骨髓增生异常综合征患者T细胞异常极化导致的负性造血调控

目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓T细胞极化状况及其与骨髓上清液中促凋亡因子TNF—α、INF-γ水平及造血细胞凋亡的关系。方法采用流式细胞术检测34例MDS患者骨髓T细胞极化亚群状况，用ELISA法检测骨髓上清液TNF—α、INF-γ水平，并用TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测骨髓造血细胞凋亡状况，分析三者间的相关性。结果①MDS患者骨髓，Th1细胞百分比[（10．1±1．6）％]和Tc1细胞百分比[（24．0±3．6）％]以及Tc1／Tc2值（50．0±11．1）明显高于正常对照[分别为（4．0±0．5）％，（5．8±0．6）％和13．4±2．7]；MDS患者骨髓上清液INF．1浓度[（58．6±21．7）μg／L]和TNF—α浓度[（15．7±3．8）μg／L]较正常对照[分别为0和（0．3±0．2）μg／L]明显升高；MDS患者骨髓造血细胞凋亡指数[（7．8±1．5）％]明显高于正常对照[（2．1±0．3）％，P〈0．05]。骨髓Th1细胞数与骨髓上清液INF-γ和TNF—α浓度呈正相关（r值分别为0．38和0．39，P〈0．05），并与造血细胞凋亡指数呈正相关（r=0．33，P〈0．05）。骨髓上清液INF-γ，和TNF—α浓度与造血细胞凋亡也呈正相关（r值分别为0．74和0．73，P〈0．01）。②难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）组（18例）Th1、Tc1细胞百分比，Tc1／Tc2值较正常对照明显升高（P值均〈0．01），T细胞向Ⅰ型反应极化；RCMD伴环形铁粒幼细胞增多（RCMD—RS）（4例）、RAEB—1（5例）、RAEB-2组（7例）T细胞未显示异常极化。③IPSS低危组病例Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常升高，而高危组T细胞未见异常极化。④染色体核型正常的RCMD患者骨髓Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常对照明显升高。而核型异常组T细胞未见异常极化。结论MDS患者骨髓中Th1、Tc1细胞比例增高，Th1／Th2、Tc1／Tc2平衡向Ⅰ型反应极化，其中以RCMD组、IPSS低危组和染色体核型正常组患者的T细胞I型反应极化明显。骨髓造血细胞过度凋亡与Th1细胞以及INF-γ和TNF—α水平呈正相关，提示Th1细胞通过分泌INF-γ和TNF-α导致造血细胞过度凋亡。     

骨髓增生异常综合征中基质细胞衍生因子1与血管新生及细胞凋亡的相关性研究

本研究探讨骨髓增生异常综合征(MDS)中骨髓基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达,及其与骨髓CD34+细胞的凋亡和骨髓血管新生的关系。搜集40例MDS病例,根据IPSS积分分为低危和高危2组,采集患者的骨髓穿刺物和活检标本。检测骨髓血浆中SDF-1的含量,骨髓CD34+细胞的凋亡率,骨髓活检标本的微血管密度(MVD)。结果显示:SDF-1α在低危组和高危组的表达量分别为(2313±417)pg/ml,(1241±501)pg/ml,前者显著高于后者(p<0.05);且2组的表达率均显著高于健康正常者(710±153)pg/ml(p<0.05);Annexin-Ⅴ/PI双染色显示,低危MDS患者CD34+细胞的凋亡率为(54.75±14.15)%,显著高于对照组的(18.51±8.66)%和高危组的(23.96±12.20)%(p<0.05),后两者相比差异无显著性(p>0.05);相关分析显示:低危组中骨髓SDF-1含量与CD34+细胞凋亡率呈正相关(p<0.05);在高危组中骨髓SDF-1含量与MVD呈现正相关(p<0.05)。结论:骨髓SDF-1含量、CD34+细胞凋亡和MVD在MDS中存在显著异常,在不同风险度的病例中也有明显的不同,且SDF-1水平与骨髓细胞的凋亡和血管新生具有相关性。     

A European interlaboratory testing of three well-known procedures for immunocytochemical detection of epithelial cells in bone marrow. Results from analysis of normal bone marrow

BACKGROUND: This investigation intended to study the unspecific background to be expected in normal bone marrow (BM), comparing three well recognized protocols for immunocytochemical detection of disseminated carcinoma cells. The interlaboratory variation in screening and evaluation of stained cells was analyzed and different screening methods were compared. METHODS: BM mononuclear cells (BM MNC) from 48 normal BMs were immunostained in parallel by three participating laboratories. The protocols, based on three different anti-cytokeratin antibodies, have all been in common use for detection of disseminated carcinoma cells: the A45-B/B3 protocol (Hamburg), the CK2 protocol (Augsburg) and the AE1AE3 protocol (Oslo). For all protocols, the immunostained cells were visualized by the same alkaline-phosphatase (AP) detection system (APAAP) followed by detection of the cells by manual screening and by two different automated screening systems (ACIS from Chromavision and MDS1 from Applied Imaging). Detected AP-visualized cells were morphologically classified into unambiguous hematopoietic (Uhc) and questionable cells (Qc, potentially interpreted as tumor cells). RESULTS: Seven of 48 BMs (15%) harbored > or = 1 AP-visualized cell(s) among 1 x 10(6) BM MNC, both for the A45-B/B3- and for the AE1AE3 protocol, while for CK2 a higher proportion of BMs (21 BMs; 44%) harbored AP-visualized cells (P < 0.01, McNemar's test). The number of Qc was, for all protocols, 1 log lower than the total number of AP-visualized cells. On average, the frequency of Qc was 0.04, 0.08, and 0.02 per 10(6) BM MNC with A45-B/B3, CK2 and AE1AE3, respectively, and the number of Qc-positive BMs 1, 4, and 1. The MDS1 screening sensitivity was similar to manual screening, while ACIS detected fewer cells (P < 0.001, McNemar's test). CONCLUSIONS: All protocols resulted in AP-visualization of occasional hematopoietic cells. However, morphological classification brings the specificity to a satisfactory high level. Approximately 10% of AP-visualized cells were categorized "questionable". The CK2 protocol turned out less specific than the A45-B/B3 and AE1AE3 protocols.     

四例t(1;3)(p36;q21)骨髓增生异常综合征的临床和实验室研究

目的 研究t（1；3）（p36；q21）骨髓增生异常综合征（MDS）患者的临床特征和受累基因的表达。方法 报告4例t（1；3）（p36；q21）MDS患者。用半定量RT-PCR方法检测正常胎儿组织、2名健康正常人和3例t（1；3）（p36；q21）MDS患者骨髓细胞MEL1（MDS1／EVI1-like gene）基因两种转录形式（全长的MEL1和短型MEL1s）的表达水平。结果 t（1；3）（p36；q21）MDS患者临床表现主要以乏力等贫血症状为主，为大细胞性贫血，白细胞计数正常，血小板计数正常或增高，骨髓细胞形态有粒系、红系和巨核细胞系三系发育异常改变，以巨核细胞发育异常表现为主，患者预后差。正常人骨髓细胞和正常胎儿组织主要表达全长的MEL1，而t（1；3）（p36；q21）MDS患者骨髓以MEL1s表达为主，或仅表达MEL1S。结论 t（1；3）（p36；q21）MDS可能为一个独立临床病理遗传学病种，MEL1s的过表达在其发病机制中起重要作用。     

DNA末端原位标记结合免疫酶标技术研究骨髓增生异常综合征原位细胞凋亡

目的　观察骨髓增生异常综合征 (MDS)患者原位细胞凋亡数量及红系、巨核系凋亡状况。方法　用DNA末端原位标记 (ISEL)结合碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)免疫酶标技术分析 2 5例MDS患者骨髓塑料冷包埋切片中造血细胞原位凋亡数量及红系和巨核系凋亡状况 ,缺铁性贫血 14例作对照。结果　MDS患者凋亡细胞数平均为 (39.44± 2 9.34 ) /mm2 ,对照组为 (13.43± 8.39) /mm2 (P<0 .0 1) ;MDS中低危组 (RA +RAS)凋亡细胞数为 (4 7.5 6± 32 .86 ) /mm2 ,较高危组 (RAEB +RAEB t)[(2 1.87± 13.6 5 ) /mm2 ]高 (P <0 .0 5 )。MDS患者红系、巨核系细胞凋亡分别占该两系细胞的 3.3%和4 5 % ;对照组分别为 3.0 %和 2 .8% ,两组比较差异无显著性。部分显示红系、巨核系形态学特征的凋亡细胞不表达簇分化抗原。结论　MDS存在过度凋亡 ;MDS中危组细胞凋亡数高于高危组 ;未观察到有核红细胞及巨核细胞凋亡明显增加 ,可能与晚期凋亡细胞表面抗原丢失有关     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34-和CD34+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响

本研究分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓CD34^＋和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34^＋细胞的比例、CD34^＋细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡／增殖（A／P）比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34^＋细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明：①MDS高危组患者骨髓CD34^＋细胞的比例明显高于低危组（P〈0．05）,而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为（80．36±1．82）％,明显高于CD34^＋细胞的（54．75±2．18）％（P〈0．05）,而在高危组中,CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34^＋细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34^＋细胞的增殖率为（50．67±3．37）％,明显高于CD34-细胞的（30．99±1．96）％（P〈0．05）;④CD34^＋、CD34-细胞的A／P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A／P值在MDS高、低危组均明显高于CD34^＋细胞的A／P值（P〈0．05）。此外,CD34^＋细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论：CD34^＋细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34^＋细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34^＋细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。     

MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用。方法以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析。结果MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P<0.005)。随着病情的进展,TRF1表达升高(P<0.005);随着病情的改善,TRF1表达降低(P<0.01)。结论TRF1 mRNA随着病情变化在MDS患者骨髓的表达改变,提示TRF1作为端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一。     

骨髓增生异常综合征表皮生长因子受体的表达及其与细胞凋亡的关系

目的　探索骨髓增生异常综合征 (MDS)造血细胞中表皮生长因子受体 (EGFR)表达及其与细胞凋亡的关系。方法　取 18例MDS患者骨髓有核细胞经离心涂片机制片 ,用免疫酶标记方法(碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶系统 ,APAAP)及TdT介导的dUTP缺口末端 (荧光素 )标记 (TUNEL)法先后在同一标本上检测EGFR表达和凋亡信号。 9名正常人骨髓作对照。另外 ,18例MDS中有 15例、9名正常人中有 6名经流式细胞仪分选CD3 4+细胞并制备涂片后按上述方法进行EGFR和凋亡检测 ,并分析两者间的关系。结果　①MDS骨髓细胞EGFR表达 [(38.6± 2 4.6 ) %]高于正常对照 [(18.1±14 0 ) %](P <0 .0 5 ) ;②MDS细胞凋亡主要发生在EGFR阴性细胞 (16 .1%) ,EGFR阳性细胞中凋亡细胞仅占 1.4%(P <0 .0 1) ,EGFR表达与细胞凋亡呈负相关 (r =- 0 .70 1;tr=3.6 0 ;P <0 .0 1) ;③CD3 4+细胞EGFR表达阳性率RAEB RAEB t CMML组高于RA RAS组 ,分别为 (2 0 .6± 2 7.9) %和 (8.9±11 8) %,但差异无显著性 ,细胞凋亡率RAEB RAEB t CMML组低于RA RAS组 ,分别为 (18.2± 12 5 ) %和 (4 5 .2± 2 0 .5 ) %(P <0 .0 5 )。结论　MDS造血细胞过度表达EGFR。EGFR表达增高可能预示MDS的恶性增殖倾向并通过某种途径抑制细胞凋亡。因此抗EGFR治疗有希望成为治疗MDS     

骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞内负调控因子的研究

为研究MDS患者细胞凋亡与骨髓内不同T细胞亚群胞内负调控因子的关系，采用胞内细胞因子染色技术对骨髓内不同亚群T细胞胞内的TNF—α和IFN-γ水平进行检测和分析，用RT—PCR技术测定BMMNC的凋亡基因Fas的mRNA水平。结果表明，MDS患者骨髓内产生TNF-α增多的淋巴细胞为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 细胞，产生IFN-γ增多的为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RA^ 细胞，但均以CD8^ CD45RO^ 细胞为主；MDS患者T淋巴细胞产生的IFN-γ与Fas mRNA存在相关性，而TNF—α与Fas mRNA相关性不强。结论：MDS患者造血微环境中不仅T淋巴细胞亚群失调，而且各亚群分泌负调控因子增多；MDS患者髓内IFN-γ主要来自于T淋巴细胞。     

Sequential activation of caspase-1 and caspase-3-like proteases during apoptosis in myelodysplastic syndromes

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a group of hematopoietic disorders characterized by the concomitant presence of peripheral cytopenias and normocellular to hypercellular BM. This paradox has been proposed to be due to the presence of excessive proliferation matched by excessive intramedullary apoptosis of hematopoietic cells. When cultured in vitro MDS BM mononuclear cells (BMMC) undergo apoptosis within 4 h. We measured caspase-1-like and caspase-3-like activity in 22 MDS and 4 normal BM immediately following cell separation or after 4 h culture. When cultured in vitro, MDS BMMC demonstrated an increased apoptotic index within 4 h as measured by in situ end-labeling of fragmented DNA that was matched by a concurrent increase in caspase-3-like specific activity, and the two were significantly correlated. During the 4 h culture, a sequential activation of caspase-1-like and caspase-3-like activities was detected. Caspase-1-like specific activity was detected early and transiently at approximately 15 min, followed by a gradual increase in caspase-3-like-specific activity peaking at 2 h. When the broad-spectrum caspase inhibitor, Z-VAD.FMK, was included in the MDS BM aspirate 4 h culture, apoptosis was attenuated. We conclude that sequential activation of caspase-1-like and caspase-3-like activities may form the central biochemical pathway of apoptosis in BMMC from some MDS patients, and prevention of this process by caspase inhibitors may be of significant therapeutic value for these patients, in whom supportive care continues to be the mainstay of therapy.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓及外周血中WT1及PRAME基因的表达研究

本研究探讨WT1及PRAME基因在骨髓增生异常综合征患者骨髓和外周血中的表达情况以及与核型异常、病态造血、血红蛋白值之间的关系。收集2009年7月至2012年6月在我院初诊的240例贫血患者,其中MDS203例（RCUD15例,RCMD25例,RAEB161例,RAEB255例,MDS—U23例,MDS-AML24例）,AA18例,其他良性贫血15例,PNH4例和14例健康供者的骨髓标本,并收集其中78例患者及14例健康供者的外周血,分别检测骨髓和外周血中WT1及PRAME基因的表达水平。结果表明,WT1及PRAME在MDS骨髓及外周血中的表达均高于正常组、AA组及良性贫血组（BM：WT1：P=0．000,0．000,0．000,PRAME：P=0．048,0．000,0．064;PB：WT1：P=0．012,0．000,0．011,PRAME：P=0．020,0．004,0．003）,其中高危MDS患者WT1及PRAME的表达均高于低危组,AA及其他良性贫血组,且WT1及PRAME在骨髓和外周血中的表达水平呈现良好的相关性（WT1：r=0．6028,P=0．001;PRAME：r=0．7628,P=0．000）,WT1或PRAME在骨髓与外周血中阳性率一致（P=0．167）;另外,骨髓中WTl的表达水平与核型异常相关（P=0．049）。结论：MDS患者骨髓及外周血WT1和PRAME的表达较正常人、AA及其他良性贫血患者升高,且随着病情进展,其表达增加;WT1和PRAME基因的表达上调是MDS很好的分子标记,联合运用WT1和PRAME基因表达水平检测能为MDS的临床诊断及预后判断和微小残留监测提供有用信息,且在骨髓取材不便的时候可用外周血代替监测。     

survivin、XIAP在骨髓增生异常综合征患者及其细胞株MUTZ-1中的表达及意义

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者及MDS-RAEB细胞株MUTZ-1凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP的表达和高三尖杉酯碱(HHT)诱导MUTZ-1细胞凋亡的作用机制.方法以47例初发MDS患者及15名异基因骨髓移植志愿供者为研究对象,应用RT-PCR方法检测survivin、XIAP mRNA表达;采用流式细胞术分析MDS-RAEB细胞系MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化,RT-PCR技术检测survivin、XIAP在MUTZ-1中的表达;研究survivin反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)和HHT对细胞增殖、凋亡的影响.结果 MDS患者survivin mRNA 总阳性率高于正常对照组(分别为38.3%和0,P<0.01),高危组(RAEB、RAEB-t、CMML)阳性率高于低危组(分别为53.6%和16.7%,P<0.05).MDS患者及正常对照均表达XIAP,但表达水平不同,其中低危组XIAP mRNA(0.74±0.24)低于正常对照组(1.01±0.28)(P<0.05),高危组XIAP mRNA表达(1.55±0.34)高于低危组及正常对照组(P值均<0.01).HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,凋亡率与作用浓度和时间呈正相关,细胞被阻滞在G2期;HHT作用MUTZ-1细胞6?h后细胞内survivin 表达下调,而XIAP表达无明显变化.survivin AS-ODN能明显抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡,并提高MUTZ-1细胞对HHT的敏感性.结论凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP表达在MDS的不同阶段的改变可能与MDS的发生及发展有关.HHT能诱导MUTZ-1细胞凋亡,且能使凋亡蛋白抑制因子survivin mRNA下调,可能是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的机制之一.     

骨髓增生异常综合征巨核细胞增殖与凋亡的初步研究

为观察骨髓增生异常综合征 (MDS)巨核系细胞增殖与凋亡状况 ,用CD4 1免疫酶标 (APAAP)结合DNA末端原位标记 (ISEL) ,分析 2 9例MDS患者骨髓塑料冷包埋切片中巨核细胞的增生状况、凋亡数量及特征 ,并以缺铁性贫血 14例作为对照。结果显示 ,2 9例MDS之CD4 1阳性细胞数平均为 (2 6 .2 3± 18.18)个 /毫米2 ,对照组 (15 .6 4± 7.11)个 /毫米2 ,t′2 .5 4 ,P <0 .0 5 ;MDS病例微小巨核细胞明显增多 ,占巨核细胞总数的 31.2 0 % ,对照组仅12 .0 1% ,P <0 .0 1。MDS巨核细胞总数与微小巨核细胞数之间显示正相关 ,r值 0 .70 2 ,P <0 .0 1。MDS之巨核细胞且出现在骨小梁旁的异常分布及成簇现象。MDS巨核系细胞凋亡仅占该系细胞的 4 .4 0 % ;占凋亡细胞总数的9.32 % ,与对照组相比无显著差异。MDS巨核系细胞凋亡仅见于微小巨核细胞 ,且与微小巨核细胞数间存在正相关 (r =0 .5 89) ,但部分显示微小巨核细胞形态学特征的凋亡细胞不表达CD4 1。结论认为 ,MDS确实存在巨核细胞过度增殖及明显病态 ,微小巨核细胞凋亡可能系机体对异常增殖的生理反应 ,未观察到巨核细胞凋亡明显增加可能与晚期凋亡细胞不表达CD4 1有关     

骨髓增生异常综合征患者骨髓T辅助细胞亚群的研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中辅助性T淋巴细胞(Th)亚群数量和比例改变及异常核型细胞与Th1细胞的比例,评价MDS与Th1细胞的相关性。方法用流式细胞术检测21例MDS患者、18名正常对照和13例重型再生障碍性贫血(SAA)患者骨髓Th1细胞和Th2细胞的数量和比例;检测18例MDS患者和15名正常人染色体核型,分析MDS患者肿瘤细胞负荷与Th1细胞的比例关系及MDS患者骨髓原始细胞比例与Th1细胞的相关性。结果正常对照组骨髓Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值分别为(0.48±0.10)%、(0.24±0.19)%和2.31±0.76;而MDS患者三指标分别为(0.36±0.11)%、(0.76±0.35)%和0.51±0.13。MDS患者骨髓Th1细胞减少,Th1/Th2比例明显降低(P<0.01)。SAA患者三指标分别为(4.75±0.49)%、(0.40±0.28)%和26.5±8.79,与正常对照组相比,Th1细胞明显增多、Th1/Th2比例明显升高(P<0.01)。MDS患者异常核型细胞占中期细胞的(50.00±0.10)%,而正常对照为0。随着MDS疾病进展及MDS转为AML的患者骨髓Th1细胞数量逐渐下降,原始细胞数量逐渐增多,二者呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。结论①MDS患者T细胞免疫异常,Th1细胞与Th2细胞比例失衡,抗肿瘤细胞免疫中起主要作用的Th1细胞减少;②随着骨髓Th1细胞数量下降,MDS逐渐向白血病进展。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞 Fas,FasL及Bcl-2的表达和凋亡

为了观察骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓CD34+ 细胞Fas ,FasL和Bcl 2的表达和凋亡情况并探讨这些抗原的表达和细胞凋亡的关系。采用流式细胞术测定了 2 6例MDS和 10例急性髓系白血病 (AML)患者及 6例非血液病患者 (对照 )骨髓CD34+ 细胞的Fas,FasL和Bcl 2表达率和细胞凋亡率。结果显示 ,各型MDS患者CD34+ 细胞Fas和FasL表达率较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,Bcl 2的表达率除难治性贫血 /环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RA/RAS)与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )外 ,难治性贫血伴有原始细胞增多 (RAEB)和转变中的难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB t)患者均明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;各型MDS间CD34+ 细胞Fas的表达率相近 ,而Bcl 2的表达率却存在非常显著性差异 ,即RA/RAS 相似文献   

SDF-1/CXCR4在骨髓增生异常综合征患者中的生物学作用

本研究主要探讨骨髓增生异常综合征(MDS)及白血病患者中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在细胞凋亡、迁移和黏附中的作用及相关的信号转导。选取37例初发MDS患者〔低危组(IPSS≤1.0)22例,高危组(IPSS≥1.5)15例〕、10例初发白血病患者及14例良性贫血患者(作为对照组),通过流式细胞术检测骨髓CD34+细胞表面CXCR4的表达水平及CD34+细胞的凋亡情况。选取4例低危MDS患者和5例高危MDS患者,通过微孔细胞迁移实验检测SDF-1对细胞的趋化作用。通过CCK-8法检测SDF-1对细胞之间黏附能力的影响。结果表明,低危MDS组骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于高危MDS组(21.33%vs 7.27%,p<0.001),同样低危MDS组骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于白血病组(21.33%vs 7.53%,p<0.001),未发现CD34+细胞的凋亡率与患者年龄性别有相关性。SDF-1能够促进高表达CXCR4患者的细胞黏附于基质细胞并能诱导该细胞的迁移,诱导细胞形态发生极化,上述作用可以被G蛋白抑制剂pertussis toxin、PI3K抑制剂wortmannin及CXCR4拮抗剂AMD3100明显抑制;而对低表达CXCR4的患者细胞则无上述抑制作用。结论:SDF-1/CXCR4通过PI3K信号通路提高细胞的迁移及黏附能力,发挥抗凋亡作用,上述作用可以被PI3K途径抑制剂和G蛋白抑制剂所阻断。     

骨髓增生异常综合征del（20q）异常细胞克隆在骨髓细胞系列和凋亡细胞中的分布

为了探讨20号染色体长臂部分缺失[del（20q）]的1例骨髓增生异常综合征（MDS—RAEB-1）患者异常细胞克隆在骨髓各细胞系列和凋亡细胞中的分布，应用单克隆抗体通过流式细胞分选（FACS）del（20q）的MDS患者骨髓CD15^＋、GPA^＋、CD3^＋CD56^-CD16^-、CD19^＋、CD3^-CD56^＋CD16^＋细胞，应用Annexin V—FITC和PI通过FACS分选该患者骨髓Annexin V^＋PI^-（凋亡细胞）和Annexin V^-PI^-细胞（活细胞），然后应用LSID20S108探针和Telvysion^TM 20p探针对分选细胞分别进行间期双色荧光原位杂交（D—FISH）检测。同时选取4例核型正常者作为对照组进行相应检测。结果显示。该MDSRAEB-1患者的骨髓CD15^＋细胞和GPA^＋细胞中MDS克隆百分比分别为70．50％和93．33％，明显高于对照组（5．39％和6．17％）；而在CD3^＋CD56^-1CD16^-1，CD19^＋，CD3^-CD56^＋CD16^＋细胞中分别为3．23％、4．32％、5．77％，低于对照组（5．76％、4．85％、6．36％）。该患者骨髓有核细胞凋亡率为16．09％。MDS细胞克隆在凋亡细胞和活细胞中的比例分别为32．48％和70．11％。结论：MDS患者del（20q）异常克隆主要分布于粒系与红系细胞，以及一小部分凋亡细胞     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在恶性血液病骨髓有核细胞的表达及其抗凋亡作用

为探索胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞表面的表达及其与细胞凋亡的关系,收集MDS和AML患者各16例骨髓有核细胞,经离心涂片机制片,用免疫酶标记方法(APAAP)及TdT凋亡检测(TUNEL)法先后在同一标本上检测IGF-IR表达和凋亡信号,并以16名正常人骨髓有核细胞作对照.结果显示①MDS组骨髓细胞IGF-IR表达[(56.8±14.3)%]高于正常对照[(40.4±9.6)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞IGF-IR表达[(86.8±13.8)%]高于正常对照(P＜0.01),AML骨髓细胞IGF-IR表达高于MDS骨髓细胞(P＜0.01);②MDS组骨髓细胞凋亡率为[(5.4±3.0)%]高于正常对照[(1.2±0.9)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞凋亡率为[(0.3±0.4)%]低于正常对照(P＜0.01),MDS组细胞凋亡率明显高于AML组(P＜0.01);③细胞凋亡主要发生在IGF-IR阴性细胞[(9.0±4.8)%],IGF-IR阳性细胞中凋亡细胞仅占[(1.4±2.4)%](P＜0.01),IGF-IR表达与细胞凋亡呈负相关(r=-0.852;P＜0.01);④MDS骨髓细胞IGF-IR表达阳性率RAEB/RAEB-t/CMML组高于RA/RAS组,分别为(64.1±3.2)%和(53.5±16.2)%,但差异无显著性,细胞凋亡率RAEB/RAEB-t/CMML组低于RA/RAS组,分别为(3.1±2.1)%和(6.4±2.8)%,(P＜0.05);⑤MDS和AML中IGF-IR阳性率与原始细胞百分比存在明显的正相关(r=0.677;P＜0.01).结论MDS和AML造血细胞过度表达IGF-IR.IGF-IR表达增高可能预示造血细胞的恶性增殖倾向并通过某种途径抑制细胞凋亡.如果能证实此点,则抗IGF-IR治疗有希望成为治疗MDS和AML的新方法.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞细胞遗传学异常的研究

本研究旨在探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者与正常对照者造血细胞(HC)及经分离所得骨髓间充质干细胞(BMMSC)的细胞遗传学特征,分析其是否同时受累并参于MDS的发病及进展.收集我院血液科收治初诊的22例MDS患者及7例体检者(正常对照)骨髓,建立贴壁培养体系,分离并体外扩增BMMSC.根据形态学特征及流式细胞仪检...     

骨髓增生异常综合征患者骨髓巨噬细胞百分比异常及其意义

目的：了解骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes,MDS）患者骨髓中巨噬细胞所占比例,并分析其与Th细胞、IPSS积分及骨髓CD34⁺细胞比例间的相关性。方法：以CD14、CD68标记巨噬细胞,以CD3、CD8、干扰素γ（interferon γ, IFN-γ）、白细胞介素（interlukin, IL-4）标记T细胞,采用流式细胞术检测47例MDS患者骨髓中的巨噬细胞百分比以及Th细胞活化情况,另设8名志愿者为对照组。结果：①低危MDS患者骨髓中的巨噬细胞百分比为1.56%±0.22%,显著高于高危MDS患者(0.20%±0.07%) (P<0.001)及正常对照者(0.62%±0.09%)(P<0.001)。②MDS患者骨髓中的巨噬细胞百分比与Th1细胞百分比呈正相关（r=0.434, P<0.01）。③MDS患者骨髓中巨噬细胞百分比与国际预后积分系统(international prognostic scoring system, IPSS)呈负相关（r=-0.532, P<0.001）,同时也与骨髓原始细胞百分比呈负相关（r=-0.457, P<0.01）,与外周血血红蛋白浓度成负相关（r=-0.398, P<0.01）,与骨髓CD34⁺细胞百分比呈负相关（r=-0.324, P<0.05）。结论：低危MDS患者骨髓中巨噬细胞增加,并可能导致了Th1细胞的异常激活;检测MDS患者骨髓中巨噬细胞百分比可能有助于判断其预后。