低氧性肺动脉高压大鼠肺组织相关凋亡基因表达的研究

目的 探讨bcl-1、bax、Fas、FasL凋亡相关基因在低氧肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其与发病的关系。方法 60只Wistar大鼠随机分为5组：正常对照组；低氧肺动脉高压组；血晶素组；锡原卟啉；低浓度CO组；每组12只。采用组织的原位细胞凋亡、DNA片段检测，免疫组织化学染色，原位杂交等方法进行检测。结果 低浓度CO组和血晶素组肺组织有典型的DNA梯带，bcl-2、bax、Fas、FasL免疫组化显示的表达呈强棕黄色，比低氧组均显著升高，原位杂交可见，低浓度CO组和血晶素组肺内支气管和小血管壁细胞胞浆呈强的紫蓝色，bcl-2基因呈棕黄色，比低氧组降低，原位杂交可见呈紫蓝色，结论 CO可以调节bcl-2、bax、Fas、和FasL凋亡基因的表达，而这些凋亡基因又通过不同途径参与低氧肺动脉高压肺组织的细胞凋亡的调节，并在慢性阻塞性肺疾病的发生与发展中发挥重要作用。     

低氧肺动脉高压时血红素氧合酶基因表达状况的研究

目的 探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)基因在低氧肺动脉高压大鼠肺动脉组织中的表达及一氧化碳(carbon monoxide,CO)对其的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为5组:常氧组;低氧肺动脉高压组;血晶素组;锡原卟啉组;低浓度CO组(n=12).采用紫外分光光度计、逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学染色和原位杂交进行检测.结果 ①HO-1活性:低氧组、血晶素组、低浓度CO组肺动脉组织HO-1活性以胆红素生成量计算,均升高,其中血晶素组最高,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01).②逆转录-聚合酶链反应:各组大鼠肺动脉HO-2 mRNA表达没有明显变化,均保持稳定.缺氧组、血晶素组、锡原卟啉组和低浓CO组HO-1 mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质均明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质 明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加     

一氧化碳调节低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的: 探讨一氧化碳对低氧大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将大鼠随机分为4组:常氧对照组(n=7)、低氧组(n=6)、低氧+锌原卟啉组(低氧+ ZnPP组,n=6)及低氧+低浓度一氧化碳组(低氧+低浓度CO组,n=5).应用Bcl-2、Caspase-3多克隆抗体和NF-κΒ单克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法(TUNEL)对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行凋亡定位及半定量分析.结果: (1)低氧组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分低于对照组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组;(2)低氧+ ZnPP组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数明显低于对照组和低氧组,平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显低于对照组,与低氧组无差异;NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组和低氧组;(3)低氧+低浓度CO组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显高于对照组、低氧组及低氧+ZnPP组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显低于低氧组及低氧+ZnPP组,与对照组差异无显著性.结论: CO促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡,同时还伴有Bcl-2和NF-κΒ的变化.     

血红素氧合酶-1对大鼠脑外伤后细胞凋亡的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠颅脑外伤后细胞凋亡的作用。方法 72只成年雄性SD大鼠,随机分为血晶素组、生理盐水组和锌原卟啉组。采用液压冲击伤复制颅脑外伤的动物模型,伤后予以45mg/100mg体质量腹腔注射诱导剂血晶素、抑制剂锌原卟啉、生理盐水干预HO-1的表达。SP免疫组织化学法测定HO-1和抗凋亡蛋白(Bcl-2)的表达以及TUNEL法检测凋亡细胞。结果血晶素组HO-1表达较生理盐水组和锌原卟啉组显著增加(P<0.01)。血晶素组Bcl-2表达较生理盐水组和锌原卟啉组显著增加(P<0.01)。同时,血晶素组凋亡指数较生理盐水组和锌原卟啉组显著降低(P<0.01)。结论 HO-1在颅脑外伤中的表达,具有上调Bcl-2的表达,抗细胞凋亡的作用。     

钙蛋白酶介导低氧诱导的肺动脉高压肺血管重构

目的：研究钙蛋白酶(calpain)在低氧诱导肺动脉高压肺血管重构中的作用及机制。方法：SD大鼠随机分为低氧模型组和常氧对照组。插管法测定大鼠右心室收缩压及平均肺动脉压,右心室/(左心室+室间隔)比值评价右心肥厚指数,HE染色检测血管重构情况,分别采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肺动脉calpain-1,-2和-4 mRNA和蛋白的表达。原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞分为4组：常氧对照组、常氧对照+ MDL28170(calpain抑制剂)组、低氧模型组、低氧模型+MDL28170组。MTS及流式细胞术观察细胞增殖情况,实时荧光定量PCR检测Ki-67及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA) mRNA表达情况。结果：与常氧对照组大鼠比较,低氧模型组大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压及右心肥厚指数显著增加,肺动脉血管显著重构;同时,低氧模型组大鼠肺动脉中calpain-1,-2,-4 mRNA和蛋白表达也显著上调。与常氧对照组细胞比较,低氧模型组细胞显著增殖,MDL28170可显著抑制低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,同时逆转低氧诱导的Ki-67和PCNA mRNA表达上调。结论：calpain介导低氧诱导的肺动脉高压肺血管重构,其机制可能与介导低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖有关。     

血红素氧合酶-1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法大鼠主动脉平滑肌细胞株经复苏、传代培养后用于实验,设置空白对照组、HO-1诱导组、HO-1抑制组,后两组分别加用血晶素、锌原卟啉Ⅸ与细胞共同孵育,用Western blot法检测HO-1表达量,并检测HO-1活力;用MTT法检测RASMC增殖能力。同时,还观察了血晶素、锌原卟啉Ⅸ的细胞毒性作用。结果上调HO-1蛋白表达及升高HO-1活力能显著抑制血清刺激的RASMC增殖,反之,抑制HO-1蛋白表达及其活力则增强血清刺激的RASMC增殖。实验浓度的血晶素、锌原卟啉Ⅸ无明显细胞毒性作用。结论 HO-1蛋白高表达能有效抑制RASMC增殖。     

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.     

高肺血流量对大鼠动脉压及肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的：建立左向右分流所致肺动脉高压的大鼠模型，探讨高肺血流量对肺血流动力学及肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用腹主动脉－下腔静脉分流术建立左向右分流的大鼠模型，观察术后6周和11周肺血流动力学，右心室肥厚和肺动脉舒张反应的改变。采用免疫组织化学和原位缺口末端标记方法对11周组大鼠肺血管平滑肌细胞进行增殖和凋亡状态的研究。结果：术后6周与11周大鼠肺动脉了收缩压，肺动脉平均压，右心室（RV）与左心室加室间隔（LV＋S）的比值较同龄对照组明显增加，而且11周分流组肺动脉收缩压较6周分流组进一步增高，在11周分流组大鼠中，乙酰胆碱（ACh)产生的肺动脉环舒张反应较对照组明显减弱，而硝普钠（SNP）产生的肺动脉环舒张百分比无明显变化，11周分流组大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖指数（PI），凋亡指数（AI），PI／AI比值明显高于11周对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞。结论：腹主动脉－下腔静脉分流术可导致肺动脉高压形成，高肺血流量引起的内皮依赖性肺血管舒张功能失调对肺动脉高压的形成有重要的影响，肺动脉平滑肌细胞的增殖的增加和凋亡的相对减少在肺动脉高压的发生中起到重要作用。该模型简单，可靠，重复性好。     

血晶素对间歇性低氧大鼠作用的研究

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)激动剂血晶素对间歇性低氧大鼠血压的影响,探讨间歇性低氧致动物血压变化的机制和调控方法。方法将24只雄性SD大鼠随机分为血晶素组、间歇低氧组及正常组,每组8例。血晶素组大鼠接受腹腔内注射血晶素30 min后置于常压低氧有机玻璃箱内,使其间歇性低氧8 h/d;间歇低氧组大鼠接受腹腔内注射生理盐水30 min后置于常压低氧有机玻璃箱内,使其间歇性低氧8 h/d,箱体内氧气浓度与血晶素组相同;正常组大鼠接受每天早晨腹腔内注射生理盐水后置于玻璃箱中正常通气。三组大鼠均在同等条件下室温常规饲养。35 d后测定大鼠平均颈总动脉压力(mCAP),检测其血浆一氧化碳(CO)含量,应用逆转录聚合酶链反应检测相关组织器官中HO-1 mRNA的表达,用免疫组织化学检测相关组织器官中HO-1蛋白表达。结果 mCAP在间歇低氧组较血晶素组及正常组明显升高(P0.05),在血晶素组较正常组高(P0.05)。血浆CO含量在血晶素组较间歇低氧组、正常组高(P0.05),间歇低氧组与正常组差异无统计学意义(P0.05)。肝、脾、肺、肾HO-1 mRNA的表达在血晶素组较间歇低氧组及正常组高(P0.05),在间歇低氧组较正常组高(P0.05)。mCAP与HO-1 mRNA呈曲线趋势,二次方曲线拟合方程为Y=39.715+446.640X-334.353X~2。结论间歇性低氧可使大鼠的血压升高,相关组织器官中的HO-1表达增加,但血浆CO含量并不升高。使用血晶素可使间歇性低氧大鼠体内HO-1及CO均升高,并有一定程度的降血压作用。     

缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

慢性阻塞性肺病患者肺内细胞增殖与凋亡的研究

目的研究细胞增殖、凋亡及其调节基因在慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）继发肺动脉高压中的作用。方法应用免疫组化及原位缺口末端ＤＮＡ碎片标记技术检测ＣＯＰＤ患者肺内细胞增殖及凋亡,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＣＯＰＤ患者肺内ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因表达。结果ＣＯＰＤ患者及对照组肺内（包括肺小血管壁）均存在着一定比率的增殖及凋亡细胞。两组相比,ＣＯＰＤ组增殖指数增高而凋亡指数减少,增殖与凋亡比值显著增高,约为对照组４倍。在ＣＯＰＤ患者肺内,增殖细胞绝大部分位于肺小血管壁,而凋亡细胞在肺小血管壁上较对照组少见。ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及蛋白表达在ＣＯＰＤ肺内比对照组明显增高,主要在肺小血管壁。ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达量约为对照组３倍,ｂｃｌ２ｍＲＮＡ三条带表达量约为对照组２５～３５倍,ｐ５３基因ｍＲＮＡ表达量比对照组显著减少,约为１／３倍。结论可能由于ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因异常表达所致的细胞增殖与凋亡异常参与了ＣＯＰＤ时的肺血管结构改建的调节,亦即参与了ＣＯＰＤ继发的肺动脉高压过程     

慢性阻塞性肺病肺内细胞凋亡与增殖关系的实验研究

目的 探讨慢性阻塞性肺病（COPD）肺内细胞凋亡与增殖的关系。方法 22只大鼠分为正常组、对照组、慢性支气管炎组、慢性支气管炎＋肺气肿组,采用免疫组化法及原位缺口末端DNA碎片标记技术（TUNEL法）检测各组大鼠肺内细胞凋亡与增殖。结果 慢性支气管炎、慢性支气管炎＋肺气肿组的细胞凋亡指数、增殖指数均有不同程度增高,与正常组相比较差异有统计学意义。凋亡细胞主要分布在气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞以及气管周围少许炎细胞,增殖细胞绝大多数为位于气管上皮细胞、气管周围炎性细胞。结论 慢性支气管炎、慢性支气管炎＋肺气肿组中凋亡和增殖均有不同程度增高,增殖增高水平高于凋亡,细胞增殖与凋亡的失衡可能在COPD发病机理中起到一定的作用。     

阿托伐他汀对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨阿托伐他汀对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖凋亡的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧组和干预组Ⅰ、Ⅱ。干预组Ⅰ、Ⅱ每日低氧前分别给予阿托伐他汀1.5mg/kg或3.0mg/kg灌胃。建立常压低氧大鼠模型,应用增殖细胞核抗原（PCNA）及原位缺口末端标记法（TUNEL）对PASMCs进行增殖与凋亡分析。结果各组大鼠PASMCs增殖和凋亡细胞同时存在。与对照组比较,低氧组大鼠PASMCs增殖指数（PI）显著增高、凋亡指数（AI）显著下降（P值均〈0.01）;而与低氧组比较,两干预组大鼠PASMCs的PI显著降低、AI明显增加（P值均〈0.05）。结论阿托伐他汀对低氧大鼠PASMCs具有抑制增殖、促进凋亡的作用。     

THE ROLES OF bcl-2 GENE FAMILY IN THE PULMONARY ARTERY REMODELING OF HYPOXIA PULMONARY HYPERTENSION IN RATS

Objective. To investigate the roles of apeptosis in the pulmonary artery remodeling of pulmonary hypertension secondary to hypoxia and illustrate the relative genes expression. Methods. Thirty rats were divided into hypoxia group(10%O2, 8h/d) and normal control group. On the 15th day of hypoxia, pulmonary artery pressure and fight ventricular hypertrophy index were measured and pulmonary artery vessels were studied by light microscope. Then terminal deoxynucleotidyl transferase-mediateddUTP nick-end labeling(TUNEL)technique was used to detect nucleosomal DNA fragmentation of apeptotic cells.In situ hybridization and RT-PCR were used to detect the expression level of bel-2 and bax. Results. The pulmonary artery pressure and right ventricular hypertrophy index of hypoxia group were increased significantly, the pulmonary artery wall of hypoxic group become incrassate than control group. Apeptotic cells can be found in lung with hypoxia or without hypexia. Compared with control group, apeptotic index of hypoxic group decreased significantly. Through the methods of in situ hybridization and RT-PCR, we found the expression of bel-2 increased whereas bax decreased significantly in the hypoxic group. Conclusion. The alternation in bel-2 and bax expression induced by hypoxia play an important role in the pulmonary artery remodeling which is the main pathologic change of p~monary hypertension secondary to hypoxia.     

新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧 NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧 NaHS组比较,低氧 NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组,应用MTT比色法、3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果同年轻组比较,老年组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,增殖细胞核抗原(PCNA)增加;同常氧组比较,缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入先受抑制,后明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,PCNA增加。结论衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖,衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

腺病毒介导的p53消减基因对慢性低氧性肺动脉高压大鼠的影响

目的 探讨p53消减基因对低氧性肺动脉高压（pulmonary artery hypertension,PAH）大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 SD大鼠60只随机分为常氧对照组、常氧实验Adeno-null组、常氧实验Adeno-p53组、低氧对照组、低氧实验Adeno-null组和低氧实验Adeno-p53组各10只。低氧组大鼠置于含有10% O2浓度的低氧舱中。培养2周后气管滴入3×108 MOI腺病毒,继续培养2周。利用右心导管测压法测定各组大鼠平均颈总动脉压、平均肺动脉压;称重右心室、室间隔+左心室的重量,计算右心室肥厚指数,TUNEL染色法检测左肺肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,评价p53消减基因转染对大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 结果 常压下持续通入10.0% O2培养4周的大鼠与正常情况下培养的大鼠相比,平均肺动脉压力显著升高,右心室明显肥厚（P＜0.01或P＜0.05）。低氧培养条件下,与低氧实验Adeno-null组相比,低氧实验Adeno-P53组肺动脉压和右心室肥厚指数降低(P＜0.05)。低氧实验Adeno-P53组的肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数显著高于低氧实验Adeno-null组常氧实验Adeno-p53组大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数高于常氧实验Adeno-null组(P＜0.05)。 结论 p53消减基因能在一定程度上缓解低氧性PAH的发展,其机制可能与p53消减基因诱导肺动脉平滑肌细胞的增加有关。