体外转染绿色荧光蛋白基因的肌源性干细胞移植修复大鼠脊髓损伤

背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨、软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等,是组织工程临床用于脊髓损伤修复的理想种子细胞。 目的：观察肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠运动功能的修复作用。 方法：40只成年SD大鼠随机数字表法分为移植组和对照组,每组20只。均进行脊髓半切损伤,伤后9 d,移植组于伤处移植体外转染绿色荧光蛋白基因的大鼠肌源性干细胞,而对照组仅注射等量PBS,于移植后1,2,3,4周用斜板实验和BBB评分测大鼠的运动功能,同时进行损伤脊髓取材、快速冰冻切片进行荧光显微镜观察。 结果与结论：所有大鼠脊髓半切损伤手术均成功,术后无动物死亡。肌源性干细胞移植后1周,移植组与对照组均有所恢复,斜板实验和BBB评分差异无显著性意义(P > 0.05);2~4周移植组恢复明显较好,斜板实验和BBB评分显著高于对照组(P < 0.05),移植组后肢活动与前后肢活动的协调性明显优于对照组。荧光显微镜观察经诱导分化和基因标记的肌源性干细胞在损伤脊髓组织局部生长良好,并且有沿着脊髓神经束向头尾两侧迁移的趋势。提示脊髓半切损伤大鼠经肌源性干细胞移植后能在损伤脊髓组织局部长期存活并明显改善其运动功能,肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠有修复作用。 关键词：肌源性干细胞;移植;脊髓损伤;绿色荧光蛋白;大鼠     

组织工程脊髓移植治疗大鼠脊髓半切块状损伤

目的 研究组织工程脊髓移植治疗大鼠脊髓半切块状损伤的疗效.方法 以聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)为细胞支架,多聚赖氨酸为细胞外基质,神经十细胞(NSCs)为种子细胞,体外构建组织工程脊髓.制作大鼠T10脊髓右半切块状损伤模型,随机分成3组:实验组在损伤区移植组织工程脊髓,对照组A移植NSCs,对照组B移植PLGA.移植治疗12周,每周均行BBB评分定量评价肢体运动功能.伤后第12周辣根过氧化物酶(HRP)神经逆行示踪评价脊髓传导束的恢复程度,并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,观察移植区的形态结构修复.结果 伤后12周实验组的BBB运动功能评分较对照组明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05).HRP神经逆行示踪显示:实验组鼠右侧大脑组织中可见大量的HRP标记阳性神经元,而两对照组仅见有少量HRP阳性神经元;免疫组织化学染色显示:实验组移植区NF阳性神经元和GAP-43阳性神经轴索数量较多,修复了缺损,而对照组极少,仍留下不同程度的缺损.结论 组织工程脊髓移植治疗促进了半切块状损伤脊髓的形态结构修复和功能恢复,疗效明显优于单纯的NSCs移植和PLGA移植.     

人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价

目的 观察人脐带间充质干细胞（human umbilical cordmesenchymal stem cell，hUCMSC）移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法 SD大鼠70只，随机分为3组：脊髓半切＋hUCMSC组（n=30）、脊髓半切＋PBS组（n=30）和假手术组（n=10）。脊髓半切＋hUCMSC组和PBS组又分为头侧注射、尾侧注射和头尾两侧注射三个亚组。移植后1、7、14、21、28d观察大鼠神经功能恢复情况，应用免疫组化检测移植到脊髓的hUCMSC胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）表达情况。结果 大鼠脊髓半切损害后，hUCMSC组动物较PBS组有明显的神经功能恢复。植入后28d在宿主脊髓中存活的hUCMSC细胞MABl281（mouse antiuman nuclei monoclonal antibody）染色阳性，免疫组化双标染色显示MABl28l阳性细胞亦分别有NSE或GFAP表达并向损伤部位迁移，hUCMSC来源的GFAP阳性细胞可见明显的树突生长。结论 hUCMSC移植到宿主损伤脊髓后可以存活、向损伤部位迁移，并向神经元样和星形胶质细胞分化，且可促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复。hUCMSC作为一种来源广泛的干细胞用于治疗脊髓损伤可能具有重要的价值。     

甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的 探讨甲强龙、电针与羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cell,AECs)移植联合治疗,对脊髓损伤(spinal cord injury,SCl)大鼠下肢运动功能的影响.方法 将60只成年雌性Wistar大鼠随机分成5组,每组12只.A组(SCI损伤对照):做SCI手术,不进行治疗;B组(甲强龙治疗):SCI后,用大量甲强龙药物冲击治疗,共3d;C组(MP+电针):B组基础上,SCI后4h,行华佗夹脊穴电针治疗;D组(MP+电针+AEC):C组基础上,SCI后第7天,在脊髓损伤处移植大鼠AECs;E组(假手术):只打开椎板,暴露脊髓,不造成SCI.各组定期行为学观察(BBB评分),术后30d行5-HT免疫荧光组织化学观察和神经电生理检测.结果 5-HT染色:D组损伤区可见大量有序的5-HT阳性神经纤维,与E组最接近;BBB评分:D组恢复最为明显,与其它治疗组比较差异显著;MEP检测:D组峰-峰值显著增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01).结论 甲强龙、电针与AECs联合治疗脊髓损伤极大的促进了5-羟色胺能神经纤维的再生,对SCI大鼠后肢运动功能的恢复有明显的促进作用.     

骨髓间充质干细胞移植联用氨基胍对大鼠脊髓损伤修复的影响*

背景：体内实验发现,骨髓间充质干细胞可在体内神经组织中分化为神经元样细胞,表达神经元抗原,并且骨髓间充质干细胞的存在对神经元的损伤有保护作用,这可能与骨髓间充质干细胞分泌的活性物质有关。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植联用诱导型一氧化氮合酶抑制剂-氨基胍对大鼠脊髓损伤修复的影响。 设计、时间及地点： 随机对照动物实验,细胞学观察,于2006-07/2008-02在河北工程大学附属医院外科实验室和中心实验室完成。 材料：Wistar大鼠36只随机分成对照组、骨髓间充质干细胞组、联合移植组,每组12只。氨基胍由美国Sigma公司提供。 方法：采用密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,以Brdu标记细胞核。对照组：制备脊髓半切损伤模型不做处理。骨髓间充质干细胞组：制备脊髓半切损伤模型后,损伤上下各 1 mm处移植骨髓间充质干细胞悬液共2 μL。联合移植组：制备脊髓半切损伤模型后,损伤上下各 1 mm处移植骨髓间充质干细胞悬液8 μL,同时局部给予氨基胍100 mg/kg。 主要观察指标：术后采用斜板试验及改良Tarlov评分评价动物后肢运动功能恢复情况。术后2个月,显微镜下观察移植后脊髓形态结构变化及移植物存活情况。神经微丝和胶质原纤维酸性蛋白免疫组织化学评价移植对脊髓再生的影响。 结果：下肢运动功能评价联合移植组优于骨髓间充质干细胞组,骨髓间充质干细胞组优于对照组。免疫组织化学检测发现,脊髓损伤区有新生束状轴突伸向断端,嗜银染色可见脊髓断端的再生轴突长入断端间组织中,部分连接两端面。损伤阶段脊髓内可见Brdu标记阳性骨髓间充质干细胞存活,灰质分布较白质多,以注射部位向周围损伤组织迁移,联合应用氨基胍组Brdu标记阳性骨髓间充质干细胞存活多。联合移植组术后2个月神经微丝和胶质原纤维酸性蛋白免疫阳性反应的面积比均高于其他各组。 结论：骨髓间充质干细胞联合氨基胍移植促进大鼠半横断脊髓结构和功能恢复的效果明显优于单纯细胞移植组,两者联用具有协同效应。     

移植人羊膜细胞对大鼠创伤性脑损伤的实验研究

目的 探究大鼠TBI后脑内移植人羊膜细胞（HACs）对大鼠运动功能的影响。方法 HACs经分离、Hoechst33342标记后重悬调整细胞浓度为10^5/μl；采用改进的Feeney自由落体法打击大鼠脑皮层后肢运动区域，损伤后24h经微量注射器和立体定向仪将Hoechst33342标记的HACs 10μl分别移植于挫伤灶中心和挫伤灶边缘；在TBI后的28d内采用钉板平衡木行走测试大鼠运动功能变化，运动功能检测结束后取出脑组织行组织学检测。结果 治疗组滑落脚步数明显少于对照组（P〈0．05）；移植的HACs呈蓝色荧光；部分移植HACs可见MAP-2阳性表达。结论 移植HACs使大鼠TBI后运动功能明显改善。     

高压氧联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

背景：单纯神经干细胞移植已应用于对受损脊髓组织的修复。 目的：以神经干细胞移植同时应用高压氧治疗大鼠脊髓损伤,观察联合作用对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。 方法：雌性SD大鼠60只,以半切法制成胸段脊髓半横断大鼠模型。随机分成单纯损伤组、神经干细胞移植组及高压氧治疗组,每组20只。伤后第4周取材行病理切片苏木精-伊红染色及BrdU免疫组织化学染色,第8周取材行辣根过氧化物酶示踪,透射电镜观察轴突的再生情况,通过体感诱发电位观察神经电生理恢复情况。造模后1,2,4,6,8周进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。 结果与结论：观察伤后4周病理切片,单纯损伤组未见神经轴索通过,神经干细胞移植组可见少量神经轴索样结构,高压氧治疗组可见较多神经轴索样结构。BrdU的阳性细胞数及辣根过氧化物酶阳性神经纤维数,高压氧治疗组最多,神经干细胞移植组次之,单纯损伤组最少,且各组之间差异有显著性意义(P < 0.05)。透射电镜下神经干细胞移植组、高压氧治疗组正中横断面可见新生的无髓及有髓神经纤维。高压氧治疗组大鼠体感诱发电位的潜伏期短于神经干细胞移植组,波幅高于神经干细胞移植组(P < 0.05),明显优于单纯损伤组(P < 0.01)。伤后4周神经干细胞移植组、高压氧治疗组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,高压氧治疗组较神经干细胞移植组恢复快(P < 0.05);单纯损伤组亦有所恢复,但程度较轻。提示神经干细胞移植对于脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复有促进作用,联合应用高压氧有协同效果。     

骨髓间质干细胞源性神经元样细胞与控释神经营养因子移植治疗猴脊髓损伤：电生理评价

背景：临床研究表明诱发电位监测能准确监测脊髓的损伤,因此通过对电生理的监测来评估干细胞移植治疗脊髓损伤的效果具有重要意义。 目的：通过电生理监测评估骨髓间质干细胞源性神经元样细胞与控释神经营养因子移植治疗猴脊髓损伤的疗效。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2004-06/2005-11在中山大学附属二院骨外科实验室完成。 材料：健康雄性恒河猴8只,随机分为移植组、模型组,4只/组。 方法：两组猴均建立急性脊髓损伤模型。造模后第10天,取体外分离培养的猴骨髓间质干细胞源性神经元样细胞3.0×106 cells/kg,与含1 μg胶质细胞源性神经营养因子的控释生物材料用200 μL PBS制成悬液,分5点注射到移植组脊髓损伤部位;模型组同法给予等量磷酸盐缓冲液。 主要观察指标：皮质体感诱发电位检查结果,运动诱发电位检查结果,行为学Tarlov分级。 结果：①造模前两组动物均检测到正常皮质体感诱发电位信号,造模后两组动物皮质体感诱发电位波幅消失。移植后四五个月,移植组3只恒河猴皮质体感诱发电位波幅有明显恢复,但波幅仍明显低于造模前(P < 0.01),且潜伏期也延迟(P < 0.01);模型组动物未见有皮质体感诱发电位波幅恢复。②造模后两组动物运动诱发电位缺失。移植后4~5个月,移植组运动诱发电位波型有轻微恢复,但潜时期平均延长3.1 ms,波幅下降超过50%;模型组运动诱发电位仍然缺失。③移植后四五个月,移植组行为学Tarlov分级为1或2级,模型组为0级。 结论：电生理评估结果表明,骨髓间质干细胞源性神经元样细胞与胶质细胞源性神经营养因子控释材料联合移植可以促进损伤脊髓的一定程度恢复。     

人脂肪间充质干细胞静脉移植修复脊髓损伤：相关因子及行为学评价

背景：研究证实脂肪间充质干细胞在体外经丹参等诱导剂诱导后可分化为神经元样细胞,因此有可能成为治疗脊髓损伤新的种子细胞。 目的：探讨脂肪间充质干细胞尾静脉移植后,对急性闭合性脊髓损伤大鼠行为学及损伤脊髓组织中各因子表达的影响。 方法：无菌条件下体外分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第4代,将细胞收集并制成浓度为1×109 L-1细胞悬液。盐水对照组、细胞移植组大鼠建立脊髓损伤模型,造模成功后1周,细胞移植组经尾静脉注射1 mL干细胞悬液,盐水对照组同法注射等体积的生理盐水,模型对照组不做任何处理。 结果与结论：与模型对照组和盐水对照组比较,细胞移植组大鼠后肢运动功能明显恢复,BBB评分明显升高(P < 0.05);胶质纤维酸性蛋白阳性表达明显减少(P < 0.05),神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白的阳性表达均明显升高(P < 0.05)。移植后3 d及1周,在损伤区及临近的脊髓节段可见经荧光染料标记的脂肪间充质干细胞,主要聚集在受损伤脊髓节段1 cm范围内,呈不均匀分布。提示急性闭合性脊髓损伤大鼠经尾静脉移植人脂肪间充质干细胞后,其行为学得到改善,受损脊髓节段局部神经元细胞分化明显增多,修复速度加快。     

BDNF-GFP转染神经干细胞修复大鼠脊髓损伤：发挥干细胞与神经因子的双重效应？

摘要 背景：神经干细胞移植入大鼠脊髓损伤模型可以促进功能恢复,基因治疗已被广泛用于治疗脊髓损伤。 目的：确定BDNF-GFP转染后神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复效果。 设计,时间和背景：本实验是在中国医科大学基础医学院发育生物学实验室与2009年5月至2010年1月完成。 材料：10只新生Wistar大鼠和88只2-3个月大,雌雄不限的Wistar大鼠。 方法：以携带BDNF-GFP基因的腺病毒转染神经干细胞。88只Wistar大鼠中假手术组8只, 80只大鼠制成T9左侧横断模型,并随机分成四组：BDNF和GFP修饰的神经干细胞移植组,GFP修饰的神经干细胞移植组;单纯神经干细胞移植组和模型组。在各神经干细胞移植组,脊髓损伤后向横断处显微注射等体积细胞,模型组在相同的部位注射等体积的PBS。 主要观察指标： BBB评分检测脊髓损伤模型运动功能恢复情况;制备脊髓损伤模型2周后取材,免疫组化评估BDNF-GFP转染的神经干细胞移植后的细胞学特点;制备脊髓损伤模型2、4、6、8周Real-time PCR检测脊髓横断处BDNF表达情况。 结果： BDNF-GFP转染后神经干细胞在脊髓半切模型中存活并表达BDNF和GFP,移植该细胞后的大鼠体内高表达具有生物活性的BDNF,且脊髓损伤动物运动功能较对照组明显恢复。 结论：移植BDNF-GFP转染后神经干细胞可能是一种修复脊髓损伤的有效的方法。 关键词：神经干细胞,脑源性神经营养因子;绿色荧光蛋白;脊髓损伤;移植。     

Rat hair follicle stem cells differentiate and promote recovery following spinal cord injury

Emerging studies of treating spinal cord injury （SCI） with adult stem cells led us to evaluate the effects of transplantation of hair follicle stem cells in rats with a compression-induced spinal cord lesion. Here, we proposed a hypothesis that rat hair follicle stem cell transplantation can promote the recovery of injured spinal cord. Compression-induced spinal cord injury was induced in Wistar rats in this study. The bulge area of the rat vibdssa follicles was isolated, cultivated and characterized with nestin as a stem cell marker. 5-Bromo-2＇-deoxyuridine （BrdU） labeled bulge stem cells were transplanted into rats with spinal cord injury. Immunohistochemical staining results showed that some of the grafted cells could survive and differentiate into oligodendrocytes （receptor-interacting protein positive cells） and neuronal-like cells （~lll-tubulin positive cells） at 3 weeks after transplantation. In addition, recovery of hind limb locomotor function in spinal cord injury rats at 8 weeks following cell transplantation was assessed using the Basso, Beattie and Bresnahan （BBB） locomotor rating scale. The results demon- strate that the grafted hair follicle stem cells can survive for a long time period in vivo and differentiate into neuronal- and glial-like cells. These results suggest that hair follicle stem cells can promote the recovery of spinal cord injury.     

Optimal time for subarachnoid transplantation of neural progenitor cells in the treatment of contusive spinal cord injury

This study aimed to identify the optimal neural progenitor cell transplantation time for spinal cord injury in rats via the subarachnoid space. Cultured neural progenitor cells from 14-day embryonic rats, constitutively expressing enhanced green fluorescence protein, or media alone, were injected into the subarachnoid space of adult rats at 1 hour (acute stage), 7 days (subacute stage) and 28 days (chronic stage) after contusive spinal cord injury. Results showed that grafted neural progenitor cells migrated and aggregated around the blood vessels of the injured region, and infiltrated the spinal cord parenchyma along the tissue spaces in the acute stage transplantation group. However, this was not observed in subacute and chronic stage transplantation groups. O4- and glial fibrillary acidic protein-positive cells, representing oligodendrocytes and astrocytes respectively, were detected in the core of the grafted cluster attached to the cauda equina pia surface in the chronic stage transplantation group 8 weeks after transplantation. Both acute and subacute stage transplantation groups were negative for O4 and glial fibrillary acidic protein cells. Basso, Beattie and Bresnahan scale score comparisons indicated that rat hind limb locomotor activity showed better recovery after acute stage transplantation than after subacute and chronic transplantation. Our experimental findings suggest that the subarachnoid route could be useful for transplantation of neural progenitor cells at the acute stage of spinal cord injury. Although grafted cells survived only for a short time and did not differentiate into astrocytes or neurons, they were able to reach the parenchyma of the injured spinal cord and improve neurological function in rats. Transplantation efficacy was enhanced at the acute stage in comparison with subacute and chronic stages.     

许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植修复大鼠脊髓损伤*

目的：观察许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡、Bcl-2表达及下肢运动功能恢复的影响。 方法：清洁级SD大鼠随机分为4组：正常对照组、单纯损伤组、许旺细胞组、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组。后3组制作脊髓全横断损伤模型。正常对照组、单纯损伤组不进行移植处理,许旺细胞组植入吸附许旺细胞悬液的明胶海绵块、许旺细胞-海藻酸钠凝胶组植入许旺细胞-海藻酸钠凝胶。分别于 12 h,1,3,7,21 d对动物进行BBB评分后处死,取损伤区脊髓节段制成石蜡切片进行TUNEL、Bcl-2染色,观察脊髓内凋亡细胞、Bcl-2细胞的数量及分布变化。 结果：正常对照组仅有少量淡染Bcl-2阳性细胞;单纯损伤组神经元Bcl-2免疫反应阳性细胞表达的高峰在第3天,14 d时Bcl-2免疫反应阳性细胞表达接近正常水平。许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植后损伤脊髓细胞Bcl-2免疫反应阳性细胞表达具有显著增高(P < 0.05),7 d高度表达并持续2周以上。单纯损伤组脊髓内细胞凋亡最多,并于损伤后1,7 d形成两个高峰,多分布于白质中。许旺细胞-海藻酸钠凝胶组BBB评分较单纯损伤组及许旺细胞组明显提高(P < 0.05)。 结论：许旺细胞-海藻酸钠凝胶移植能抑制大鼠脊髓损伤后脊髓细胞凋亡、促进Bcl-2的表达,提高了脊髓运动功能的恢复,但未达到正常水平。 关键词：脊髓损伤;细胞凋亡;许旺细胞;Bcl-2     

Transplantation of an adipose stem cell cluster in a spinal cord injury

We investigated whether transplantation of a three-dimensional cell mass of adipose-derived stem cells (3DCM-ASCs) improved hind limb functional recovery by the stimulation of angiogenesis and neurogenesis in a spinal cord injury. In in-vitro experiments, we confirmed that 3DCM-ASCs differentiated into CD31-positive endothelial cells. To evaluate the therapeutic effect of 3DCM-ASCs in vivo, PBS, human adipose tissue-derived stem cells, and 3DCM-ASCs were transplanted into a spinal cord injury model. The 3DCM-ASCs transplanted into the injured spinal cord differentiated into CD31-positive endothelial cells and remained differentiated. Transplantation of 3DCM-ASCs into the injured spinal cord significantly elevated the density of vascular formations through angiogenic factors released by the 3DCM-ASCs at the lesion site, and enhanced axonal outgrowth at the lesion site. Consistent with these results, the transplantation of 3DCM-ASCs significantly improved functional recovery compared with both ASC transplantation and PBS treatment. These findings suggest that transplantation of 3DCM-ASCs may be an effective stem cell therapy for the treatment of spinal cord injuries and neural ischemia.     

蛛网膜下腔移植自体激活许旺细胞治疗大鼠脊髓损伤***

背景：许旺细胞能够分泌多种神经营养因子,促进脊髓损伤功能的恢复。但异体许旺细胞移植可引发自身免疫反应,且在移植方式上,局部移植无法避免二次损伤,静脉移植虽可以透过血脊髓屏障到达损伤局部,但不能达到有效的治疗浓度。 目的：探讨经蛛网膜下腔移植自体激活许旺细胞对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响。 方法：66只大鼠均建立脊髓损伤模型,造模后随机分为3组,自体激活许旺细胞组通过结扎单侧隐神经从而激活许旺细胞,自体未激活许旺细胞组、模型对照组仅在相同部位手术但不结扎神经。切除各组手术远端1 cm神经,采用组织块法进行许旺细胞的体外分离培养及纯化。1周后,自体激活许旺细胞组、自体未激活许旺细胞组分别通过蛛网膜下腔注入经Hoechst33342标记的对应许旺细胞悬液,模型对照组仅注入等量DMEM。对脊髓损伤后肢体功能的恢复进行BBB运动功能评分及脚印分析,通过苏木精-伊红染色和GFAP染色从组织学角度评价脊髓损伤恢复情况。 结果与结论：从术后第4周开始,自体激活许旺细胞组BBB后肢功能评分明显优于另两组(P < 0.05)。移植后2周,可见迁移至大鼠脊髓损伤局部的许旺细胞。与自体未激活许旺细胞组比较,移植后5周自体激活许旺细胞组的前后足中心距离、后肢第3足趾外旋角度均显著减小(P < 0.05),移植后13周损伤区胶质瘢痕面积明显减小(P < 0.05),损伤区空洞面积明显减小(P < 0.05)。证实经蛛网膜下腔移植自体激活许旺细胞可以促进脊髓损伤的恢复。     

胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响

目的研究胎鼠神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡及凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组),脊髓损伤组(SCI组),神经干细胞组(NSC组),神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组)。采用电控脊髓损伤打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-dU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植。免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移及凋亡抑制基因Bcl-2的表达,TUNEL法标记凋亡细胞(免疫组化及免疫荧光显色),改良Rivlin法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果 BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs。BrdU+NSC组与NSC组各时间点凋亡阳性细胞数均比SCI组减少(P<0.01),Bcl-2免疫阳性细胞光密度值比SCI组明显增加(P<0.01),且Bcl-2表达高峰延长至伤后7d;移植后7d、14d、28d后肢运动功能评分较SCI组明显升高(P<0.01)。Br-dU+NSC组与NSC组之间比较无明显差异(P>0.05)。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs可在脊髓损伤区域存活、迁移,并能通过上调Bcl-2的表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞的凋亡,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复。     

嗅鞘细胞移植损伤脊髓组织的超微结构变化

背景：脊髓损伤后神经功能难以自行恢复,嗅鞘细胞具有外周性和中枢性两种胶质细胞的成鞘功能,是修复受损神经最有前途的种子细胞。嗅鞘细胞移植到受损脊髓后的组织学和超微结构的变化可能帮助解释嗅鞘细胞发挥修复作用的机制。 目的: 验证嗅球源性嗅鞘细胞移植对脊髓损伤功能恢复的促进作用,并观察移植的嗅鞘细胞对神经元和轴突组织和超微结构的影响。 方法：将已制备脊髓模型的Wistar大鼠随机分为3组,对照组不做任何注射操作,DMEM/F12组注射DMEM/F12培养基,嗅鞘细胞组注射嗅鞘细胞悬液。每周进行肢体活动BBB评分,8周后取脊髓标本进行组织学和免疫组织化学观察,评价脊髓损伤的修复情况,并观察嗅鞘细胞移植对脊髓组织和超微结构的影响。 结果与结论：3组动物均出现后肢运动功能的恢复,嗅鞘细胞组优于对照组和DMEM/F12组,在4周后更为明显。组织学观察可见,在嗅鞘细胞组可见有神经纤维通过损伤处。损伤处附近,嗅鞘细胞组脊髓腹侧的神经纤维和神经元形态较好,损伤较轻。而对照组和DMEM/F12组神经纤维和神经元损害严重。嗅鞘细胞组的caspsase-3阳性细胞数少于对照组和DMEM/F12组。超微结构观察可见,嗅鞘细胞组的神经纤维和细胞形态均优于对照组和DMEM/F12组。结果表明嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤修复有明显的促进作用,并可恢复损伤神经的部分功能,对受损神经纤维和神经元有保护作用。     

人羊膜上皮细胞在体内外不同脑损伤环境中向神经元样细胞转化

移植细胞的存活及分化与局部的微环境关系密切。实验发现,RPMI 1640培养基与创伤性脑组织提取液构成的体外模拟创伤性脑损伤微环境下培养的人羊膜上皮细胞部分呈现锥形、三角形或不规则形,伸出类似神经元样的突起, 部分细胞突起相互交织相连,表现出神经元样形态,部分形态改变明显的人羊膜上皮细胞呈微管相关蛋白2阳性表达。人羊膜上皮细胞移植于创伤性脑损伤大鼠脑挫伤灶中心和边缘处后,可存活至少4周,且也呈微管相关蛋白2阳性表达,并使创伤性脑损伤大鼠后肢运动功能明显改善。     

Recovery of locomotor function in adult paraplegic frogs by inductive lability in the distal isolated spinal cord neural networks

We postulated (Krishnan, 1991) that in a spinal cord transected adult paraplegic mammal locomotor functions can be revived if polyneuronal innervation is reinduced in the paralyzed hind limb muscles. This procedure destabilizes the neural networks and induces new synaptic growth in the distal isolated cord. In this pilot project we tested the hypothesis in cord-transected adult paraplegic frogs. Polyneuronal innervation was reinduced by crushing the sciatic nerve in the right upper thigh. Left limb sciatic nerve was not crushed and served as control. Another group of adult frogs had only cord transection without nerve crush. Five to seven weeks postnerve crush, full powered flexion-extension movements in the hip and knee joints appeared in the right hind limb and were used for swimming and surface progression. Movements gradually declined over the next weeks, which in some animals was seen preserved even beyond 120 days. Paraplegic frogs without nerve crush did not show any recovery of locomotor function. Interestingly, the uncrushed contralateral limb also produced transient, weak locomotor-like movements. This lasted for 4 to 6 days and waned out completely thereafter. These results validate our hypothesis on methods to generate new synaptic sprouts and reconnections to redrive the locomotor system. We had recommended earlier that destabilization procedure should be included as an essential component in treatment strategies for spinal cord injury repair for effective relinking of the severed cord ends.