电针对不同时间段局灶性脑缺血大鼠缺血区突触数密度、面密度的影响

[目的]探讨电针对脑缺血后突触重建的干预作用.[方法]45只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血模型组和电针组,每组又分为1 h、1 d、3 d、1周、3周5个时间段进行观察,采用热凝闭大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,电针组给予电针百会、大椎穴治疗.每个时间段后分别取材,采用透射电镜观察缺血区大脑皮层突触的结构、数密度、面密度的变化规律以及电针对其影响.[结果]缺血模型组于1 h、1 d、3 d时数密度、面密度显著性下降(P<0.001.与同时段假手术组比较),3周时数密度有所升高但仍与假手术组有显著性差异(P<0.01);电针组数密度、面密度于1 d时较缺血模型组显著性升高(P<0.01),3 d、1周后进一步升高(P<0.001),与假手术组相仿.[结论]电针从早期即可抑制脑缺血后的突触数量、面积的减少,并在恢复过程中促进其尽快地修复.这为电针在不同时间段促进突触重建和脑缺血恢复提供了形态学基础.     

针刺调节MAPK/ERK通路对脑缺血模型大鼠的干预作用

【目的】观察电针调节丝裂原活化蛋白激酶／细胞外信号调节激酶（MAPK／ERK）通路对脑缺血模型大鼠的干预作用。【方法】选用SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和电针组,每组又分为2h、1d、3d3个亚组,后2组采用热凝闭大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型。电针组针刺百会、大椎穴,每天1次,分别治疗2h、1d、3d。每组均进行神经行为学评分及Y迷宫测试,并采用免疫组化法检测脑组织CAl区、CA3区磷酸化EPK（p-EPK）阳性细胞表达的积分光密度值总和（Dsum）。【结果】模型组大鼠神经行为学评分显著升高、Y迷宫测试时间显著延长（均P〈0．01）,电针1d、3d组可显著降低神经行为学评分,缩短Y迷宫测试时间,与模型组及电针2h组比较差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈O．01）。假手术组无p-EPK阳性细胞表达,模型组CA1区和CA3区Dsum显著升高（均P〈0．01）,电针各组CA1区、CA3区Dsum,均较模型组显著降低（P〈0．05或P〈0．01）,而电针1d、3d组Dsum降低幅度显著大于电针2h组（均P〈0．05）。【结论】电针可以通过调节MAPK／ERK通路,降低p-ERK在脑缺血早期的表达,从而改善脑缺血模型大鼠的脑组织损伤。     

针刺对大鼠脑缺血后海马突触可塑性的促进作用

目的:探讨针刺治疗缺血性脑血管疾病的机制。方法:采用热凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血模型,随机分为假手术组、缺血组和治疗组,观察针刺对脑缺血后缺血同侧海马齿状回(DG)突触可塑性的影响。结果:缺血2周后缺血同侧海马齿状回兴奋性突触后电位(EPSP)、群峰电位(PS)的I/O曲线幅度均显著降低(P<0.05);和缺血组相比,治疗组EPSP、PS的I/O曲线幅度均显著升高(P<0.01,P<0.05),和假手术组相比无明显差异(P>0.05)。EPSP的长时程增强(LTP)幅度在缺血2周后明显升高(P<0.05);治疗组与假手术组相比明显升高(P<0.05),与缺血组无明显差异(P>0.05)。PS的LTP幅度在缺血2周后明显降低(P<0.05),治疗组明显高于缺血组(P<0.05),与假手术组相比无明显差异(P>0.05)。EPSP的长时程抑制(LTD)幅度在缺血2周后明显降低(P<0.05),治疗组与假手术组相比明显降低(P<0.05),与缺血组相比无明显差异(P>0.05)。PS的LTD幅度缺血组与假手术组无明显区别(P>0.05);治疗组与假手术组相比有所升高(P<0.05),与缺血组相比无明显差异(P>0.05)。结论:针刺对缺血引起的海马DG区I/O曲线的EPSP、PS的幅度变化起保护作用;针刺能修复缺血造成海马DG区PS的LTP诱导的损害;针刺对缺血后海马DG区EPSP的LTD的诱导无明显影响,对PS的LTD诱导有一定的提高作用。     

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层神经生长因子表达的影响

探讨针刺对缺血性脑损伤的保护作用。【方法】SD大鼠36只,随机分为假手术组、缺血模型组和电针组, 每组又分为2周和5周两个时间段组;除假手术组外,其他组均采用热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组化法观察缺血2周和5周后缺血区皮层神经生长因子(NGF)的变化规律以及针刺对其影响。【结果】两个假手术组大鼠手术侧皮层只见到很少的NGF免疫阳性细胞;两个缺血组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫活性细胞的表达与假手术组比较显著增多(P<0．01),缺血5周组与缺血2周组相比缺血区皮层NGF阳性细胞的数量下降(P<0．01);电针组在2周时缺血区皮层NGF免疫阳性细胞的表达增高,与缺血2周组、假手术2周组相比差异具有显著性意义(P<0．01);电针5周组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫阳性细胞表达虽呈下降趋势,但仍高于同时间段的缺血组大鼠(P<0．01)。【结论】电针可以增加大鼠脑缺血区皮层NGF的分泌和表达时程,这可能是其保护缺血性脑损伤的机制之一。     

电针对血管性痴呆大鼠学习记忆和血红素氧化酶的影响

[目的]探讨电针对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆障碍的治疗效应及其作用的分子机制.[方法]SD雄性大鼠60只,除假手术组10只外,其他大鼠均采用4-血管阻断法复制VD模型,存活大鼠随机分为电针组14只,尼莫通组13只,模型组13只;电针组针刺“百会”和“大椎”两穴,尼莫通组以12 mg/kg灌胃给药,假手术组与模型组未予任何治疗.采用Morris水迷宫观察治疗20d后各组大鼠在学习记忆方面的变化,并检测血红素氧化酶（HO）的蛋白表达和信使核糖核酸（mRNA）表达.[结果]与假手术组比较,模型组逃避潜伏期、HO-1蛋白表达、HO-1 mRNA表达增高（P＜0.01）;与模型组比较,电针组、尼莫通组逃避潜伏期、HO-1蛋白表达均显著减少（P＜0.01）,H0-1 mRNA表达水平均降低（P＜0.05）;电针组与尼莫通组比较,各指标均无显著性差异（P＞0.05）.[结论]电针治疗改善VD模型大鼠学习记忆能力与尼莫通治疗相仿,两法均可能与减少海马和皮质神经元细胞HO-1蛋白表达及H0-1 mRNA表达有关.     

脑缺血损伤大鼠海马区钙结合蛋白Calbindin-D28k蛋白表达的变化及针刺对其影响

[目的]观察针刺对脑缺血损伤大鼠大脑海马区钙结合蛋白Calbindin-D28k蛋白表达及神经行为学的影响.[方法]选用雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、脑缺血模型组、针刺治疗组,每组10只,采用化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉手术复制大鼠局灶性脑缺血模型;针刺组采用针刺百会、水沟穴,每天1次,治疗7 d;治疗结束后,采用免疫组化方法观察针刺前后大鼠海马区Calbindin-D28k蛋白表达的变化,造模后1～2 h及治疗结束后分别对各组大鼠进行神经行为学评分.[结果]大鼠局灶性脑缺血后Calhindin-D28k阳性细胞表达显著减少(与空白对照组比较,P＜0.05),针刺后大鼠大脑海马区Calbindin-D28k阳性细胞表达显著增加(与脑缺血模型组比较,P＜0.01).大鼠在造模后1～2 h的神经症状行为评分均有阳性反应,与空白对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.01),针刺治疗组大鼠在治疗前后的神经症状行为评分差异也有显著性意义(P＜0.01).[结论]针刺可上调Calbindin-D28k蛋白的表达,减轻细胞内Ca2+超载,可能是针刺保护脑缺血损伤的机制之一.     

白藜芦醇对脑缺血大鼠突触可塑性的影响

目的：探究白藜芦醇对脑缺血大鼠突触可塑性的影响。方法60只雄性Wistar大鼠采用数字随机法随机分为假手术组(Sham,n=15),脑缺血大鼠模型组(CCH,n=15),给予40 mg/kg白藜芦醇预处理四周的脑缺血大鼠模型组(CCH+Resveratrol,n=15)以及白藜芦醇处理组(Resveratrol,n=15)。采用莫里斯水迷宫检测大鼠空间感知能力和记忆能力;透射电子显微镜下测量神经元突触界面结构参数;高尔基体染色法检测齿状回区树突刺的形态学变化;Western blot检测突触相关蛋白的表达情况。结果 CCH组大鼠逃脱时间长于Sham组(P<0.05)。CCH+Resveratrol白藜芦醇预处理缺血组逃脱时间与CCH组相比显著降低(P<0.05),但是与假手术组和白藜芦醇组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CCH组大鼠突触界面曲率、突触活性区长度以PSD厚度显著低于Sham组(P<0.05),且突触间隙宽度显著高于Sham组(P<0.05),白藜芦醇处理后大鼠突触界面参数恢复正常。CCH组大鼠树突刺和蘑菇状刺与Sham组相比显著减少(P<0.05),CCH+Resveratrol组减少量明显下降。在CCH组脑缺血大鼠中的PSD95、PSD93、NR2A/B三类蛋白水平显著下降,而通过白藜芦醇预处理可以部分改善这一现象。结论白藜芦醇预处理的脑缺血大鼠在功能以及结构方面有效的恢复了其突触可塑性,而突触相关蛋白的表达在白藜芦醇介导的脑缺血大鼠模型的神经元保护作用中起到关键作用。     

电针对缺血性脑损伤大鼠海马齿状回突触传递活动的影响

[目的]观察电针对实验性脑缺血大鼠海马齿状回(DG)突触传递活动的影响。[方法]Wistar大鼠60只,随机分为 基础组和高频刺激(HFS)组,每组又分为假手术组(手术暴露双侧颈总动脉,但不阻断血流)、脑缺血模型组(丝线牵拉 法阻断双侧颈总动脉)及针刺组(造模并加用电针治疗)。采用在体记录突触传递长时程增强(LTP)的电生理学方法,观 察电针对海马齿状回基础突触活动的影响;高频刺激组动物均在造模后给予HFS诱发LTP,然后观察电针对HFS诱导海马 齿状回LTP的影响。[结果]假手术组120min内群峰电位(PS)幅值无明显变化;模型组10min时PS幅值开始下降,与同 时间点假手术组比较具有显著性差异(P<0.01),随后逐渐回升接近假手术组水平;针刺组在造模前、后分别给予电针刺 激,造模后10 min PS幅值未出现明显下降,随后逐渐上升,与同时间点模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P< 0.01)。在给予HFS诱导出LTP后,假手术组PS幅值显著增大,并维持3 h无明显减弱;模型组在HFS 30 min后诱发LTP; 针刺组在HFS后30min给予电针刺激,HFS后60min的PS幅值逐渐增高,其中HFS120min和180min的PS幅值与同时间点 模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]电针可增强缺血性脑损伤大鼠海马齿状回的基础突触传递活 动和HFS所诱导的LTP。这可     

电针对血管性痴呆大鼠海马长时程增强效应及钙调蛋白、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ mRNA表达水平的影响

【目的】探讨电针对血管性痴呆(VD)大鼠长时程增强效应(LTP)及钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMPKⅡ)mRNA表达水平的影响。【方法】将70只SD大鼠,除正常组、假手术组各14只外,其他经改良4-VO法造模成功后36只分为电针组、西药组、模型组各12只。电针组针刺百会、大椎、肾俞穴,西药组给予尼莫通12 mg.kg-1.d-1,其他3组不予任何治疗。观察各组大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期、各象限平台跨越次数,活体海马LTP实验结果及神经元CaM、CaMPKⅡmRNA表达水平。【结果】与模型组比较,电针组和西药组逃避潜伏期显著缩短,跨越原平台及左侧平台次数增加,LTP幅值升高,持续时间延长,CaM、CaMPKⅡmRNA表达水平显著升高(均P0.05)。【结论】电针有效提高VD大鼠学习与记忆能力的作用可能与其能提高LTP反应幅值及持续时间,提高CaM、CaMPKⅡmRNA表达水平有关。     

针刺保肝护脑对脑缺血再灌注肝损伤大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响

【目的】探讨针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响。【方法】将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺对照组、针刺保肝护脑组。采用线栓法复制缺血再灌注大鼠模型,测试各组大鼠行为学,血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-GCS,肝组织γ-GCS水平。【结果】模型组、针刺对照组和针刺保肝护脑组缺血2 h(电针治疗前)时神经功能缺损评分无显著差异;经10次电针治疗后,与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组神经功能缺损评分显著降低(P<0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组神经功能缺损评分降低更为显著(P<0.05)。电针治疗前,与假手术组比较,模型组血清ALT、AST水平显著增高(P<0.01),而血清、肝组织γ-GCS水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组血清ALT、AST水平显著降低(P<0.01),同时血清、肝组织γ-GCS水平显著升高(P<0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组血清ALT、AST、γ-GCS和肝组织γ-GCS水平改善更为显著(P<0.05)。【结论】针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠的治疗效果较单纯针刺更为显著,其治疗机理可能与促进肝组织γ-GCS的表达相关。     

哌醋甲酯对大鼠脑缺血性损伤后神经再塑的影响

目的研究大鼠脑缺血后哌醋甲酯对脑损伤区域及其相关部位神经再塑的影响。方法线栓法建立大鼠的大脑中动脉缺血模型(MCAO),术后第3天起,口服灌注哌醋甲酯,采用免疫组织化学方法观察术后第7、14、28天突触素(Synaptophysin,SYN)及突触后致密物质(Postsynaptic density-95,PSD-95)在大鼠皮层缺血灶的内、外、对侧的表达。结果哌醋甲酯可使SYN在MCAO术后的第14天出现显著增生(P<0.05)。结论哌醋甲酯对缺血损伤后的大鼠皮层梗死区的内、外、对侧的神经再塑、突触重建有一定促进作用。     

针刺对脑缺血胶质增生的影响

目的:通过针刺对脑缺血后星形胶质细胞增殖进行干预,以探讨其对胶质增生的影响。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用免疫组化和免疫印迹方法检测2 d和7 d后损伤侧海马细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。观察针刺对胶质增生的影响。结果:MCAO后2d,损伤侧海马CDK4蛋白表达明显增强(P<0.01),MCAO后7 d,损伤侧海马GFAP蛋白的表达明显增强(P<0.01),给予针刺后,可抑制CDK4蛋白和GFAP蛋白表达(P<0.01)。结论:针刺可抑制胶质增生,从而有可能为神经再生和功能重建提供更有利的生存环境。其机制可能与其调控细胞周期有关。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血梗死体积及微血管新生的影响

目的:探讨亚低温对局灶性缺血脑组织梗死体积和微血管新生的影响。方法:采用改良的线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将模型成功大鼠随机分为对照组和亚低温治疗组,并在术后2 h,7 d及14 d进行神经功能评估。术后14 d观察亚低温治疗对脑梗死体积及梗死灶周围区微血管密度的影响。结果:对照组和亚低温组在术后2 h神经功能评分没有统计学差异,术后7 d及14 d亚低温组神经功能评分明显低于对照组,差异具有统计学意义。术后14 d亚低温组和对照组脑梗死体积分别为(81.9±17.7)mm3和(110.6±22.5)mm3,微血管密度分别为(373.10±68.81)/mm2和(208.90±61.38)/mm2,差异均具有统计学意义。结论:亚低温对缺血脑组织具有保护作用,促进血管新生可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

米诺环素对脑缺血再灌注损伤后炎性反应影响

目的 探讨米诺环素对局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。设定假手术组、生理盐水组、米诺环素预处理组、30min组、4h组。用免疫组织化学法、逆转录聚合链式反应技术（RT-PCR）、放射免疫法和核磁共振T2WI扫描等方法,观察米诺环素对缺血再灌注大鼠脑组织COX-2、ICE的表达、PGE2的含量及脑缺血体积的影响。结果 米诺环素能降低缺血再灌注大鼠脑组织中PGE2的含量,减少COX-2、ICE的表达,缩小脑梗死体积。结论 米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应有抑制作用。     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:揭示针刺对脑缺血再灌注大鼠模型细胞凋亡的影响.方法:本实验以线栓法阻断一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注的动物模型,从缺血区脑细胞凋亡的变化以及针刺的干预作用等方面进行系列动态研究.结果:与假手术组、针刺治疗组相比,对照组大鼠脑梗死体积、神经元缺失明显(P＜0.01).对照组、针刺治疗组大鼠大脑皮层均存在神经元凋亡,但针刺治疗组与对照组相比,脑梗死体积明显缩小(P＜0.01),阳性神经元数目明显减少(P＜0.01).结论:针刺"百会"、"风府"及"曲池"、"足三里"可以促进受伤神经元的恢复,有较好的抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的作用.     

针刺百会、水沟穴对脑缺血大鼠抗心磷脂抗体含量的影响

目的:探讨针刺百会、水沟穴治疗对脑缺血大鼠抗心磷脂抗体(ACA)含量的影响.方法:72只SD大鼠随机分成正常纽、模型组、针刺组.针刺组每天针刺百会、水沟穴.分别于缺血再灌注后第1 d、第3 d、第7 d、第14 d采用酶免法测血清抗心磷脂抗体.结果:针刺组大鼠在缺血再灌注后第1 d、第3 d、第7 d IgG型ACA水平高于正常组(P<0.05),低于模型组(P<0.05);第14 d接近正常组(P>0.05).针刺组大鼠在缺血再灌注后第1 d、第3 d、第7 d、第14 d IgM型ACA水平高于正常组(P<0.05),低于模型组(P0.05).结论:针刺百会、水沟穴治疗对脑缺血大鼠血清IgG型、IgM型ACA的产生有一定抑制作用.     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立大鼠中动脉阻塞再灌注模型（MCAO）,应用TUNEL法观察神经元凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白表达。结果脑缺血再灌注后应用针刺疗法能够降低大鼠神经细胞受损后出珊的Caspase-3蛋白表达,并能减轻神经细胞凋亡。结论针刺疗法能通过有效的抑制脑缺血再灌注后大鼠神经细胞的凋亡起到脑保护作用。     

内源性NO介导的Stargazin亚硝基化修饰在脑缺血再灌注后突触可塑性中的作用及机制

  目的  研究Stargazin-亚硝基化修饰在脑缺血再灌注后突触可塑性中的作用，并探讨NO调控AMPAR“Trafficking”的分子机理。  方法  采用线栓法阻塞大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注（MCAO/R）损伤大鼠作为模型组，分别在每只大鼠MCAO/R模型内给予NMDAR抑制剂MK801、氧化还原剂DTT干预作为实验组。采用mNSS评分标准检测大鼠神经功能，TTC染色检测脑部缺血损伤情况，TUNEL染色检测以及WB检测缺血侧海马神经元凋亡情况，Griess法检测缺血侧海马组织中NO的含量，此外Western Blot检测海马组织中Stargazin-亚硝基化修饰水平以及AMPAR蛋白的表达和活化情况。  结果  给予MK801和DTT处理后MCAO/R模型中Stargazin-亚硝基化修饰水平（P < 0.01）以及NO含量（P < 0.01）下降；AMPAR亚基GluR2磷酸化水平降低（P < 0.0001）；抑制Stargazin亚硝基化修饰能够改善MCAO/R引起的神经损伤与凋亡（P < 0.001）。  结论  在MCAO/R模型中，抑制内源性NO和Stargazin亚硝基化水平可促进神经突触重塑，其机制可能是干预了Stargazin辅助蛋白与AMPAR亚基GluR2亲和力有关。     

针刺对脊髓Clarke核突触性终末可塑性的影响

用单侧后肢备用根猫,针刺手术侧(实验组)与不针刺者(对照组)各5只,于30天时在电镜下比较腰3段Clarke核的终末数。结果实验组和对照组的非手术侧三类突触性终末的数量差别无显著性,表明针刺对对侧无明显影响;实验组手术侧背根来源的巨大终末较对照组明显增多,并恢复到非手术侧水平,而非背根来源的两类终末数与对照组差别无显著性,表明针刺对完好背根,主要为备用背根粗髓纤维的侧枝出芽与突触重建的可塑性变化有明显地促进作用,而对非背根的神经纤维却无明显影响。