尾型同源盒基因2沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的逆转

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）沉默对逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响。方法将对数生长期的人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP接种于培养板中,分为3组：感染RNA干扰Cdx2基因沉默重组慢病毒载体（pLL—Cdx2-shRNA）作为实验组;感染慢病毒空载体作为阴性对照组;空白对照组不做任何处理。Westernblot及RT—PCR检测Cdx2及凋亡相关基因C—myc、cyclinD1、survivin等蛋白及mRNA表达水平;MTT法检测3组细胞对化疗药物阿霉素、5．氟尿嘧啶、顺铂的敏感性;流式细胞技术检测3组细胞阿霉素的泵出率、细胞周期分布及细胞凋亡情况。计量资料用面±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK—q检验,计数资料采用,检验。结果实验组、阴性对照组、空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP中各蛋白相对表达量：Cdx2分别为0．187±0．060、0．535±0．033、0．567±0．014,C—myc分别为0．086±0．004、0．379±0．006、0．354±0．004,cyclin D1分别为0．016±±0．005、0．141±0．003、0．162±0．008,survivin分别为0．276±0．012、0．672±0．009、0．517±0．313,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义（F=247．385,3．353,597．882,98．628,P〈0．05）。实验组、阴性对照组、空白对照组mRNA相对表达量：cdx2分别为0．184±0．010、0．894±0．056、0．837±0．049,c—myc分别为0．212±0．022、0．538±0．021、0．545±0．032,cyclinD1分别为0．045±0．009、0．163±0．009、0．157±0．010,survivin分另4为0．401±0．027、0．824±0．016、0．782±0．056,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述基因mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义（F=243．776,161．793,138．523,118．426,P〈0．05）。MTT法检测实验组、阴性对照组和空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP阿霉素Ic50值分别为（0．12±0．05）mg／L、（0．33±0．08）mg／L、（0．39±0．15）mg／L,5-氟尿嘧啶Ic50值分别为（0．52±0．13）mg／L、（4．10±1．25）mg／L、（4．05±1．44）mg／L,顺铂Ic50值分别为（0．82±0．13）mg／L、（2．81±0．50）mg／L、（3．28±1．03）mg／L。实验组、阴性对照组、空白对照组中人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素泵出率分别为0．21％、0．37％和0．35％。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素、5一氟尿嘧啶和顺铂的Ic。值及对阿霉素的泵出率显著降低,差异均有统计学意义（F=8．101,13．854,15．159,X2=7．106,P〈0．05）。实验组、阴性对照组与空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDPG0／G1期细胞比例分别为17．87％、34．71％、37．20％,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组G0／G1期细胞减少,差异有统计学意义（X^2=1．055,P〈0．05）;实验组G1／M期的细胞比例为11．93％,细胞凋亡率为31．13％,均明显高于阴性对照组的0．26％、16．58％和空白对照组的0．35％、13．18％,差异有统计学意K（X^2=2．249,11．030,P〈0．05）。结论Cdx2基因沉默可有效提高人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,增加化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的耐药性。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强肿瘤坏死因子α诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡作用的研究

目的研究核转录因子-κb（NF—κb）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝（MTr）法检测不同浓度的PDTC和TNF-α以及两者联合应用对SGC-7901细胞增殖的抑制率：采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况：Westernblot检测SGC-7901细胞survivin和easpase-3蛋白的表达。结果PDTC在15、30、60和100μmol／L浓度时．对SGC-7901的细胞生长抑制率分别为（12．14±0．91）％、（20．00±1．11）％、（37．63±1．01）％和（41.46±1．07）％．均可抑制细胞增殖（P〈0．01）。TNF-α为25mg／L时,对SGC．7901细胞的生长抑制率为（2．38±0．67）％,与对照组（1．50±0．81）％相比,差异无统计学意义（F=28．28,P〉0．05）：而在50、100和150mg／L浓度时,对SGC-7901细胞的生长抑制率分别为（4．53±0．85）％、（4．43±0．70）％和（4．74±1．07）％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。PDTC15μmol／L分别与25、50、100和150mg／L的TNF．仅联合应用时,对SGC-7901的细胞生长抑制率则分别为（18．94±1．10）％、（30．23±0．89）％、（41．55±0．94）％和（53．34±0．98）％,与单用TNF—α或单用15μmol／LPDTC比较,细胞生长抑制率增加（P〈0．01）。Hoechst检测结果显示,TNF-α100mg／L组、PDTC15μmol／L组及两者联合应用组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）,且联合用药组细胞凋亡率增高最为显著（P〈0．01）。PDTC（15μmol／L）与TNF-α（100mg／L）联合用药与单用TNF—α（100mg／L）比较,细胞survivin蛋白表达明显降低（P〈0．01）,与单用PDTC（15μmol／L）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;但caspase-3蛋白的表达联合用药组较两者分别单用时显著增加（P〈0．01）。结论PDTC可增强TNF-α对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能与PDTC阻断TNF-α诱导的NF—κb活性、下调survivin表达并最终上调凋亡蛋白easpase-3的表达有关。     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

RNA干扰沉默STIL基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨STIL在胃癌中的表达以及沉默STIL基因对胃癌细胞株SGC-7901各生物学活性的影响.方法 采用实时定量PCR（qPCR）法和Western Blot法检测STIL在胃癌及癌旁组织中的表达.构建靶向STIL的SiRNA并转染SGC-7901细胞,以MTT法检测细胞增殖、平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中STIL在mRNA和蛋白水平表达显著增高.与对照组相比,STIL特异性SiRNA（Si-STIL）转染后,SGC-7901细胞中STIL mRNA表达受到抑制,细胞增殖、克隆形成能力下降,凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期.结论 STIL在胃癌组织中高表达,STIL基因沉默可抑制胃癌细胞生长和克隆增殖、抑制有丝分裂期（M期）转换,促进细胞凋亡.     

抑制HO-1基因表达对人胃癌细胞系SGC-7901的影响

目的：通过构建shRNA沉默HO-1基因,研究抑制HO-1基因表达对胃癌细胞系SGC-7901的影响。方法：构建靶向HO-1基因的shRNA干扰质粒转染人胃癌细胞系SGC-7901,荧光共聚焦显微镜下观察转染效率;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫化学法分别在基因、蛋白质水平检测HO-1基因的抑制效果;应用MTT法检测HO-1基因沉默后胃癌细胞的生长情况。结果：与对照组比较,shRNA在基因、蛋白质水平特异地抑制了胃癌细胞SGC-7901中HO-1的表达,抑制率分别为62.4%、67.6%;HO-1的表达被抑制后,胃癌细胞SGC-7901生长受抑制（P〈0.05）。结论：shRNA-HO-1可有效抑制胃癌细胞中HO-1的表达;HO-1的沉默表达可抑制肿瘤细胞生长。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制胃癌生长和血管生成及其分子机制的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制胃癌生长和血管生成的分子机制。方法建立裸鼠异位胃癌肿瘤模型．检测肿瘤生长及肿瘤组织微血管密度（MVD）。培养SGC-7901胃癌细胞．Western印迹方法检测肿瘤细胞及其组织血管内皮生长因子（VEGF）、总信号转导、转录活化因子（Star3）和磷酸化形式Stat3的表达,同时采用ELISA方法检测肿瘤细胞培养液中VEGF蛋白水平．RT-PCR方法检测胃癌细胞VEGFmRNA的表达水平。结果EGCG组肿瘤组织平均质量（0．32±0．08）g,显著低于对照组（0．81±0．12）g,t=7．24,P〈0．01。EGCG组平均肿瘤抑制率为（60．4±6．1）％：其肿瘤生长曲线也显著低于对照组、EGCG组的肿瘤组织MVD（15．2±4．3）也显著低于对照组（24．6±6．6）（t=3．41,P〈0．01）。EGCG组胃癌组织的VEGF表达也减少78．6％．并呈剂量依赖性地下降：其肿瘤组织中Stat3磷酸化活化也减少了53．5％,也呈剂量依赖性地下降：但并未影响总的Stat3表达。结论EGCG通过抑制Stat3活化减少胃癌细胞VEGF表达．从而抑制胃癌生长和血管生成。     

双链蛋白聚糖对胃癌细胞生长作用研究

目的:研究双链蛋白聚糖(biglycan,BGN)对人胃癌细胞系SGC-7901的细胞增殖、周期及凋亡等生长作用影响。方法:构建重组质粒pIRES2-EGFP/BGN,转染胃癌细胞株SGC-7901,获得胃癌稳转细胞株SGC-7901/BGN。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、平板克隆实验、流式细胞技术,分别检察BGN过表达对SGC-7901细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响。结果:SGC-7901/BGN组胃癌细胞较SGC-7901/空载组生长明显抑制(P<0.01),细胞培养板形成的克隆数明显减少[(209.7±12.6)比(326.0±15.1)];同时过表达BGN可促进胃癌细胞的凋亡[(10.7±1.5)%比(5.3±1.1)%],且将细胞周期阻止在G1期[(55.7±2.1)%比(37.6±1.8)%]。结论:胃癌细胞过表达BGN可抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成。BGN可能通过将细胞周期阻滞在G1期、诱导细胞凋亡,从而发挥其生长抑制的生物学效应。     

尾型同源盒基因2过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的多药耐药性的影响。方法将SGC7901／DDP细胞分为实验组[Cdx2过表达重组慢病毒载体（pCMA-Cdx2-HA）处理]、空载体组[慢病毒载体（pCMA-HA）处理]、对照组（不做处理）3组。MTT法检测各组SGC7901／DDP细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测各组SGC7901／DDP细胞阿霉素的泵出蓄积量、细胞周期分布及凋亡情况;Westernblot技术进一步检测Cdx2蛋白和多药耐药基因1（MDRl）的蛋白表达水平。组间比较采用方差分析。结果SGC7901／DDP细胞感染慢病毒载体72h后,转染效率达90％以上。实验组Cdx2蛋白的相对表达量为0．374-0．06,较空载体组的0．12±0．02和对照组的0．11±0．03明显升高,3组比较,差异有统计学意义（F=82．37,P〈0．05）。实验组SGC7901／DDP细胞对阿霉素、5．氟尿嘧啶和顺铂的半数凋亡浓度分别为（1．10±0．08）mg／L、（4．81±0．12）mg／L、（3．81±0．15）mg／L,均高于空载体组的（0．59±0．05）mg／L、（3．71±0．14）mg／L、（2．20±0．15）mg／L和对照组的（0．63±0．04）mg／L、（3．92±0．15）mg／L、（2．92-4-0．11）mg／L,3组比较,差异有统计学意义（F=158．75,98．06,188．78,P〈0．05）。实验组阿霉素的泵出率为18．20％±0．12％,高于空载体组的7．22％±0．09％和对照组的8．79％4-0．11％,3组比较,差异有统计学意义（F=146．31,P〈0．05）。实验组G．期细胞的比例为52．2％±4．4％,明显低于空载体组的62．0％±5．O％和对照组的67．8％±3．3％;实验组S期的细胞比例为40．4％±1．5％,明显高于空载体组的25．6％±2．O％和对照组的21．8％±1．3％,3组细胞G．期和S期比较,差异均有统计学意义（F=17．08,236．83,P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为7．6％±1．3％,明显低于空载体组的11．1％±1．1％和对照组的10．8％±1．0％,3组比较,差异有统计学意义（F=16．29,P〈0．05）。实验组中MDRl蛋白的表达量为1．854-0．18,高于空载体组的1．124-0．08和对照组的1．024-0．09,3组比较,差异有统计学意义（F=76．22,P〈0．05）。结论Cdx2基因的过表达可降低胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,降低化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,增强胃癌多药耐药细胞的耐药性。     

VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）-反义寡核苷酸（ASODN）转染胃癌细胞SGC-7901对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,24h后实时荧光定量RT-PCR检测细胞VEGF mRNA起始拷贝数,ELISA法检测细胞及培养液上清中VEGF蛋白含量,Western blot法检测细胞生存素（survivin）蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA水平、降低胃癌细胞及其培养液中VEGF蛋白含量、降低survivin蛋白含量、增加细胞凋亡、抑制细胞活性及生长（P〈0.05）。结论VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制VEGF和survivin蛋白表达、增加细胞凋亡、抑制细胞生长。     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

Expression of vascular endothelial growth factor-C in gastric carcinoma and the effect of its antisense gene transfection on the proliferation of human gastric cancer cell line SGC-7901

PurposeThe aim of this study was to investigate the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in gastric carcinoma and tumor lymphangiogenesis and to determine the effect of antisense–VEGF-C gene transfection on proliferation.MethodsAdjacent cancer tissues were collected from 72 gastric carcinoma cases and compared with 10 nongastric carcinoma tissues to detect the expression of VEGF-C and its messenger RNA (mRNA) and calculate the density of neonatal lymphatic microvessels. The in vitro–cultured gastric cancer cell line SGC-7901 was transfected with recombinant plasmid pCI-neo-anti VEGF-C. The expression in the transfected cells and the proliferation were determined.ResultsThe positive rate of VEGF-C mRNA in the lymph node metastasis tissues was 85.7% compared with negative controls (20%, P < .05). The density of lymphatic vessels in the metastasis group was 6.65 ± 1.57 compared with the negative group (3.75 ± 1.47, P < .05). Protein and mRNA of VEGF-C were reduced in transfected cells. Proliferation was inhibited as well.ConclusionsVEGF-C can increase the invasiveness of gastric cancer and promote lymphangiogenesis in adjacent tissues. Transfection with antisense VEGF-C can reduce the expression of VEGF-C and inhibit the proliferation. VEGF-C can inhibit the tumor growth and reduce its metastasis and recurrence.     

胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达与淋巴结微转移的关系

目的：检测胃癌患者血管内皮因子C（VEGF-C）蛋白及mRNA在胃癌组织中的表达情况,探讨其与胃癌淋巴结微转移的关系。方法应用免疫组织化学法及RT-PCR法检测80例胃癌组织、癌旁组织及正常组织中的VEGF-C蛋白及mRNA表达情况;免疫组化法检测淋巴结微转移情况,比较有无淋巴结微转移的VEGF-C蛋白和mRNA的表达差异,明确存在的关联性。结果VEGF-C蛋白及mRNA两者在胃癌组织中明显高于癌旁组织和正常组织（P＜0.05）。结论胃癌组织中的VEGF-C蛋白及mRNA与胃癌淋巴结微转移相关,基因检测优于蛋白,可作为评价胃癌患者是否存在淋巴结微转移的优选指标。     

血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的　研究血管内皮生长因子 C(VEGF C)在胃癌中的表达并探讨其与淋巴结转移的关系。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGF CmRNA在 5株胃癌细胞株中的表达情况 ,同时采用免疫组织化学法 ,检测 63例接受根治性切除手术病例的胃癌组织标本VEGF C蛋白的表达。结果　VEGF CmRNA表达于胃癌细胞株MKN 45、SGC 790 1及AGS。VEGF C蛋白则在 5 2 .4%(3 3 /63 )的病例中呈阳性表达。在伴淋巴结转移的胃癌中 ,VEGF C表达较无淋巴结转移者更显著 (P <0 .0 1)。同时 ,VEGF C表达与淋巴管浸润和TNM分期密切相关 (P <0 .0 1) ,但与年龄、性别、肿瘤大小、位置、Lauren分型、浸润深度和血管浸润均无明显相关。结论　VEGF C的表达与胃癌淋巴结转移密切相关。     

重组人生长激素对不同生长激素受体表达人胃癌细胞的作用

目的 观察重组人生长激素(rhGH)在体外对生长激素受体(GHR)表达不同的人胃癌细胞株增殖及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响.方法 选取GHR高表达细胞株SGC-7901和低表达细胞株MKN-45.分组:空白对照组、rhGH组1～3(分别予50、150、250 μg/L rhGH).噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术分析rhGH对胃癌细胞株增殖的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析细胞上清液的IGF-1蛋白浓度.结果 SGC-7901细胞株rhGH组1～3和空白对照组的生长率分别为126.5%、128.7%、128.0%、100.0%;增殖指数(PI)分别为52.49±0.20、54.27±0.45、57.13±0.21、48.37±0.42;IGF-1浓度分别为228.67±17.01、226.88±30.31、229.03±30.31、200.46±21.33;与空白对照组比较,各浓度rhGH组细胞显著增殖,IGF-1浓度显著升高(P均<0.05),各浓度组间差异无统计学意义(P>0.05).rhGH干预对MKN-45细胞株的生长增殖和IGF-1浓度无明显影响(P>0.05),各浓度组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 rhGH在体外促进高表达GHR的胃癌细胞增殖及表达IGF-1,对低表达GHR的胃癌细胞增殖和IGF-1表达无明显影响.     

转基因LIGHT的人脐血间质干细胞对胃癌抑制杀伤作用的研究

目的探讨转基因LIGHT脐血间质干细胞对胃癌的抑制杀伤作用。方法采用慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-LIGHT．在脂质体Lipofectamine2000介导下与结构质粒pHelper1．0和包膜质粒pHelper2．0共转染293T细胞获得慢病毒后分别感染人脐血间质干细胞．获得重组慢病毒感染的脐血间质干细胞（MSC-LIGHT）和空载体慢病毒感染的脐血间质干细胞（MSC）。人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型。荷瘤裸鼠分为MSC-LIGHT组、MSC组和生理盐水组,每组5只,向3组裸鼠瘤周分别注射MSC-LIGHT、MSC及生理盐水。隔日1次,注射3次,第4周取材,观察注射前后瘤体生长情况。反转录PCR和ELISA法测定3组胃癌组织中LIGHT的mRNA和蛋白表达;病理切片观察瘤体的坏死面积。结果MSC．LIGHT组、MSC组和生理盐水组裸鼠肿瘤体积分别为（0．45±0．25）cm3、（0．64±0．36）cm3和（1．21±0．79）cm3,3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。3组LIGHTmRNA相对表达量分别为2．96±0．27,1．23±0．47和0．73±0．10．蛋白浓度分别为（167．89±2．31）、（73．22±5．74）和（49．66±5．25）ng／L;3组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。病理切片显示MSC-LIGHT组坏死面积最大。结论转基因脐血间质干细胞旁分泌LIGHT对胃癌细胞具有明显的抑制杀伤作用。     

内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因治疗胃癌的作用及其机制

目的探讨新型内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制.方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒Ad hENDOVEGI151转染胃癌SGC-7901、MKN-28细胞和血管内皮ECV-304细胞4 h后,继续培养6 d,噻唑蓝(MTT)比色法检测第1至6天3种细胞的存活率;流式细胞仪(FCM)丙化碘锭(PI)单染色法检测转染后48 h胃癌和内皮细胞凋亡的情况;应用DNA片断化试验分析转染后12、24、36、48 h时ECV-304凋亡情况;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测融合基因转染对SGC-7901表达促血管生成因子VEGF165的影响.结果AdhENDO-VEGI151治疗强烈抑制ECV-304增殖,72 h抑制率为55.18%,144 h抑制率89.86%;FCM检测出现明显凋亡峰,凋亡细胞约占(20.70±5.83)%,并且出现G1期阻滞(65.41±2.38)%和S期明显减少(21.81±1.52)%,与Ad LacZ组和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);转染组细胞DNA出现典型的梯形条带,尤以转染后24～36 h最为明显,Ad LacZ组及对照组DNA无裂解.Ad hENDO-VEGI151转染对胃癌细胞无直接毒性作用,但明显下调胃癌细胞VEGF165的表达水平.结论Ad hENDO-VEGI151治疗一方面强烈抑制内皮细胞增殖,诱导凋亡;另一方面抑制胃癌细胞表达VEGF165,多角度联合抑制肿瘤新生血管形成,使肿瘤细胞因缺血而发生大量凋亡.     

Sema4D蛋白高表达与结直肠癌血管形成和临床进展的相关性

目的：探讨轴突导向因子4D（Semaphorin4D,Sema4D）在结直肠癌组织中的表达及结肠癌细胞分泌Sema4D对血管形成的影响。方法：采用免疫组织化学SP法检测86例结直肠癌组织和52例正常结直肠组织中Sema4D的表达,并分析其与临床病理特征的关系;单纯血管内皮细咆组为空白对照组,结肠癌Lovo细胞和血管内皮细胞共培养组为实验组,应用ELISA检测2组Sema4D蛋白的表达,并观察其对内皮细胞成管的影响。结果：Sema4D蛋白在结直肠癌组织阳性表达率为60％,在正常结直肠组织中阳性表达率为12％,差异有统计学意义（P〈0．05）,且Sema4D蛋白表达与组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移明显相关（P〈0．05）,而与年龄、肿瘤大小无关（P〉0．05）;ELISA检测结果显示,对照组和实验组Sema4D蛋白分别为（663．54±21,59）pg／mL、（1320．99±28．42）pg／mL（P〈0．05）;内皮细胞管形成实验显示,对照组和实验组小管数目分别为7．25±1．26、15．25±0．96（P〈0．05）。结论：Sema4D蛋白表达与结直肠癌组织分化类型、TNM分期和淋巴结转移相关;Sema4D蛋白促进内皮细胞管形成。     

过表达癌胚抗原相关黏附分子6抑制胃癌细胞的凋亡与失巢凋亡

目的:探讨过表达癌胚抗原相关黏附分子6(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6,CEACAM6)对胃癌细胞凋亡与失巢凋亡的影响。方法:构建CEACAM6真核过表达载体转染胃癌细胞SGC-7901和MKN-45,使其CEACAM6过表达,qRT-PCR、Western印迹验证过表达效果,免疫荧光定位CEACAM6;流式细胞仪检测过表达CEACAM6后胃癌细胞凋亡的变化,失巢凋亡检测其失巢凋亡的变化。结果:转染CEACAM6后,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的CEACAM6分别过表达了30 000倍和4 000倍;在胃癌细胞SGC-7901中凋亡与失巢凋亡分别下降了46.2%和53.8%,在MKN-45中凋亡与失巢凋亡分别下降了71.7%和74.6%。结论:过表达CEACAM6抑制胃癌细胞的凋亡和失巢凋亡,CEACAM6通过抑制胃癌细胞凋亡和失巢凋亡的途径参与胃癌细胞的恶性生长过程。