CO2对宫颈癌Hela细胞CDK9基因表达的影响

目的 研究CO2对宫颈癌Hela细胞株CDK9基因表达的影响,分析其在癌细胞生长与转移中的作用.方法 将宫颈癌Hela细胞株随机分为3组:A组Hela细胞株在压力为8mmHg的纯CO2下通气4h,培养24h;B组Hela细胞株在压力为8mmHg的纯CO2下通气4h,培养120h;C组Hela细胞株未进行CO2处理,细胞株置于常规细胞培养箱中培养120h.采用RT-PCR法检测A、B、C组宫颈癌Hela细胞CDK9 mRNA的表达.结果 A、B组与C组比较,A、B组CDK9 mRNA的相对表达量明显下调(P＜0.05);B组与A组比较,B组CDK9 mRNA的相对表达量比A组下调更显著(P＜0.01).结论 宫颈癌Hela细胞CDK9基因在CO2作用下受抑制出现表达下调,且随CO2作用时间越长,CDK9基因相对表达量降低越明显.     

鸦胆子油乳对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其作用机制

目的:探讨鸦胆子油乳对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其可能的机制.方法:采用倒置显微镜及巴氏染色法,观察药物质量浓度分别为5、10 μg/ml作用下细胞形态的变化;用MTT法检测5个不同药物质量浓度(40、20、10、5、2.5 μg/ml)作用下药物对细胞的抑制率;用流式细胞仪检测药物质量浓度分别为10、20 μg/ml的实验组细胞周期的变化.结果:鸦胆子油乳作用后,颈癌Hela细胞形态上都发生了改变,凋亡小体出现;鸦胆子油乳显著抑制了宫颈癌Hela细胞的增殖,作用48 h后各组中抑制率都已超过60%,72 h后抑制率都超过80%;鸦胆子油乳阻滞S期细胞进入G2～M期,并且有凋亡峰,10、20 μg/ml药物作用后细胞凋亡率分别为59.9%、69.8%.结论:鸦胆子油乳可有效抑制宫颈癌Hela细胞的增殖且呈时间依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞于S期有关.     

Cyclin A、CDK2基因在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的研究细胞周期素A（Cyclin A）和细胞周期素依赖性激酶2（cyclin—dependent kinases，CDK2）基因在非小细胞肺癌（non—small—cell lung cancer，NSCLC）组织中的表达及其相互关系，探讨其对NSCLC发生、发展、淋巴结转移及预后的影响。方法采用免疫组织化学二步法检测40例NSCLC（伴淋巴结转移21例，不伴淋巴结转移19例），11例支气管黏膜上皮增生或不典型增生，9例淋巴结转移癌组织中Cyclin A、CDK2蛋白的表达，并随访40例NSCLC患者3年生存期。结果在支气管黏膜上皮增生或不典型增生，不伴淋巴结转移的NSCLC，伴淋巴结转移的NSCLC，淋巴结转移癌组织中，Cyclin A蛋白的阳性表达率分别为9．09％（1／11），31．58％（6／19），80．95％（17／21），66．67％（6／9）；CDK2蛋白的阳性表达率分别为9．09％（1／11），36．84％（7／19），76．19％（16／21），77．7896（7／9）；不伴淋巴结转移的NSCLC组织中的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率分别与伴淋巴结转移NSCLC组织、淋巴结转移癌组织的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率比较，差异均有显著性（P均〈0．05）。23例Cyclin A蛋白表达阳性患者3年生存率为21．74％（5／23），17例表达阴性患者3年生存率为58．82％（10／17），两者比较有显著性差异（P〈0．05）；23例CDK2蛋白表达阳性息者3年生存率为17．39％（4／23），17例表达阴性患者3年生存率为64．71％（11／17），两者比较有显著性差异（P〈0．05）。NSCLC中Cyclin A与CDK2蛋白表达呈正相关（x^2=19．22，P〈0．001，列联系数Pearson=0．570）。结论在NSCLC发生、演进、浸润、淋巴结转移过程中Cyclin A、CDK2起正调控作用，NSCLC组织中Cyclin A、CDK2表达上调可作为判断NSCLC预后不良的参考指标。     

COX-2反义寡核苷酸抑制宫颈癌Hela细胞的研究

目的：通过研究环氧合酶-2（COX-2）反义寡核苷酸（AS-ODNs）对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及对其抑制原理进行分析,探讨COX-2 AS-ODNs对宫颈癌的治疗意义.方法：Hela细胞分6组培养：对照组（A）、正义寡核苷酸（SODNS）组（B）、脂质体组（C）及反义寡核苷酸组 （D）设3个亚组.MTT实验检测细胞的增殖情况;在转染后48 h,RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达水平,Western blot检测COX-2蛋白的表达,流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果：与其他组比较,AS-ODNs转染的细胞增殖缓慢,且随着AS-ODNs的浓度增加细胞增殖指数有下降的趋势,COX-2 mRNA及蛋白表达明显下调,表达量随AS-ODNs转染浓度的增加而减少,细胞周期S期细胞比例明显减少,G2/M及G0/G1期细胞所占比例增多,P ＜0.05.结论：COX-2反义寡核苷酸对Hela细胞的增殖有抑制作用;其抑制机制可能与抑制COX-2转录与翻译及细胞周期再分布有关.     

微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-206(miR-206)对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期素G相关蛋白激酶(GAK)表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18(t=6.572,P=0.001)、0.43±0.17(t=5.794,P=0.001),GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04(t=22.420,P<0.001)、0.32±0.08(t=14.500,P<0.001).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期(23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035)和G2-M期(16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033)的细胞比例下降,在G0-G1期(60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P<0.001)的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱(22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005).集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80(t=3.370,P=0.015)、82.65±14.05(t=6.708,P=0.001),提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法:培养人宫颈癌Hela细胞,不同浓度Rg3处理,HE染色观察细胞形态学改变,CCK-8、流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:Rg3作用后Hela细胞出现了典型的凋亡形态学变化,包括细胞皱缩、细胞核内染色体浓缩。10、20、40、80μg/ml人参皂苷Rg3处理48小时后Hela细胞的平均生存率为76.3%、57.1%、50.0%、29.8%;流式细胞术(FCM)显示肿瘤细胞凋亡率为16.4%、37.0%、50.0%、69.8%,表明肿瘤细胞在人参皂苷Rg3诱导下发生凋亡。结论:Rg3能抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡作用呈剂量依赖性。     

RNAi沉默环氧合酶-2基因对宫颈癌Hela细胞细胞周期影响的实验研究

目的:利用RNA干扰(RNAi)抑制宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygen-ase-2,COX-2)表达研究其对细胞周期的影响。方法:构建特异性COX-2小干扰RNA(siRNA)真核表达载体质粒Pgenesil-COX-2,以脂质体法将其转染至人宫颈癌Hela细胞。转染48h分别用RT-PCR和Western blot方法评价Pgenesil-COX-2对COX-2表达的抑制效应,48和96h时用流式细胞技术检测Hela细胞细胞周期,用RT-PCR方法检测CyclinE的表达变化。结果:转染48h后,Pgenesil-COX-2特异性抑制了Hela细胞COX-2的表达,与对照组比较差异有统计学意义,t=4.496,P=0.002。48及96h流式细胞仪分析显示,转染Pgenesil-COX-2后Hela细胞增殖活性降低,与对照组比较G0/G1期细胞增多,t值分别为3.217和2.495,P值分别为0.011和0.043;S期细胞减少,t=5.978和6.137,P值均为0.000。同时,CyclinE表达降低,t值分别为2.879和8.612,P值分别为0.020和0.000。结论:siRNA真核表达载体可特异性抑制Hela细胞COX-2基因的表达,抑制COX-2表达可能通过下调Cy-clinE的表达使细胞周期阻滞于G0/G1期。     

抗癌药物对宫颈癌细胞HeLa端粒酶活性的影响

目的：观察阿霉素、丝裂霉素、紫杉醇、顺铂和环磷酰胺五种抗癌药对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：运用MTT法测定24小时的药物IC50在此基础上，运用端粒重复序列扩增—酶联免疫吸附法测定细胞经过不同浓度的抗癌药作用不同时间后端粒酶活性的变化。结果：细胞对不同药物有不同敏感性。五种药物均能下调端粒酶活性，但只有阿霉素、紫杉醇和顺铂在作用24小时后迅速而明显地影响端粒酶活性。IC50／3浓度处理72小时的效果与IC50。浓度处理24小时的效果相当。结论：五种药物都能通过直接或间接的方式下调端粒酶活性，其机制可能与药物浓度及时间依赖有关。     

运用saRNA激活p21基因表达上调对肺癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的：探讨利用针对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21WAF1/CIP1（p21）的基因启动子的saR-NA（dsp21-322）特异激活p21基因的表达对肺癌细胞生长及耐药的影响。方法：化学合成针对p21启动子区的saRNA,将其转染非小细胞型肺癌细胞系A549,利用RT-PCR技术及Western blotting技术检测细胞中p21表达情况,进而观察p21表达改变后细胞凋亡情况及对顺铂药物敏感性的影响。结果：在转染dsp21-322的A549肺癌细胞中,p21的mRNA和蛋白的表达均有所上调。p21表达的上调可引起A549细胞生长的的明显抑制并可增强其对顺铂的化疗敏感性。结论：p21基因在肺癌药物耐药性的过程中发挥了作用,为应用saRNA上调抑癌基因治疗肿瘤提供了新的思路。     

DNA甲基转移酶1在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义

 目的　探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义。方法　选择经病理学确诊的子宫颈鳞状细胞癌（SCC）患者80例、子宫颈上皮内瘤样变（CIN）患者105例（CINⅠ 52例,CINⅡ／Ⅲ 53例）和子宫颈正常（NC）者53名,收集其手术或活组织检查子宫颈组织标本。选择子宫颈癌Caski细胞（HPV16阳性）和C33A细胞（HPV阴性）进行体外实验。分别采用Western blot和实时荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测子宫颈组织和细胞中DNMT1蛋白和mRNA的表达。结果　DNMT1蛋白和mRNA的表达水平在CIN及SCC组织中均较NC组织高,差异均有统计学意义（F＝110.57,P＜0.001;F＝2.68,P＝0.048）;随着子宫颈病变程度的加重,DNMT1蛋白表达水平呈逐渐上升趋势（χ2趋势＝50.80,P＜0.001）,但DNMT1 mRNA的表达在调整子宫颈癌相关因素后,未显示相同趋势（χ2趋势＝3.63,P＞0.05）。Caski 细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平均较C33A细胞高,特别是mRNA的表达水平差异有统计学意义（t＝7.134,P＝0.002）。结论　DNMT1蛋白和mRNA高表达均是导致子宫颈癌和癌前病变发生的危险因素,HPV16感染与DNMT1转录功能异常对子宫颈癌的发生可能有协同效应。     

槲皮素抑制X线照射后宫颈癌Hela细胞侵袭性的作用

目的:研究放射线及槲皮素对人宫颈癌Hela细胞侵袭性变化的影响,并初步探讨VEGF、MMP-9表达对其影响。方法:MTT法检测不同浓度的槲皮素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;Transwell体外侵袭实验分别观察放射线及不同浓度槲皮素作用后24h细胞的侵袭能力的改变。Western blot法检测不同浓度槲皮素、放射线单独及联合应用后Hela细胞中VEGF、MMP-9蛋白的表达。结果:槲皮素对Hela细胞具有增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性（P<0.05）,24小时的IC50值约为120μmol/L。与空白组比较,X线照射24h后细胞侵袭能力增加（P<0.01）,槲皮素对HeLa细胞的侵袭能力具有抑制作用（P<0.01）,槲皮素与X线共同处理细胞后,仍具有明显的抑制侵袭能力（P<0.01）,组间差异具有统计学意义。X线单独作用后VEGF、MMP-9蛋白表达在一定时间内有增加的趋势（P>0.05）,槲皮素、以及联合X线组VEGF、MMP-9蛋白表达降低（P<0.05）。结论:X线照射后宫颈癌Hela癌细胞侵袭潜能短暂增强;槲皮素能抑制X线照射后宫颈癌细胞的侵袭能力。机制可能与槲皮素能下调VEGF、MMP-9的表达有关。     

EXPRESSION OF INTRON 9 IN CD44 GENE IN CERVICAL CANCER AND CIN AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

Cervical cancer is the commonest malignant neoplasia in women’s generative system. It is the first reason for women’s death[1]. More and more young patients are found. The morbility rate in women less than 50 years olds has increased 10.3%, and it has been increasing at the rate of 3% per year. Traditional method to find cervical cancer was based on cell pathology in cervical exfoliated cells which was affected by many factors. The false negative rate isabout 2%～50%[2]. So it is urgent to …     

棕榈酸在体外通过促进凋亡作用抑制宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的 探讨体外棕榈酸(Palmitic acid,PA)抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡作用及其部分机制。方法 体外培养的宫颈癌HeLa细胞分为对照组(不加药)、PA处理组(分别加入PA 25、50、100μg/mL处理),CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况,Transwell试验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测不同浓度PA处理后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达,PA处理后的HaLa细胞用膜联蛋白V/碘化丙啶双标,随后用流式细胞仪检测其凋亡情况。结果 与对照组比较,PA处理HeLa细胞后增殖抑制率逐渐增高(P＜0.05);PA处理后,HaLa细胞的迁移与侵袭能力显著下降(P＜0.05);同时,PA处理HeLa细胞后,随着PA浓度增高,Bcl-2基因表达逐渐降低,而Bax和Cleaved-caspase-3基因表达逐渐增强与流式细胞仪检测结果相符合,HeLa细胞的凋亡率随着PA浓度增高逐渐增高(P＜0.05)。结论 PA体外可抑制HeLa细胞增殖,减少其迁移与侵袭水平,并诱导其凋亡,其机制可能与调节HeLa细胞Bcl-2家族有关。     

Ki-67抗原与CDK8在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的：探究Ki-67抗原与细胞周期依赖性蛋白激酶8（CDK8）在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中的表达和临床意义。方法选取宫颈癌患者64例,宫颈上皮内瘤变（CIN）患者138例,并对其进行分级分期,同时选取正常妇女宫颈组织50例,运用免疫组化方法检测所纳入研究病例宫颈组织Ki-67抗原与CDK8的表达水平。结果Ki-67与CDK8在正常宫颈、宫颈癌、CIN中的阳性率比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）;Ki-67与CDK8在宫颈癌各分化程度间,各临床分期间的阳性率比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）;Ki-67与CDK8在鳞癌中的阳性率与腺癌比较,及在有无淋巴结转移宫颈癌中的阳性率比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 Ki-67抗原及CDK8与宫颈癌、CIN的病变程度存在一定的关系,检测其表达水平和强弱可能有助于预测宫颈高度病变的转归。     

非小细胞肺癌mRNA的表达谱分析

目的 检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织和正常肺组织中mRNA的表达差异,并进行生物信息学分析。方法 采用基因芯片技术对3例NSCLC组织和3例正常肺组织的mRNA进行检测,筛选差异表达基因,进一步对差异表达基因进行Gene Ontoloty（GO）分析和信号通路分析。结果 在20 716条目的基因中共发现两种组织差异表达基因896条,其中593条基因表达增加,303条基因表达降低;生物信息学分析表明上述差异性表达的mRNA参与了NSCLC重要的生物学调节功能和通路。结论 基因芯片技术可以筛选出NSCLC组织和正常肺组织间差异表达的基因,mRNA在NSCLC组织和正常肺组织间的表达水平有明显差异,差异性表达的mRNA参与了NSCLC重要的生物学功能。     

HPV16 E6、P21^WAF1、CDK2、Livin在宫颈癌中的表达及其意义

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16E6、P21^WAF1、CDK2、livin在宫颈癌中的表达及P21^WAF1、CDK2、livin与E6的关系。方法采用免疫组化SP法检测HPV16E6、P21P21^WAF1、CDK2、livin在20例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变（CIN）及20例正常对照组中的表达。应用图像分析软件分别对此四个因子的表达进行平均光密度分析。结果E6、P21^WAF1、CDK2、livin蛋白于宫颈癌组高于CIN1-2组及正常组（P〈0．05）,CIN3组高于CIN1-2组及正常组（P〈0．05）,宫颈癌组与CIN3组之间差异无统计学意义（P〉0．05）,CIN1-2组与正常组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。E6分别与P21^WAF1、CDK2、livin成正相关（相关系数r分别为0．706、0．713、0．711,P〈0．05）。结论E6、CDK2与宫颈癌的发生、发展密切相关,E6、CDK2异常高表达可能是宫颈疾病恶变早期事件。livin可能成为宫颈癌潜在的治疗分子靶向。