人子宫内膜细胞原代体外培养方法

目的改良人子宫内膜细胞原代体外培养方法的建立,并对其进行特征鉴定。方法将选择的子宫内膜组织机械法分离,复合酶消化,传代自然增殖法纯化细胞,进行单层培养。通过倒置显微镜观察其大体形态,HE染色观察其胞核情况,免疫细胞化学染色法对间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)及上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)进行鉴定。结果培养的子宫内膜细胞均有ESC和EEC两种形态细胞。EEC和ESC经角蛋白单抗体和波形蛋白单抗体染色,凡是胞质被染成棕黄色的细胞为阳性细胞。结论成功培养了原代人子宫内膜细胞,方法经济、简单,获得细胞成活率高,生长稳定。成功建立子宫内膜细胞原代体外培养体系,为从细胞和分子水平方面研究子宫内膜的各种功能及干预调节奠定基础。     

人子宫内膜细胞的分离培养及鉴定方法的探索

目的　体外分离并培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。方法　用酶解、二次滤网过滤、沉降等方法进行分离、纯化及培养 10例正常子宫内膜腺上皮细胞及基质细胞并传代 ,通过光镜进行形态学观察 ,用免疫细胞化学法进行细胞鉴定。结果　 9例标本获得成功 ,基质细胞纯度可达 95 %以上 ,腺上皮细胞的纯度约为 90 % ,分离出的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞可以在体外进行增殖。结论　采用二次滤网过滤法可以分离得到纯度较高的内膜腺上皮细胞和基质细胞 ,这两种细胞均能在体外成活并传代。     

小鼠子宫内膜上皮细胞的分离和原代培养

目的 建立一种高效的子宫内膜上皮细胞分离和体外培养方法,为子宫疾病的发病机制或治疗药物筛选的进一步研究提供一个比较理想和有价值的的实验模型.方法 用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养小鼠子宫内膜上皮细胞,以上皮细胞角蛋白为抗原的免疫荧光法对分离培养的细胞进行纯度鉴定.结果 小鼠子宫内膜上皮细胞培养4～...     

着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养及形态学观察

目的探索着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞的原代培养方法，并对培养细胞进行形态学检测。方法取着床窗口(妊娠d4)小鼠双侧子宫角，用胰蛋白酶消化和机械削刮法相结合分离上皮细胞，经高密度接种及添加EGF培养后，通过光镜和透射电镜观察其形态学特征。结果接种24h后大部分细胞已贴壁，培养4d后细胞排列紧密、长成上皮细胞集落，电镜显示细胞为分泌上皮细胞，细胞纯化率在90％以上。结论采用上述方法可成功地分离、原代培养着床窗口小鼠子宫内膜上皮细胞。     

一种简便有效的小鼠子宫内膜细胞原代培养方法

由于小鼠子宫内膜细胞尚未成功建系。所以其原代培养为建立理想的小鼠胚胎着床体外模型奠定基础。本实验采用子宫内膜上皮细胞和基质细胞共同培养,通过改进方法,克服污染．提高了子宫内膜细胞的成活率。     

原代人子宫内膜细胞分离及培养鉴定

目的：探究原代人子宫内膜细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定。方法采用胶原酶消化人子宫内膜组织,经2次筛网过滤、离心及贴壁纯化技术,分离、纯化培养人子宫内膜间质细胞（ESC ）和腺上皮细胞（EEC ）,用细胞角蛋白（cytokeratin）和波形蛋白（vimentin）免疫细胞化学染色法和免疫荧光方法对所分离的细胞进行鉴定。结果 ESC呈平行生长,细胞呈梭形或多角形,波形蛋白抗体免疫细胞化学染色呈阳性,纯度达95％以上。EEC呈漩涡状生长,细胞呈多角形或蝌蚪形,细胞角蛋白抗体免疫细胞化学染色呈阳性,纯度可达90％。结论应用胶原酶消化法及二次筛网过滤法成功分离并培养数量、活力和纯度高的子宫内膜细胞,可操作性强,可供具备基本细胞培养条件的实验室进行推广。     

小鼠子宫内膜基质细胞分离培养及鉴定

目的寻求一种简便有效的早孕小鼠子宫内膜基质细胞的培养方法。方法采用胰蛋白酶消化与机械振荡相结合分离小鼠子宫内膜基质细胞,接种后通过光镜观察其形态学特征,并采用免疫细胞化学进行细胞鉴定。结果接种24h后大部分细胞已贴壁,培养3d后细胞排列紧密、形态为长梭形。经过免疫细胞化学鉴定,成功获得了小鼠子宫内膜基质细胞。结论胰蛋白酶消化与机械振荡相结合可成功分离并原代培养小鼠子宫内膜基质细胞。     

改良式筛网法人子宫内膜细胞的分离与纯化

目的探讨改良式筛网法在分离子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中的应用价值。方法通过高浓度胶原酶结合不同浓度、时间消化、过滤及贴壁纯化等技术,应用筛网分离法培养各15例子宫内膜腺上皮和间质细胞,并传代。结果改良式筛网分离法培养中的15例标本中,腺上皮细胞和间质细胞成功率分别为93.3%和93.3%;分离出的腺上皮细胞及间质细胞可体外培养,经分离纯化后腺上皮细胞纯度>90%,间质细胞纯度>98%;两种细胞经传代后间质细胞成功率92.9%;腺上皮细胞传代培养后活力下降,成功率14.3%。结论通过改良式筛网分离法能获得纯度较高的腺上皮细胞与间质细胞;间质细胞可行传代培养;腺上皮细胞传代培养后活力下降,不宜传代。     

人子宫内膜细胞的体外培养技术及鉴定

子宫内膜组织标本来源于行子宫全切术，年龄在４５岁以下诊断为单纯子宫肌瘤的妇女，用胰蛋白酶或胶原酶消化分离子宫内膜细胞并进行原代培养均获得成功，细胞活力达８５％以上。细胞传代１０次，最长生存时间达２个月。培养中利用光镜观察细胞生长及形态，通过电镜及链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（ＳＰ）免疫组化染色法进行细胞鉴定。     

成年大鼠嗅鞘细胞的原代培养与鉴定

目的 探索一种简便、经济实用的获得成年大鼠嗅鞘细胞的方法.方法 无菌条件下取2.5月龄的SD大鼠嗅球最外二层,经分散后将细胞种植于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中.采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制相结合的方法培养.定期进行形态学观察并摄片.在培养第14 d行胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经生长因子受体(NGFRp75)的免疫细胞化学染色鉴定,并计算嗅鞘细胞的纯度.结果 培养的嗅鞘细胞呈双极、多突起形、扁圆形三种,其中扁圆形较少,嗅鞘细胞的纯度在90%以上.结论 差速贴壁和阿糖胞苷化学抑制相结合进行成年大鼠嗅鞘细胞原代培养是一种简便经济实用的方法,可获得高纯度的嗅鞘细胞.     

小鼠肝枯否细胞分离培养与免疫组化鉴定

门静脉灌注ＧＢＳＳ以清除肝内淤血，链霉蛋白酶Ｅ选择性破坏肝脏实质细胞，可以获得肝间质细胞悬液。经Ｐｅｒｏｃｌｌ梯度离心，贴壁养得到大量纯化枯否细胞，数量大约为４．１＊１０＾６个／克肝组织。     

兔视网膜Müller细胞原代培养

目的 :建立兔视网膜 Müller细胞原代培养的方法。方法 :组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞 ,用电镜和免疫组织化学法对细胞进行鉴定。结果 :培养的细胞贴壁生长 ,呈长梭形 ,胞体肥大 ,胞浆丰富。电镜下可见特征性的中间丝 (直径 8～ 1 0 nm) ;免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白 ( GFAP)和 S- 1 0 0阳性 ,八因子相关抗原阴性。结论 :组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞是一种稳定、可靠的方法     

豚鼠鼻腔上皮嗅神经鞘细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨成年豚鼠嗅球嗅神经鞘细胞(Olfactory ensheathing cells, OECs)取材、体外培养及纯化方法,为以豚鼠作为实验模型的神经移植实验及进一步研究其生物学特性打下基础.方法 在解剖显微镜下仔细分离出嗅球的第一二层,经剪碎、消化及吹打后去除沉淀,并行培养前差速贴壁法初步纯化及培养后第7-10d用消化法行进一步纯化,用神经生长因子受体蛋白(p75NGFR)行免疫组织化学鉴定及估算OECs纯度.结果 体外培养成年豚鼠OECs形态与成年大鼠基本相似;未经纯化处理的嗅球组织中的OECs,在培养2周时被大量增殖的成纤维细胞所覆盖和取代.而经过精细取材、培养前纯化和培养后纯化的综合处理,可使OECs纯度达到70%.结论 精细取材和综合纯化可培养出纯度较高的OECs,为以豚鼠作为实验模型的神经移植实验及进一步研究其生物学特性打下基础.     

乳小鼠心肌细胞体外培养方法的优化

目的探讨乳小鼠心肌细胞分离和体外培养的方法,并结合实际情况建立一种优化的体外培养乳小鼠心肌细胞的方法。方法胰酶-Ⅱ型胶原酶混合液分次消化乳小鼠心肌组织后行差速贴壁法达到心肌细胞纯化目的,并利用心肌细胞特意表达a-肌动蛋白的特性运用细胞免疫组织化学方法鉴定心肌细胞。结果差速贴壁48h后心肌细胞贴壁完全,并见大部分贴壁细胞出现搏动,但未观察到同簇搏动,经a-肌动蛋白细胞免疫组织化学鉴定,心肌细胞纯度达96.7%。结论本研究优化了原代乳小鼠心肌细胞分离和体外培养方法,为后续细胞实验打下了基础。     

1例肺腺癌组织的原代培养及异种移植检测

目的选取1例云南宣威女性肺腺癌组织进行原代培养,观察其生长增殖及异种动物接种成瘤情况,建立理想的实验模型.方法以手术切除的无菌肺癌组织标本进行原代培养,以有限稀释法获克隆化生长的肺腺癌细胞,通过光镜、生长曲线、异种动物成瘤实验、免疫组化等对其生物学特性进行分析.结果体外培养细胞生长稳定、状态良好,细胞形态学、增殖动力学实验表明该细胞系符合恶性肺腺癌细胞特征;动物接种成瘤率为100%,表明肿瘤对正常组织的侵袭能力,免疫组化结果证实瘤细胞为腺癌细胞,与原患者的病理切片相同.结论通过一系列对该细胞的体外研究证实本细胞株为恶性肺腺癌细胞,是一株具有地区特异性的肺腺癌细胞株,对研究肺癌癌变、侵袭转移、生物学特征以及开发抗肺癌新药等均有十分重要的理论和临床意义.     

人子宫内膜细胞纯化方法的研究

目的探讨一种人子宫内膜细胞体外分离培养的方法。方法将离体子宫内膜组织立即放入无菌瓶中,冲洗、剪碎,0.1%Ⅰ型胶原酶消化2h,100目和300目细胞筛分离上皮细胞和间质细胞,分别离心（前者700r/min,离心5min,后者1000r/min,离心10min）,应用含20%胎牛血清的DMEM培养基体外培养,并通过免疫细胞染色进行鉴定。结果胶原酶消化及细胞筛过筛后离心可以完全分离子宫内膜上皮细胞和间质细胞,并分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗组化染色为阳性。结论该方法简单,费用低廉,能达到完全分离子宫内膜细胞的目的。     

原代人胚肺、肾细胞成功培养方法的改进

目的：培养出广泛适合于基础与临床研究的原代人胚肺、人胚肾细胞。方法：分别用不同的培养基及不同浓度的血清,以改进的方法对原代人胚肺、肾细胞进行培养。结果：经水囊引产的３月大小的胚胎肺及肾,用ＭＥＭ及１６４０加上２０％的牛血清,对细胞的贴附及增殖十分有利,细胞生长状态良好。结论：经改进后的对人胚肺细胞和人胚肾细胞的原代培养,用含２０％的小牛血清的ＭＥＭ和１６４０的培养液对细胞的生长极为有利。     

人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

目的 :建立人肾小管上皮细胞原代培养、传代、冻存及鉴定方法。方法 :采用肾小管节段贴块培养法 (A法 )与消化培养法 (B法 )对比原代培养 ,并以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化、传代 ,以免疫细胞化学方法鉴定细胞种类 ,常规冻存和复苏。结果 :A法成功培养、传代、冻存、复苏并鉴定了人肾小管上皮细胞 ,B法失败。结论 :肾小管节段贴块培养法用于人肾小管上皮细胞原代培养是可行的     

原代肺癌细胞培养与耐药性研究进展

肿瘤细胞的内在和(或)获得性多药耐药是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因,寻求个体化化疗方案,是目前临床研究中的热点和难点。对肺癌细胞进行体外培养、药物敏感性试验和检测耐药基因的表达将为临床化疗提供客观的依据。现综述肺癌细胞的体外培养、药物敏感性及耐药基因检测方面的研究进展。