槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。     

槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织p38MAPK/AP-1表达的影响

目的观察槐定碱对内毒素血症小鼠p38MAPK信号分子、转录因子激活蛋白1(AP-1)及下游炎症因子TNF-α影响,探讨槐定碱抗内毒素的药理机制。方法 BALB/c小鼠尾静脉注射LPS(7mg.kg-1)制备内毒素血症小鼠模型,30min后腹腔注射槐定碱,剂量分别为12、6和3mg.kg-1,6h后取血和肺组织。免疫印迹法(Western-blot)检测肺组织总p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白表达,RT-PCR检测肺组织c-jun和c-fos mRNA表达,放免法检测血清中TNF-α含量。结果与内毒素血症模型组比较,三个剂量槐定碱干预组肺组织中磷酸化p38蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),c-jun和c-fos mRNA表达显著减少(P<0.01或P<0.05),血清中TNF-α含量明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱可抑制肺组织中p38MAPK的磷酸化,下调c-jun和c-fos mRNA的表达,抑制下游炎症因子TNF-α表达。     

槐定碱对小鼠中枢神经系统的影响

目的观察槐定碱对小鼠中枢神经系统的影响。方法采用行为学方法观察槐定碱对正常小鼠自主活动及对阈剂量戊巴比妥钠小鼠入睡潜伏期和睡眠持续时间的影响;观察槐定碱与阈下剂量戊四氮、烟碱、士的宁、印防己毒素、异烟肼致惊厥的协同作用。结果小鼠ip给予槐定碱10、20mg/kg,小鼠自主活动抑制率分别为66.9%、76.6%,延长小鼠ip戊巴比妥钠40mg/kg的入睡潜伏期,缩短入睡时间(P<0.01)。每只小鼠icv给予槐定碱2.5μg,能协同士的宁、印防己毒素、异烟肼致惊厥作用,但对戊四氮、烟碱致惊厥无协同作用。小鼠ip槐定碱20mg/kg,对其被动运动未见明显影响。结论槐定碱对中枢神经系统具有明显的兴奋作用。     

槐定碱和氧化槐定碱对豚鼠心率的影响

目的：本文观察氧化槐定碱（ＯＳＲ）和槐定碱（ＳＲ）对豚鼠心肌自律性及心率的影响。方法∶应用离体心房实验法及整体动物试验法观察药物对心肌自律性及动物心率的影响。结果∶对整体豚鼠，ｉｖＯＳＲ５００ｍｇ／ｋｇ和ＳＲ１０ｍｇ／ｋｇ可使心率分别由４５８±２０次／ｍｉｎ，４３３±２０次／ｍｉｎ减慢到３７１±２８次／ｍｉｎ（Ｐ＜００１），４１１±１５次／ｍｉｎ（Ｐ＜００５），并能对抗ｉｖ异丙肾上腺素１０μｇ／ｋｇ增加心率的作用，对豚鼠离体左心房，ＯＳＲ（１９ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＳＲ（６０μｍｏ１／Ｌ）均可使肾上腺素诱发自律性的阈浓度由９６±３７μｍｏｌ／Ｌ降低到４８±１８μｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜００５），５７±２３μｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜００５）。结论∶ＯＳＲ和ＳＲ可减慢整体豚鼠的心率，对抗异丙肾的加快心率的作用；而在离体心肌，它们能够使肾上腺素诱发离体心房自律性的浓度降低，表现为加快心率的作用     

槐定碱、氧化槐定碱的药理学研究进展

槐定碱(sophoridine,SR)、氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)是从豆科槐属植物苦豆子(sophora alopecuroides L)中提取到的一对重要的生物碱,其基本结构是由2个三价氮原子稠和的双哌啶环。近几年,关于这两种生物碱的研究又有了很大的进展,探索了其多方面的药理活性。本文对其药代动力学、药理作用、作用机制及应用前景做一综述,为进一步认识、研究、开发利用这一对生物碱提供参考。     

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的 研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节.方法 观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化.结果 槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平.结论 槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPs识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关.     

氧化槐定碱对小鼠中枢神经系统的影响

目的 探讨氧化槐定碱对中枢神经系统的影响。方法 采用行为药理学方法观察并测定氧化槐定碱对阈剂量和阈下剂量戊巴比妥催眠作用的影响,对小鼠外观活动和自身活动的影响及对戊四氮惊厥的影响。结果 腹腔内注射氧化槐定碱250,500,1000mg/kg,小鼠自发活动抑制率分别为42．6％,57．2％和76．3％,戊巴比妥钠入睡时间分别缩短38．4％,49．0％和39．7％,而睡眠时间分别延长172％,138％和389％,并能明显加强阈下剂量戊巴比妥钠的催眠作用。氧化槐定碱500,1000mg/kg不能对抗戊四氮引的惊厥。结论 氧化槐定碱具有镇静、催眠等中枢抑制作用。     

槐定碱对小鼠免疫器官的影响

[摘要] 目的 观察槐定碱(SRI)观察对昆明小鼠免疫器官的影响。方法 将50只昆明小鼠分为槐定碱高剂量组(SRI H)、槐定碱低剂量组(SRI L)、氟尿嘧啶组(5-FU)、槐定碱+氟尿嘧啶合用组和生理盐水阴性对照组,腹腔注射给药两周。计算不同组别小鼠的胸腺指数、脾脏指数,进行胸腺、脾脏、肝脏、肾脏的病理组织学观察。结果 槐定碱组小鼠的胸腺、脾脏指数与阴性对照组比较均无显著变化(P>0.05);5-FU组小鼠胸腺和脾脏指数与阴性对照组比较显著降低(P<0.01);合用组小鼠的胸腺和脾脏指数与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),胸腺指数与各组相比均有显著性差异(P<0.01),脾脏指数与5-FU组相比差异有显著性 (P<0.01),与对照组、槐定碱组比较差异无显著性 (P>0.05)。结论 SRI对昆明小鼠的免疫功能无明显抑制作用,可以拮抗5-FU对脾脏的免疫抑制。     

槐定碱预处理对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响

目的 观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制.方法 培养RAW264.7巨噬细胞,以槐定碱(31.25mg·L-1)预处理细胞24h后给予LPS(E.coli 055:B5)100μg·L-1刺激细胞,并于刺激后5、30、60、120min收集细胞;再以槐定碱31.25、15.63、7.81mg·L-1三个浓度同上预处理细胞,于IPS刺激后60min收集细胞.利用免疫细胞化学技术检测RAW264.7巨嘴细胞中c-Jun的表达.结果 单独槐定碱对c-Jun表达尢影响;LPS模型组各时间点c-Jun阳性细胞数均显著高于巨噬细胞对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而升高,持续升至120min;槐定碱预处理组在LPS作用后30、60、120min时c-Jun阳性细胞数均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(均P<0.01),但槐定碱预处理组各时间点c-Jun阳性细胞数无明显变化.不同浓度槐定碱(31.25、15.63、7.81 mg·L-1)预处理细胞,对LPS刺激的c-Jun表达均有显著抑制作用(P<0.01),且31.25 mg·L-1的作用强于另两个浓度(15.63、7.81mg·L-1),差异有统计学意义(P<0.05).结论 槐定碱预处理RAW264.7巨噬细胞能显著抑制LPS诱导的c-Jun蛋白表达,其作用有剂量依赖性.     

槐定碱、氧化槐定碱对常见泌尿生殖道感染细菌的抑菌作用

目的研究槐定碱（sophoridine,SR）、氧化槐定碱（oxysophori-dine,OSR）对常见泌尿生殖道感染病原菌的体外抑菌作用。方法采用纸片扩散法初步测定SR、OSR对大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌体外抑菌的范围,利用液体倍比稀释法测定SR、OSR对各细菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果 SR对4种受试菌均有显著的抑菌作用,SR对大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌和表皮葡萄球菌的MIC分别为8.0、8.0、8.0和4.0mg·m L^-1;OSR的抑菌作用较弱,其对大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌和表皮葡萄球菌的MIC分别为256、256、256和128mg·m L^-1。结论槐定碱对4种常见泌尿性殖道感染细菌具有一定的抑菌作用,而氧化槐定碱的抑菌效果最弱。     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

Toll样受体4在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征

 [目的]探讨Toll样受体4（TLR4）在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征。[方法]采用免疫组化染色法检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）63例、慢性重型肝炎（CSH）11例及健康对照组10例肝组织TLR4的表达,综合评分法判断结果。常规培养肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,采用直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR4在细胞上表达的平均荧光强度（MFI）及阳性细胞率。[结果]TLR4在慢性乙型病毒性肝炎及慢性重型肝炎患者肝组织上的表达明显高于健康对照组（P〈0.01）,主要表达于肝细胞胞浆及部分胞膜,在慢性乙型病毒性肝炎中,TLR4的表达强度与肝组织炎症活动度分级（G）呈显著正相关（r=0.632,P〈0.001）。TLR4在肝癌细胞株HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为18.24±8.18、（17.79±9.46）%,明显高于HepG2的2.33±0.41、（1.71±0.77）%（P〈0.001）。[结论]TLR4的表达与乙型病毒性肝炎肝组织的炎症活动密切相关,而乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,故TLR4参与了乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关。     

槐定碱对大鼠肝硬化形成及内毒素水平的干预作用

目的探讨槐定碱对大鼠肝硬化形成及内毒素水平的干预作用。方法将75只大鼠随机分为空白对照组、肝硬化模型组、槐定碱低、中、高剂量干预组。肝硬化模型组用四氯化碳复合法复制肝硬化模型,槐定碱低、中、高剂量干预组在此基础上于皮下注射四氯化碳后1h分别腹腔注射槐定碱36、、10mg.kg-1,每周2次,注射8周。实验8周后观察肝脏的病理变化并采用显色基质鲎试剂试管法测定大鼠血浆内毒素水平。结果病理观察发现肝硬化模型组肝组织有假小叶形成,而三个剂量槐定碱干预组的肝组织均无假小叶形成,纤维化程度较低。五组大鼠血浆内毒素浓度的总体均数不相等,每两组大鼠血液内毒素浓度比较差别均有统计学意义(P<0.05)。结论槐定碱可以通过抗内毒素而延缓肝硬化的形成,不同剂量槐定碱干预效果不同,具有一定的剂量-效应关系。     

肝纤维化过程中Toll样受体4在肝脏的表达分布及意义

目的动态观察大鼠肝纤维化过程中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白在肝脏的表达,探讨TLR4与肝纤维化发生发展的关系。方法以四氯化碳皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组和模型1周组、2周组、4周组、6周组。常规HE染色和天狼猩红胶原染色观察肝脏病变;检测肝组织羟脯氨酸和血浆内毒素含量;免疫组化和Western blot检测TLR4在肝组织中的表达,检测α-SMA观察活化的肝星状细胞(HSCs)。结果与正常对照组比较,CCl4作用2周时,肝组织羟脯氨酸含量开始明显增多(P0.01);模型组各组血浆内毒素含量呈梯度上升(P0.01),且与肝组织羟脯氨酸含量呈显著正相关关系(P0.01);CCl4作用1周后肝组织TLR4的表达即明显增强(P0.01),4周时和6周时有所下降(与2周组相比,P0.05),但仍高于正常对照组(P0.01)。TLR4阳性细胞包括枯否细胞、活化的HSCs及少量的肝细胞和内皮细胞。结论内毒素及其受体TLR4的改变可能在肝纤维化中起重要作用。     

体外循环围手术期单核细胞TLR4表达的动态观察

目的研究体外循环围手术期不同时点Toll样受体4（TLR4）的表达变化。方法选取20例体外循环下心内直视手术病人，分别于麻醉诱导前（T1）、体外循环前（T2）、体外循环后即刻（T3）、体外循环后4h（T4）、体外循环后24h（T5）抽取外周静脉血，分离单核细胞，用逆转录聚合酶联反应（RT—PCR）法检测TLR4的表达变化。结果与术前比较，体外循环前、体外循环结束后即刻单核细胞TLR4的表达下调，体外循环结束后4h表达上调，体外循环结束后24h进一步升高。结论体外循环围手术期，TLR4的表达呈现动态变化，TLR4可能与体外循环术后炎症反应等病理生理有一定关系。     

失血性休克后小鼠肺组织TLR4受体表达及其意义

目的探讨单纯性失血性休克(无复苏)后肺组织TLR4表达变化及意义。方法C57BL/6小鼠随机分为失血性休克组、脂多糖(LPS)刺激组、假手术组。复制各组动物模型,在不同时间点取出肺组织,通过免疫组化方法,观察TLR4在肺组织的表达变化。结果在失血性休克和LPS刺激后肺部出现明显的中性粒细胞浸润、红细胞渗出。在失血性休克1、2及4 h后,肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺间质TLR4表达逐渐增加,6 h开始下降;而LPS刺激后1、2、4及6 h肺TLR4表达逐渐增加。假手术组未见TLR4表达。结论失血性休克后肺TLR4变化可能与急性肺损伤(ALI)的发生有关。失血性休克及LPS刺激后肺组织TLR4变化增强了机体的非特异性免疫能力,同时增加了宿主对随后各种刺激的易感性,过度表达的TLR4可能造成组织、器官结构和功能的损害。     

槐定碱对家兔血流动力学的影响

目的研究槐定碱(sophoridine,SRI)对家兔血流动力学的影响。方法将32只家兔随机分为四组,即槐定碱2.5、5、10mg/kg及生理盐水对照组。采用经典的血流动力学方法观察给药前与给药后0、1、3、5、7、10min的心率(HR)、收缩压(SP)、舒张压(DP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室终末舒张压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(dp/dtmax)、左心室开始收缩至dp/dtmax的间隔时间(t-dp/dtmax)、心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)和等容舒张时间室内压下降的时间常数(T)的变化,并与对照组比较。结果(1)SRI对家兔心率和血压的影响:与对照组比较,静脉注射SRI 2.5mg/kg对心率无明显影响(P>0.05);5mg/kg在1min时明显减慢心率(P<0.05),10mg/kg能使家兔心率显著减慢(P<0.01)。SRI 2.5mg/kg能增加SP(P<0.05),对DP无明显影响;5mg/kg明显增加SP、DP(P<0.01或P<0.05);10mg/kg能显著增加SP、DP(P<0.01)。(2)SRI对家兔心功能的影响:与对照组比较,静脉注射SRI 2.5mg/kg对心功能各指标均无明显影响(P>0.05);5 mg/kg和10mg/kg能显著增加LVSP、±dp/dtmax(P<0.01),并能增加T值(P<0.05);SRI三个剂量对LVEDPt、-dp/dt-max均无明显影响(P>0.05)。以上参数的变化随着剂量的增加持续时间延长。结论静脉注射槐定碱5mg/kg和10mg/kg在10min内有减慢家兔心率,增加血压和心功能的作用。     

荆芥、桂枝挥发油对LPS体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的:观察VOHS(荆芥挥发油)、VOCC(桂枝挥发油)体外干预小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4通路的抗炎机制.方法:1.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,加入不同浓度的VOHS、VOCC,药物作用24h后采用MTT法检测细胞存活率.2.常规培养小鼠腹腔巨噬细胞,分组加药培养24h后,提取细胞总RNA,采用RT-PCR测定TLR2...