全身低温对吸入性损伤大鼠肺的保护作用

目的 观察全身低温对烟雾吸入性损伤大鼠的急性肺部损伤的影响.方法 将54只健康雄性SD大鼠随机分为3组,正常对照组、单纯致伤组、全身低温组,每组18只.单纯致伤组致伤后放恒温水浴箱中,维持正常体温.全身低温组致伤后作全身低温处理维持(33±0.5)℃持续1 h后升为正常体温.正常对照组不致伤.3组大鼠于伤后6 h后取腹主动脉血2 mL离心取血清,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量.取右下肺行病理切片,左肺作肺组织湿干重比.结果 单纯致伤组和全身低温组与正常对照组相比烟雾吸入性损伤6 h后肺组织湿干重比显著升高(P＜0.05),腹主动脉血中TNF-α、IL-6的含量显著升高(P＜0.05),肺部充血水肿及炎症细胞浸润程度严重.全身低温组与单纯致伤组相比肺组织湿干重比降低(P＜0.05),腹主动脉血中TNF-α、IL-6的含量降低(P＜0.05),肺部充血水肿及炎症细胞浸润程度减轻.结论 全身低温可以减轻烟雾吸入性损伤大鼠的急性肺部炎症、减轻肺损伤.     

烟雾吸入性损伤血清对PMN粘附的影响

目的：通过大鼠烟雾吸入务血清体外刺激培养的内皮细胞和中性粒细胞（ＰＭＮ）,了解ＰＭＮ粘着的变化,以及抗ＣＤ１１ａ和抗ＩＣＡＭ－泽ＰＭＮ粘着的影响,探讨粘附因子在烟协和有入性损伤中的作用。方法：在体外实验中用荧光标记ＰＭＮ,测定ＰＭＮ与烟雾吸入性损伤血清刺激的内皮细胞的粘着率,并本阻断技术,测定了粘附因子ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ和ＩＣＡＭ－１在ＰＭＮ粘着的作用。结果：吸入伤血清能粘着率增高,１２－２４     

卡托普利对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用

目的:探讨卡托普利对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组、致伤组、卡托普利组。卡托普利组烟雾吸入性致伤后腹腔注射卡托普利,致伤组致伤后注射与卡托普利组等体积的生理盐水,对照组不做致伤处理。检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的水平。并取各组5 h大鼠左肺组织行病理切片光镜观察。结果:光镜下对照组肺泡结构清晰完整;致伤组肺组织肺泡间质增宽、炎细胞浸润;卡托普利组肺组织炎细胞较致伤组减少。卡托普利组各时相点血清TNF-α和IL-6含量高于对照组(P<0.01),但低于致伤组(P<0.05)。致伤组IL-10含量与对照组相比无差异(P>0.05),卡托普利组IL-10含量高于对照组(P<0.01)。卡托普利组各时相点肺组织MDA和MPO含量均高于对照组(P<0.01),但低于致伤组(P<0.05)。卡托普利组5 h肺组织SOD含量高于致伤组(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.01)。结论:卡托普利可减轻烟雾吸入性损伤大鼠体内炎性反应,对肺组织有一定的保护作用。     

依达拉奉对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用

目的观察雾化吸入依达拉奉(EDA)对烟雾吸入性损伤大鼠肺的保护作用。方法将雄性大鼠30只随机均分为对照组、模型组、EDA低剂量组、EDA高剂量组、EDA预防组。对照组不做任何处理,其他各组建立肺损伤模型。计算各组氧合指数(OI)、肺组织含水率及湿干比(W/D);检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量;测定肺组织丙二醛(MDA)、肺髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性及细胞凋亡率;肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察。结果与对照组比较,其余各组肺组织含水率、W/D、TNF-α、IL-6、IL-10、MDA、MPO、Caspase-3及细胞凋亡率水平明显升高(P＜0.05),OI及SOD水平降低(P＜0.05)。与模型组比较,EDA各组肺组织含水率、W/D、TNF-α、IL-6、MDA、MPO、Caspase-3、细胞凋亡率水平下降(P＜0.05),OI、IL-10及SOD水平升高(P＜0.05),且EDA预防组变化最显著。镜下EDA各组较模型组肺组织水肿减轻,炎症细胞浸润明显减少。结论依达拉奉能改善烟雾吸入性肺损伤,并呈剂量依赖性,且预防性用药效果更佳。     

重度烧伤伴吸入性损伤13例临床分析

目的:总结13例重度烧伤伴吸入性损伤患者的诊治经验。方法:通过对13例重度烧伤伴吸入性损伤患者临床资料进行回顾性分析,从影像学、纤维支气管镜检查、机械通气、血生化变化及病死率方面观察。结果:治愈8例,病死5例。结论:早期气管切开,合理补液,加强呼吸支持,尽早尽快处理创面,减少脓毒血症的发生率,是重度烧伤伴吸入性损伤救治的关键环节。     

烧伤合并吸入性损伤病人的肺功能检测

报道了36例烧伤病人的肺功能检测，结果：（1）中等面积，大面积烧伤和体表烧伤合并吸入性损伤患者用力肺活量（FVC），第1秒时间肺活量（FEV1.0，呼出50%肺活量时的呼气流速（FEF50%），呼出75%用力肺活量时的呼气流速（FEF75%）降低，于伤后50h降至最低值；（2）中等烧伤面积组伤后10d时FVC，FEV1.0，FEF50%，FEF75%有所回升；至伤后30d恢复正常；（3）大面积烧伤和体表烧伤合并吸入性损伤组伤后50h和10d均明显降低；伤后30d有所升高，除大面积烧伤组FVC伤后30d时FVC已恢复正常外，均未达到正常范围；（4）体表烧伤合并吸入性损伤组的各时点所观察的肺功能参数下降较大面积烧伤组更为明显，采用微型肺量计检测对监护烧伤病人肺功能具有一定临床意义。     

预防性应用槲皮素对吸入性损伤大鼠肺治疗效果的影响

目的:探讨槲皮素在吸入性损伤中对肺的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawle大鼠40只采用随机数字表法随机分为4组:正常对照组(A组)、致伤空白组(B组)、槲皮素治疗组(C组)、槲皮素预防组(D组),每组10只。C组在致伤后3 h腹腔注射槲皮素(200 mg/kg),D组在致伤前10 min腹腔注射槲皮素(200 mg/kg),B组于致伤后3 h腹腔注射等量的生理盐水,A组无处理。各组分别于致伤后72 h留取大鼠腹主动脉血液样本5 mL离心检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,留取肺组织制备肺组织匀浆后测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性。取右肺组织做肺组织干湿比。取部分肺组织做病理HE染色切片并光镜观察。结果:C组较B组TNF-α、IL-6、MDA、iNOS水平降低(P<0.01),SOD水平增高(P<0.01)。D组上述变化更明显(P<0.01)。光镜下B组肺泡形态不规则,肺泡壁不均匀,大量炎症细胞浸润,C组及D组较B组病理变化减轻。与C组比较,D组肺含水量下降(P<0.05)。结论:槲皮素可能通过增强肺水的清除,减少炎症介质的释放及抑制自由基生成对烟雾吸入性肺损伤起到保护作用。提前用药效果更好。     

吸入一氧化氮改善犬烟雾吸入性损伤的氧合功能

目的：评价吸入一氧化氮（ＮＯ）在犬烟雾吸入性损伤氧合功能改善的效果。方法：烟雾吸入伤后，１７只犬随机分为２组，对照组（ｎ＝８）单纯吸氧（ＦＩＯ２，０．４５）治疗组（ｎ＝９）吸氧（ＦＩＯ２，０．４５）＋０．００４５％（４５×１０＾－６）ＮＯ，连续监测１２ｈ血气及动脉血乳酸变化，数据行多个样本的均数间方差分析。结果：吸入ＮＯ治疗组ＰａＯ２动静脉氧含量差（Ｃａ－ｖＯ２）５０％ＳａＯ２时血氧分压（Ｐ５０Ｏ     

受体介导的细胞内信息传递系统在烟雾吸入性损伤肺组织的变化及机制的研究

受体介导的细胞内信息传递系统在烟雾吸入性损伤肺组织的变化及机制的研究Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｃｈａｎｇｅｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｓｓｅｎｇｅｒｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｉｎ...     

低分子肝素对吸入性损伤大鼠肺愈合的影响

目的:探讨低分子肝素对吸人性损伤大鼠肺的治疗效果.方法:将40只Wistar大鼠随机分为4组,正常对照组和致伤组分别在气管内滴注生理盐水,高、低剂量肝素组气管内滴注低分子肝素.各组分别于致伤48 h后测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量,取右肺做肺组织干湿比,左肺做肺组织病理切片和Brdu免疫组化以观察肺上皮细胞的增殖.结果:与致伤组相比,高低剂量肝素组肺含水量、TNF-α和IL-6的含量下降,Brdu标记的肺上皮细胞数增高,两肝素组间没有明显的差异.光镜下正常对照组大鼠肺组织正常,致伤组肺泡间隔增厚,肺泡腔内可见大量粒细胞聚集、浸润,而肝素组上述病理变化较轻.结论:低分子肝素大鼠气管内给药可以减轻吸人性损伤后引起的肺水肿和炎症反应,并有利于肺上皮细胞的增殖与修复.     

组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的综合鉴定

目的 为组织块法培养的大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells,RPMVECs)建立合理可靠的多指标综合鉴定方案.方法 采用外周肺组织贴块法培养RPMVECs,抽取组织块进行切片观察,以大鼠肺动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞为对照,对培养细胞进行CD34、植物凝集素BSI、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构.结果 组织切片显示组织块源于外周肺组织,CD34免疫细胞化学染色阳性,植物凝集素BSI结合试验阳性,而Ⅷ因子相关抗原染色阴性,透射电镜未见Weibel-Palade小体.结论 Ⅷ因子相关抗原和Weibel-Palade小体并非RPMVECs鉴定的理想指标,联合应用外周肺组织切片、CD34和植物凝集素BSI三指标为组织块法培养的RPMVECs提供了一个简单易行、合理、可靠的综合鉴定方案.     

免疫磁珠分选法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞

目的：探讨一种高效、稳定的小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）原代培养方法。方法：选取45只1周龄Balb/c小鼠,随机分成3组,分别用酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法3种方法分离培养小鼠PMVECs,观察细胞形态学以及VIII因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞,计算各组原代培养成功率及从原代培养开始到首次传代所需时间,测定细胞纯度,MTT法绘制生长曲线。结果：3组原代培养的细胞在倒置显微镜下均能见到短梭形、多边形的微血管内皮细胞,血管内皮细胞特异性标志物VIII因子相关抗原表达阳性。免疫磁珠分选法组原代培养成功率及细胞活性显著高于其他2组,差异有统计学意义（P＜0.01）,从原代培养至首次传代所需的时间短于组织贴块法组,差异有统计学意义（P＜0.05）,细胞纯度显著高于酶消化法组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：相比于酶消化法与组织贴块法,免疫磁珠分选法原代培养小鼠PMVECs具有重复性好,分离速度快,细胞纯度高及活性好的优点。     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞ACE和ACE2表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂的干预作用

目的 观察脂多糖(LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂( ACEI) Captopril的干预作用.方法 组织块法体外培养大鼠PMVECs,观察LPS对PMVECs作用的时间和浓度相关毒性以及Captopril的干预作用;再将PMVECs随机分为4组:对照组(n=6),不加干预措施;Captopril组(n=6),10-5mol/L Captopril孵育细胞8 h;LPS组(n=6),1 mg/mL LPS孵育细胞8 h;Captoril+ LPS组(n=6),10-5 moL/L Captopril孵育细胞30 min后再加入1 mg/mL LPS孵育8h.CCK8检测细胞活性;Western blotting法检测各组细胞ACE和ACE2的表达.结果 LPS可对大鼠PMECs产生明显的毒性作用,并可使细胞ACE表达上调及ACE2表达下降;经Captopril干预后,可明显抑制LPS的细胞毒性作用,并逆转LPS对PMVECs中ACE及ACE2表达的影响,使ACE和ACE2表达水平回调至对照组水平.结论ACEI能减轻LPS所致的PMVECs毒性作用,而ACE及ACE2表达的变化可能在这一过程中起重要作用.     

模拟失重对肺微血管内皮细胞F-actin的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞纤维肌动蛋白（F-actin）的影响,探讨其在失重环境下的损伤机制。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养24h、48h和72h,同时设1g同步对照静置培养。采用免疫荧光技术标记PMVEC内的F-actin,以激光共聚焦显微镜观察采集荧光图像。结果：与同步对照相比,不同时间回转的PMVEC微丝骨架均发生明显破坏,且这种破坏随着回转模拟失重时间的延长而加重。结论：模拟失重可破坏PMVEC内F-actin,导致PMVEC损伤。     

模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响

目的：观察回转模拟失重对肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法：组织块贴壁法原代培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）,采用回转器模拟失重效应。PMVEC回转培养48h,同时设1g对照静置培养。采用Hoechst33258染色,荧光显微镜观细胞凋亡的形态学改变;采用Annexin V—FITC试剂盒对细胞染色,以流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果：回转模拟失重48h后,Hoeehst33258染色结果发现细胞凋亡明显增加;流式细胞仪定量结果表明回转48hPMVEC的凋亡率为19．85％,显著高于同步对照组PMVEC的凋亡率13．72％（19．85％±1．29％vs13．72％±1．15％,P〈0．01）。结论：48h回转模拟失重可明显诱导PMVEC发生凋亡。     

尿毒症患者血清对大鼠肺微血管内皮细胞单层通透性和骨架蛋白的影响

目的 观察尿毒症患者血清对培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)单层通透性、肌动蛋白骨架(F-肌动蛋白)的影响,探讨尿毒症患者血清对肺微血管内皮细胞损伤的机制.方法 体外培养大鼠RPMVEC并鉴定;用针头式滤器观察尿毒症患者血清对RPMVEC单层通透性的影响;F-actin用流式细胞仪测定.结果 健康对照组6、12 h单层通透性系数分别为(0.0382 4±0.0022)、(0.0393±0.0016)ml·min-1·cm-2·kPa-1;尿毒症患者血清6、12 h单层通透性系数分别为(0.0687±0.0014)、(0.0772±0.0031)ml·min-1·cm-2·kPa-1;流式细胞仪测定F-肌动蛋白的值分别为:阴性对照组10.60±3.3、正常健康对照组1233.34±13.92、尿毒症血清组(6 h)712±51、尿毒症血清组(12 h)613.31±42.81;实验发现尿毒症患者血清100μl作用于RPMVEC 6、12 h可使RPMVEC的单层通透性增高(P<0.01);F-肌动蛋白解聚(P<0.01),且二者呈负相关(r=-0.927,P<0.01).结论 尿毒症患者血清作用于RPMVEC一定时间,可引起RPMVEC单层通透性的增高与F-肌动蛋白解聚.尿毒症患者血清引起内皮单层通透性的增高的机制与F-肌动蛋白解聚密切相关.     

内毒素诱导急性肺损伤大鼠血清对内皮细胞通透性的影响及乌司他丁的保护作用研究

目的:研究乌司他丁对大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:将15只SD大鼠分成3组:A组为健康对照组,B组为内毒素(LPS)诱导ALI组,C组为LPS诱导ALI应用乌司他丁治疗组。收集3组大鼠的血清分别作用于大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC),观察血清刺激后RPMVEC通透性的改变及F-肌动蛋白的变化。结果:B组大鼠的血清使RPMVEC通透性明显增加,C组大鼠的血清明显减小RPMVEC的通透性。3组的通透系数与未加血清对照组通透系数的百分比依次为(7.31±0.27)%、(30.13±1.24)%、(18.94±0.59)%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。B组大鼠的血清可使RPMVEC F-肌动蛋白的荧光强度明显降低、F-肌动蛋白解聚,C组大鼠血清则明显减低F-肌动蛋白的解聚程度,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS诱导ALI大鼠的血清可引起RPMVEC单层通透性增高与F-肌动蛋白解聚;乌司他丁可减轻ALI过程中炎症介质对内皮细胞骨架的影响,改善内皮细胞的通透性。     

大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定

目的改进大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征和生长特性,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞表面标志物Ⅷ因子相关抗原和CD31表达,荧光显微镜观察细胞与PMVECs的特异性结合物植物凝集素BSI的结合情况（FITC-BSI结合试验）。结果倒置显微镜下,培养细胞呈多边形或梭形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌生长并有接触抑制现象;免疫组织化学染色显示,细胞CD31和Ⅷ因子表达阳性;FITC-BSI结合试验呈阳性结果。结论改进的原代细胞培养方法操作简单、可重复性好且成功率高;综合鉴定表明培养细胞形态学及生物学特性与PMVECs一致。     

大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进及细胞鉴定

目的 改进大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）的原代培养方法,并对培养细胞进行相关鉴定。方法 从动物选择、取材、循环灌注、植块贴壁等方面对体外分离PMVECs的原代培养方法进行改良。原代培养细胞经传代、冻存与复苏,倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征和生长特性,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞表面标志物Ⅷ因子相关抗原和CD31表达,荧光显微镜观察细胞与PMVECs的特异性结合物植物凝集素BSI的结合情况（FITCBSI结合试验）。结果 倒置显微镜下,培养细胞呈多边形或梭形,融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌生长并有接触抑制现象;免疫组织化学染色显示,细胞CD31和Ⅷ因子表达阳性;FITC-BSI结合试验呈阳性结果。结论 改进的原代细胞培养方法操作简单、可重复性好且成功率高;综合鉴定表明培养细胞形态学及生物学特性与PMVECs一致。     

大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法

目的建立一种简便可靠的脑微血管内皮细胞的培养方法.方法新生SD乳鼠脑皮质经匀浆、过滤、消化和差速贴壁等方法对大鼠脑微血管内皮细胞进行原代培养及传代培养,对培养的细胞进行形态学观察,并用Ⅷ因子相关抗原进行免疫细胞化学鉴定.结果培养的细胞呈单层贴壁生长,约7～9d后呈典型的"铺路石"征象,免疫细胞化学鉴定证实为内皮细胞.结论此种脑微血管内皮细胞培养方法的建立为体外研究脑血管疾病提供了可靠的手段.