2009年7月～2010年6月期间每月采集一次样品,采用高灵敏时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测各样品中MC-LR的浓度情况.结果 太湖水体中MC-LR浓度高峰出现在10月份,枯水期浓度显著高于丰水期.此外,太湖北部和西部水体中MC-LR的污染状况较东部、南部以及中部严重.结论 太湖水体已受到MC-LR的污染且污染程度存在时间和地域差异,为保障饮用水安全,应改善自来水深度处理工艺和加强枯水期水质监测.     

微囊藻毒素-LR特异性RNA配基体外筛选探讨

目的利用大容量寡核苷酸库筛选富集具有分子识别、能与微囊藻毒素LR特异结合的RNA配基。方法将一段中间为40个随机核苷酸排列、两端为恒定区域的DNA库转录成RNA随机库,然后将RNA随机库与共价结合在琼脂糖上的微囊藻毒素LR反应、洗脱、收集能与靶分子特异结合的微量RNA,反转录为cDNA,PCR扩增。如此重复,经13轮筛选富集,再对筛选核酸配基克隆、测序,进一步比较各克隆RNA配基的亲和性。结果能与靶分子特异结合的微量RNA经过每轮筛选逐步增加,到第11～13轮进入平台期;60个克隆产物中有38个成功测定序列和分析,将其分成3组5对,所有克隆序列中未发现组间共有保守序列。选择有代表性的克隆RNA配基,比较其对靶分子的亲和力,克隆RNA配基MC1、MC25、MC17和MC32对靶分子微囊藻毒素LR具有较高的亲和力;他们与不同浓度系列的靶分子反应,经数学模型外推克隆MC1、MC25、MC17和MC32RNA配基以及RNA随机库对微囊藻毒素LR的解离常数值分别为84、46、57、91和>256μmol/L,其中MC25检测微囊藻毒素LR最低下限至少可达05μmol/L。结论从大容量RNA随机库中分离富集到一类能够识别并特异性结合微囊藻毒素LR的配基,为研究与检测环境中藻类毒素提供了一种新的手段。     

比较三种免疫分析法检测微囊藻毒素-LR

目的评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、纳米均相时间分辨荧光免疫分析(NH-TRFIA)和酶联免疫分析(ELISA)三种免疫检测方法。方法通过比较包被板、反应步骤、信号系统和试剂用量,分析反应条件的差异;通过分析灵敏度、精密度和准确性,比较上述方法的性能指标;通过检测实际样品,评估方法的可靠性。结果 NH-TRFIA反应时间最短,试剂消耗量最少,灵敏度最高,量程宽;TRFIA信号最强,稳定性佳;三种方法精密度高,相对标准差均小于15%。三种方法检测实际样品与高效液相色谱法的分析结果差异无统计学意义,认为可靠。结论 TRFIA和NH-TRFIA,技术优势明显,应用前景广阔。     

微囊藻毒素-LR对小鼠单核细胞和淋巴细胞的影响

目的 探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)对小鼠血液中单核细胞和淋巴细胞的影响及毒性效应,筛查血液中早期灵敏效应指标.方法 1月龄SPF级雄性昆明小鼠按体重采用随机数字表法分为5组,每组7只,分别分为对照组、低剂量组、中低剂量组、中高剂量组、高剂量组,每天给予1次腹腔注射染毒,分别给予生理盐水及3.125、6.250、12.500、25.000 μg/kg剂量的MC-LR.染毒7d后采用放射免疫方法检测重要相关细胞因子,KCl-SDS沉淀法检测淋巴细胞DNA-蛋白质交联(DNAprotein crosslinks,DPC)情况,流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能及单核细胞和淋巴细胞的活性氧变化(reactive oxygen species,ROS),并分析其变化情况.结果 中低、中高和高剂量MC-LR染毒组小鼠白细胞介素-6[分别为(346.837±25.536)、(360.847±37.886)、(434.245±35.858) pg/ml]均高于对照组[(232.775±32.816) pg/ml](t值分别为-7.258、-6.760、-10.966,P值均＜0.05);高剂量组肿瘤坏死因子-α含量[(10.782±0.966) fmol/ml]低于对照组[(16.878±3.378) fmol/ml](t=4.591,P＜0.05).中低和高剂量组淋巴细胞DPC[分别为(242.576±7.545)、(241.472±2.793) ng/ml]高于对照组[(228.657±4.130) ng/ml](t值分别为-4.282、-6.801,P值均＜0.05);低、中低、中高和高剂量组淋巴细胞DCF荧光强度(依次为3299.37±120.54、3281.38±58.34、3308.06±136.12、3346.92±108.69)均低于对照组(3770.81±131.39)(t值分别为6.995、9.007、6.472、6.577,P值均＜0.05).低、中低、中高和高剂量单核细胞DCF荧光强度(依次为3271.51±140.79、3270.05±117.92、3326.90±114.39、3292.49±145.97)均低于对照组(3841.72±130.92)(t值分别为7.847、8.584、7.835、7.411,P值均＜0.05).其他检测指标未见明显改变.结论 在体内实验中,可观察到MC-LR对血液中单核细胞和淋巴细胞有一定的影响.经比较,白细胞ROS为本实验中最灵敏效应指标.     

Caspase-3在微囊藻毒素-LR诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)染毒对大鼠睾丸支持细胞凋亡形态以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活力的改变。方法自健康18～20日龄SPF级SD雄性大鼠体内分离、培养睾丸支持细胞。用含MC-LR终浓度分别为0(对照)、1、10μg/ml的培养液培养48 h。采用Hoechst荧光染色法检测睾丸支持细胞的凋亡情况;采用caspase-3底物切除法检测caspase-3的活力。结果随着MC-LR染毒剂量的增高,大鼠睾丸支持细胞凋亡率升高。与对照组比较,仅10μg/ml MC-LR染毒的睾丸支持细胞caspase-3活力升高,差异有统计学意义(P<0.05);而1μg/ml MC-LR染毒睾丸支持细胞caspase-3活力略有降低,但差异无统计学意义。结论 MC-LR能诱导睾丸支持细胞发生凋亡,caspase-3在MC-LR诱导睾丸支持细胞凋亡中起重要调控作用。     

微囊藻毒素-LR对小鼠肝甲基转移酶活性影响

目的 观察微囊藻毒素-LR(MCLR)暴露对小鼠肝组织DNA甲基转移酶(DNMTs)活性的影响。方法 80只昆明小鼠,雌雄各半,随机分为4组,每组20只,即对照组(生理盐水)及MCLR低、中、高剂量组(MCLR 5、10、20 μg/kg),1次/d经腹腔注射染毒,分别于染毒第11、21 d测定肝功能生化指标,观察肝脏组织形态学变化,检测DNMTs酶活性。结果 染毒11 d时,与对照组比较,低剂量MCLR组小鼠肝脏谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)无明显变化,高剂量组ALT、AST、ALP酶活性均升高,差异有统计学意义(P<0.05);染毒21 d时,与对照组比较,各剂量MCLR组小鼠肝脏ALT和AST水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);染毒11、21 d时,低、中、高MCLR组小鼠DNMTs酶活性分别为(89 135.7±14 334.7)、(92 645.8±15 962.3)、(70 481.3±15 621.3)和(59 115.6±9 884.6)、(83 310.7±15 066.3)、(86 612.5±20 572.8)RFU/(h·mg),均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MCLR 暴露可引起ALT、AST、ALP水平升高,肝组织DNMTs酶活性升高。     

武汉市区主要湖泊微囊藻毒素-LR污染现状调查

目的 了解武汉市区主要湖泊水中微囊藻毒素的污染状况及随时间变化的规律.方法 于2008年6-10月及2009年4、5月,对武汉市内南湖、东湖、沙湖、北湖、菱角湖、中山湖、莲花湖、墨水湖、月湖9个主要湖泊11个采样点(东湖设3个采样点)进行水样的采集.水样经过滤、反复冻融等处理,分离细胞内和游离藻毒素.通过反相C<,18...     

二烯丙基硫醚拮抗微囊藻毒素-LR致细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基硫醚( DAS)对微囊藻毒素-LR (MCLR)诱导的细胞凋亡及活性氧产生的影响.方法 体外培养人肝癌细胞株HT17,用1μmol/L MCLR染毒的同时给予DAS(0.02～2 mmol/L)作用4、24h,同时设立溶剂对照组、DAS对照组和单纯MCLR染毒组.应用四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,采用荧光探针2-[6-(4'-羟基)苯氧基-3H-占吨醇-3-on-9-yl] -苯甲酸检测细胞内活性氧水平.结果 0.2和2mmol/L DAS干预组细胞存活率分别为(80.91±5.25)％,(90.13±4.47)％,高于MCLR染毒组的(69.50±3.03)％,差异有统计学意义(P＜0.05);而0.2和2 mmol/L DAS干预组细胞凋亡率分别为(10.87±0.52)％,(8.52±0.55)％,低于MCLR染毒组的(13.29±1.16)％,差异有统计学意义(P＜0.05);0.2和2 mmol/L DAS干预组的活性氧水平明显下降(P＜0.05).结论 DAS可拮抗MCLR诱导的活性氧产生及细胞凋亡.