三维血管瘤血管生成体外模型的建立

目的 建屯三维血管瘤血管生成体外培养模型.方法 将10例新鲜的增殖期血管瘤组织块置于纤维蛋白凝胶中以双层夹心法建屯三维血管瘤血管生成体外培养模型.于血管新生后3 d加入平阳霉素(PYM.1×102mg/L)做干预实验.镜下观察新生血管情况,SP免疫组织化学法检测第Ⅷ因子相关抗原(FⅧR-Ag)、透射电镜观察内皮细胞超微结构鉴定新生血管.结果 血管瘤组织培养4～7 d后芽生出细小m管,至第8～10大长成枝丫状血管样结构,第11～14天之后血管样结构生长渐缓停滞萎缩.PYM作用1一2 d后血管样结构很快萎缩.组织周边新生树枝状结构经鉴定为血管内皮细胞.结论 该模型部分程度上可代表血管生成、萎缩的过程,但细小血管样结构的芽生时间不等,萎缩较快,与体内血管瘤血管仍有一定区别.     

雌激素促进小儿血管瘤血管生成的体外实验研究

目的论证雌激素促进小儿血管瘤血管生成的作用。方法应用已建立的三维血管瘤血管生成体外培养模型,以雌激素及雌激素受体竞争性抑制剂三苯氧胺分组干预小儿血管瘤体外血管生成过程。实验分为四组:①组1对照组;②组2雌激素组(50pg/ml);③组3三苯氧胺组(10-6mol/L);④组4雌激素(50pg/ml) 三苯氧胺组(10-6mol/L)。比较各时间点各组间新生血管区面积的差异。结果三维血管生成模型中对照组培养2～3d后组织块芽生出细小血管,至第8～9天长成树枝状血管。培养后第3、6、9天组织块新生血管区面积组2均大组1,组4及组3均小于组2及组1(P<0.05)。结论雌激素能促进小儿血管瘤血管生成,从而促进血管瘤增殖,该过程能被三苯氧胺所阻滞。     

Alphastatin体外抑制血管内皮细胞血管生成的实验研究

血管新生（angiogenesis）是肿瘤生长和转移过程中一个非常重要的阶段.研究表明,当肿瘤大小超过1～2 mm^3时,其继续生长和转移则依赖于新血管的形成.抗肿瘤血管生成制剂可以阻断瘤体血供,有效地抑制肿瘤生长、转移和复发.目前,多种血管生成抑制剂相继被发现,研究证实具有良好的效果.2004年Staton等首次研究发现人纤维蛋白原α链末端的24个氨基酸片段具有抑制体外血管生成和鼠源性肿瘤血管生成的作用,他们将其命名为alphastatin.本研究中,我们在体外模拟血管生成,探讨了alphastatin对人血管内皮细胞的作用,为进一步抗人源性肿瘤实验提供了依据.     

ECV304细胞用于三维血管新生的研究

目的:采用ECV304细胞(人脐静脉内皮细胞株)构建体外血管新生的三维模型,为ECV304细胞应用于体外血管新生的研究提供依据.方法:制作鼠尾胶原三维凝胶,在凝胶表面种植ECV304细胞,培养至接近汇合状态,换用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液继续培养3～12d,用倒置相差显微镜观察内皮细胞株向凝胶内迁移、生长状况.结果:bFGF组ECV304细胞迁移到凝胶内不同层次,形成细胞条索并吻合成网;垂直切面上可见ECV304细胞从凝胶表面的单细胞层向凝胶内发芽生长,形成树枝状毛细血管样结构.结论:ECV304细胞在三维胶原凝胶基质培养模型中,在适当的因子诱导下,能够表现出血管新生中的增殖、迁移、发芽等步骤,可以作为内皮工具来研究体外血管新生.     

促血管生成素-1、2及Tie2在血管瘤及血管畸形中的表达及意义

目的探讨促血管生成素-1（Ang-1）、促血管生成素-2（Ang-2）及其受体Tie2在血管瘤和血管畸形组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学S—P方法，测定血管瘤、血管畸形的血管内皮细胞中Ang-1、Ang-2及Tie2的表达。结果Ang-2、Tie2的表达在增生期血管瘤最强；在退化期血管瘤中的表达次之；而在血管畸形中表达较弱，与小儿正常皮肤表达无显著性差异。而Ang-1的表达，各组差异无统计学意义。结论Ang-1、Ang-2及其受体Tie2在血管瘤的血管生成以及血管瘤的自然消退过程中可能起着重要的作用；Ang-1、Ang-2及其受体Tie2的表达可能与血管畸形的发病无明显关系。     

促血管生成素家族及其受体与血管瘤血管生成

促血管生成素家族（Angiopoietin family）及其受体（Tiel、Tie2）是近年来新发现的血管生成因子，参与各种生理性及病理性血管生成。现已发现的促血管生成素家族成员包括Ang-1、Ang-2、Ang-3及Ang-4。促血管生成素家族成员可以趋化内皮细胞，诱导血管出芽，并增强血管内皮细胞对生长因子（如VEGF等）的敏感性作用；并在VEGF等生长因子存在的条件下，导致内皮细胞大量增殖堆积等一系列过程，在血管瘤异常血管生成机制中扮演重要的角色。本文仅就Ang家族成员及其受体与血管瘤异常血管生成的关系做一综述。     

TNP-470对MHCC97-H体外血管生成拟态的抑制作用

目的研究血管生成抑制剂TNP-470对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H体外形成血管生成拟态的影响。方法TNP-470作用于MHCC97-H细胞,应用MTT试验、体外侵袭实验,检测MHCC97-H细胞增殖活性和侵袭力的变化。建立MHCC97-H细胞人工基底膜基质凝胶体外三维细胞培养模型,观察MHCC97-H细胞能否形成血管生成拟态以及TNP-470对其影响,应用扫描电镜、透射电镜观察细胞结构改变。结果TNP-470对MHCC97-H细胞增殖无显著抑制作用,可抑制其体外侵袭能力,明显抑制MHCC97-H细胞形成血管生成拟态,减少细胞表面的微绒毛和细胞间连接。结论人肝癌高转移细胞株MHCC97-H可形成血管生成拟态,TNP-470能抑制人肝癌细胞株MHCC97-H体外血管生成拟态形成。     

Ang1、Ang2及其受体Tie2在血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨血管瘤的血管生成与促血管生成素家族（Ang/Tie2）之间的关系。方法通过免疫组化SP法、RT-PCR检测增生期血管瘤17例、消退期血管瘤13例和小儿正常皮肤10例的组织中促血管生成素1（Ang1）、促血管生成素2（Ang2）及其受体Tie2的表达情况。结果增生期血管瘤组织Ang2、Tie2表达高于消退期血管瘤（P〈0.01）;Ang2、Tie2在小儿正常皮肤表达较弱或阴性;Ang1在血管瘤和小儿正常皮肤表达均较弱或阴性,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论Ang/Tie2体系在血管瘤的增生和消退过程中可能起重要的作用。     

人促血管生成素2单链抗体对裸鼠人肝癌血管生成及肿瘤生长的作用

目的 观察促血管生成素2(Ang2)单链抗体(ScFv-Ang2)对人肝癌血管生成及肿瘤生长的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),各组分别添加血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF+ Ang2、VEGF+ Ang2+ ScFv-Ang2,通过HUVEC增殖测定、迁移实验、小管形成实验观察ScFv-Ang2在体外对HUVEC生物学行为的影响;建立荷人肝癌细胞株MHCC97的肝原位移植瘤模型裸小鼠24只,随机分为实验组和对照组,实验组瘤内注射ScFv-Ang2 (4×1011 pfu/ml),对照组予以生理盐水,测量肿瘤大小、肺转移灶数目、癌组织CD31蛋白表达及微血管密度(MVD)计数,观察ScFv-Ang2对肝细胞癌(HCC)血管生成及肿瘤生长的作用.结果 体外实验中观察到ScFv-Ang2可抑制VEGF和Ang2诱导的HUVEC增殖、迁移及小管形成;ScFv-Ang2瘤内注射组肿瘤体积、重量、肺转移灶数目、CD31表达水平以及MVD计数均显著低于对照组(P＜0.05).结论 ScFv-Ang2在体外实验中具有抑制HUVEC形成血管的作用,体内实验中对裸鼠人肝癌具有抑制血管生成和肿瘤生长的作用.     

p27在婴幼儿皮肤血管瘤不同时期的表达及意义

目的 探讨p27在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义.方法 采用免疫组织化学方法 (SABC法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中p27的表达水平,利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织p27表达的积分光密度和面积.结果 增生期血管瘤内皮细胞p27表达水平低于退化期,其差异有统计学意义(P<0.05),退化期血管瘤内皮细胞p27表达水平与正常皮肤组织相比,其差异有统计学意义(P<0.05).结论 p27可能通过抑制血管形成和血管内皮细胞增殖来抑制血管瘤的发展.     

Experimental study on the reconstruction of vascular links between a pedicle skin flap with preserved subcutaneous vascular network and its implanting bed]

A comparative study of skin flap with a preserved subcutaneous vascular network and conventional skin flap was undertaken in rats with determination of skin temperature, laser Doppler, ink perfusion, microangiography and transparent specimen technics. It was found that all the skin flaps with a preserved subcutaneous vascular network survived after transplantation. Three hours postoperation, the flap microcirculation was poorest (LDF, 28% of the preoperative value). Six hours postoperation, it began to augment, and microvessels containing ink could be seen under microscope at 24 hours, as compared to 3 days postoperation in the controls. On the fifth day, LDF returned to the preoperative level, and the diameter and density of reformed microvessels were similar to the vessels of the adjacent skin. This phenomenon only occurred on the 7th day in the controls. After division of the pedicle on the fifth day, all the flaps survived, while the controls showed partial necrosis. The results indicate that skin flaps with a preserved subcutaneous vascular network can survive on the blood flow of pedicle in the early stage, at 24 hours postoperation flap microvessels begin to reform, and on the fifth day flaps can survive on the reformed microcirculation in spite of the severance of the pedicle.     

扩髓治疗骨折不愈合中的血管分布研究

目的 研究扩髓治疗骨折不愈合过程中血管生成和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的时间和空间特点以及相互联系.探讨扩髓并更换粗直径髓内钉治疗骨折不愈合的生物学机理,为临床运用扩髓治疗长骨骨折延迟愈合及不愈合提供理论依据. 方法 3个月龄雄性SD大鼠200只.对大鼠一侧股骨干骨折用不稳定固定方法制备肥大性骨折不愈合模型,随机选取40只作为模型鉴定,剩下160只随机分为试验组扩髓治疗和对照组不扩髓治疗,每组80只进行随机配对研究.术后第1、3、5、7、14、21、28、42天取材.用血管性血友病因子(VWF)标记血管,免疫组化方法检测骨折处VWF和VEGF的表达,来研究骨折处血管生成的时空特点以及与VEGF表达的关系. 结果 实验组的骨折愈合率显著高于对照组.时空分布上,在早期(1～7 d),实验组血管生成主要在骨外膜和软骨痂中.对照组主要在骨内膜;中期(7～14 d)实验组血管随着肉芽组织长入骨折间隙,对照组近骨内膜处血管增加,但是骨折间隙没有血管;后期(14～42 d)实验组骨内膜处出现血管,骨折间隙血管大量增加,对照组血管仍然局限在肉芽组织和骨内膜处,骨折间隙没有血管.实验组血管总数始终高于对照组.VEGF出现的时间和空间顺序与血管生成顺序一致,实验组VEGF表达普遍高于对照组. 结论 在骨折不愈合的治疗中,扩髓可使骨外膜和骨痂血供代偿性增加以及刺激VEGF表达增加,血管总数要高于不扩髓组.VEGF表达时间和分布与血管的生成关系密切,提示治疗骨折不愈合中,VEGF可能起着至关重要的作用,决定着血管形成的时间、部位与数量.     

雌激素对大鼠创面愈合过程中微血管形成的影响及其机制

目的 观察雌激素对大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中微小血管再形成的影响.方法 将40只雌性Wistar大鼠随机分成3组:单纯损伤组15只(A组),去卵巢组15只(B组)和假手术组10只(C组).8周后,在背部制成全层全损皮肤创伤愈合模型,分别于伤后1、3、7、14和21 d记录3组各个时间点伤腔容积,并在创缘取材.常规组织学观察皮肤愈合过程和微血管的数量,同时采用雌激素β受体(ER-β)进行免疫组织化学染色,观察微血管及周围细胞受体的染色.结果　比较各个时间点的伤腔容积,单纯损伤组和假手术组大鼠创面内肉芽组织形成量明显大于去卵巢组,组织学评分略高于去卵巢大鼠;而单纯损伤组和假手术组之间差异无统计学意义(P＞0.05).卵巢切除大鼠伤后各时间点,真皮内微小血管的数量较单纯损伤组减少,各组均于伤后7 d,随着成纤维细胞和毛细血管数目的 增加,肉芽组织生长达到高峰.同时,各损伤组创基内微小血管周围均出现较为幼稚的细胞,其表面可以表达ER-β,但卵巢切除组(159.91±12.65)稍弱于单纯损伤组(189.36±27.32),差异无统计学意义(P＞0.05).结论　大鼠去卵巢后创面愈合速度明显减慢与微血管形成有关,雌激素及其受体在该过程中有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of estrogen on the revascularization of full-thickness skin wounds healing in rats. Methods Forty 2-month-old female Wistar rats were divided into three groups: control group (group A, pure injury,n = 15), ovariectomized group (group B,n = 15) and sham operation group (group C,n = 10 ). After 8 weeks, full-thickness wounds model, 18 mm in diameter, were made on the back of the each animal. The volume of wound was measured at each time point. The specimens of wound edge were obtained at the 1st, 3rd, 7th, 14th and 21st day after injury. The process of wound healing and the number of microvessels in the granulation tissue were evaluated by Haematine-Eosin (HE) staining. The immunohistochemical staining was used to detect the expression of estrogen receptor β (ER-β) in microvascular endothelial cells and their surrounding cells. Results To compare the volume of wound at each time point, the granulation tissue formation in group A and group C was significantly higher than that in group B, but there was no significant difference between group A and group C. The number of capillary blood vessels in group B was significantly reduced as compared with that in group A. The expression of ER-β was positive on the cells surface in all groups. ER-β expression in group B was weaker than in group A ( 159. 91 ± 12. 65 v. s 189. 36 ±27. 32,P ＜0. 05). Conclusion The delay of wound healing in ovariectomized rats has a great relationship with angiogenesis. Estrogen and its receptor might play important roles in the process.     

成人骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的研究

目的研究成人骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）体外分化为血管内皮细胞的能力并探讨其诱导条件。方法分离成人骨髓单个核细胞，经贴壁法获取MSCs。所获细胞分4组进行诱导：组1、2以5×10^3／cm^2细胞密度接分别接种于含2％和15％胎牛血清的L—DMEM培养基；组3、4以5×10^4／cm^2细胞密度分别接种于上述两种血清浓度的培养基，各组细胞经血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）辅以牛脑提取物的诱导，对照组为正常传代培养的MSCs。在诱导的第14、21天分别测定表面分子CD34、VEGFR-2、CD31和Ⅶ因子相关抗原（factor Ⅷ—related antigen，又称von Willebrand factor，vWF）以及体外成血管实验对分化细胞进行鉴定，同时测定不同诱导条件下的细胞增殖指数（proliferation index，PI）。结果组3细胞经诱导后，内皮系表面分子CD34、VEGFR-2、CD31、vWF于第14天均有不同程度表达，分别为8．5％、12．0％、40．0％、30．0％．其中CD34、VEGFR-2在第21天表达上调，为15．5％、20．0％，余各诱导组细胞未表达上述表面分子；诱导后的组3细胞呈低增殖状态（PI值约为10．4％），在半固体培养基中还可形成血管腔样结构。结论从成人骨髓中分离培养的MSCs，在较高细胞接种密度和低增殖状态下，经VEGF、牛脑垂体提取物诱导后，可分化为血管内皮细胞，可作为治疗性血管生成及组织工程理想的种子细胞。     

组织工程组织血管化研究新进展

组织工程的血管化问题是制约组织工程产品的关键问题之一。根据血管发生中内皮细胞的来源不同，将血管发生分血管生成和血管再生两种形式，两种血管形成的方式都是一个动态、复杂的生理过程，通过生长因子和粘附物质来调节。对组织工程组织的血管化研究模型有体外和体内两种。体外实验可以检测支架与内皮细胞的粘附、增殖及迁移、材料的细胞毒、血管化效应和各种生长因子的调节作用，体内最简单实用的模型是用鸡胚茸毛尿囊膜模型，更高等的实验模型是在完整的动物体。组织工程组织血管化的策略有对支架材料的表面结构进行修饰、在材料内复合缓释的生长因子、内皮细胞与其它种子细胞联合培养、体内血管网包裹、血管束植入、血管模板以及体外在人造组织内构造微血管等，但目前的方法或多或少地存在一些问题，相信随着对血管化的机制和分子基础的了解的不断深入，以及各种技术手段的不断发展、完善，最终会找到比较理想的血管化方法。     

甲状腺术中甲状旁腺原位损伤类型对甲状旁腺功能的影响

目的 通过模拟甲状腺全切除术中甲状旁腺不同类型的原位损伤情况建立动物模型,研究不同程度的甲状旁腺原位损伤对术后甲状旁腺功能恢复的影响.方法 以实验家兔为研究对象,随机分为A、B、C、D四组,每组8只,A组(假手术组):单纯暴露、探查甲状腺、甲状旁腺;B组(血供损伤组):双侧甲状腺全切除+双侧下甲状旁腺血供损伤保留被膜;C组(被膜损伤组)双侧甲状腺全切除+双侧下甲状旁腺被膜损伤保留血供;D组(复合损伤组)双侧甲状旁腺全切除+双侧下甲状旁腺被膜及血供的复合损伤.术前1d,术后第1天、第3天、第5天、第7天监测血钙、血PTH,术后第7天切取双侧下甲状旁腺行苏木精-伊红染色,观察甲状旁腺组织的存活及病理损害.结果 (1)各组动物术前血钙、血PTH差异无统计学意义(P＞0.05);(2)A组术后血钙下降,但在第5天恢复至术前水平(P＞0.05);B、C组术后血钙明显下降(P＜0.05),以术后第1天最低,逐渐恢复,但C组恢复较B组快(P＜0.05);D组术后血钙持续下降;(3)A组术后血PTH下降,但在第7天恢复至术前水平(P＞0.05);B、C组术后血PTH明显下降(P＜0.05),以术后1d最低,逐渐恢复,但3d后C组恢复较B组快(P＜0.05);D组术后血PTH持续下降;(4)病理结果:A组甲状旁腺以主细胞为主,少量空泡性改变(5％～10％);B组甲状旁腺出血、坏死(40％ ～50％),部分细胞空泡变性(30％ ～ 40％),中心伴纤维化,周边可见炎性肉芽肿及增生的甲状旁腺组织;C组甲状旁腺出血(10％ ～20％),部分细胞空泡变性(10％ ～ 20％);D组甲状旁腺坏死,几乎无正常甲状旁腺组织,明显纤维化,残存的甲状旁腺组织较少呈散在分布.结论 (1)甲状腺术中甲状旁腺原位损伤的类型影响术后甲状旁腺功能的恢复,其中甲状旁腺血供和被膜的复合损伤最严重,甲状旁腺缺血坏死,功能不能恢复;单纯血供损伤,部分能恢复功能;带血管蒂的甲状旁腺原位保留能较快的恢复功能;(2)对于甲状腺术中严重血供及被膜损伤,甚至游离的甲状旁腺应立即自体移植.