川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。      

Cdk5在肾小球足细胞中的表达及作用

目的研究周期素依赖性蛋白激酶-5（Cdk5）及其激活剂p35在肾小球足细胞中的表达及作用。方法分别培养原代小鼠神经细胞、原代小鼠分化成熟的离体足细胞（简称足细胞）以及人胚肾细胞（HEK293细胞）,应用免疫印迹、免疫沉淀及同位素标记等方法检测Cdk5、p35的表达及Cdk5的活性;以原代小鼠分化成熟的离体足细胞为研究对象。分为正常组、ROS组（Cdk5．活性抑制组）、Cdk5siRNA组（Cdk5表达沉默组）,观察Cdk5的表达及活性,并应用Cdk5 siRNA、Cdk5化学抑制剂-Roscovitine进行抑制实验。结果离体培养原代小鼠分化成熟的足细胞中均有Cdk5及p35蛋白的表达;Cdk5在足细胞中具有活性;沉默Cdk5表达、应用Cdk5活性抑制剂Roscovitine抑制Cdk5活性后,可引起足细胞特异性标志物WT1的表达减少,说明足细胞受到损伤,数量减少。结论Cdk5的表达及活性在维持正常足细胞功能中起重要作用。     

山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响

目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响。方法:分别用0、20、40、60、80和100μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞。处理24、48和72h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1mRNA的表达水平。结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001),细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001)。结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖。     

二十碳五烯酸对人肝癌HepG2凋亡细胞线粒体的影响

目的:探讨二十碳五烯酸(EPA)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对线粒体的影响. 方法:HepG2细胞与经EPA处理后,DNA Ladder检测细胞凋亡的发生,应用线粒体荧光探针和四唑盐(MTT)比色法分析细胞线粒体数量和功能,应用免疫印迹法和特异性底物检测HepG2细胞Caspase-9蛋白酶的表达和活性. 结果:终浓度为120 μmol/L EPA处理HepG2细胞24 h后,可以检测到凋亡标志性的DNA梯形带;细胞线粒体数量减少,MTT比色法检测A值为0.173±0.065(P＜0.01),提示线粒体功能降低;线粒体相关凋亡级联反应的启动分子Caspase-9蛋白表达增加,Caspase-9酶活性增强至75.4±4.8,与未经EPA处理HepG2细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论:EPA可能通过损伤线粒体诱导人肝癌HepG2细胞凋亡.     

丁酸钠对HepG2细胞诱导凋亡的作用及机制

目的探讨丁酸钠（sodium butyrate，SB）对HepG2细胞的诱导凋亡作用及与端粒酶活性的关系。方法采用MTT法检测5mmol／L丁酸钠在不同时间对HepG2细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测丁酸钠作用于HepG2细胞后的凋亡情况，及细胞周期的改变；TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果丁酸钠能明显抑制HepG2细胞增殖，并且这种抑制作用具有时间依赖性。丁酸钠处理HepG2细胞48h凋亡率明显提高（P〈0．01），S期细胞比例显著下降（P〈0．05），G0／G1期细胞比例显著升高（P〈0．05）。实验组端粒酶活性为1.16±0．12，对照组端粒酶活性为3．58±0．33，实验组端粒酶活性明显降低（P〈0．05）。结论丁酸钠具有诱导HeoG2细胞凋亡的作用，其机制与抑制端粒酶活性有关。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

热疗对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,在各种恶性肿瘤的死亡顺序中居第二位,每年死亡20多万人,约占世界肝癌死亡人数的一半以上[1].恶性肿瘤的发生、发展的过程,是细胞的过度增殖和细胞凋亡受到抑制的过程[2].诱导细胞凋亡已成为治疗肿瘤的一个新热点.应用加热治疗肿瘤早已被临床所接受,但加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响未见报道.为此,我们以肝癌HepG2细胞为模型,观察不同加热时间对肝癌HepG2细胞凋亡的影响.     

大蒜素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素对体外培养的人肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用及其分子机理.方法 采用TUNEL法检测大蒜素对HepG2细胞凋亡的影响,提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究大蒜素对Bcl-2基因表达的影响.结果 大蒜素使人HepG2细胞凋亡指数增加(P<0.01),且呈剂量依赖效应;Bc1-2基因mRNA水平随大蒜素浓度升高而降低.结论 大蒜素可促进人HepG2细胞的凋亡过程,并使Bcl-2基因mRNA水平降低,从而起到抗肿瘤的治疗作用.探讨大蒜素体内外诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的作用及机制.     

欧前胡素下调Mcl-1蛋白表达诱导人肝癌细胞HepG2凋亡实验研究

目的探讨欧前胡素对人肝癌细胞的抑制作用及机制。方法将人肝癌细胞系Hep G2用5、10、20、40、80μM的欧前胡素处理24h或48h,以相同培养条件不加欧前胡素的Hep G2细胞为对照组,MTT法检测欧前胡素治疗后Hep G2细胞的增殖抑制情况;Hep G2细胞用10、20、40μM的欧前胡素处理24h,通过流式细胞术和Western blot检测欧前胡素对Hep G2细胞的凋亡诱导作用和Mcl-1(myeloid cell leukemia-1)的表达;在Hep G2细胞中转染pc DNA-3.1-Mcl-1真核表达载体后再用欧前胡素治疗,检测欧前胡素对Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应。结果 10、20、40、80μM欧前胡素组增殖抑制率分别为24h:(7.2±1.7)%、(14.5±2.6)%、(37.4±3.7)%、(56.3±4.3)%;48h:(14.5±2.1)%、(23.6±3.0)%、(52.3±4.8)%、(78.3±5.9)%,与对照组(0)比较,差异均有统计学意义(P0.05);10、20、40μM欧前胡素组凋亡诱导率分别为(3.9±0.8)%、(12.4±1.8)%、(26.9±2.5)%,与对照组(0.5±0.2)%比较,差异有统计学意义(P0.05)。欧前胡素治疗后,Hep G2细胞的Mcl-1表达水平显著下降,用pc DNA-3.1-Mcl-1真核表达载体转染Hep G2细胞后,欧前胡素对Hep G2细胞的凋亡诱导率较空pc DNA3.1载体转染组显著下降[(6.8±1.2)%比(25.7±2.3)%,P0.05]。结论欧前胡素具有体外抗肝肿瘤的生物活性,其抗肿瘤效应的机制可能是通过下调Mcl-1蛋白表达从而诱导细胞凋亡。     

软脂酸诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨软脂酸(PA)对肝细胞的损害作用及其机制.方法采用人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象,观察PA对细胞生存力的影响.用Trypan blue法检测细胞死亡率;流式细胞记数仪检测细胞周期;AnnexinV和碘化丙啶双重染色定量检测早期凋亡及Bcl-2/Bax的表达.结果在人HepG2细胞系中PA诱导了时间相关性细胞死亡和剂量依赖性的细胞生存能力下降;PA诱导了HepG2细胞随处理时间而增加的早期凋亡,PA处理后HepG2细胞中Bcl-2/Bax的比值下降.结论PA能诱导肝细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2/Bax比值有关.     

川芎多糖对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的探讨川芎多糖抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,加入不同浓度的川芎多糖,经MTT法检测HepG2细胞的活性,观察药物作用后的细胞形态,并采用流式细胞术检测HepG2细胞周期。结果 HepG2细胞的存活率随给药浓度的增大而降低,抑制作用呈现出明显的剂量依赖性(P0.05);和空白组比较,药物作用48h后给药组G1期细胞百分含量明显升高(P0.01),S期细胞百分含量明显减少(P0.01)。结论川芎多糖对人肝癌HepG2细胞有明显的体外活性抑制作用,可能是通过将肿瘤细胞阻滞在G1期,从而诱导它的凋亡。     

TRAIL重组蛋白诱导肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导肝癌细胞HepG2的凋亡作用和意义。方法HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果TRAIL蛋白对HepG2的作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为1 000 ng/ml和24h;1 000 ng/ml的TRAIL蛋白作用24 h后,HepG2肝癌细胞的存活率降至45%,凋亡指数达51%。结论TRAIL重组蛋白能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤一定量的HepG2肝癌细胞,有可能成为潜在的抗肝癌新药。     

β1整合素过表达抑制顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨β1整合素过表达对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法功能性β1整合素稳定过表达Hep3B细胞系用于实验。采用WST-1细胞增殖实验试剂盒检测细胞增殖,DNA梯形条带和Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果与亲株、空载体转染Hep3B细胞相比,β1整合素过表达明显抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。细胞外信号调节激酶(ERK)抑制物PD98059和p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制物SB203580能够明显减弱β1整合素对细胞凋亡的保护作用,但Jun激酶抑制物SP600125不能减弱β1整合素的保护作用。结论β1整合素能够通过ERK和p38MAPK信号通路抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。β1整合素介导的细胞外基质信号与肝细胞肝癌化疗耐药有关。     

体外培育牛黄诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的研究体外培育牛黄诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法用单层培养法培养HepG2细胞，用不同剂量的体外培育牛黄作用于HepG2细胞不同时间，用荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态的改变及细胞凋亡，用流式细胞仪检测HepG2细胞的亚G1峰细胞（凋亡）率的变化。结果体外培育牛黄100～800ug／ml作用于HepG2细胞48h后，HepG2细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态学改变；流式细胞直方图上可见亚二倍体峰，不同浓度作用于HepG2细胞24、36、48、72h后的细胞凋亡率均显著高于空白对照组（P〈0．01），400ug／ml浓度组与阳性对照FT207（100ug／ml）组比较无明显差异。结论体外培育牛黄能诱导人肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡。     

二硫化二砷对肝癌细胞凋亡和坏死的影响

目的观察二硫化二砷（As2S2）对人肝癌细胞株（BEL-7402）凋亡和坏死的影响。方法人肝癌细胞株BEL-7402经不同浓度A82s2处理后,采用MTT法进行细胞增殖抑制率的测定,台盼蓝排染法观察As2S2对肝癌细胞的细胞毒作用,通过流式细胞仪定量检测细胞凋亡和坏死的情况,同时检测凋亡相关蛋白Fas和Apo2．7的表达。结果As2S2对细胞有明显细胞毒作用,并且可诱导细胞凋亡的产生,上调Apo2．7和Fas蛋白的表达。结论A22S2具有促肝癌细胞凋亡和坏死的作用。     

低氧诱发人肝癌细胞株HepG2中IAP-2表达及相关机制

目的 研究极度低氧下人肝癌细胞株HepG2中凋亡抑制蛋白2（IAP-2）表达的变化，初步探讨其与缺氧诱导因子1（HIF-1）的相关性。方法 HepG2细胞株分组孵育，用免疫细胞化学定性检测IAP-2蛋白，再用Western blot半定量检测IAP-2蛋白变化，同时对比HIF-1蛋白表达；用RT-PCR检测IAP-2基因水平改变。结果 免疫细胞化学检测IAP-2蛋白在HepG2细胞中呈阳性表达，定位于胞质。Western blot显示，极度低氧1 h IAP-2蛋白表达明显高于常氧组（t=5．723，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，复氧后恢复基线水平；实验还显示HIF-1和IAP-2的蛋白表达具有差异性：常氧组HIF-1未表达，低氧4h可诱发，IAP-2保持基线水平；极度低氧HIF-1无变化，IAP-2表达明显增高；复氧后HIF-1不表达，IAP-2恢复基线表达；加入氯化钴后HIF-1恢复表达，IAP-2保持基线。RT-PCR检测表明，极度低氧1 h IAP-2 mRNA表达明显高于常氧组（t=7．097，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，该结果与上述IAP-2蛋白表达具有一致性。结论 首次表明极度低氧下IAP-2在人肝癌细胞株HepG2表达上调，并具有独立于HIF-1的抗凋亡机制。     

四虫片对低氧培养人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响

目的观察四虫片含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,以及对肝癌细胞突变型p53表达的影响。方法用不同浓度的四虫片和氟尿嘧啶（5-Fu）分别加入肝癌细胞株中一起培养。用单四唑（MTT）法检测其对肝癌细胞增殖的抑制作用,用PV-9000二步法对突变型p53表达进行测定。结果MTT检测显示四虫片高浓度（25％）含药血清72h对肝癌细胞的抑制率为53％,5-FU（10μg／ml）对照组抑制率为22％,两组有明显差异（P〈0．05）。经药物处理后,两组所测变异型p53表达差异明显（P〈0．05）,HOECHST染色试剂盒所测细胞凋亡率亦有明显差异（P〈0．05）。结论四虫片能有效抑制肝癌细胞增殖,且能诱导肝癌细胞凋亡。其诱导肝癌细胞凋亡的机制可能与下调突变型p53蛋白的表达有关。     

组蛋白去乙酰化酶1 siRNA对HeLa细胞生长和凋亡的影响

目的 研究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases-1,HDAC-1)siRNA对宫颈癌HeLa细胞HDAC-1蛋白表达、细胞生长和凋亡的影响.方法 HDAC-1 siRNA沉默HDAC-1蛋白;Western blot技术检测HDAC-1蛋白;MTT法和克隆形成实验检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 HDAC-1 siRNA转染48 h可明显下调HeLa细胞HDAC-1蛋白表达;下调HDAC-1 表达明显降低HeLa细胞克隆形成率,抑制细胞增殖;下调HDAC-1诱导HeLa细胞凋亡.结论 HDAC-1 siRNA可能通过诱导凋亡抑制HeLa细胞生长.     

Molecular Pathway of Psoralidin-Induced Apoptosis in HepG2 Cell Line

Objective: To test the role of psoralidin in human liver cancer HepG2 cells in vitro. Methods: Cell viability was assessed by methylthiazolyldiphenyl-tetrazolum bromide assay and apoptotic cells were labeled by annexin V then sorted by flow cytometry. Protein expressions of caspase-3, caspase-8, caspase-9, Bax, Bid, Bcl-2, Bcl-xL and p53 were examined by western blot while activity of caspase-3,-8 and -9 were also determined. Results: Psoralidin reduces cell viability greatly in a time dependent manner(64%, 40%, 21%, 12% at 2, 6, 24 and 48 h treatment with 64 μmol/L psoralidin respectively) and up-regulates activities of caspase-3,-8 and-9 in a concentration dependent manner(between 4 to 64 μmol/L). Psoralidin also increases the expression of pro-apoptosis genes Bax, Bid and p53 while decreases the expression of pro-survival genes Bcl-2 and Bcl-xL, both in a concentration dependent manner between 4 and 64 μmol/L(P0.05 at 16 and 64 μmol/L). Caspase-3 inhibitor(Ac-DEVD-CHO at concentrations between 10 to 20 μmol/L), p53 inhibitor(pifithrin-α at 5 μmol/L) and cyclosporin A can attenuate the apoptotic effect of psoralidin. Conclusion: The cytotoxic role of psoralidin might work through both intrinsic and extrinsic apoptotic pathway.