去甲斑蝥素和阿霉素对人胆管癌细胞QBC939的联合作用

目的研究去甲斑蝥素与阿霉素对人胆管癌细胞OBC939体外作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞OBC939为实验模型，分别或联合应用不同浓度的去甲斑蝥素与阿霉素作用于癌细胞，光学显微镜下观察药物处理后癌细胞的细胞形态学变化，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析药物对癌细胞生长的抑制作用，流式细胞技术测定药物作用后癌细胞的细胞周期分布和凋亡率。结果去甲斑蝥素和阿霉素单独作用于癌细胞时都有增殖抑制作用，且呈剂量依赖性（P〈0．05）。两药合用对癌细胞的细胞毒作用优于两者的单纯相加。去甲斑蝥素和阿霉素两药联合使用可以使癌细胞阻滞于G0／C1期（P〈0．05），凋亡率明显升高（P〈0．05）。结论去甲斑蝥素、阿霉素无论单用或合用对癌细胞的增殖均有抑制作用，均能够明显改变癌细胞的细胞周期分布并诱导癌细胞出现凋亡，但二者合用有协同作用。     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

去甲斑蝥素对人黑色素瘤A375细胞周期、活性氧自由基及细胞凋亡的影响

［摘要］ 目的探讨去甲斑蝥素（Norcantharidin,NCTD）对人黑色素瘤A375细胞周期、ROS自由基及细胞凋亡的影响及其机制。 方法培养人A375黑素瘤细胞,分别采用10,20,40 μmol/L NCTD预处理,培养48 h后,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞周期的影响,采用免疫印迹法检测NCTD对人A375黑素瘤细胞蛋白Cyclin D1和P21表达的影响,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞ROS及凋亡水平的影响。 结果10,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于对照组,S期和G2期细胞比例低于对照组,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于10 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于20 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。40 μmol/L NCTD组处理人A375黑色素瘤细胞48 h后,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A和CDK2低于对照组,P21蛋白高于对照组（P＜0.05）。10,20,40 μmo/L NCTD组细胞内ROS水平高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。10,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。NAC组细胞凋亡率低于对照组,NCTD组和NAC+NCTD组细胞凋亡率高于对照组,NAC+NCTD组细胞凋亡率低于NCTD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论NCTD通过阻滞细胞G1周期、减少S期抑制人A375黑色素瘤细胞的增殖,通过诱导ROS水平升高诱导细胞凋亡。     

去甲斑蝥素体外抑制NCI-H446细胞迁移、增殖及促进凋亡

目的 研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体外抑制人小细胞肺癌H446细胞迁移、增殖和诱导其凋亡作用.方法 以不同浓度NCTD处理H446细胞24h后,采用细胞划痕试验检测NCTD对H446细胞侧向迁移能力的影响;采用细胞计数检测对体外培养的H446细胞的抑制增殖作用;选用不同浓度的NCTD作用H446细胞48 h后,以Hoechst33258染色观察H446细胞形态的变化,研究NCTD对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的诱导作用.结果 经较高浓度的NCTD干预24h后,H446细胞的侧向迁移速度明显减慢(P＜0.01).细胞计数结果显示NCTD作用于H446细胞后其细胞群体倍增时间延长.NCTD作用H446细胞48 h后,部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变,细胞凋亡率增加(P＜0.01).结论 NCTD能明显影响人小细胞肺癌H446细胞迁移、抑制其增殖并诱导其发生凋亡.     

切割bcl-2 mRNA核酶诱导人胆管癌细胞凋亡的形态学改变

研究切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶诱导胆管财亡的形态学改变。方法将合成的切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶民真核细胞表达载体重组,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞,通过光镜及扫描和透射电镜手段,观察转染后的胆管癌细胞,通过光镜及扫描和透射电镜手段,观察传染后的胆管癌细胞凋亡的形态学改变。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因和bax蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因、bax蛋白表达的影响。方法分别以0μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L浓度的As2O3作用于胃癌SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测各组吸光度值、细胞生长抑制率,采用流式细胞仪(FCM)检测bcl-2基因和bax蛋白的表达情况。结果随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,MTT吸光度值逐渐降低,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与0μmol/L组比较,不同作用时间MTT吸光度值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。1μmol/L的As2O3对细胞增殖抑制作用较小,随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,细胞增殖抑制率相应增加,2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与1μmol/L组比较,不同作用时间细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的As2O3作用于SGC-7901细胞后,bcl-2基因呈低表达,bax蛋白呈高表达,bcl-2/bax比值降低且呈剂量依赖性,不同浓度As2O3组与对照组bcl-2基因、bax蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导胃癌细胞的凋亡有关。     

Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C诱导凋亡

[目的]利用基因开关调节Xaf1-Saos诱导细胞株,检测Xaf1对肿瘤坏死因子受体(TNFR)(外源性)以及线粒体(内源性)凋亡信号通路的影响,研究Xaf1诱导肿瘤细胞凋亡的机制.[方法]流式细胞术DNA含量检测Xaf1诱导的细胞凋亡和Bcl2对Xaf1-Saos细胞凋亡的影响,Gel Mobility Shift Assay检测NFkB的DNA结合活性,激酶分析法检测SAPK/JNK激酶的活性,细胞色素C流式细胞术检测Xaf1对细胞色素C释放的调节.[结果]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值49%,Xaf1的表达抑制TNFα介导的NFkB的DNA结合活性(50%)和JNK/SAPK的活性,Xaf1可释放细胞色素C,而且不被胱冬肽酶抑制剂所抑制(Z-VAD).[结论]Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C而诱导肿瘤细胞凋亡.     

去甲斑蝥素通过诱导自噬体聚集促使乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

探究去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和MCL-1表达水平的影响;采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I,Parkin和PINK1表达水平的影响;采用流式细胞术检测NCTD对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位及线粒体活性氧（reactive oxygen species,ROS）变化情况的影响;采用共聚焦显微镜检测NCTD对表达mCherry-EGFP-LC3的MDA-MB-231细胞自噬流的影响;采用流式细胞术检测NCTD联合使用氯喹（chloroquine,CQ）或3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）后,对MDA-MB-231细胞凋亡情况的影响。实验结果显示,NCTD可显著上调Bax/Bcl-2、cleaved...     

洛铂对SKOV3细胞凋亡及bax、bcl-2基因表达的影响

目的研究洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用及探讨其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果体外培养卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时,随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

半胱天冬酶与肿瘤的研究进展

1半胱天冬酶 半胱天冬酶（Caspase）是一个半胱氨酸蛋白酶家族,这个家族的所有成员在它们的活性位点均有半胱氨酸,并且切割靶蛋白也均在特异性的天门冬氨酸位点后,因此称半胱天冬酶^[1]。它们在细胞凋亡的过程中起着关键性作用。目前,该家族有14个成员被克隆出^[2],在氨基酸序列、结构及酶的特性上均相似。     

COX-2与MMP-9肝外胆管癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨肝外胆管癌组织中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达与肝外胆管癌临床病理特征之间的关系及其预后意义。方法采用免疫组织化学法检测69例肝外胆管癌,12例非肿瘤胆管黏膜上皮组织中COX-2与MMP-9的表达情况,并分析其与临床病理参数以及预后的关系。结果69例胆管癌组织,12例非肿瘤胆管黏膜上皮组织中COX-2表达阳性率分别为79.7%(55/69)、33%(4/12);69例胆管癌组织,12例非肿瘤胆管黏膜上皮组织中MMP-9表达阳性率分别为85.5%(59/69)、41.7%(5/12),有统计学意义。COX-2、MMP-9的表达与TNM分期有密切关系。单因素分析表明MMP-9阳性表达与肝外胆管癌预后负相关。结论COX-2、MMP-9表达与肝外胆管癌的临床病理特征密切相关,有助于预后的判断。     

维生素E琥珀酸酯对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞的生长抑制作用.方法:以5,10,20,40 mg/L浓度的VES作用于人鼻咽癌CNE2细胞,使用光镜、透射电镜、MTT法、流式细胞仪观察和检测作用24,48,72 h后细胞形态、增殖、凋亡及细胞周期分布情况.结果:...     

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的影响

目的：研究羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长抑制和凋亡作用的影响.方法：采用CCK8检测不同浓度羟喜树碱对SW-13细胞增殖的影响;流式细胞仪测定药物作用前后的细胞凋亡情况.结果：不同浓度的羟喜树碱分别作用24,48,72 h后,SW-13细胞的生长增殖均受到明显抑制（P＜0.01）,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术显示SW-13细胞凋亡率随羟喜树碱浓度的增加而升高.结论：羟喜树碱可以显著抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长,促进其凋亡.     

促凋亡基因bax在胆管癌组织中的表达及临床意义

（１）目的 探讨促凋亡基因ｂａｘ在胆管癌组织中的表达。（２）方法 应用抗ｂａｘ多克隆抗体分别对２０例胆管癌和７例先天性胆总管囊肿组织的石蜡切片进行免疫组化染色。（３）结果 ２０例胆管癌组织有１１例ｂａｘ蛋白表达阳性（５５．００％），而７例先天性胆总管囊肿仅１例表达阳性（１４．２９％），两组间差异有显著性（Ｘ＾２＝６．７３，Ｐ〈０．０１），随肿瘤分化程度的增高，阳性表达增强，但差异无显著性（Ｘ＾２＝     

胃癌和相应癌旁组织中细胞凋亡与bcl-2的表达

①目的　探讨细胞凋亡和bcl 2蛋白表达在胃癌发生发展中的作用。②方法　选取 5 8例胃癌和相应癌旁组织作为研究对象 ,采用脱氧核苷酸移换酶 (TdT)介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)及免疫组化技术检测其细胞凋亡指数 (AI)和bcl 2蛋白的表达。③结果　胃癌和相应癌旁组织中AI及bcl 2蛋白表达差异有显著性 (t=13.4 0 0 ,P <0 .0 1;χ2 =4 .32 1,P <0 .0 5 )。bcl 2表达阳性组AI明显低于bcl 2表达阴性组 ,差异有显著性 (t=2 .381,P <0 .0 5 )。④结论　bcl 2蛋白异常表达可抑制细胞凋亡 ,与胃癌的发生有明显相关性     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响

目的研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响.方法以1和5μmol/L 9-cis-RA处理肿瘤细胞株,分别于0、12、24、36、48、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化,应用流式细胞术分析细胞周期分布、Bcl-2表达和凋亡细胞数.结果9-cis-RA可抑制肺鳞癌细胞生长;用药后细胞分化征明显,可见凋亡细胞.流式细胞计数显示,用药组细胞G0/G1百分率明显升高,S期细胞百分率下降,细胞凋亡率增加,Bcl-2的表达下降.结论9-cis-RA能抑制人肺鳞癌L78细胞、A2细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡.     

姜黄素对人口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制及诱导凋亡作用。方法分别应用6．25、12．50、25．00、50．00μmol／L的姜黄素作用Tca8113及Tb细胞24h,采用MTT法检测姜黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制作用,形态学观察及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果6．25～50．00μmol／L姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞Tca8113和Tb细胞的增殖（F＝793．94、391．08,q＝6．00～62．68,P〈0．05）。流式细胞仪检测显示口腔鳞癌细胞凋亡率随姜黄素浓度升高而增加。倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。结论姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡。     

p185、p53、bcl-2和nm23H1蛋白在胆管癌组织的表达及其意义

目的 探讨p185、p53、bcl-2和nm23H1蛋白在胆管癌组织表达的表达及临床意义.方法 应用免疫组化方法检测46例胆管癌和10例正常胆管组织中p185、p53、bcl-2及nm23H1蛋白表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 胆管癌中p185及p53阳性表达率均显著高于正常胆管组织(χ2=8.50、5.30,P<0.05),而bcl-2及nm23H1阳性表达率显著低于正常胆管组织(χ2=5.91、4.08,P<0.05).p185、p53高表达和bcl-2、nm23H1低表达与胆管癌的分化程度、TNM分期和转移相关(χ2=4.00～6.88,P<0.05).结论 p185、p53、bcl-2和nm23H1蛋白可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标.     

去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266生长调控的影响及其机制的研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对多发性骨髓瘤细胞株的增殖及其凋亡的影响及其可能的机制.方法 四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测5、20、40、80、160μmol/L的NCTD对U266细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同浓度NCTD对细胞周期及细胞凋亡的影响,并应用半定量反转录聚合酶链反应检测survivin基因表达的变化.结果 在20～160μmol/L的浓度内,NCTD对U266细胞的增殖有抑制,抑制与NCTD的浓度呈剂量依赖关系(P<0.05).不同浓度的NCTD能诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,使细胞明显阻滞于G2 /M 期;在NCTD作用下,U266 细胞survivin 及其机制可能与诱导凋亡、细胞周期阻滞有关.结论 NCTD能抑制U266细胞的增殖,并诱导其凋亡的机制可能与抑制survivin的表达及G2 /M 期阻滞有关.     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的 了解辣椒素对人结肠癌 SW480 细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT检测法,观察终浓度100～400 μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480 细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400 μmol/L辣椒素作用人结肠癌 SW480 细胞株后其细胞周期变化和凋亡率.结果 辣椒素能抑制结肠癌 SW480 细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性.在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期.辣椒素作用24、48 h,SW480 细胞凋亡率升高(F=8.73、8.10,q=4.86～7.30,P<0.01).结论 辣椒素抑制 SW480 细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1,期.