在不同应激状态下MDM2基因对Jurkat细胞的作用

[目的]探讨MDM2基因在不同应激状态下对T细胞性白血病细胞株Jurkat增殖、凋亡和基因表达的影响.[方法]采用RNA干扰下调白血病细胞株Jurkat MDM2基因表达后,用Western blot、流式细胞术等方法检测Jurkat细胞在不同应激状态下的变化.[结果]无应激状态下,MDM2基因表达下降后,Jurkat细胞增殖减慢,细胞周期表现一定程度的G1-S阻滞;E2F1表达明显降低超过78%,p65表达下调超过58%;细胞损伤后,MDM2表达下调可导致细胞损伤修复减慢,增强紫外线和甲氨喋呤诱导凋亡作用,导致甲氨喋呤作用下Rb和Bax基因的表达相对增加.[结论]在不同应激状态下,MDM2基因表达下降广泛影响Jurkat细胞的增殖、凋亡和基因表达等生物学特性,提示MDM2基因有可能作为T细胞性白血病治疗的潜在新靶点.     

MDM2基因在急性白血病中的表达

为了研究ｐ５３基因的拮抗基因ＭＤＭ２基因在急性白血病中的表达，作者用逆转录聚合酶链（ＲＴ－ＰＣＲ）方法研究了４０例急性白血病患者ＭＤＭ２基因的表达，发现５２．５％的急性白血病患者有较高水平的ＭＤＭ２基因的表达，ＭＤＭ２的表达在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴白血病之间无明显差别，提示ＭＤＭ２基因可能在急性白血病的发病中起了一定的作用。     

乳香提取物诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

检测不同浓度、不同时间作用了下乳香提取物对人急性Ｔ淋巴细胞血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ细胞的促凋亡作用。方法：用琼脂糖凝胶电泳技术、透射电子显微镜（ＴＥＭ）和流式细胞仪（ＦＣＭ）分别检测Ｊｕｒｋａｔ细胞的ＤＮＡ梯状带,形态学改变及凋亡峰与药物作用的细胞周期。     

鼻咽癌细胞中MDM2基因扩增与表达的研究

应用斑点杂交和半定量逆转录－多聚酶链反应技术对３２例鼻咽癌（ＮＰＣ）标本,１０例慢性鼻咽炎症粘膜（ＣＩＮＥ）标本,ＮＰＣ细胞株进行ＭＤＭ２基因扩增与表达的检测。结果显示;１例ＮＰＣ有ＭＤＭ２基因的扩增,ＮＰＣ细胞株ＨＯＮＥ１和１０例ＮＰＣ有ＭＤＭ２ ｍＲＮＡ高表达,ＣＩＮＥ无ＭＤＭ２基因的扩增及ｍＲＮＡ的高表达。     

Jurkat细胞TCR基因重排对 BV CDR3的影响

目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3（BV CDR3）可能产生的影响，为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCR BV26个亚家族CDR3区，结合TCR基因扫描（GeneScan）和基因测序技术，监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCR BV CDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCR BV8家族的单克隆细胞株Jurkat，在增殖传代过程中，以及经刺激诱导48或72h后，未监测到有TCR BV8以外的新的BV亚家族出现，BV8 CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCR BV CDR3改变，因而对TCR BV CDR3区抗原识别特异性（即抗原特异性漂移）并未产生影响，但并不排除TCR发生改变的可能性。     

β-catenin特异的RNA干扰对Jurkat和K562细胞的作用

目的干扰β-catenin在Jurkat和K562细胞中的表达,探讨β-catenin对细胞生长、增殖和凋亡等方面的作用。方法设计合成β-catenin的siRNA干扰序列和对照序列,阳离子脂质体法介导转入Jurkat和K562细胞,分别用RT-PCR和Western blot方法检测β-catenin在干扰后mRNA水平和蛋白水平的表达变化。采用台盼兰拒染法计数,MTT比色法和集落形成能力检测细胞的生长增殖,AnnexinV/PI检测细胞凋亡以及PI染色检测细胞周期。结果与对照组相比,实验组细胞β-catenin的mRNA和蛋白水平的表达均降低。在Jurkat细胞,实验组和对照组的细胞增殖抑制率分别为(49.30±9.86)%和(15.10±6.55)%(P<0.05),而在K562细胞分别为(39.40±7.56)%和(10.10±6.89)%(P<0.05),实验组细胞生长明显受抑。在Jurkat细胞,实验组和对照组的集落形成率分别为(25.00±5.13)/104细胞和(31.90±5.55)/104细胞(P<0.05),而在K562细胞分别为(39.33±6.26)/104细胞和(47.33±8.52)/104细胞(P<0.05),实验组细胞集落形成能力明显减弱。在Jurkat细胞,实验组和对照组的细胞凋亡率分别为(55.90±2.22)%和(23.50±2.82)%(P<0.05),而在K562细胞分别为(27.90±15.30)%和(14.90±8.54)%(P>0.05),实验组细胞凋亡率有所增加。在这两种细胞系中均未发现细胞周期的改变。结论β-catenin基因有可能对Jur-kat和K562细胞具有促进细胞生长、增殖,抑制凋亡的作用。     

靶向Hsp90β的siRNA对Jurkat细胞生长的抑制作用

目的 探讨RNA干扰技术沉默热休克蛋白90β(heat shock protein 90 beta,Hsp90β)基因表达对Jurkat细胞生长的抑制作用.方法 根据Hsp90β基因全长cDNA序列Hsp90B1(NM_003299.1),设计并构建针对Hsp90β基因的siRNA真核表达载体,应用LipofectamineTM LTX 转染入Jurkat细胞后,Real-time PCR检测 Hsp90β mRNA水平的变化,筛选出沉默效果最好的Hsp90β siRNA干扰片段;Western印迹法检测Hsp90β蛋白表达水平;MTT法和流式细胞仪检测干扰前后对Jurkat细胞生长抑制作用.结果 成功构建Hsp90β基因特异性的真核表达载体pSOS-Hsp90βi,转染Jurkat细胞后发现pSOS-Hsp90βi2的沉默效果最明显,Jurkat细胞Hsp90β mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05).Hsp90β基因表达沉默后,Jurkat细胞增殖明显受抑(P<0.01),实验组与对照组的细胞凋亡率分别为:(2.69±0.34)%、(3.63±0.38)%、(19.56±0.62)%, 细胞凋亡率比空白对照组及转染pSOS-Hsp90βi control组明显增加,差异具有显著意义(P<0.05).结论 靶向Hsp90β的siRNA下调Hsp90β表达对人白血病Jurkat细胞有明显的生长抑制作用.     

MDM2基因与乳腺癌研究进展

MDM2(Murine Double Minute)最初是在自发转化的成纤维细胞中发现的,可与p53蛋白结合,抑制p53介导的转录活性和阻止p53诱导凋亡的作用,引起肿瘤发生。人体许多肿瘤中都存在MDM2基因的扩增表达,且表达程度往往与肿瘤的临床分级、病理分期、是否转移有关。目前,已证实MDM2基因加速乳腺癌恶性转化,研究结果表明,乳腺癌的疗效与MDM2蛋白的表达程度有关。本文对近年来有关     

T细胞激活剂对Jurkat细胞重组激活基因表达的影响

目的:研究T细胞激活剂PHA,抗-CD3 mAb, PMA A23187对人T细胞白血病细胞株Jurkat重组激活基因(RAGs )mRNA表达水平的影响. 方法:采用RT-PCR法检测不同T细胞激活剂作用不同时间后Jurkat 细胞中RAG-1, RAG-2 mRNA,以β肌动蛋白(β-actin)的表达作为内参照进行灰度分析,比较不同组Jurkat细胞RAGs mRNA的表达水平 . 结果:三种T细胞激活剂刺激诱导的Jurkat细胞RAG-1 mRNA表达量明显低于对照组(P＜0.05),且RAG-1 mRNA表达量的下降与刺激诱导作用时间有关;PHA刺激诱导后RAG-2表达量显著低于对照组(P＜0.05);PMA A23187刺激诱导6, 12 h均未检测出RAG-2 mRNA的表达; 而抗-CD3 mAb作用12 h组RAG-2 mRNA表达量显著高于对照组(P＜0.05). 结论:Jurkat细胞同时表达RAG1, RAG2 mRNA,并在一定诱导下RAGs表达量发生改变,因此有可能成为研究外周T细胞RAGs表达调节的一个潜在的细胞模型.     

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RT-PCR技术，检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示，硫化砷作用于NB4细胞后，PNAS-2基因表达下调；RT-PCR结果发现，NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调，并呈时间依赖性；APL原代细胞经硫化砷作用后，PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS-2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达，推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。     

MDM2及P53在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义探讨

用免疫组化的方法检测了23例初诊急性淋巴细胞白血病患儿骨髓细胞MDM2及P53的表达，结果发现：MDM2的阳性表达占56％（13/23），而且化疗2周末，MDM2阳性组10例患者仅4例获完全缓解，而MDM2阴性组8例患者7例获完全缓解。P53阳性表达率30％（7/23）。MDM2与P53共同表达者，无1例在化疗2周末完全缓解，两者同时阴性者在化疗2周末均达完全缓解。提示，急性淋巴细胞白血病患儿MDM2的表达特点是伴P53的表达预示着化疗效果差。该两项指标的检测有助于选择治疗方案及预后的判断。     

蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（bufalin）对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;半定量RT—PCR技术检测bcl-2mRNA表达。结果蟾蜍灵对K562细胞生长具有明显的抑制作用,MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0．013μmol·L^-1,统计学分析表明差异具有显著性（P〈0．01）;蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡（P〈0．01）,药物作用6h、12h和24hK562细胞的凋亡率分别为20．36％、34．35％和48．16％;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;bcl-2mRNA表达3h开始下降,6～12h持续下调,与对照组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论蟾蜍灵对K562的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用,而K562细胞凋亡可能是由于bcl-2基因表达改变。     

UBE2D2基因在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其调控作用的影响

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。     

沉默BIRC7基因的Jurkat稳定细胞系建立

 【目的】 通过RNA干扰技术(RNAi)建立稳定性BIRC7基因沉默的Jurkat实验细胞模型。 【方法】应用pSilencer 4.1-CMV neo 构建BIRC7 shRNA 表达载体，采用脂质体将载体导入Jurkat 细胞，利用G418筛选出稳定表达shRNA 细胞后，行RT-PCR 和Western blot 等技术检测细胞BIRC7表达水平。 【结果】成功筛选出分别携带二种重组shRNA表达的Jurkat细胞系。与对照组细胞相比，转染BIRC7 shRNA的细胞BIRC7 mRNA表达下降约＞70％，BIRC7蛋白表达减少＞60％。生长曲线显示生长速度减慢，细胞倍增时间延长。细胞凋亡率增加。【结论】稳定转染重组BIRC7 shRNA表达载体能有效干扰BIRC7基因表达，表明RNAi技术可以成为研究BIRC7基因功能的有效工具。BIRC7有可能成为白血病治疗的潜在新靶点。     

急性白血病细胞p53基因表达

目的：检测急性白血病细胞内ｐ５３基因表达情况。方法：３Ｈ－ｄＡＴＰ标记基因探针的斑点杂交。结果：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）表达ｐ５３ＲＮＡ水平与正常对照类似，急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中５９．４％表达低水平ｐ５３或表达缺失，ｐ５３表达缺失在Ｍ４、Ｍ５中多见。结论：急性白血病细胞中存在ｐ５３ＲＮＡ表达异常。     

HCCR-2基因沉默后HepG2肝癌细胞形态变化

目的研究HCCR-2基因表达沉默后肝癌细胞HepG2形态学的变化.方法将经测序证实的干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.分别用光镜、HE染色、荧光显微镜、透射电镜观察HepG2细胞转染前后形态学的改变.结果与亲本细胞相比,HCCR-2沉默后,HepG2细胞呈梭形,核浆比例有所下降,透射电镜下可观察到细胞核收缩变圆,胞质浓缩,细胞核中染色质边集、皱缩,密度增高.结论 RNAi介导的HCCR-2基因沉默可以促进HepG2细胞形态的改变及凋亡.