弥漫大B细胞淋巴瘤患者血浆MGMT基因甲基化与化疗疗效关系

目的 检测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血血浆中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6 -methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因的甲基化状态,探讨MGMT基因甲基化与含烷化剂方案治疗DLBCL疗效的关系.方法 利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测CHOP方案治疗前后DLBCL患者外周血血浆MGMT基因的甲基化状态.结果 30例DLBCL患者血浆MGMT基因甲基化率为63.3% (19/30),血浆MGMT基因甲基化者化疗有效率为100.0% (19/19),非甲基化者化疗有效率为72.7% (8/11),两组化疗有效率差异有统计学意义(P=0.041).血浆MGMT基因甲基化者化疗后耐药发生率为10.5% (2/19),非甲基化者耐药发生率为54.5%(6/11),两组化疗耐药率差异有统计学意义(P=0.028).结论 外周血血浆中MGMT基因甲基化可能是预示DLBCL使用含烷化剂方案化疗疗效和耐药的指标.     

含铂方案调节弥漫大B细胞淋巴瘤患者血浆MGMT基因甲基化及与化疗疗效关系

目的：检测弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者用含铂方案化疗后外周血血浆中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）基因的甲基化状态,探讨含铂方案能否调节MGMT基因甲基化状态,并观察MGMT基因甲基化与含铂方案化疗疗效的关系。方法：利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测DLBCL患者含铂方案治疗前后外周血血浆MGMT基因的甲基化状态。结果：30例对CHOP方案耐药的DLBCL使用DHAP方案化疗前血浆MGMT基因甲基化为10.0%（3/30）,化疗2个和4个周期后血浆MGMT基因甲基化状态分别为63.3%（19/30）和73.3%（22/30）,化疗前后血浆MGMT基因甲基化状态比较有显著差异（χ2=16.148,P=0.000和χ2=22.217,P=0.000）。血浆MGMT基因甲基化与非甲基化者用含铂方案化疗2个周期后有效率分别为100.0%（3/3）和92.6%（25/27）,无显著差异（P=1.000）,4个周期后有效率分别为86.4%（19/22）和75.0%（6/8）,无显著差异（P=0.589）。结论：含铂方案可能调节MGMT基因甲基化状态。含铂方案化疗疗效与MGMT基因甲基化状态无关。     

含铂方案调节弥漫大B细胞淋巴瘤患者血浆MGMT基因甲基化及与化疗疗效关系

目的 检测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者用含铂方案化疗后外周血血浆中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因的甲基化状态,探讨含铂方案能否调节MGMT基因甲基化状态,并观察MGMT基因甲基化与含铂方案化疗疗效的关系.方法 利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测DLBCL患者含铂方案治疗前后外周血血浆MGMT基因的甲基化状态.结果 30例对CHOP方案耐药的DLBCL使用DHAP方案化疗前血浆MGMT基因甲基化为10.0%(3/30),化疗2个和4个周期后血浆MGMT基因甲基化状态分别为63.3%(19/30)和73.3%(22/30),化疗前后血浆MGMT基因甲基化状态比较有显著差异(χ2＝16.148,P=0.000和χ2＝22.217,P=0.000).血浆MGMT基因甲基化与非甲基化者用含铂方案化疗2个周期后有效率分别为100.0%(3/3)和92.6%(25/27),无显著差异(P=1.000),4个周期后有效率分别为86.4%(19/22)和75.0%(6/8),无显著差异(P=0.589).结论 含铂方案可能调节MGMT基因甲基化状态.含铂方案化疗疗效与MGMT基因甲基化状态无关.     

MGMT基因启动子甲基化检测在脑胶质瘤化疗中的意义

背景与目的：如何预测和克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性,实施个体化治疗是肿瘤化疗急需解决的问题。与基因启动子甲基化密切相关的DNA损伤修复基因O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT）表观沉默与肿瘤对烷化剂药物化疗敏感性密切相关。本研究探讨检测MGMT基因启动子CpG岛甲基化在判断脑胶质瘤患者预后及预测肿瘤对烷化剂药物耐药性中的意义。方法：甲基化特异性PCR（MSP）法检测脑胶质瘤组织及肿瘤细胞株MGMT基因启动子甲基化状态,蛋白印迹和免疫组化法测定蛋白表达。MTF法检测肿瘤细胞株对烷化剂药物敏感性,将患者随访资料针对MGMT甲基化状态绘制Kaplan-Meier生存曲线,并进行log—rank检验分析。结果：39例脑胶质瘤患者组织MGMT基因启动子甲基化发生率为46．2％,蛋白表达阳性率为61．5％,且肿瘤组织中MGMT基因甲基化状态与蛋白表达显著相关（P〈0．05）：6例正常组织均未检测出基因甲基化。MGMT基因过甲基化的脑胶质瘤SHG44细胞株用5-Aza-CdR处理后完全脱甲基化．MGMT蛋白恢复了表达,同时细胞株对烷化剂药物敏感性也发生逆转．由敏感转变为耐受。在采用手术、放疗和烷化剂尼莫司汀化疗等综合治疗的39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存率显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0．05）。结论：MGMT基因甲基化状态与蛋白表达及肿瘤细胞对烷化剂药物敏感性密切相关,有可能替代MGMT蛋白检测成为判断脑胶质瘤患者预后和预测肿瘤对烷化剂化疗耐药性的标志分子。     

NSCLC患者血浆p16和MGMT基因甲基化检测及临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）患者外周血血浆中p16基因、O^6-甲基乌嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine—DNA methyhransferase，MGMT）基因启动子的甲基化状态，探讨p16、MGMT基因启动子的异常甲基化在NSCLC筛查及早期诊断中的意义。方法：利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测NSCLC患者外周血血浆p16、MGMT基因启动子的甲基化状态。结果：65例NSCLC血浆样品中分别发现19例（29．23％）p16基因启动子异常甲基化和16例（24．62％）MGMT基因启动子异常甲基化，45例正常对照血浆组未检测到p16、MGMT基因启动子的异常甲基化（P〈0．05），血浆中两基因甲基化检出率与NSCLC的分型及临床分期无明显相关性（P〉0．05）。结论：利用巢式甲基化特异性PCR法检测外周血血浆中p16、MGMT基因启动子的甲基化，可为NSCLC的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。     

胶质瘤MGMT启动子甲基化及其临床意义

目的 分析O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子甲基化状态及其与胶质瘤临床病理特征、预后的关系。方法 收集2012年1月至2013年6月间行手术治疗的70例胶质瘤组织和14例非肿瘤患者正常脑组织，采用甲基化特异性 PCR法（MSP）检测MGMT甲基化水平，分析其与胶质瘤临床病理特征的关系。比较不同MGMT甲基化状态的高、低级别胶质瘤患者的总生存（OS），Cox比例风险回归模型分析影响低级别胶质瘤患者的OS的因素。结果 70例胶质瘤患者中48例（68.6％）MGMT基因启动子甲基化，而正常脑组织标本中仅2例（14.3％）MGMT甲基化，差异有统计学意义（P＜0.05）。MGMT甲基化与年龄、性别、肿瘤类型、KPS评分、p53和Ki-67表达无关（P＞0.05）；与病理分级有关（P＜0.05）。低级别脑胶质瘤患者中，MGMT甲基化患者中位OS为30个月，明显长于非甲基化者的11个月，差异具有统计学意义（P＜0.05）。单因素分析显示WHO病理分级、烷化剂化疗、MGMT甲基化与低级别脑胶质瘤患者OS有关（P＜0.05）。多因素分析WHOⅡ级、未接受烷化剂化疗、MGMT非甲基化是影响低级别胶质瘤患者OS的独立危险因素（P＜0.05）。结论 MGMT甲基化与胶质瘤的发生、发展有关，在判断胶质瘤恶性度、评估预后及指导临床治疗方面具有一定的价值。     

MGMT表达与恶性肿瘤化疗关系的研究现状

06甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（O6 methylguanine DNA methyltransferase．MGMT）是一种非常重要的DNA修复酶：肿瘤细胞对烷化剂耐药常与MGMT高表达有关。抑制MGMT的表达和活性，可能提高烷化剂疗效？文章就此进行综述。     

胶质瘤患者外周血 DNA 修复基因甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（ O6-Methylguanine -DNA methyltransferase,MGMT）及人类错配修复基因 MSH2（Human mutS homolog2,hMSH2）蛋白表达与外周血相应基因启动子甲基化的相关性。方法分别采用免疫组化法及甲基化特异性PCR （ MSP ）检测275例胶质瘤患者肿瘤组织MGMT、hMSH2蛋白的表达及外周血中这两个基因启动子甲基化情况。结果脑胶质瘤患者肿瘤组织MGMT和hMSH2蛋白阴性表达率分别为47．2％和62．5％;基因启动子区甲基化阳性率分别为41．8％和22．4％。统计学分析显示外周血MGMT基因启动子甲基化与肿瘤组织蛋白阴性表达相关（P＜0．05）。 hMSH2基因启动子甲基化与肿瘤组织hMSH2蛋白表达不具有相关性（P＞0．05）。结论 MGMT基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与胶质瘤的发生有关;而hMSH2基因启动子甲基化可能并不是胶质瘤hMSH2蛋白失活的主要原因,可能存在其他重要因素影响其表达。     

MGMT表达指导下的复发恶性胶质瘤挽救性化疗疗效分析（附30例报告）

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）是与恶性胶质瘤对替莫唑胺（temozolomide,TMZ）等烷化剂耐药相关的重要指标。本文总结根据MGMT表达状态选择不同的化疗方案,对复发恶性胶质瘤患者进行挽救性化疗的临床疗效。方法:经手术后病理确诊的复发恶性胶质瘤患者30例,均有可评价病灶。应用免疫组化法检测肿瘤MGMT表达状态,分为阳性组和阴性组。阳性组患者应用非TMZ常规5天方案或非烷化剂药物进行化疗,阴性组患者不限制化疗方案。结果:全组患者客观有效率为20%,中位无进展生存时间为8个月（95%CI:4.3～11.7）,中位生存时间为16个月（95%CI:7.4～24.6）。其中MGMT阳性组16例,阴性组14例。阳性组和阴性组患者的客观有效率分别为18.8%和21.4%,中位无进展生存时间分别为7个月（95%CI:3.1～10.9）和8个月（95%CI:3.9～12.1）,中位生存时间分别为16个月（95%CI:5.4～26.6）和16个月（95%CI:7.3～24.7）,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:复发恶性胶质瘤挽救性化疗具有良好的临床获益,根据肿瘤MGMT表达进行个体化化疗,特别是对于MGMT阳性复发恶性胶质瘤患者,能够避免耐药,得到与MGMT阴性患者相当的临床疗效。      

甲基转移酶与肿瘤耐药预见性、个体化化疗的研究

如何预见和克服肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是肿瘤化疗急需解决的问题。我们通过对中国人肿瘤细胞系、裸鼠移植瘤及肿瘤患者的组织分子水平的研究,探讨肿瘤细胞中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyltraasferase,MGMT)活性和蛋白水平高低与细胞对烷化剂、特别是对亚硝脲化疗药物耐药的关系。研究证明,肿瘤细胞的MGMT蛋白水平高,对烷化剂耐药;MGMT蛋白水平低对烷化剂敏感。在研究工作基础上,我们提出了以分析MGMT蛋白为依据．合理使用烷化剂、特别是使用亚硝脲类药物的预见性、个体化治疗方案。并进一步采用制备MGMT单抗的技术途径,研制出MGMT免疫组化检测试剂盒。本文结合文献和我们的研究工作,对甲基转移酶与肿瘤耐药预见性、个体化化疗的研究,从理论依据到实验研究作一全面的介绍。     

放化同期治疗对局部晚期非小细胞肺癌血浆MGMT的影响及意义

目的:比较放化同期治疗和放化序贯治疗对局部晚期非小细胞肺癌血浆中MGMT的影响。方法:2010年1月至2012年12月,64例经病理确诊的Ⅱb至Ⅲb期非小细胞肺癌患者,随机分成放化同期治疗（A组）和放化序贯治疗（B组）两组。A组采用三维适形放疗及同期每周TC方案化疗后序贯TC方案化疗2个周期。B组先接受三维适形放疗后序贯TC方案化疗4个周期。在放射治疗前、放疗开始一个月和治疗后（两组均完成四个周期化疗后）采用巢式甲基化特异性PCR方法检测MGMT基因的甲基化状态。比较两组MGMT基因甲基化阳性率的动态变化情况。结果:A、B两组缓解率分别为90.6%和68.8%;A组近期治疗有效率明显优于B组（P=0.0296）。A组和B组的中位疾病进展时间为8.8个月(3-22个月)和7.3个月(2.8-21个月）（P=0.4635)。A、B两组1年生存率分别为74.1%、72.4%;2年生存率为46.8%、45.2%(P>0.05)。在放射治疗前,A组和B组的MGMT基因甲基化阳性率分别为31.3%（10／32)和34.4%（11／32),无显著性差异(P=0.7901);放疗开始1个月甲基化阳性率分别为15.6%（5／32)和37.5%（12／32),有显著性差异(P=0.0476);治疗后甲基化阳性率分别为9.4%（3／32)和21.9%（7／32),无显著性差异(P=0.1685)。治疗前后,A组MGMT基因甲基化阳性率显著下降(P=0.0296);B组有下降趋势但无显著差异。结论:放化同期治疗较序贯治疗能够有效降低局部晚期肺癌血浆中MGMT基因异常甲基化,提示同期化疗能够抑制肿瘤放疗过程中放疗诱发的肿瘤再修复。     

Relationship Between Hypermethylated MGMT Gene and Osteosarcoma Necrosis Rate After Chemotherapy

To investigate the relativity of MGMT(O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) gene methylation from patients with protein expression and osteosarcoma necrosis rate after chemotherapy. Fifty-one oteosarcoma tissues were collected, Methylation of MGMT gene promoter was detected by methylation-specific PCR method, and protein expression of MGMT was examined by immunohistochemistry procedure, the relationship between methylated MGMT gene expression and patients response to chemotherapy was analyzed. The positive ratio of methylation MGMT gene promoter in 51 patients was 23.5% (12 in 51). Negative percentage of protein expression of MGMT was 27.5% (14 in 51). It seemed that methylation of MGMT gene in osteosarcoma tissues had no evident relationship with the patient’s age, sexuality, and the size and type of neoplasms, etc. The necrosis rates of methylated MGMT of osteosarcoma (tumor grade from I to IV) were 0 (0/51), 3.9% (2/51), 5.9% (3/51), 13.7% (7/51), respectively. In contrast, the necrosis rates of unmethylated MGMT of osteosarcoma (tumor grade from I to IV) were 45.1% (23/51), 25.5% (13/51), 3.9% (2/51), 2.0% (1/51), respectively. It suggest that methylated and unmethylated MGMT gene of osteosarcoma have significant difference in protein expression. The unmethylated MGMT gene has higher positive protein expression (u = −4.92, P < 0.001). Methylation of MGMT gene has higher tumor necrosis rate in osteosarcoma patients. Methylation in MGMT promoter may be important for judging the effect of chemotherapy in Osteosarcoma patients.     

Quantitative analysis of O<Superscript>6</Superscript>-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) promoter methylation in patients with low-grade gliomas

Methylation of the MGMT promoter is supposed to be a predictive and prognostic factor in glioblastoma. Whether MGMT promoter methylation correlates with tumor response to temozolomide in low-grade gliomas is less clear. Therefore, we analyzed MGMT promoter methylation by a quantitative methylation-specific PCR in 22 patients with histologically verified low-grade gliomas (WHO grade II) who were treated with temozolomide (TMZ) for tumor progression. Objective tumor response, toxicity, and LOH of microsatellite markers on chromosomes 1p and 19q were analyzed. Histological classification revealed ten oligodendrogliomas, seven oligoastrocytomas, and five astrocytomas. All patients were treated with TMZ 200 mg/m² on days 1–5 in a 4 week cycle. The median progression-free survival was 32 months. Combined LOH 1p and 19q was found in 14 patients; one patient had LOH 1p alone and one patient LOH 19q alone. The LOH status could not be determined in two patients and was normal in the remaining four. LOH 1p and/or 19q correlated with longer time to progression but not with radiological response to TMZ. MGMT promoter methylation was detectable in 20 patients by conventional PCR and quantitative analysis revealed the methylation status was between 12 and 100%. The volumetric response to chemotherapy analyzed by MRI and time to progression correlated with the level of MGMT promoter methylation. Therefore, our retrospective case series suggests that quantitative methylation-specific PCR of the MGMT promoter predicts radiological response to chemotherapy with TMZ in WHO grade II gliomas.     

弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血T淋巴细胞亚群与NK细胞检测的临床意义

 【摘要】　目的　探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的变化与治疗效果的关系。方法　收集经病理确诊且治疗有效的DLBCL患者47例,分别于化疗前及化疗第2个周期、第4个周期结束后第3天采集静脉血,经流式细胞术测定T淋巴细胞亚群及NK细胞,比较化疗前与化疗后T淋巴细胞亚群、NK细胞水平的差异,并与同期健康体检者50名进行比较。结果　DLBCL患者组化疗前外周血CD+3、CD+4、CD+4／CD+8、NK细胞表达水平[（70.04±8.87）%、（42.79±6.06）%、（1.68±0.59）%、（14.40±6.02）%]较健康对照组[（63.89±6.67）%、（32.72±5.77）%、（0.85±0.25）%、（9.95±5.24）%]低（P＜0.05）,而CD+8细胞表达水平较健康对照组高[（27.21±6.54）%比（39.92±7.11）%]（P＜0.05）。DLBCL患者组化疗第4个周期外周血CD+3、CD+4、CD+4／CD+8表达水平与化疗第2个周期相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）,该组患者化疗第4个周期CD+3、CD+4、CD+8、CD+4／CD+8、NK细胞表达水平与治疗前相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论　初治DLBCL患者体内存在着免疫抑制,外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞可作为反映DLBCL患者机体细胞免疫功能的较好参数,在临床上可用于免疫功能的监测,为DLBCL治疗方案的选择提供指导意义。     

脑脊液MGMT启动子甲基化在胶质瘤诊断中的应用

目的 比较胶质瘤患者脑脊液与外周血中MGMT（O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶）启动子甲基化在胶质瘤初期诊断中的敏感度和特异性。方法 收集283例胶质瘤患者肿瘤组织及其对应的术前外周血和脑脊液,10例颅脑外伤患者挫伤的脑组织及其对应的术前外周血、脑脊液。MGMT启动子甲基化状态通过甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MSP）确定,比较脑肿瘤组织,外周血和脑脊液中MGMT启动子甲基化率。结果 不同级别胶质瘤组织MGMT启动子甲基化阳性率分别为68.13%（WHO Ⅱ）、65.69% （WHO Ⅲ）以及 67.78%（WHO Ⅳ）,三者之间差异无统计学意义（P>0.05）。胶质瘤瘤体组织、对应的外周血和脑脊液启动子甲基化率为分别为67.14%、44.87%和66.08%,阴性对照组中检测结果均为0。MGMT启动子甲基化阳性瘤体组织,对应的脑脊液中MGMT启动子甲基化敏感度为79.66%（141/177）,较对应的外周血58.82%（110/187）高（P<0.05）。结论 术前患者肿瘤组织、脑脊液和外周血中MGMT启动子甲基化率与肿瘤级别无关。与外周血相比,脑脊液中的 MGMT 启动子甲基化特异性和敏感度更高。     

CpG island hypermethylation of the DNA repair enzyme methyltransferase predicts response to temozolomide in primary gliomas.

PURPOSE: The DNA repair enzyme O(6)-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) inhibits the killing of tumor cells by alkylating agents, and its loss in cancer cells is associated with hypermethylation of the MGMT CpG island. Thus, methylation of MGMT has been correlated with the clinical response to 1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (BCNU) in primary gliomas. Here, we investigate whether the presence of MGMT methylation in gliomas is also a good predictor of response to another emergent alkylating agent, temozolomide. EXPERIMENTAL DESIGN: Using a methylation-specific PCR approach, we assessed the methylation status of the CpG island of MGMT in 92 glioma patients who received temozolomide as first-line chemotherapy or as treatment for relapses. RESULTS: Methylation of the MGMT promoter positively correlated with the clinical response in the glioma patients receiving temozolomide as first-line chemotherapy (n = 40). Eight of 12 patients with MGMT-methylated tumors (66.7%) had a partial or complete response, compared with 7 of 28 patients with unmethylated tumors (25.0%; P = 0.030). We also found a positive association between MGMT methylation and clinical response in those patients receiving BCNU (n = 35, P = 0.041) or procarbazine/1-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea (n = 17, P = 0.043) as first-line chemotherapy. Overall, if we analyze the clinical response of all of the first-line chemotherapy treatments with temozolomide, BCNU, and procarbazine/1-(2-chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea as a group in relation to the MGMT methylation status, MGMT hypermethylation was strongly associated with the presence of partial or complete clinical response (P < 0.001). Finally, the MGMT methylation status determined in the initial glioma tumor did not correlate with the clinical response to temozolomide when this drug was administered as treatment for relapses (P = 0.729). CONCLUSIONS: MGMT methylation predicts the clinical response of primary gliomas to first-line chemotherapy with the alkylating agent temozolomide. These results may open up possibilities for more customized treatments of human brain tumors.