全反式维甲酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用途径.方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7培养基中加入一定浓度ATRA和PKC-δ的专一抑制剂rottlerin(RO)并分组,通过SubG1assay by FACS、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA ladder来观察ATRA对MCF-7的影响.结果:在浓度为5μM的ATRA作用下,MCF-7的凋亡率显著高于其它各组(P＜0.01),并可观察到明显梯状DNA.结论:ATRA能够诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但受PKC-δ的专一抑制剂RO的抑制.     

低频超声联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究低频超声和紫杉醇联合应用对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响以及其可能机制。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,随机分为4组:对照组、低频超声组、紫杉醇组和低频超声+紫杉醇组。低2频超声组为超声840k Hz,0.75W/cm×3min辐照;紫杉醇组为药物浓度为10nmol/L培养24h;联合组叠加处理因素。应用CCK-8检测细胞增殖,应用流式细胞仪和凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡,应用流式细胞仪和ROS试剂盒检测各组细胞ROS水平,应用Western Blot实验检测凋亡相关蛋白表达。结果单独应用低频超声或紫杉醇均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡,升高细胞内活性氧水平,增加凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、cleaved caspase-2、Bax)的表达水平,降低Bcl-2的表达水平。与单独应用组相比,低频超声和紫杉醇联合,显著增强了上述作用。结论低频超声和紫杉醇联合作用,极大增强了抑制MCF-7细胞增殖,诱发其凋亡的作用,其作用可能和线粒体凋亡途径相关。     

蓝光照射姜黄素对乳腺癌MCF-7细胞的光动力杀伤效应研究

目的:探讨蓝光照射姜黄素(Curcumin,CUR)介导的光动力疗法(CUR-PDT)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及形态学的影响。方法:以CUR作为光敏剂、455 nm的蓝色发光二极管(LED)为光源的光动力疗法作用于体外培养的乳腺癌MCF-7细胞。利用MTT法分别检测不同姜黄素孵育时间(2h,3h)、姜黄素浓度(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L)及光剂量(1.2 J/cm2,2.4 J/cm2,4.8 J/cm2)对MCF-7细胞生长的抑制效应,最终选定在40μmol/L的浓度下,分别用2.4 J/cm2、4.8 J/cm2的剂量照射姜黄素,检测能量密度改变后光敏化姜黄素对细胞的杀伤作用,Hoechst 33342荧光染色观察细胞光敏化姜黄素对MCF-7细胞形态的改变及促凋亡效应。结果:细胞抑制率随光敏剂孵育时间延长而增大,呈时间依赖效应,光敏化姜黄素对细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导凋亡,且呈浓度-光剂量依赖效应;Hoechst 33342荧光染色显示,与对照组相比,单独姜黄素组及照光组细胞明显减少,随剂量增加现象越明显,细胞呈典型凋亡形态改变,核染色质凝聚、核固缩、核碎裂,出现凋亡小体。结论:蓝光对姜黄素抑制MCF-7细胞生长及诱导凋亡具有增敏作用,姜黄素孵育时间、姜黄素浓度、光剂量均是影响CUR-PDT的重要因素。     

WNT5B过表达对人乳腺癌MCF-7细胞活力及凋亡的影响

目的:检测WNT5B在人正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞株中的表达,及过表达WNT5B后对人乳腺癌MCF-7细胞活力及凋亡的影响,探讨WNT5B在乳腺癌发生发展中的作用。方法:采用RT-PCR法检测正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中WNT5B的mRNA表达水平,将WNT5B的表达载体pc DNA3.1/WNT5B和空白对照载体pc DNA3.1分别瞬时转染人乳腺癌MCF-7细胞,通过real-time PCR和Western blotting法分别在mRNA和蛋白水平验证WNT5B的表达效率;并通过CCK-8的方法检测WNT5B过表达对人乳腺癌MCF-7细胞活力的影响,通过流式细胞术分别检测过表达WNT5B对MCF-7细胞周期分布及凋亡比例的影响。结果:与正常乳腺上皮细胞相比,WNT5B在乳腺癌细胞中低表达;在乳腺癌细胞MCF-7中转染WNT5B表达质粒后,WNT5B表达上调,差异有统计学显著性(P0.05);与对照组相比,过表达WNT5B后,MCF7细胞的活力明显降低,处于S期细胞的量明显增加,G1和G2/M期细胞明显减少,且细胞凋亡比例明显增加,差异均有统计学显著性(P0.05)。结论:WNT5B在乳腺癌细胞中低表达,过表达WNT5B可使人乳腺癌细胞MCF-7阻滞在S期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的影响

目的：研究蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响，为天然药物蛴螬的开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株的抗增殖作用及细胞毒活性；通过倒置显微镜、HE染色、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）荧光染色方法观察肿瘤细胞的形态学改变；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；应用免疫细胞化学技术（S-P法）检测用药前后凋亡通路中Bcl-2、Fas、caspase-9、caspase-3的表达改变，探讨蛴螬提取物对凋亡通路的影响。结果:(1)用MTT法检测结果表明，蛴螬提取物在体外对MCF-7人乳腺癌细胞株有明显的抑制增殖作用，实验组与对照组相比其生长抑制率有显著差异（P<0.01），而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性；(2)倒置显微镜观察表明，实验组可见胞核固缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化；(3)HE染色表明实验组胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色、核染色质浓缩、呈碎块状，有凋亡小体形成；(4)经AO／EB荧光染色观察结果表明，实验组出现凋亡细胞；(5)流式细胞仪结果表明实验组凋亡率明显增加，呈时间依赖性；(6)免疫细胞化学染色结果表明，实验组 Bcl-2表达下调，Fas、caspase-3、caspase-9表达均上调，与对照组比差异显著（P<0.01）。结论:①蛴螬提取物在体外显著抑制MCF-7人乳腺癌细胞株增殖；②蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响机制可能是通过下调Bcl-2，上调Fas、caspase-3 、caspase-9的蛋白表达而起作用，是经由细胞凋亡的线粒体途径和死亡受体途径来完成凋亡的启动和执行。     

IGFBP7对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的: 探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法: 将质粒pCMV6-IGFBP7转染MCF-7细胞,构建稳定表达IGFBP7的MCF-7细胞系;采用Western blotting检测IGFBP7在MCF-7细胞稳定转染子的表达;采用软琼脂培养克隆形成实验检测IGFBP7对MCF-7细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测IGFBP7对MCF-7细胞周期的影响;采用Western blotting检测IGFBP7对MCF-7细胞细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、cyclin E、CDK2、p21^CIP1/WAF1、p27^KIP1、p53、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和p-Rb蛋白含量的影响。结果: (1)只有稳定转染质粒pCMV6-IGFBP7的MCF-7细胞表达IGFBP7。(2)IGFBP7能够显著降低MCF-7细胞的克隆形成率(P<0.01),阻止细胞从G₁期进入S 期,使其停滞于G₁期(P<0.01)。(3)IGFBP7能够显著抑制ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。(4)IGFBP7能够下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达(P<0.01),上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达(P<0.01),抑制Rb的磷酸化(P<0.01)。(5)MEK1/2阻断剂PD98059可部分模拟IGFBP7的肿瘤抑制效应。结论: (1) IGFBP7可通过下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达,上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达,以及抑制Rb磷酸化发挥抗肿瘤作用;(2) IGFBP7对cyclin D1和p27^KIP1的调节可能与其抑制ERK1/2信号通路有关。     

青蒿琥酯对乳腺癌MCF-7细胞抗失巢凋亡的影响

目的：探讨青蒿琥酯对乳腺癌细胞抗失巢凋亡的影响。 方法： 采用不同浓度的青蒿琥酯处理乳腺癌MCF-7细胞，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)法检测乳腺癌细胞抗失巢凋亡，采用软琼脂集落形成试验检测细胞的生长增殖。 结果： 青蒿琥酯能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞锚着不依赖性增殖，且呈浓度依赖性。乳腺癌细胞经青蒿琥酯处理后，可促进失巢凋亡，且与时间和浓度相关。 结论： 青蒿琥酯可有效地抑制乳腺癌细胞锚着不依赖性增殖，其机制可能与促进失巢凋亡有关。     

小干扰RNA抑制RUNX2对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨小干扰RNA抑制人RUNT相关转录因子2(RUNX2)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法应用化学合成小干扰RNA技术沉默人乳腺癌MCF-7细胞中RUNX2基因的表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot实验验证基因沉默效率。应用MTT方法检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。结果设计的siRNA能够明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞RUNX2的表达。RUNX2基因沉默后,人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力降低,细胞凋亡率明显提高,侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论RUNX2基因是治疗人乳腺癌MCF-7细胞的潜在靶点。     

IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。     

DMSO诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究二甲基亚砜(DMSO)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度DMSO处理体外培养的MCF-7细胞,应用倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33258/PI荧光染色,用荧光显微镜分析凋亡细胞比率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。结果在倒置光学显微镜下观察1%DMSO处理细胞12h后细胞形态发生变化。约有50%以上的细胞变圆,细胞内有多泡小体形成。随DMSO浓度增加和作用时间的延长,细胞存活率明显下降,经MTT检测其IC_(50)值为1%;荧光显微镜下可见60%以上细胞核染色质凝集,核碎裂等凋亡细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)。结论适当浓度的DMSO能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

PSD-007对宫颈癌Hela细胞光动力杀伤效应的剂量学研究

目的 探讨癌光啉（PSD-007）对人宫颈癌Hela细胞体外光动力杀伤效应及主要影响因素.方法 不同质量浓度（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/ml）的PSD-007与Hela细胞共同孵育2h后,予以不同能量（0、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 J/cm2）635 nm波长的激光照射,以相同剂量光照和光敏剂剂量的人乳腺癌细胞系MCF-7光动力杀伤作用做对比,通过噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞的光密度（OD）值及存活率;质量浓度为12.5 μg/ml的PSD-007与细胞共同孵育2h后,以不同能量（1.2、2.4、4.8 J/cm2）的激光照射,流式细胞术（FCM）分析细胞周期及凋亡率.结果 与空白对照组相比,单纯光敏剂PSD-007在＞25 μg/ml质量浓度下影响Hela细胞存活率,光动力疗法（PDT）对Hela细胞有更明显的杀伤效应,并且随着光敏剂质量浓度增加和光照能量密度增大,对细胞的杀伤效果逐渐增强.当光敏剂质量浓度＞12.5 μg/ml,光照能量＞4.8 J/cm2时,各组间细胞存活率的差异无统计学意义（P＞0.05）.FCM分析发现,PDT于G0/G1期阻断Hela细胞生长,凋亡诱导作用呈时间依赖性.结论 光敏剂PSD-007自身对体外人宫颈癌细胞系Hela细胞具有生长抑制作用,PSD-007介导的光动力杀伤效应更为显著,较人乳腺癌-7（MCF-7）细胞的PSD-007光动力作用有更低的使用剂量和光照剂量.     

淫羊藿颗粒剂联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用

目的探讨补肾中药淫羊藿或与三苯氧胺(TAM)合用是否有促人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。方法设立空白、E2及TAM对照组,观察淫羊藿颗粒剂单用及联合TAM在不同剂量和作用时间下对MCF-7细胞的生长的影响。应用MTT法观察细胞增殖情况。结果淫羊藿对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响因浓度的不同而不同:低浓度的淫羊藿颗粒剂对乳腺癌细胞MCF-7的促增殖作用不明显(P>0.05)。淫羊藿与TAM联合作用于MCF-7细胞,无明显促细胞增殖的作用(P>0.05),而中等剂量的淫羊藿颗粒有弱雌激素样作用(P<0.05),但可被TAM拮抗。结论淫羊藿联合TAM作用于乳腺癌MCF-7细胞,无促癌细胞生长的作用。但单独应用淫羊藿治疗乳腺癌患者,其使用剂量及持续时间尚需进一步探索。     

Propolis from Turkey induces apoptosis through activating caspases in human breast carcinoma cell lines

Propolis is a sticky substance that is collected from plants by honeybees that has anti-mutagenic and anti-carcinogenic properties with biological and therapeutic effects. The target of this study was to investigate the anti-apoptotic effect of propolis extracts (PE) on the caspase pathway in the human breast cell line MCF-7 in culture. Seven different propolis extracts, numbered PE 1–7, produced in their natural ecological environment, were collected from the Hacettepe University Beytepe Campus area in Ankara, Turkey. Individual extracts at 0.5, 0.25, 0.125 and 0.063 mg/ml were incubated with MCF-7 cells during 2 days culture. Cell growth and cytotoxicity were measured colorimetrically by MTT assay. Apoptotic cell death was determined by the TUNEL method (terminal deoxynucleotidyltransferase-biotin nick end-labelling) and caspase activity was investigated by immunocytochemistry using antibodies directed against caspase 6, caspase 8 and caspase 9. The results showed that the PE 5 and 6 extracts at 0.125 mg/ml dilution induced apoptosis in association with increased number of TUNEL positive cells. MTT results showed that cultures exposed to the same extracts and at the same dilution experienced better cell growth compared to those cultures exposed to the other extracts. Immunpositivity for all caspases was detected after treatment with all the extracts and at all dilutions, with stronger immunoreactivity for caspase 6 than caspases 8 and 9. Caspase 6 labelling was especially strong in PE 5 and PE 6. We conclude that propolis may have anti-tumour effects by increasing apoptosis through the caspase pathway. Such propolis extracts may be important economically and allow development of a relatively inexpensive cancer treatment.     

NGF对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7增殖和存活的影响

目的:研究神经生长因子(NGF)对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖与存活的影响。方法:运用免疫荧光方法检测NGF及其受体酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)的表达;运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测细胞的NGF自分泌情况;运用蛋白质印迹(Western blotting)方法检测TrkA蛋白的表达情况;运用NGF阻断剂Ro 08-2750对细胞进行NGF剥夺,通过单核细胞直接细胞毒性测定法(MTT)检测细胞增殖的情况;运用流式细胞仪检测细胞凋亡情况以及细胞周期分布的变化。结果:2株乳腺癌细胞系均表达NGF及其受体TrkA,NGF阻断剂Ro 08-2750能够明显抑制2种细胞的增殖,并具有剂量依赖性;流式细胞仪显示Ro 08-2750处理的MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的S期细胞比例明显增加,G2/M期细胞比例明显降低,MDA-MB-231细胞出现凋亡峰。结论:NGF剥夺明显抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并引起MDA-MB-231细胞凋亡。     

重组质粒pEGFP-ING4的构建及其对MCF-7细胞凋亡的影响

目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。     

大黄素阻抑人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期进程

 目的：探讨大黄素抗人乳腺癌MCF-7细胞增殖及其相关机制。方法：采用MTT法检测大黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析周期分布和凋亡情况;原子力显微镜(AFM)观察细胞膜表面超微结构的变化。结果：大黄素呈剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖;大黄素能使MCF-7细胞阻滞在G0/G1期;Annexin V/PI双染法结果表明,大黄素对MCF-7细胞没有明显的促凋亡作用。AFM观察细胞膜超微结构,结果显示对照组细胞核区饱满,膜表面平坦光滑;大黄素作用48 h可致细胞核区坍塌萎缩,细胞表面颗粒密集,膜表面的平均粗糙度(Ra) 和均方粗糙度(Rq) 与对照组相比均有显著增加(P<005)。结论: 大黄素通过阻断MCF-7细胞的细胞周期进程及影响细胞膜超微结构而发挥抗肿瘤作用。